Результат интеллектуальной деятельности: НАБОР ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ СПЕРМЫ В ПЯТНАХ НА ИССЛЕДУЕМОМ ОБРАЗЦЕ

Изобретение относится к области судебно-медицинской экспертизы, а именно к тестовым наборам, и позволяет произвести тестирование спермы в пятнах на исследуемом образце.

Известен набор «Phosphatesmo КМ» для тестирования спермы в пятнах на исследуемом образце, содержащий индикаторную бумагу, специфичную на кислую фосфотазу - КФ (Khaldi N., Miras A., Botti К., Benali L., Gromb S. Evaluation of three rapid detection methods for the forensic identification of seminal fluid in rape cases // J. Forensic Sci. - 2004. - Vol.49, №4. - P. 749-753). При положительной реакции наблюдается фиолетовое окрашивание бумаги. Реакция не является заменой микроскопическому исследованию на живые сперматозоиды.

Недостаток набора: с помощью индикаторной бумаги (тестовой полоски), входящей в набор, можно выявить лишь общую КФ, которая может быть обнаружена в пятнах на исследуемых образцах за счет присутствия на них как спермы, так и слюны, влагалищных выделений, крови, сока растений, а также за счет загрязнения их бактериальными ферментами.

Простатическая же КФ, которая содержится только в сперме, с помощью этого набора не выявляется.

Известен тест-набор «Кислая фосфотаза кинетика» фирмы «АБРИС+», содержащий цитратный буфер, тартрат натрия, α-нафтил фосфат и прочный красный TR. Набор используется в медицине для разделения общей и простатической кислой фосфатазы в диагностических целях (Лифшиц В.М., Сидельникова В.И. // Биохимические анализы в клинике. Медицинское информационное издательство, Москва, 2001, стр. 72-74). Этот набор принят авторами за прототип.

Недостатком набора является большой расход дорогостоящих реактивов, значительные временные и трудовые затраты и в связи с этим нецелесообразность использования для целей судебно-медицинской экспертизы.

Техническим результатом изобретения является создание набора для тестирования спермы в пятнах на исследуемом образце, позволяющего значительно удешевить, ускорить и упростить процесс тестирования спермы, обеспечить возможность проведения тестирования спермы в пятнах на исследуемом образце как в лабораторных условиях, так и непосредственно на месте происшествия.

Указанный технический результат достигается тем, что набор для тестирования спермы в пятнах на исследуемом образце согласно изобретению содержит две тестовые полоски из фильтровальной бумаги, одна из которых пропитана раствором, содержащим:

а другая полоска пропитана раствором, содержащим:

дистиллированную воду для получения водного экстракта исследуемого образца и емкость для проведения тестирования, при этом чувствительность полосок к сперме составляет не менее 0,00625 мг/мл.

Проведенные исследования показали, что тестовые полоски из фильтровальной бумаги, пропитанные реагентами из известного набора «Кислая фосфотаза кинетика», позволяют значительно сократить расход дорогостоящих реагентов. Один комплект реагентов позволяет провести около 2500 тестовых исследований. Для проведения одного исследования на тестирование спермы (разделение общей и простатической кислой фосфатазы) требуется около 30 минут. Набор позволяет провести исследование на месте происшествия. Тестовые полоски в процессе реакции накапливают на себе биоматериал (сперму). Их высушивают, сохраняют и в дальнейшем, при необходимости, используют для других целей судебно-медицинской экспертизы (исследования ДНК, выявления антигенов системы АВО).

Сущность изобретения иллюстрируется фиг. 1, 2 где

на фиг. 1 изображены тестовые полоски 1 (цитратный буфер), 2 (тартрат натрия), емкость 4 для проведения тестирования, емкость со стерильной дистиллированной водой 5;

на фиг. 2 изображен объект, с поверхности которого вырезаны фрагменты для исследуемого образца 3.

Тестовые полоски 1 и 2, входящие в набор, приготовлены с использованием реагентов из набора «Кислая фосфотаза кинетика» фирмы «АБРИС+». В состав этого набора входят следующие ингредиенты: цитратный буфер в количестве 50 мл (концентрация 50 ммоль/л); тартрат натрия в количестве 50 мл (концентрация 2 ммоль/л); α-нафтил фосфат в количестве 10×26,5 мг (концентрация 10 ммоль/л); прочный красный TR в количестве 10×3,9 мг (концентрация 1,5 ммоль/л).

Рабочий реагент №1 получают путем растворения содержимого одного флакона α-нафтил фосфата в 10 мл цитратного буфера. Переносят полученный раствор в один из флаконов с прочным красным TR и перемешивают до полного растворения. Рабочий реагент №1 используют для пропитывания тестовой полоски 1 цитратным буфером для обнаружения общей КФ.

Рабочий реагент №2 получают путем растворения содержимого одного флакона α-нафтил фосфата в 10 мл раствора тартрата натрия. Переносят полученный раствор в новый флакон с прочным красным TR и перемешивают до полного растворения. Рабочий реагент №2 используют для пропитывания тестовой полоски 2 тартратом натрия для обнаружения простатической КФ.

Ленты фильтровальной бумаги (шириной 0,3 см и длиной 9-15 см) погружают в емкости, содержащие соответственно рабочий реагент №1 или рабочий реагент №2, не менее чем на 20 секунд для равномерного пропитывания соответствующим буфером. Пропитанные ленты фильтровальной бумаги высушивают в термостате при температуре 56°C в течение 30-40 минут. Высушенные ленты фильтровальной бумаги нарезают на тестовые полоски 1, 2 (реагент №1 и реагент №2) шириной 0,3 см и длиной 1,5 см. Приготовленные таким образом тестовые полоски 1, 2 сохраняют свои свойства в течение не менее 48 часов.

Набор используют следующим образом.

Подготавливают образец для исследования.

С поверхности объекта исследования вырезают фрагмент или несколько фрагментов размерами 0,5×0,5 см и используют их в качестве исследуемого образца 3. Фрагменты исследуемого образца 3 помещают в емкость 4 и заливают минимально необходимым объемом дистиллированной воды 5. Экстрагируют при температуре 4°C от 18 до 24 часов в условиях лаборатории, либо в течение 30 минут - 1 часа при температуре 15-20°C, если работа ведется непосредственно на месте происшествия.

Тестирование спермы в приготовленном экстракте исследуемого образца разделяют на 2 этапа.

1 этап. Обнаружение общей КФ.

В приготовленный водный экстракт (емкость 4) исследуемого образца 3 помещают тестовую полоску 1 с реагентом №1 так, чтобы верхняя часть полоски 1 выступала над жидкостью. Через 15-30 минут после погружения полоски 1 в экстракт исследуемого образца 3 при положительном результате выступающий конец тестовой полоски 1, а затем и вся полоска 1 окрашиваются в красно-коричневый цвет. При отрицательном результате - окраски полоски не наблюдается.

2 этап. Обнаружение простатической КФ.

Второй этап проводят при получении положительного результата тестирования на 1 этапе. В приготовленный водный экстракт исследуемого образца помещают тестовую полоску 2 с реагентом №2 и наблюдают за реакцией, протекающей в емкости 4. Если в течение 15-30 минут окрашивания тестовой полоски 2 не происходит, результат считают положительным. Это объясняется тем, что простатическая КФ блокируется тартратом и после подавления ее ингибитором (тартратом) окрашивания тестовой полоски 2 не происходит. При отрицательном результате тестовая полоска 2 окрашивается в коричневатый цвет. Тестирование является ориентировочным и не является заменой микроскопическому исследованию на живые сперматозоиды.

Исследования показали, что тестовые полоски 1,2 размером 1,5 см×0,3 см при последовательном их использовании обеспечивают положительный результат тестирования при концентрации спермы в водном экстракте исследуемого образца не менее 0,00625 мг/мл.

Предлагаемый набор для ориентировочного тестирования спермы в пятнах на исследуемом образце отличается дешевизной и простотой использования, позволяет сохранять результаты исследования, которые в дальнейшем могут быть использованы для выделения и типирования ДНК, а также выявления антигенов системы АВО стандартными серологическими реакциями.