Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОРТО-КАВАЛЬНЫХ АНАСТОМОЗОВ СТЕНКИ ПОЛЫХ ОРГАНОВ БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ ЧЕЛОВЕКА

Изобретение относится к медицине, в частности к анатомии, гистологии, топографической анатомии и патологической анатомии, может быть использовано при изучении особенностей расположения порто-кавальных анастомозов внутри стенки полых органов брюшной полости человека в норме и при патологии, а также в качестве наглядных пособий при преподавании гистологии в учебных заведениях.

Исследование особенностей расположения порто-кавальных анастомозов, характера взаимоотношения сосудов портальной и кавальной систем вне- и внутри стенки полых органов брюшной полости, как некого компенсаторного механизма декомпрессии воротной системы, позволит индивидуализировать лечебную тактику и уменьшить затраты на пациентов с синдромом портальной гипертензии (Никель В.В., Ефремова В.П. Возрастные особенности морфо-функциональных показателей кровеносных сосудов желудка / Сибирское медицинское обозрение, 2018; 6(114): 58-62). Проблемы изучения этих анатомических структур возникают на этапе определения принадлежности сосуда к месту взаимодействия портальной и кавальной системам. Известно несколько способов выявления внеорганных порто-кавальных соустий, имеющих, как преимущества, так и недостатки в решении этого вопроса.

Известен «Способ ангиографической диагностики порто-кавальных анастомозов», суть которого сводится к выполнению флеботестикулографии в дискретном режиме времени до 3 минут при обтурации дистального отдела яичковой вены (Патент РФ №2525776217; А61В 6/00; Бюл. №22, 10.08.2014). При выявлении «смыва» контрастного вещества в проксимальном направлении возможно диагностировать наличие порто-кавальных анастомозов. Преимуществом заявленного авторами способа является увеличение частоты обнаружения брыжеечно-яичковых анастомозов. Однако, данный способ ограничивает себя лишь диагностикой наличия порто-кавальных анастомозов и не может быть использован для исследования места и характера расположения венозного соустья, особенностей его морфометрии и топографии.

Наиболее близким к предлагаемому является способ рентгенологического исследования порто-кавальной системы прямой кишки человека в эксперименте (Патент РФ №2541830; G09B 23/28, А61В 6/00, А61K 49/04; Бюл. №5, 20.02.2015). Оригинальность предлагаемого способа, как результат трехэтапного рентгенконтрастного исследования венозных систем прямой кишки, дает возможность не только обнаружить порто-кавальные анастомозы в аноректальной зоне, но и их количество, уровень и место расположения. Данный способ предоставляет возможность определить особенности пространственного расположения сосудистых образований прямой кишки непосредственно по отношению к самому органа, а также костным структурам малого таза. В то же время, способ применим для визуализации, изучения топографии и морфометрии внеорганных порто-кавальных анастомозов внутренних органов брюшной полости человека. Использование данного способа в момент изучения внутристеночных анастомозов в органах маловероятно в виду отсутствия возможности верификации расположения, принадлежности и характера отношения к оболочкам органа столь мелких по размерам сосудов.

Таким образом, известные способы изучения порто-кавальных анастомозов ограничены рентгенологическими приемами исследования, не имеющими возможностей определения особенностей строения и расположения внутристеночных венозных соустий органов брюшной полости.

Задачей способа является оптимизация исследования порто-кавальных анастомозов стенки полых органов брюшной полости человека в анатомической, гистологической, топографоанатомической и паталогоанатомической практиках при изучении морфометрических и топографических особенностей в норме и патологии.

Поставленную задачу решают за счет одномоментного гистологического окрашивания сосудов портальной и кавальной систем стенки внутренних органов брюшной полости человека разными цветами. В качестве наливной инъекционной среды, контрастирующей сосуды, используют «Тушь гистологическая HistoSafe» - гистологический краситель для маркировки краев резекции макропрепарата, имеющий регистрационное удостоверение медицинского изделия (РЗН 2019/9247 от 15.11.2019 по ТУ 21.20.23-008-89079081-2017), позволяющая заполнять внутристеночные сосуды малого диаметра до 0,1-0,2 мм. Суть способа заключается в следующем: осуществляют плотное равномерное заполнение предварительно промытых венозных структур органа гистологическим красителем через сосуды диаметром более 5 мм при помощи 20 мл шприца. Для селективного окрашивания сосудов разных венозных систем органов используют красители 2-х цветов: оранжевый и синий. Портальную венозную систему полого органа заливают оранжевым красителем, кавальную - синим. Затем макропрепарат погружают в 10% раствор забуференного формалина на срок 48-72 часа. После завершения этапа фиксации, орган извлекают из формалина и промывают проточной водопроводной водой в течение 5 минут. Вырезку образцов ткани (стенки) с формированием фрагментов осуществляют в направлении, перпендикулярном ходу основным сосудам в зоне исследования. Сформированные фрагменты толщиной от 2 до 3 мм подвергают гистологической обработке в условиях вакуумного гистопроцессора закрытого типа. После гистологической обработки проводят заливку образцов в тугоплавкий парафин (температура плавления 59°-62°С) с формированием гистологических блоков и последующей микротомией. Полученные гистологические срезы толщиной 2 мкм помещают на предметные стекла с положительным зарядом для обеспечения адгезии материала. Препараты окрашивают гематоксилином Майера без окраски эозином путем депарафинизации, регидратации, инкубации в течение 20 минут, промывают в проточной воде и просветляют.На завершающем этапе готовые препараты помещают в сканирующий микроскоп Pannoramic 250 Flash II 3DHistech (Венгрия) с тотальным сканированием стекол в автоматическом режиме при увеличении объектива х40. Контроль результатов проводят с применением программы CaseViewer v.2.3 3DHistech. В полученных препаратах просветы селективно окрашенных сосудов заполнены пигментом красителя с соответствующим цветом: сосуды портальной системы оранжевым, кавальной - синим. Те сосуды, которые имеют равномерное заполнение инъекционной средой обоих цветов, расценивают как порто-кавальный анастомоз.

Пример 1. Сосуды кавальной системы стенки кардиального отдела желудка заливаются тушью гистологической синего цвета, сосуды портальной системы - тушью оранжевого цвета. После фиксации ткани, вырезки образцов и гистологической обработки препараты окрашивают гематоксилином Майера (фиг. 1). Так, на срезе кардиального отдела желудка видны: собственная пластинка слизистой оболочки с однослойным призматическим железистым эпителием (1), мышечная пластинка слизистой оболочки (2), подслизистая основа (3), мышечная оболочка (4), а также внутристеночные вены кавальной системы кардиального отдела желудка с красителем в просвете синего цвета (5), его внутристеночные портальные сосуды с красителем в просвете оранжевого цвета (6), сосуды без красителя в просвете - артерии (7), сосуды, равномерно заполненные красителем обоих цветов - порто-кавальные анастомозы (8).

Пример 2. Вены портальной системы прямой кишки заливаются тушью гистологической оранжевого цвета, сосуды кавальной системы - синего цвета. После фиксации ткани, вырезки образцов и гистологической обработки, препараты окрашивают гематоксилином Майера (фиг. 2). Так, на срезе прямой кишки в толще ее мышечной оболочки визуализируются вена портальной системы с окрашенным в оранжевый цвет просветом (6), кавальной системы с красителем в просвете синего цвета (5) и сосуд, равномерно заполненный красителем обоих цветов - порто-кавальный анастомоз (8).

Несомненным преимуществом данного способа являются возможность четкой дифференцированной визуализации порто-кавальных анастомозов внутри стенки полого органа с возможностью изучения их топики относительно оболочек и морфометрических особенностей.