Результат интеллектуальной деятельности: Способ профилактики маститов крупного рогатого скота

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способам профилактики маститов крупного рогатого скота.

Проблема профилактика маститов коров всегда остается актуальной темой в ветеринарии. В этиологии мастита основную роль играют микроорганизмы, которые приводят к развитию воспаления в тканях молочной железы, однако существуют маститы, особенно субклинический, которые развиваются асептически при раздражении тканей вымени, например, при неправильном машинном доении коров и способствующих паратипических факторах. В связи с этим для профилактики маститов применяют средства специфической защиты.

Известен способ профилактики и лечения маститов у коров с введением им тканевого препарата, в качестве которого используют фильтрат экстракта молочной железы здоровых животных, стабилизированный маннитом. Сущность способа заключается в том, что коровам с профилактической целью тканевый препарат (убералин нативный) вводят двукратно на 30-20 и на 10 день до отела, подкожно в дозе 0,1-0,2 мл на кг массы тела (П РФ №2201758 от 19.09.2000, МПК А61К 35 /48, А61Р 15/00).

Недостатком данного способа является то, что препарат представляет собой экстракт тканей животного происхождения, что при частом применении может вызвать сенсибилизацию организма с последующим развитием аллергических реакций.

Также недостатком является то, что технология его приготовления не предусматривает четкого соблюдения химического состава препарата от партии к партии, что может негативно сказаться на его эффективности.

Наиболее близким решением, принятым за прототип, является способ повышения естественной резистентности молодняка крупного рогатого скота (Заявка №2022110007 от 15.04.2022, МПК А61К 31/721, A61D 91/00).Сущность способа заключается в пероральном введении телятам биотинилированное производное окисленного декстрана (БОД) в дозе 0,2 мг/кг живого с интервалом 72 часа 5 выпаиваний.

Недостатком данного способа является то, что БОД используется только на телятах, нет данных о применении БОД для профилактики маститов коров.

Задача изобретения - расширение арсенала способов профилактики маститов крупного рогатого скота, основанном на введении биологически активного препарата, в качестве последнего используют биотинилированное производное окисленного декстрана.

Поставленная задача решается тем, что в способе профилактики и терапии маститов коров, включающем применение биологически активного препарата, согласно изобретению, в качестве препарата используют биотинилированное производное окисленного декстрана (БОД), представляющее собой коньюгат, полученный реакцией гидрозида биотина и окисленного декстрана с молекулярной массой 40-70 кДа с образованием азометиновой связи в дозе 0,03 мг/кг каждые 72 часа 3 инъекций.

Способ осуществляется следующим образом.

Способ получения биологически активного препарата биотинилированного производного окисленного декстрана (ПРФ №2537246 от 27.12.2014).

Сухой окисленный декстран с молекулярной массой 40-70 кДа предварительно растворяют в трис-ацетатном буферном растворе с рН 5,0-5,5 до концентрации 5%. Для запуска реакции в реакционную смесь добавляют гидразид биотина в качестве активного реагента в весовом соотношении с декстраном 1:(20-25) в пересчете на массу сухого вещества. Реакцию проводят при температуре 80-90°С в течение 30-60 минут. Гидразид биотина взаимодействует с карбонильными группами окисленного декстрана с образованием азометиновой связи -C=N-.

Полученный биологически активный препарат биотинилированного производного окисленного декстрана представляет собой конъюгат, в котором гидразид биотина и окисленный декстран связаны ковалентными связями. Именно наличие азометиновой связи в конъюгате гидразида биотина с окисленным декстраном обусловливает его специфические биологические свойства имитировать (моделировать) конъюгаты с лекарственными препаратами, имеющими в своей структуре первичные аминогруппы. Далее по тексту препарат обозначается «БОД».

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Определение дозы препарата БОД коровам.

Для определения дозы препарата были сформированы по принципу аналогов 4 группы клинически здоровых коров: три опытных и одна контрольная (n=10). Все животные находились в одной фазе лактации, были после первого отела и не имели явных признаков субклинического мастита -отрицательный Кенотест (CID LINES). Животным опытных групп внутримышечно вводился препарат БОД по схеме, представленной в таблице 1.

Перед введением препарата и каждые последующие трое суток брали пробы молока у всех опытных животных для исследования количества соматических клеток, показатель наличие патологического процесса в вымени. Подсчет количества соматических клеток проводили с помощью прибора - Lactoscan MCC COMBO. За все время проведения опыта, отмечалось удовлетворительное состояние животных, реакций со стороны организма на препарат не наблюдалось.

Результаты влияния препарата БОД на количество соматических клеток в молоке коров представлены в таблице 2.

Из таблицы 2 видно, что в 1 опытной группе не прослеживали тенденции к снижению на протяжении всего опыта, что свидетельствует о не эффективной дозе препарата. Максимальное снижение числа соматических клеток отмечали во 2 и 3 опытных группах, где доза БОД составила 0,03 мг/кг и 0,05 мг/кг. На четвертые сутки опыта в этих группах наблюдали четкую тенденцию по снижению количества соматических клеток в молоке 73,6 и 75,2 тыс/мл³ соответственно. В контрольной группе количество соматических клеток на четвертые сутки проведения опыта составило 80,9 тыс/см. На седьмые сутки отмечаем снижение соматических клеток во 2 и 3 опытных группах относительно контроля в 1,86 и 1,48 раза, на десятые сутки разница с контролем уже была в 2,97 и 2,51 раза, соответственно.

Отмечаем, что, начиная с тринадцатых суток опыта, в контрольной группе количество соматических клеток увеличилось, это говорит о том, что в данной группе животные имеют тенденцию к развитию субклинического мастита, в вымени начало развиваться воспаление, что сопровождалось увеличением количества соматических клеток (99,9 тыс/мл). При этом во всех опытных группах продолжали наблюдать сниженное количество соматических клеток (88,4, 23,9, 25,8 тыс/мл³ соответственно), относительно 2 и 3 опытных групп количество соматических клеток в контроле было в 4,18 и 3,87 раза выше.

Количество соматических клеток максимально снизилось к пятнадцатым суткам опыта во 2 и 3 опытных группах и составило 23,7 и 24,6 тыс./см³. В контрольной группе количество соматических клеток составило 120,9 тыс/см³, что в 5,1 и 4,91 раз выше, чем во 2 и 3 опытных группах.

Таким образом, во 2 и 3 опытных группах наблюдается снижение количества соматических клеток после внутримышечного введения БОД, это указывает на то, что БОД оказывает иммуностимулирующие действие. Так же в опытных группах на всем протяжении опыта не зафиксировали случаев заболевания субклинической формой мастита, в то время как в контроле данное заболевание появилось у 10% животных.

Проведенные исследования определили эффективную дозу БОД. Максимальное снижение соматических клеток наблюдалось в группах коров, препарат которым вводился в дозах 0,03 мг/кг и 0,05 мг/кг. Применение дозы препарата 0,05 мг/кг не целесообразно, так как это ведет к перерасходу препарата при таких же показателях, как и при дозе 0,03 мг/кг.При дозе 0,01 мг/кг отсутствуют заметные эффекты от применения препарата.

Пример 2. Изучение действия БОД для профилактики мастита коров.

Исходя из полученных данных по эффективной дозе БОД, было проведено изучение профилактического действия препарата. Исследование проводили на коровах без явных клинических признаков мастита -отрицательный Кенотест (CID LINES) при первичной диагностике и лабораторного подсчета соматических клеток на Lactoscan MCC COMBO (количество соматических клеток менее 200 тыс/см).

Было сформировано 2 группы животных (n=20) по принципу аналогов.

БОД применяли по следующей схеме:

- опытная группа: внутримышечное введение БОД в дозе 0,03 мг/кг каждые 72 часа 5 инъекций;

- контрольная группа: БОД не применяли.

Результаты влияния БОД на динамику изменения соматических клеток представлены в таблице 3.

В течение трех суток отмечены близкие значения соматических клеток в обеих группах, имеющие не значительное отклонение. В опытной группе с четвертых по пятнадцатые сутки наблюдается динамическое снижение соматических клеток с 68,62 до 85,47%, соответственно относительно контроля. С пятых суток в опытной группе наблюдаются стабильно низкие значения соматических клеток, тогда как в контрольной группе выявлены животные, положительно реагирующие на Кенотест (CID LINES), что в совокупности с повышением соматических клеток указывает на развитие скрытого (субклинического) мастита (табл.4).

Таким образом, применение БОД коровам в дозе 0,03 мг/кг внутримышечно каждые 72 часа 5 инъекции, профилактирует развитие субклинической формы мастита, на что указывает снижение соматических клеток и отрицательный Кенотест (CID LINES).