×
17.07.2019
219.017.b577

Результат интеллектуальной деятельности: Способ выявления генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ выявления генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота. Способ включает в себя выделение РНК из биологического материала в виде экстракта фекалий или фрагментов органов брюшной полости сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда. Фрагмент генома возбудителя короновирусной инфекции имеет следующие нуклеотидные последовательности: BCoVF 5'-GATCAAATTGCTAGT-3' - прямой праймер; BCoVR 5'-CAGTCTGCTTAGTTA-3' - обратный праймер; BCoVP 5'-FAM-GGATGCCACTAAGCCA-3'-BHQ1 – зонд. Изобретение расширяет арсенал способов диагностики короновирусной инфекции у крупного рогатого скота. 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики коронавирусной инфекции у животных, как в практике ветеринарной службы, так и для научных исследований.

Известно техническое решение, в котором коронавирусную инфекцию определяют методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени (патент РФ №2504585, C12Q 1/68, 2014 г.), включающий выделение РНК из биологического материала, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией.

Также известен способ выявления коронавирусных инфекций методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени (патент РФ №2460803, C12Q 1/68, 2014 г. - прототип), включающий выделение РНК из биологического материала по выбору: мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту, бронхоальвеолярный лаваж, секционный материал, образцы культуральной жидкости от инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего положительного контроля мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold.

Недостатком прототипа является отсутствие возможности получения достоверной диагностики короновирусной инфекции КРС.

Техническим результатом является получение достоверной диагностики коронавирусной инфекции КРС с помощью ОТ - ПЦР в реальном времени.

Технический результат достигается тем, что в способе выявления генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота, включающем выделение РНК из биологического материала по выбору: мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту, бронхоальвеолярный лаваж, секционный материал, образцы культуральной жидкости сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold, согласно изобретению для выделения РНК используют дополнительный биологический материал в виде экстракта фекалий или фрагментов органов брюшной полости, взятый от животных инфицированных возбудителем коронавирусной инфекции, а для внутреннего контрольного образца - суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103, и для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя коронавирусной инфекции и фрагмент генома бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

BCoVF 5'-GATCAAATTGCTAGT-3' - прямой праймер

BCoVR 5'-CAGTCTGCTTAGTTA-3' - обратный праймер

BCoVP 5'-FAM-GGATGCCACTAAGCCA-3' - BHQ1 - зонд

MS2F, 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер

MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер

MS2P, Су5 5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' - зонд, при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала; Су5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции -отрицательный.

Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для получения достоверной диагностики коронавирусной инфекции животных используют две последовательные реакции: обратной транскрипции вирусной РНК для получения кДНК и полимеразной цепной реакции для амплификации фрагмента полученной кДНК матрицы. Обе реакции проводятся последовательно в одной ПЦР-пробирке (one-tube) с использованием специфичных для участка генома коронавируса олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и разных видов контроля для которых используют различные формы материала бактериофага MS2: суспензия и фрагмент генома со специфическими к нему праймерами и зондом. Такая постановка ОТ-ПЦР в реальном времени сокращает и упрощает процедуру анализа, снижает риск контаминации и возможность ошибки при переносе кДНК в другую пробирку для ПЦР. Кроме того, детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5' конце олигонуклеотидного зонда.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ рекомендовано использовать в ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики коронавирусной инфекции у животных что соответствует критерию «промышленная применимость».

Способ выявления генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота осуществляется следующим образом.

Для исследования респираторной коронавирусной инфекции используют мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту, бронхоальвеолярный лаваж, секционный материал, образцы культуральной жидкости. Для исследования на коронавирусный энтерит и носительство коронавирусов используют предварительно выделяют РНК из экстракта фекалий или фрагментов органов от инфицированных животных сорбционным методом. Проводят синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции с использованием внутреннего контрольного образца - суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103/мл и положительного контрольного образца в качестве, которого используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома коронавируса BCoV и фрагмент генома бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеитидными последовательностями:

BCoVF 5'-GATCAAATTGCTAGT-3' - прямой праймер

BCoVR 5'-CAGTCTGCTTAGTTA-3' - обратный праймер

BCoVP 5'-FAM-GGATGCCACTAAGCCA-3' - BHQ1 - зонд

MS2F, 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер

MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер

MS2P, Су5 5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' - зонд

и полимеразной цепной реакции - с проведением 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома возбудителя коронавирусной инфекции олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда.

Затем измеряют накопление флуоресцентного сигнала по каналам: FAM/Green для специфического сигнала; Су5/Red для сигнала внутреннего контроля и интерпретируют результаты на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией (Threshold). Если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции -отрицательный.

Использование следующих олигонуклеотидных праймеров BCoVF, и BCoVR флуоресцентно-меченного зонда BCoVP обеспечивает специфическое выявление РНК коронавируса у животных.

Использование для разных видов контроля различные формы материала бактериофага MS2: суспензии и фрагмента генома со специфическими к нему праймерами и зондом обусловлено тем, что это позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения РНК из образцов.

Выбор последовательности и расчет первичной структуры олигонуклеотидных праймеров и зондов.

Проведен сравнительный анализ доступных в базе данных GenBank нуклеотидных последовательностей N гена BCoV, кодирующего один из пяти главных структурных белков вириона (nucleocapsid protein (N) gene) коронавирусов, входящих в семейство Coronaviridae. Как и другие представители этого семейства, коронавирусы представлены однонитевой нефрагментированной РНК позитивной полярности, размером порядка 26-30 тысяч оснований. N белок является фосфопротеином с молекулярным весом 50-60 кДа, который взаимодействуя с геномной РНК образует вирусный нуклеокапсид и играет определенную роль в репликации вирусной РНК.

С помощью программы "BioEdit 7.0" выравнены нуклеотидные последовательности N гена BCoV - представителей родов коронавирусов (альфа, бета и гамма подсемейств) нуклеотидной последовательностью гена N генома коронавируса изолята BCoV/FRA/EPI/Caen/2004/14 (Bovine corona-virus isolate BCoV/FRA/EPI/Caen/2004/14 nucleocapsid protein (N) gene, complete cds. (код доступа KT318096). В результате анализа построенного элайнмента внутри гена капсидного белка N выбран участок между 700 и 800 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности.

С помощью программы "Oligo 6.0" рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд BCoVP, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров BCoVF, и BCoVR. Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

С помощью программы "Oligo 6.0" проанализирована нуклеотидная последовательность бактериофага MS2 (Enterobacteria phage MS2 isolate ST4, complete genome. ACCESSION EF204940). Бактериофаг MS2 содержит однонитевую позитивно ориентрованную РНК размером 3569 оснований. В результате анализа внутри гена белка 'созревания' (maturation protein) выбран участок между 200 и 350 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд MS2P, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров MS2F и MS2R. Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

Пример конкретного осуществления способа выявления генома возбудителя коронавирусной инфекции у животных

Для исследования используют следующий материал:

Для исследования на коронавирусный энтерит и носительство коронавирусов используют:

- фекалии, которые берут весом 5 г. в стерильный пластиковый контейнер;

- из тканей кишечника вырезают кусочки размером 1 см3 и помещают в стерильный контейнер. Далее обрабатывают исследуемый материал.

Пробы тканей кишечника с содержимым (до 1 г) гомогенизируют с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков, затем готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе. Суспензию переносят в пробирку объемом 1,5 мл и центрифугируют при 9000 об/мин в течение 1 мин. Аликвоту надосадочной жидкости (0,1 мл) используют для экстракции РЖ. Из фекалий (1-5 г) готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе. Взвесь фекалий декантируют в течение 5-10 минут. Отбирают 1 мл надосадочной жидкости и переносят в чистую пробирку 1,5 мл, центрифугируют при 5000 об/мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, в течение 5 мин. Экстракцию РНК из осветленного экстракта фекалий проводят по возможности, сразу. При необходимости хранения замораживают.

Для исследования респираторной коронавирусной инфекции используют по выбору: мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту, бронхоальвеолярный лаваж, секционный материал, образцы культуральной жидкости.

• Выделения из носоглотки и трахеи, мазки со слизистой носовой полости, снимают с помощью стерильного зонда, зонд помещают в пластиковую микропробирку объемом 1,5 мл с 0,5 мл стерильного физиологического раствора/фосфатного буфера/транспортной среды.

• Фарингеальные смывы помещают в стерильный контейнер. Смывы, мазки берут на исследование без предварительной подготовки.

Вязкую по консистенции мокроту обрабатывают реагентами типа муколизин, с целью снижения вязкости.

Анализ проводят с помощью набора реагентов «ПЦР-КОРОНОВИРУС-ФАКТОР» http://www.vetfaktor.ru/ (см. таблицу 1 и 2), который состоит из трех этапов: http://www.vetfaktor.ru/ экстракция НК;

• проведение ОТ-ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени;

• учет результатов анализа.

Реакцию ОТ-ПЦР РВ проводят в одной пробирке.

Подготовка образцов к проведению ПЦР

Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл. Успешное прохождение реакции контролируют использованием ПКО BCoV, ВКО BCoV и РНК буфера.

Буфер для проведения ОТ-ПЦР, ПЦР буфер BCoV; состав: 2,5х ПЦР-буфер (хлорид калия, 100 мМ, Трис-HCl, рН 8,8 100 мМ, глицерол 1%, Tween-20 0.02%); хлорид магния, 5 мМ; деионизированная вода.

Смесь для проведения ПЦР, ПЦР-смесь BCoV состав: эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (дНТФ) в концентрации 0,25 мМ; деионизированная вода, смесь праймеров и флуоресцентного зонда на корона-вирус (прямой и обратный праймеры BCoV F и BCoVR в концентрации 0,2 мкМ, зонд BCoVP-FAM в концентрации 0,1 мкМ, взятых в соотношении 1:1:0,5), смесь праймеров и флуоресцентного зонда на ПКО (прямой и обратный праймеры MS2F и MS2R в концентрации 0,2 мкМ, зонд MS2P-Су5 в концентрации 0,1 мкМ, взятых в соотношении 1:1:0,5).

Смесь ферментов, RT PCR ENZ, состав: ДНК полимераза с антителами, ингибирующими активность фермента, TAQ POLYMERASE (5 ед/мкл), обратная транскриптаза MMLV REVERSE TRANSCRIPTASE (100 ед/мкл).

Буфер для разведения РНК, РНК буфер, состав: деионизованная вода.

Внутренний контрольный образец, ВКО BCoV; состав: суспензия бактериофага MS2 (5×103/мл)

- Отрицательный контрольный образец, ОКО (ТЕ буфер); состав: ТЕ буфер (10 мМ Tris-HCl, 0,5 мМ EDTA, рН 8,0)

- Положительный контрольный образец, ПКО BCoV; состав: смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса BCoV и фрагмент генома бактериофага MS2, взяты в соотношении 1:1.

В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию:

10 мкл ПЦР БУФЕР BCoV

5 мкл ПЦР СМЕСЬ BCoV

0,75 мкл RT PCR ENZ.

Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации НК исследуемых и контрольных проб. В них вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.

Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки внести:

а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл РНК буфера;

б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую внести по 10 мкл НК соответствующей пробы, включая пробу ВК-);

в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) 10 мкл ПКО BCoV.

Проведение реакции ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией

Параметры температурно-временного режима амплификации на приборах «Rotor-Gene Q», «ДТ-96» и «CFX96» указаны в таблице 3.

Поместить подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора.

Интерпретация результатов анализа

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в режиме «реального времени» в соответствии с инструкцией производителя к прибору.

Учет результатов ОТ-ПЦР проводился по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции НК в соответствии с таблицей 4.

Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале FAM/Green и для отрицательного контроля этапа ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.

Образцы, для которых по каналу Су5/Red значение Ct отсутствует или превышает 35 цикл (при этом по каналу FAM/ Green значение Ct также отсутствует) требуют повторного проведения исследования с этапа ПЦР. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале Су5/Red указывает на присутствие ингибиторов в пробах или на ошибки при постановке реакции ОТ-ПЦР. Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции НК.

Образец считается положительным, РНК коронавируса КРС присутствует, если наблюдается рост специфического сигнала на канале FAM/Green, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (см. Табл. 4). Если для исследуемого образца по каналу FAM/ Green значение Ct определяется позднее 35 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (наблюдается рост специфического сигнала на канале FAM/Green) - образец считается положительным.

Образец считается отрицательным (РНК коронавируса КР отсутствует) если не определяется значение Ct (не наблюдается рост специфического сигнала) на канале FAM/ Green, при этом значения Ct по каналу Су5/Red и Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл.4).

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 201-210 of 465 items.
13.06.2019
№219.017.8155

Устройство для отделочно-зачистной обработки

Изобретение относится к машиностроению и может быть использовано для шлифования, полирования и упрочнения поверхностного слоя деталей в свободно гранулированной абразивной среде. Устройство содержит установленный на станине барабан с приводом, выполненный из секций со средствами для загрузки и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002691156
Дата охранного документа: 11.06.2019
14.06.2019
№219.017.82d2

Марка для идентификации износа дорожного покрытия

Изобретение относится к строительству и эксплуатации автомобильных дорог и аэродромов и может быть использовано при измерении износа дорожных и аэродромных покрытий. Технический результат - упрощение изготовления марки и идентификации величины оставшейся после износа высоты дорожного покрытия....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002691415
Дата охранного документа: 13.06.2019
15.06.2019
№219.017.833a

Станок для отделочно-зачистной и упрочняющей обработки

Изобретение относится к машиностроению и может быть использовано для отделочно-зачистной и упрочняющей обработки деталей в свободной гранулированной среде. Станок содержит упруго установленный на станине со средствами для загрузки и выгрузки барабан с приводом, имеющий торцевые стенки. Барабан...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002691472
Дата охранного документа: 14.06.2019
15.06.2019
№219.017.8378

Комбинированная система для отопления и электроснабжения зданий с вентилируемым фасадом

Изобретение относится к области энергообеспечения и может быть востребовано для электроснабжения сельскохозяйственных помещений с вентилируемым фасадом. Для повышения надежности электроснабжения и возможности потребления большого количества солнечного излучения в комбинированной системе для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002691509
Дата охранного документа: 14.06.2019
20.06.2019
№219.017.8d19

Устройство для оценки износа асфальтового покрытия

Изобретение относится к дорожному строительству и может быть использовано при оценке эксплуатационных качеств дорожных покрытий. Технический результат - упрощение изготовления устройства и оценки износа асфальтового покрытия. Устройство для оценки износа асфальтового покрытия включает репер,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002691803
Дата охранного документа: 18.06.2019
27.06.2019
№219.017.988d

Способ получения комбикорма для крупного рогатого скота

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности к способу получения комбикорма для крупного рогатого скота. Способ включает обработку семян подсолнечника после вторичной очистки с фрагментами корзинок и стеблей подсолнечника для получения жмыха, экструдирование, введение в жмых...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002692593
Дата охранного документа: 25.06.2019
02.07.2019
№219.017.a303

Устройство для контроля массы сотовых рамок улья

Изобретение относится к пчеловодству, а именно к контролю количества меда на индивидуальных и коллективных пасеках. Устройство для контроля массы сотовых рамок улья содержит корпус с двойной стенкой из фанеры, поддоном и сотовыми рамками. Устройство также включает контроллер пасеки и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002692919
Дата охранного документа: 28.06.2019
03.07.2019
№219.017.a39c

Измельчитель белкового корма

Изобретение относится к устройствам для измельчения и может быть применено для белковых кормов, а именно подсолнечного жмыха. Устройство содержит загрузочный бункер, заслонку, корпус, раму, электродвигатель, ротор с дисками, между которыми установлены ножевые блоки. Устройство имеет комплект...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002693260
Дата охранного документа: 01.07.2019
03.07.2019
№219.017.a3d8

Марка для определения износа дорожного покрытия

Изобретение относится к строительству и эксплуатации автомобильных дорог и аэродромов и может быть использовано при измерении износа дорожных и аэродромных покрытий. Технический результат - упрощение изготовления марки для определения износа дорожного покрытия. Марка для определения износа...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002693025
Дата охранного документа: 01.07.2019
03.07.2019
№219.017.a40e

Экструдер для приготовления белкового корма

Изобретение относится к кормопроизводству и может быть использовано для приготовления белкового корма, а именно подсолнечного жмыха в сыпучем виде. Экструдер включает корпус с загрузочной воронкой. В корпусе расположены прессующий с конической головкой и подающий шнеки, имеющие навивку в форме...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002693072
Дата охранного документа: 01.07.2019
Showing 201-210 of 230 items.
29.01.2020
№220.017.fafd

Способ повышения иммунобиологической реактивности телят при специфической профилактике вирусных респираторных заболеваний

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к способу повышения иммунобиологической реактивности телят при специфической профилактике вирусных респираторных заболеваний, для этого используют иммуностимулирующий препарат и водный раствор серебра, содержащий не более 0,8 мг ионов...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002712237
Дата охранного документа: 27.01.2020
17.02.2020
№220.018.033c

Способ определения днк ткани дятла (picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к методам определения видовой принадлежности мяса с помощью полимеразной цепной реакции. Выделяют ДНК из ткани птиц семейства дятловых (Picidae). Осуществляют постановку полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002714287
Дата охранного документа: 13.02.2020
24.04.2020
№220.018.1891

Способ выявления днк вируса нодулярного дерматита (lsdv) в биологическом материале животных с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления ДНК вируса нодулярного дерматита (LSDV) в биологическом материале животных с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, включающем выделение ДНК возбудителя инфекционного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002719719
Дата охранного документа: 22.04.2020
03.07.2020
№220.018.2de3

Тест-система для определения днк ткани дятла (picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест систему для идентификации ДНК ткани ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящая из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002725216
Дата охранного документа: 30.06.2020
03.07.2020
№220.018.2df5

Тест-система для идентификации днк ткани ежа обыкновенного (erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для идентификации ДНК ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002725215
Дата охранного документа: 30.06.2020
03.07.2020
№220.018.2e2f

Тест-система для идентификации днк ткани перепелки обыкновенной (coturnix coturnix) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для идентицикации ДНК ткани перепелки обыкновенной (Coturnix coturnix) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002725210
Дата охранного документа: 30.06.2020
04.07.2020
№220.018.2e9e

Тест-система для идентификации днк тканей крыс и мышей в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для идентификации ДНК ткани крыс (Rattus) и мышей (Mus musculus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящую из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002725539
Дата охранного документа: 02.07.2020
12.07.2020
№220.018.31f3

Тест-система для выявления днк вируса нодулярного дерматита (lsdv) в биологическом материале животных с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для выявления ДНК вируса нодулярного дерматита (LSDV) в биологическом материале животных с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, включающей буфер для проведения полимеразной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002726242
Дата охранного документа: 10.07.2020
12.07.2020
№220.018.322a

Способ выявления днк ткани домашнего осла (equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ идентификации ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающем выделение ДНК из ткани животного сорбционным методом, постановку полимеразной цепной реакции с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002726248
Дата охранного документа: 10.07.2020
16.07.2020
№220.018.32cf

Тест-система для идентификации днк ткани медведя (ursus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для идентификации ДНК ткани медведя (Ursus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящую из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002726429
Дата охранного документа: 14.07.2020
+ добавить свой РИД