Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ТЕЛЯТ К СМЕШАННЫМ ВИРУСНО-БАКТЕРИАЛЬНЫМ РЕСПИРАТОРНЫМ ИНФЕКЦИЯМ

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа повышения устойчивости телят к смешанным вирусно-бактериальным респираторным инфекциям и может быть использовано в системе профилактических мероприятий для повышения общей резистентности, гуморального и клеточного иммунитета.

Массовые респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота являются комплексными многофакторными синдромами, возникающими на фоне взаимодействия различных инфекционных агентов, изменения иммунного статуса, физических и экологических факторов, и проявляются как смешанные вирусные и вирусно-бактериальные инфекции, отличающиеся особенно злокачественным течением. Основная роль в развитии смешанных респираторных инфекций телят принадлежит вирусам (вирусам парагриппа-3, инфекционного торно-синцитиальному вирусу и др.) и бактериям (прежде всего, Pasteurella multocida, Mannheimia haemolytica, а также Chlamydophila pecorum и Mycoplasma bovis). Вирусы-возбудители респираторных инфекций каждый в отдельности, но особенно в ассоциациях, угнетают отдельные звенья иммунной системы - как клеточную, так и гуморальную. Так, при переболевании животных вирусной диареей - болезнью слизистых - поражается в основном клеточное звено иммунитета (снижается количество и функциональная активность лимфоцитов), угнетается биосинтез антител, снижается концентрация общего белка в сыворотке крови, при переболевании ассоциативной инфекцией диарея и инфекционный ринотрахеит, диарея и парагрипп-3 снижается биосинтез антител к данным возбудителям. Кроме того, вирус диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота - репродуцируется в лейкоцитах - лимфоцитах, моноцитах, нейтрофилах, тем самым вызывая лейкопению. Вирус инфекционного ринотрахеита, репродуцирующийся в организме телят, угнетает функцию В-лимфоцитов, снижает активность альвеолярных макрофагов.

Дефицит естественной резистентности и иммунологической реактивности, обусловленной недостаточным морфологическим развитием и ослаблением функциональной активности органов и тканей, формирующих защитные силы, требуют проведение адекватных иммунокоррегирующих мероприятий.

В настоящее время для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний все более широко применяют препараты растительного происхождения. Основными их преимуществами являются многосторонность и мягкость воздействия на организм и вследствие этого хорошая переносимость, отсутствие, как правило, побочного действия и осложнений даже при длительном применении. Благодаря сочетанию активных компонентов растения способны обеспечивать многоплановое воздействие на организм (иммуностимулирующее, противовоспалительное, антимикробное, противовирусное, детоксикационное и др.), что создает условия для комплексного и полифункционального воздействия с лечебной и профилактической целью как на пораженный болезнью орган, так и на весь организм в целом. Так, листья мать-и-мачехи (Tussilago farfara L.) содержат слизь, дубильные вещества, аскорбиновую кислоту, каротин, горький гликозид туссилгин, инулин, органические кислоты и другие вещества. Препараты из листьев растения обладают выраженным отхаркивающим, дезинфицирующим и противовоспалительным действием, которые зависят от наличия эфирных масел и слизистых веществ. Листья растения применяют в форме настоя (1:10) внутрь в качестве отхаркивающего и обволакивающего средства при заболеваниях дыхательных путей. Эхинацея пурпурная (Echinaceae purpurea Moench) содержит уникальный комплекс биологически активных веществ (полисахариды, полифенолы и биофлавоноиды с выраженной антиоксидантной активностью), сбалансированный по незаменимым аминокислотам белок, служит накопителем селена, цинка и других микро- и макроэлементов. Совокупность всех составных обусловливает иммуно- и биостимулирующие свойства препаратов эхинацеи [1].

Опыт народной медицины позволяет считать, что при лечении и профилактике многих болезней лучше пользоваться сборами трав, а не отдельными растениями. Лекарственные сборы, включающие в себя растения, действующие непосредственно на иммунную систему, обладающие противовоспалительными и антибактериальными свойствами, а также способностью регулировать функции других органов и систем, влияющих, в свою очередь, на иммунный ответ организма, оказывают комплексное нормализующее воздействие на живой организм, повышают его сопротивляемость, активируют обмен веществ, благодаря совместному, часто синергистическому влиянию на организм многих веществ, входящих в состав сборов. Кроме того, в лекарственные сборы можно включить растения, содержащие комплекс витаминов в оптимальном для организма сочетании. Рационально подобранные комбинации лекарственных растений потенцируют лечебные свойства сбора. Отдельные виды активности растений могут быть недостаточно выраженными, но они значительно усиливаются при рациональном комбинировании нескольких растений [2]. Так, сбор лекарственных трав, включающий крапиву двудомную, лопух большой, ромашку аптечную, душицу, зверобой продырявленный, полынь, подорожник большой, мать-и-мачеху и овес посевной, значительно повышает профилактическую и терапевтическую эффективность при респираторных болезнях животных [3], а сбор, включающий зверобой продырявленный, тимьян ползучий, мяту перечную, мать-и-мачеху, - активацию иммунных систем, в частности Т- и фагоцитарной, которые отягощают патологический процесс и эффективность лечения респираторных болезней [4].

Из уровня техники известно, что пробиотики могут оказывать положительное влияние на факторы естественной резистентности и иммунный статус молодняка сельскохозяйственных животных и птицы [5]. Так, пробиотик пролам (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus acidophilus 43c, Lactococcus lactis subsp. lactis 574, Lactococcus lactis subsp. lactis 1704-5, Bifidobacterium animalis 83) повышает поглотительную способность нейтрофилов и бактерицидную активность сыворотки крови [6], сахабактисубтил (Bacillus subtilis) - бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови [7], окарин (представители нормальной микрофлоры здорового человека, преимущественно эшерихии и стафилококки) - уровень общих иммуноглобулинов, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови [8], Бацинил (на основе продуктов метаболизма спорообразующих бактерий - Bacillus subtilis) - количество Τ- и В-лимфоцитов [9]. Наиболее перспективными являются пробиотики на основе микроорганизмов с заданными свойствами, полученными методами генной инженерии, например пробиотик «Ветом 1.1», содержащий бактерии Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, которые отличаются высокой устойчивостью к пищеварительным сокам и ферментам желудочно-кишечного тракта и способны к быстрому его заселению. В кишечнике животных споры бактерий трансформируются в вегетативные формы и выделяют интерферон α-2 лейкоцитарный человеческий, антибиотикоподобные субстанции, ферменты, другие биологически активные вещества. В 1 г препарата содержится 1×10⁶ КОЕ (колониеобразующих единиц) живых микробных клеток штамма бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641. Ветом 1.1 применяют для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний с синдромом диареи, бактериальных и вирусных инфекций (сальмонеллез, кокцидиоз, колибактериоз, дизентерия, рота - и парвовирусный энтерит, грипп, парагрипп, ринотрахеит, гепатит, чума плотоядных и т.д.), а также для коррекции иммунодефицитных состояний, для лечения и профилактики заболевания дизбактериозом у телят, поросят, плотоядных, собак, птицы, стимуляции роста и развития молодняка [10]. Установлено, что применение Ветома 1.1 для лечения вирусно-бактериальных желудочно-кишечных болезней телят с симптомокомплексом диареи стимулировало клеточные и гуморальные факторы иммунитета (в сыворотке крови повышались количество Т-лимфоцитов, содержание α- и β-глобулинов, бактерицидная и лизоцимная активность) [11].

Цель изобретения - биосовместимый, безвредный и экологически безопасный способ повышения устойчивости телят к смешанным вирусно-бактериальным респираторным инфекциям, позволяющий применять его для профилактики и лечения ассоциированных инфекций, протекающих с тяжелыми клиническими проявлениями; при атипично проявляющихся формах заболевания, диагностика которых затруднена; в сочетании с рекомендованными схемами лечения специфическими противовирусными и бактериальными препаратами.

Поставленная цель достигается применением комплекса препаратов, воздействующих на различные иммунодеприссантные факторы, дополняя друг друга и усиливая эффект, включающий пробиотик Ветом 1.1 и иммунотропный препарат, содержащий 3,5% водный раствор спиртовой настойки, состоящей из смеси почек сосны (Gemmae Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinazea pyrpurea), корневищ и корней девясила (Rhizoma et radix Inulae) в соотношении 2:1:1, и гидрохлорид ксимедона.

Способ осуществляется следующим образом.

Клинически здоровым телятам 20-30-дневного возраста применяют внутрь с водой или кормом пробиотик Ветом 1.1 в дозе 50 мг/кг живой массы один раз в сутки в течение 15 дней и дополнительно телят обрабатывают аэрозолем иммунотропного препарата, содержащего 3,5% водный раствор настойки, состоящей из смеси почек сосны (Gemmae Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinazea pyrpurea), корневищ и корней девясила (Rhizoma et radix Inulae) в соотношении 2:1:1, и гидрохлорид ксимедона (4 г ксимедона гидрохлорида на 100 мл 3.5% водного раствора настойки), из расчета 4,0 мл/м³ помещения, трехкратно с интервалом 72 часа при экспозиции 40 минут.

Аэрозольную обработку телят проводят в специально оборудованной герметичной камере, оснащенной канализацией и приточно-вытяжной вентиляцией. Для получения высокодисперсных аэрозолей используют сверхзвуковую аэрозольную форсунку САФ производительностью не менее 200 мл/мин при дисперсности генерируемого аэрозоля от 5 до 25 мкм. Обработку осуществляют при температуре воздуха 14°С и относительной влажности не ниже 70%). Стабильность аэрозолей достигается добавлением 10-20% стерильного глицерина или 10% глюкозы в порошке к общему объему рабочего раствора.

Иммунотропный препарат готовят следующим образом.

Почки сосны обыкновенной (Gemmue Pini), траву и соцветия эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.), корневища и корни девясила высокого (Inula Neleium L.) измельчают (в сухом виде) согласно Государственной Фармакопеи и смешивают в соотношении 2:1:1. Сырье помещают в стеклянный сосуд и смачивают, заливая этиловым спиртом 70% концентрации в соотношении 1:5, выдерживают в темном месте при температуре 15-20°С в течение 7 суток, процеживают, отжимая сырье, и фильтруют. В соответствии с классификацией токсичности веществ по ГОСТу 12.1.007-88 препарат может быть оценен как относительно безопасный, поскольку при определении параметров острой токсичности на мышах весом 20,0 г его 20% и 40% водные растворы показали ЛД₅₀ более 17,8 г/кг массы тела, а при внутриутробном введении - более 3,0 г/кг массы тела. Перед применением готовят 3,5% водный раствор с использованием кипяченой и остуженной до 37°С водопроводной воды, который смешивают с гидрохлоридом ксимедона из расчета 4 г на 100 мл 3,5% водного раствора.

Используемые ингредиенты настойки широко применяются в фитотерапии. Обоснованием для выбора компонентов композиции послужили данные о фармакологических свойствах и химическом составе лекарственного растительного сырья. Каждый компонент содержит биологически активные вещества, воздействующие одновременно на все звенья патогенеза, симптоматику воспалительных заболеваний респираторных органов, а также обладающие выраженным антимикробным действием на патогенную и условно патогенную микрофлору.

Почки сосны (Gemmue Pini) обладают дезинфицирующим, фитонцидным, отхаркивающим, витаминным и успокаивающими свойствами, эффективно предотвращают распространение микробной и вирусной инфекции в организме.

Трава и соцветия эхинацеи пурпурной (Ehinacea purpurea L.) обладают иммуномодулирующей активностью, подавляют активность гиалуронидазы - фермента, способствующего повышению проницаемости для вирусов и микробов, увеличивают противомикробную активность лейкоцитов, макрофагов и нейтрофилов крови и повышают синтез защитных антител и эндогенного интерферона.

Корневища и корни девясила высокого (Inula Neleium L.) обладают противовоспалительным, антимикробным, бактерицидным, противогрибковым, кровоостанавливающим, отхаркивающим свойствами.

Гидрохлорид ксимедона (гидрохлорид 1-(2-гидроксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиримидин-2-она) обладает репаративными, иммуностимулирующими и десенсибилизирующими свойствами, не обладает токсичностью, раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки. В ветеринарной медицине гидрохлорид ксимедона применяли в сочетании с миксофероном при ассоциированной бронхопневмонии телят [12], а в смеси с аллогенной сывороткой коров - для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят [13].

Эффективность способа повышения устойчивости телят к смешанным вирусно-бактериальным респираторным инфекциям определяли в научно-производственных опытах в условиях стационарно неблагополучных по данной патологии телят хозяйствах Нижегородской области с уровнем заболеваемости 80-90%, летальности - 24%, где установлена этиологическая роль ассоциаций вирусов парагриппа-3 (ПГ-3), инфекционного ринотрахеита (ИРТ), вирусной диареи - болезни слизистых (ВД-БС), аденовирусов (АД), респираторно-синцитиального вируса (PC) и бактериальной микрофлоры (пастереллы, сальмонеллы, протеи, стрептококки, эшерихии). Иммунный статус оценивали по следующим показателям: относительное содержание Т-лимфоцитов (в реакции спонтанного розеткообразования по методу Н.И. Блинова, 1980), функциональная активность нейтрофилов крови (в реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) по методу М.Е. Виксмана и A.M. Маянского, 1979), лизоцимная активность сыворотки крови (по методу B.Г. Дорофейчук, 1969), уровень иммуноглобулинов отдельных изотипов (G и М) (по методу Manchini, 1964). Выбор иммунологических показателей основан на том, что по результатам исследований иммунодефицитное состояние при смешанных вирусно-бактериальных респираторных инфекциях телят характеризуется дефектами клеточного и гуморального звеньев иммунитета, фагоцитоза и снижением естественной резистентности (таблица 1).

Как видно из таблицы 1, у клинически здоровых телят отмечено иммунодефицитное состояние, характеризующееся снижением относительного содержания Т-лимфоцитов на 12,5%, функциональной активности нейтрофилов крови в спонтанном и индуцированном тестах на 17 и 13% соответственно, лизоцимной активности сыворотки крови на 21% и бактерицидной активности сыворотки крови на 26,58% относительно нижней границы физиологической нормы.

Сущность метода поясняется примерами

Пример 1. Дозозависимое влияние иммунотропного препарата на параметры иммунитета определяли на 5 группах клинически здоровых телят 20-30-дневного возраста: 4 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Телятам всех групп применяли пробиотик Ветом 1.1 внутрь с водой в дозе 50 мг/кг живой массы один раз в сутки в течение 15 дней. Телят опытных групп дополнительно обрабатывали аэрозолем иммунотропного препарата, содержащего 3,5% водный раствор настойки, состоящей из смеси почек сосны (Gemmae Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinazea pyrpurea), корневищ и корней девясила (Rhizoma et radix Inulae) в соотношении 2:1:1, и гидрохлорид ксимедона (4 г гидрохлорида ксимедона на 100 мл 3,5% водного раствора настойки), трехкратно с интервалом 72 часа при экспозиции 40 минут из расчета 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мл/м³ помещения. Телят контрольной группы дополнительной обработке не подвергали. Взятие крови у животных для исследований проводили до обработок (фон) и спустя 7-10 дней после завершения опытов. Результаты представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, иммунотропный препарат оказывал стимулирующее влияние на исходно сниженные иммунобиологические показатели клинически здоровых телят. Во всех опытных группах отмечалось достоверное увеличение относительного содержания Т- и В-лимфоцитов крови, функциональной активности нейтрофилов крови в спонтанном и в индуцированном тестах, уровня иммуноглобулинов G и М, лизоцимной активности сыворотки крови. Однако более выраженные позитивные изменения, характеризующие стимулирующий эффект на механизмы клеточного и гуморального звеньев иммунитета, установлены у телят третьей и четвертой опытных групп (дозы иммунотропного препарата - 4,0 и 5,0 мл/м³). В качестве оптимальной выбрана доза иммунотропного препарата 4,0 мл/м³, поскольку повышение дозы не обеспечивало достоверного повышения иммунобиологических показателей.

Пример 2. Для подтверждения осуществимости заявленного способа формировали три группы клинически здоровых телят 20-30-дневного возраста: 2 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Телятам всех групп применяли пробиотик Ветом 1.1 внутрь с кормом в дозе 50 мг/кг живой массы один раз в сутки в течение 15 дней. Телят первой опытной группы обрабатывали аэрозолем иммунотропного препарата, содержащего 3,5% водный раствор настойки, состоящей из смеси почек сосны (Gemmae Pini), травы и соцветий эхинацеи пурпурной (Echinazea pyrpurea), корневищ и корней девясила (Rhizoma et radix Inulae) в соотношении 2:1:1, и гидрохлорид ксимедона (4 г гидрохлорида ксимедона на 100 мл 3,5% водного раствора настойки), трехкратно с интервалом 72 часа при экспозиции 40 минут из расчета 4,0 мл/м³ помещения. Телят второй опытной группы обрабатывали аэрозолем 3,5% водного раствора настойки эхинацеи пурпурной из расчета 4,0 мл/м³ помещения трехкратно с интервалом 72 часа при экспозиции 40 минут. Взятие крови у животных для исследований проводили до обработок (фон) и спустя 7-10 дней после завершения опытов. Результаты представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, во всех опытных группах проявилась тенденция к нормализации иммунобиологических показателей. Более выраженные изменения нормализующего характера установлены в первой группе. Так, относительное содержание Т-лимфоцитов крови в первой опытной группе достоверно увеличилось на 40%, во второй - на 16%, в контрольной группе изменения данного показателя были недостоверны. Относительное содержание В-лимфоцитов крови у телят первой и второй опытных групп соответственно увеличилось на 54 и 23%, в контрольной группе изменения данного показателя было недостоверным. Функциональная активность нейтрофилов крови в спонтанном тесте повысилась в первой опытной группе на 25%, во второй опытной и контрольной группах животных изменения данного показателя носили недостоверный характер; в индуцированном тесте в первой, второй, опытных группах данный показатель повысился соответственно на 40 и 20% по сравнению с 18% в контрольной группе. Лизоцимная активность сыворотки крови достоверно увеличилась у только животных первой опытной группы на 77%. Содержание иммуноглобулинов G достоверно увеличилось в первой опытной группе на 31%, во второй опытной группе - на 19%, в контрольной группе - на 16%. Содержание иммуноглобулинов М достоверно увеличилось в первой опытной группе на 56%, во второй опытной и контрольной группах изменения данного показателя носили недостоверный характер.

Пример 3. Для определения эффективности заявленного способа по принципу условных аналогов (одинакового возраста, породы, живой массы, физиологического состояния) формировали 5 групп клинически здоровых телят 20-30-дневного возраста (таблица 4).

За всеми животными в период эксперимента велись клинические наблюдения. Результаты представлены таблице 5.

Как видно из таблицы 5, из всего поголовья телят первой опытной группы (способ в соответствии с изобретением) респираторное заболевание было зарегистрировано у одного животного, тогда как в остальных опытных группах были зарегистрированы у 6,3 и 17 животных соответственно и у 6 животных контрольной группы. Респираторные заболевания клинически проявлялись повышением температуры тела, застойной гиперемией, воспалением слизистых оболочек носа, выделением серозного, а затем слизисто-гнойного экссудата. Воспаление слизистой оболочки гортани, трахеи вызывало повышенную секрецию в этих участках, сужение щели гортани и просвета трахеи, закупорку бронхиол, что затрудняло дыхание и усиливало дыхательный шум, возникал кашель.

При патологическом вскрытии у телят устанавливали катаральное воспаление и отек слизистой оболочки носовой полости, гортани, трахеи, скопление серозного или гнойного экссудата в носовых ходах и трахее. Конъюнктива отечна, гиперемирована, легкие увеличены в объеме, просветы бронхов и альвеол заполнены пенистой жидкостью или слизисто-гнойным экссудатом. Как отмечалось выше, при вирусно-бактериальных респираторных инфекциях важную роль играют неспецифические факторы гуморального иммунитета (лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови, содержание бета-лизинов, интерферона и др.), которые свидетельствуют о состоянии естественных защитных механизмов организма животного и об их взаимодействии с возбудителями инфекций. Полученные результаты указывают на значительные изменения в данном звене иммунной защиты (таблица 6).

Как видно из таблицы 6, тенденция возрастания показателей гуморального иммунитета наиболее четко прослеживалась в первой опытной группе. Так, к концу опыта бактерицидная активность сыворотки крови повысились на 61,1% по сравнению с 35,4% (вторая опытная группа), 34,5% (третья опытная группа), 27,7% (четвертая опытная группа) и 56,1% (контрольная группа) и лизоцимная активность сыворотки крови на 77,2% по сравнению с 27,7% (вторая опытная группа), 18,2% (третья опытная группа), 27,% (четвертая опытная группа) и 27,7% (контрольная группа).

Таким образом, проведенные исследования показали возможность и высокую эффективность заявленного способа при профилактике смешанных вирусно-бактериальных респираторных инфекций телят.

Источники информации, принятые во внимание

1. Колесник, Н.Д. Иммуностимулирующие свойства эхинацеи пурпурной / Н.Д. Колесник, С.А. Семенов, Н.И. Иванченко // Зоотехния. - 2004. - №12. - С. 16-17.

2. Иммунодефицитные состояния / Под ред. В.С. Смирнова, И.С. Фрейдлина. - СПб.: Фолиант, 2000. - 568 с.

3. Вильданов Р.Х. Лекарственные травы при респираторной патологии у телят / Р.Х. Вильданов, Р.Х. Вильданова // Ветеринария. - 2005. - №4. - С. 11-13.

4. RU 2250110 С1, 2005.

5. Спасская Т.А. Влияние пробиотиков на показатели резистентности и иммунный статус организма телят: автореф. дис… канд. биол. наук: 03.00.13 / Спасская Татьяна Аркадьевна. - М., 1998. - 21 с.

6. Ерина Т.А. Микробиоценоз кишечника и иммунный статус новорожденных телят с разным морфофункциональным развитием и их коррекция: автореф. дис...канд. вет.наук: 06.02.02 / Ерина Татьяна Анатольевна. - Воронеж, 2015. - 20 с.

7. Н.Е. Горковенко¹, Ю.А. Макаров¹, Н.Н. Шульга¹, Н.П. Тарабукина. О влиянии концентрированной сыворотки крови и сахабактисубтила на организм новорожденных телят. - Сельскохозяйственная биология. - 2011. - №4. - С. 102-107.

8. Патент РФ №2203976, 2003.

9. П.А. Красочко, И.А. Красочко, Ю.В. Санжаровская. Влияние бесклеточного пробиотического препарата «Бацинил» на иммунную систему телят при терапии респираторных заболеваний. - Ветеринарный врач. - 2011. - №4. - С. 11-14.

10. Наставление по применению препарата Ветом 1.1 в ветеринарии, утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 13.07.98, №13-5-2/1319, 28 октября 1997 г.

11. В.П. Иноземцев, И.И. Балковой, Г.В. Ноздрин, В.А. Млсин и др. Новое эффективное средство для профилактики желудочно-кишечных болезней телят. - Ветеринария. - 1998. - №1. - С. 47-51.

12. Яшин Д.А. Патоморфология ассоциированной бронхопневмонии телят в условиях Нижегородской области и иммунокоррекция гидрохлоридом ксимедона: автореф. дис… канд. вет. наук: 16.00.02. - Нижний Новгород, 2009. - 18 с.

13. Патент РФ №2179846 С2, 2002.