×
29.05.2020
220.018.21c6

Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Настоящее изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, карбонат кальция, фосфат калия и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. 6 табл., 4 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, микробиологии, и может быть использовано для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, который составляет основу кормовой добавки «Энзимспорин».

Определенный набор питательных веществ необходим микроорганизмам для проявления их полезных свойств [1]. Для получения полноценного питания (азотистые соединения, углеводы, микро- и макроэлементы, другие биологически активные вещества) необходимо, на основании индивидуальных особенностей микроорганизмов, проводить исследования по подбору состава питательных сред [2]. Для повышения биологической активности микроорганизмов в настоящее время все чаще используют дешевые питательные среды, на их основе разрабатывают более совершенные технологии с целью значительного повышения продуктивности бактериальных культур. В состав питательной среды входят различные компоненты.

Неорганические соли используются в питательных средах как дополнительный источник N, Р, О, S, Н. Микроорганизмы лучше усваивают азот в восстановленной форме, остальные элементы - в окисленной форме. В качестве источника азота используют горох шлифованный по ГОСТ 6201-68. Однако, данных по использованию гороха шлифованного для приготовления сред для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 не найдено.

Для оптимизации питательной среды для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, были выбраны следующие неорганические соли: фосфат калия и карбонат кальция и горох шлифованный.

Известна питательная среда [3] для культивирования Bacillus subtilis следующего состава (г/л):

фосфат калия однозамещенный - 0,2-0,4;

сульфат аммония - 1.0-3.0;

цитрат натрия - 1.0-3.0;

сернокислая медь - 0.001-0.01;

сернокислый цинк - 0.002-0.005;

сернокислое железо - 0.0001-0.001;

хлористый кальций - 0.09-0.2;

сернокислый магний - 0.1-0.5;

сернокислый марганец - 0.01-0.1;

пептон - 2.0-8.0;

мальтоза - 1.0-5.0;

вода - остальное

Недостатком данной среды является многокомпонентность.

Известна аналогичная питательная среда [4] для культивирования Bacillus subtilis следующего состава (г/л):

1. Пептон - 12.0;

2. Дрожжевой экстракт - 5.0;

3. Натрий хлористый - 5.0;

4. Вода водопроводная до 1 л;

5. Канамицин - 50 мг/л;

6. Агар-Агар - 20.0;

7. Вода водопроводная до 1 л

Питательную среду формируют в емкости в виде слоя, на который укладывают полупроницаемую мембрану, например, целлофановую пленку. Сверху на пленку наносят посевную дозу штамма бактерий. Культивирование осуществляют в термостате при температуре 34-37°С в течение 20-24 ч. Далее емкость переносят в термостат с температурой 6-10°С и выдерживают при этой температуре в течение суток до образования спор бактерий.

Недостатком данной среды является то, что в состав среды входит канамицин - антибиотический препарат группы аминогликозидов. Для его приобретения требуется оформление разрешающих документов. Так же используется трудоемкая технология посева микроорганизмов.

Недостатком данной среды является то, что, пересев культуры на твердой среде нужно осуществлять каждые 15, максимум 30 дней. Это требует затрат сред, реактивов, энергоресурсов и рабочего времени.

Целью предлагаемого изобретения является увеличение количества бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 и срока хранения культуры на твердой среде, посредством культивирования на жидкой и твердой (агаризованной) питательной среде. Поставленная цель достигается тем, что в питательную среду, содержащую питательную основу и дистиллированную воду, вносится несколько неорганических солей (карбонат кальция и фосфат калия) и горох шлифованный, предварительно обработанный.

В качестве исходного штамма использовали штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, который представляет собой светло-коричневый сухой порошок из лиофильно высушенных бактерий штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. Содержание спор составляет 5×109 КОЕ/г. Навеску спор взвешивали в стерильных условиях на аналитических весах, погрешность которых составляет 0,0002 г.

Из спор готовили суспензию в колбу Эрленмейера объемом 50 мл, содержащую жидкую питательную среду, которую готовят при следующем соотношении компонентов (г/л): пептон ферментативный - 15, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 5, горох шлифованный, предварительно обработанный, в различных количествах, неорганическая соль в различных количествах (см. таблица 2), остальное - дистиллированная вода.

Для использования гороха шлифованного требуется его предварительная обработка. Горох шлифованный, в количестве 100 г/л промыть водопроводной водой, помесить во флакон емкостью 1 литр, и довести до литра дистиллированной водой. Закрыть флакон пробкой герметично. Затем автоклавировать в течении 1 часа при 2 Bar. После автоклавирования остудить до комнатной температуры и дважды процедить через два слоя марли. Полученный после обработки горох соединить с остальными компонентами среды и довести до 1 л дистиллированной водой. Значение рН 7,0-7,2. Стерилизация при 1,1 атм. в течение 45 мин. Полученная среда имеет светло-желтый цвет, «чистый» запах и незначительный осадок. Охлаждали до комнатной температуры.

Затем вносили 5 г спор. Микроорганизмы (штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-12079) выращивали в колбах с жидкой средой в шейкер-инкубаторе «Innova 44» при 250 об/мин (эксцентриситет 5 см) и температуре 37°С в течение 24 часов. Такие условия являются оптимальными для Bacillus subtilis. Для сохранения посевного материала и подсчета колоний, после культивирования на жидкой среде, осуществляли посев на твердую питательную среду, которую готовили при следующем соотношении компонентов: пептон ферментативный - 15, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 5, горох шлифованный, предварительно обработанный, в различных количествах, неорганическая соль в различных количествах (см таблица 1), агар - 18, остальное - дистиллированная вода. Значение рН 7,0-7,2. Стерилизация при 1,1 атм. в течение 40 мин. инкубированные производиться 24 ч, температура 37°С в термостате. Затем осуществляли хранение посевного материала в течение 3-5 месяцев при температуре + 4-8°С.

Для выявления количества микроорганизмов использовали стандартный метод десятикратных разведений, с высевом в стерильных условиях в чашки Петри на твердую питательную среду,

После чего чашки с посевами инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов. В качестве контрольной пробы проводилось культивирование на средах без добавления солей и гороха шлифованного, предварительно обработанного. Для достоверности все опыты были проведены в семикратной повторности. Для культивирования использовали питательные среды (табл. 2).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Влияние фосфата калия (K3PO4).

Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 на средах, содержащих различные концентрации фосфата калия, представлены в таблице 3.

Из приведенных данных видно, что максимальный достоверный рост количества колоний Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 наблюдался в средах с содержанием фосфата калия 0,50 г/л соли. Дальнейшее увеличении концентрации не меняет численность микроорганизмов. Для удешевления среды используем минимальную концентрацию соли, которая дает увеличение численности. Добавление фосфата калия в концентрации 0,5 г/л достоверно увеличивает количество микроорганизмов относительно контроля.

Пример 2. Влияние карбоната кальция (СаСО3).

Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 на средах, содержащих карбонат кальция, представлены в таблице 4.

Добавление карбоната кальция в питательную среду в концентрации 1,0 г/л достоверно увеличивает количество микроорганизмов относительно контроля.

Пример 3. Влияние гороха шлифованного, предварительно обработанного.

Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 в среде, содержащей, горох шлифованный, предварительно обработанный представлены в таблице 5.

При концентрации гороха шлифованного, предварительно обработанного в питательной среде 50 мл/л, наблюдалось увеличение количества колоний Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. При дальнейшем увеличении концентрации численность колоний увеличивается, но твердая среда становится мутной от осадка гороха, что делает затруднительным просмотр колоний на среде. Таким образом, 50 мл/л является оптимальной концентрацией для работы со средой.

Пример 4. Влияние гороха шлифованного, предварительно обработанного, фосфата калия и карбоната кальция на численность микроорганизмов в процессе культивирования

Были выбраны концентрации выше перечисленных ингредиентов, которые максимально увеличивают численность бактерии и качество среды. Таким образом, увеличение количества Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 достигается внесением в питательную среду: 50 мл / гороха шлифованного, предварительно обработанного; 1,0 г/л карбоната кальция; 0,5 г/л фосфата калия. Наблюдаем синергетический эффект взаимодействия компонентов (табл. 6).

Хранение посевного материала на среде с добавление гороха шлифованного, предварительно обработанного, карбоната кальция и фосфата калия возможно в течении 3-4 месяца при температуре + 4-8°С.

Литература

Биотехнология. Под ред. А.А. Баева. М.: Наука, 1984. 309 с.

1. White A., Handler P., Smith Е.L. Principles of biochemistry. Baltimore: The Johns Hopkins University School of Medicine, 1974. 1051 p.

2. Леляк А.И., Костровский В.Г., Рязанкина О.И. и др. Способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis // Патент РФ №2105562, заявлено 14.06.1995, опубл. 27.02.1998.

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 78 items.
13.01.2017
№217.015.74c5

Безопасный экстракционно-флуориметрический способ определения селена в воде

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа определения селена в воде. Сущность способа заключается в том, что к анализируемому раствору добавляют 0,4 мл раствора 3%-ного щелочного борогидрида натрия восстановителя, закрывают пробкой, встряхивают и оставляют на 5 мин для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002597769
Дата охранного документа: 20.09.2016
25.08.2017
№217.015.bad9

Люминесцирующие металлсодержащие полимеризуемые композиции и способ их получения

Изобретение относится к химии и технологии материалов, преобразующих электромагнитное излучение, и используется для получения люминесцирующих и избирательно поглощающих электромагнитное излучение металлсодержащих полимерных композиций для светотехники, опто- и микроэлектроники. Основой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002615701
Дата охранного документа: 06.04.2017
26.08.2017
№217.015.eda4

Индикатор для обнаружения повышенной концентрации аммиака в воздухе рабочей зоны

Изобретение относится к устройствам для выявления утечек аммиака и может быть использовано в областях химической и холодильной промышленностей, в сфере производства удобрений и аммиака, а также для контроля воздушной среды в производственных помещениях. Индикатор представляет собой основу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002628883
Дата охранного документа: 22.08.2017
29.12.2017
№217.015.f6d1

Способ пластической деформации металлов и сплавов

Изобретение относится к области пластической обработки металлов, таких как алюминий и его сплавы, и может быть использовано в различных областях промышленности и науки для глубокого формования металлических материалов. Способ пластической деформации алюминия и его сплавов включает механическое...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639278
Дата охранного документа: 20.12.2017
29.12.2017
№217.015.f79d

Способ получения линимента на березовых почках

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения линимента на березовых почках. Способ получения линимента на березовых почках, включающий подготовку свиного жира, закладку березовых почек и свиного жира в емкость и воздействие на смесь жира и почек...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639571
Дата охранного документа: 21.12.2017
29.12.2017
№217.015.f90b

Дефектоскоп для сварных швов

Изобретение относится к методам неразрушающего контроля и позволяет обнаруживать дефекты малых размеров и глубокого залегания в сварных швах, соединяющих, преимущественно, неферромагнитные материалы. Дефектоскоп для сварных швов включает в себя аппаратную и программную части. Дефектоскоп...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639592
Дата охранного документа: 21.12.2017
29.12.2017
№217.015.fb66

Способ концентрирования микроэлементов

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в практике аналитических, агрохимических, медицинских лабораторий. Осуществляют концентрирование микроэлементов для последующего аналитического определения путем соосаждения с диантипирилметаном, образующим в системе вода -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002640337
Дата охранного документа: 27.12.2017
13.02.2018
№218.016.24a1

Мембранный экстрактор

Изобретение относится к экстракторам системы жидкость-жидкость для применения в биотехнологической, фармацевтической, химической, пищевой промышленности, и, в частности, может быть использовано для ускорения выделения целевых продуктов метаболизма микроорганизмов, например антибиотиков из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002642641
Дата охранного документа: 25.01.2018
04.04.2018
№218.016.3134

Способ определения иодид-ионов катодной вольтамперометрией

Изобретение относится к области аналитической химии. Способ определения йодид-ионов катодной вольтамперометрией проводят на серебряном электроде в фоновом растворе 0,1 М ацетата натрия, выдерживая потенциал электролиза в диапазоне потенциалов (-0,15±0,05) В при скорости развертки 20 мВ/с - 50...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002645003
Дата охранного документа: 15.02.2018
10.05.2018
№218.016.442b

Биоразлагаемый поливной шланг для капельного орошения

Изобретение относится к области устройств для капельного орошения. Поливной сочащийся шланг для капельного орошения выполнен из биоразлагаемого бумажного крафт-шпагата. Крафт-шпагат пропитан жидким растительным маслом. Шланг выполнен методом плетения. Плетение шланга обеспечивает микропористую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002649857
Дата охранного документа: 05.04.2018
Showing 1-10 of 18 items.
13.01.2017
№217.015.74c5

Безопасный экстракционно-флуориметрический способ определения селена в воде

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа определения селена в воде. Сущность способа заключается в том, что к анализируемому раствору добавляют 0,4 мл раствора 3%-ного щелочного борогидрида натрия восстановителя, закрывают пробкой, встряхивают и оставляют на 5 мин для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002597769
Дата охранного документа: 20.09.2016
29.12.2017
№217.015.fb64

Состав для экстракции в водных расслаивающихся системах без органического растворителя

Изобретение относится к химии и технологии жидкостной экстракции, а именно к составу экстракции в водных расслаивающихся системах без органического растворителя. Состав представляет собой состав на основе производных антипирина и органической кислоты: вода - минеральная кислота -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002640340
Дата охранного документа: 27.12.2017
29.12.2017
№217.015.fb66

Способ концентрирования микроэлементов

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в практике аналитических, агрохимических, медицинских лабораторий. Осуществляют концентрирование микроэлементов для последующего аналитического определения путем соосаждения с диантипирилметаном, образующим в системе вода -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002640337
Дата охранного документа: 27.12.2017
13.02.2018
№218.016.24a1

Мембранный экстрактор

Изобретение относится к экстракторам системы жидкость-жидкость для применения в биотехнологической, фармацевтической, химической, пищевой промышленности, и, в частности, может быть использовано для ускорения выделения целевых продуктов метаболизма микроорганизмов, например антибиотиков из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002642641
Дата охранного документа: 25.01.2018
10.05.2018
№218.016.4e8f

Способ экстракции ионов металлов

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для разделения и определения металлов. Способ экстракции ионов металлов включает извлечение из кислых растворов. В качестве легкоплавкого экстрагента используют дитиоцианат диантипирилметания, образующийся в системе вода -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650948
Дата охранного документа: 18.04.2018
28.09.2018
№218.016.8c64

Питательная среда для культивирования bacillus subtilis вкпм в-12079

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 96%-ный спиртовой экстракт кофе арабика и дистиллированную воду при заданном соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002668173
Дата охранного документа: 26.09.2018
28.09.2018
№218.016.8c9f

Питательная среда для культивирования bacillus subtilis

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 40%-ный спиртовой экстракт кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis L.) и дистиллированную воду...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002668178
Дата охранного документа: 26.09.2018
28.09.2018
№218.016.8cb6

Способ активации спор бактерий bacillus subtilis вкпм в-12079 перед определением количества жизнеспособных клеток

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ активации спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 перед определением количества жизнеспособных клеток. Способ включает активацию сухих спор Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 ультразвуком в течение 15-20 секунд при температуре 32-34°С,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002668180
Дата охранного документа: 26.09.2018
25.01.2019
№219.016.b3d5

Питательная среда для культивирования pseudomonas fluorescens ap-33

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens АР-33 содержит мелассу, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, сульфат магния семиводный, горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту, лапрол для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002678133
Дата охранного документа: 23.01.2019
16.02.2019
№219.016.baf7

Экстракционно-вольтамперометрический способ определения ионов цинка, кадмия, свинца и меди в поверхностных водах

Изобретение относится к аналитической химии компонентов ионных форм неорганических веществ, определяемых в атмосферных осадках и поверхностных водах. Экстракционно-вольтамперометрический способ определения ионов цинка, кадмия, свинца и меди в поверхностных водах включает экстракцию ионных форм...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680075
Дата охранного документа: 14.02.2019
+ добавить свой РИД