×
16.05.2019
219.017.5231

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НИОСОМАЛЬНОЙ ФОРМЫ ЦЕФОТАКСИМА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к способу получения ниосомальной формы цефатоксима путем обращенно-фазовой отгонки, заключающийся в том, что хлороформенный раствор сорбитана моностеарата (Span 60), холестерина, полиэтиленгликоля-4000 и дицетилфосфата в молярном соотношении 60:34:5:1 соответственно (38 ммоль компонентов на 50 мл хлороформа) смешивали с раствором цефотаксима (3 мг/мл) в 0,01 М фосфатно-солевом буфере pH 7,4 в соотношении органической и водной фаз 5:1, затем смесь подвергают воздействию ультразвукового дезинтегратора течение 5 минут, амплитуда 7,5 мкм, частота 20 кГц, эмульсию перемещают в круглодонную колбу с тефлоновой мешалкой и отгоняют хлороформ на роторном испарителе в течение 20 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°C и 150 оборотах в минуту, затем 25 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (55±1)°C, 200 оборотах в минуту, далее к смеси добавляют 20% первоначального объема водной фазы и продолжают отгонку в течение 45 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°C и 140 оборотах в минуту, препарат переносят в чистую посуду и оставляют при (20±5)°C на 12 ч. Способ обеспечивает получение ниосом с инкапсулированным цефатоксимом с высокой эффективностью включения действующего вещества (63,7%) и может быть применен для микрокапсулирования антибактериальных препаратов в ниосомы. 5 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, в частности к способу микрокапсулирования антимикробных препаратов в ниосомы. Может быть использовано в медицинской и ветеринарной практике при применении антибиотиков в составе ниосом, что снижает степень их инактивации и позволяет оптимизировать антимикробное действие за счет концентрации микровезикул на основе неионных ПАВ.

Известна система доставки биологически активных веществ с помощью ниосом, заключающаяся в интенсивном механическом перемешивании при комнатной температуре в течение 5 мин смеси ПЭГ-12 диметикона, масла авокадо, экстракта стволовых клеток и гиалуроновой кислоты. Недостатком данного способа является отсутствие сведений об эффективности включения действующих веществ в соответствующих препаратах [1].

Известна модификация способа получения ниосом с использованием обращенно-фазной отгонки, предложенная Luciani с соавт. Согласно этому способу смесь Span 60, Solulan С-24, стеарилового эфира поли-100-оксиэтилена, холестерина, N-пальмитоилглюкозамина диспергируется в водном растворе включаемого вещества (гадобенат димеглюмина). Затем полученный раствор нагревают на водяной бане при 90°C в течение 30 мин и подвергают воздействию ультразвукового дезинтегратора в течение 5 мин (амплитуда 10 мкм). Среднее значение размеров частиц дисперсии при этом составило 163-268 нм в зависимости от соотношения компонентов препарата. Эффективность включения действующего вещества в микровезикулы, определенная методом спектрофотометрии, находилась в пределах 4,6-8% от общего количества гадобенат димеглюмина (в молях), содержащегося в препарате. Недостатком данного способа является низкая эффективность включения действующего вещества в микровезикулы [2].

Известен способ получения ниосомальных препаратов, в соответствии с которым смесь сорбитана моностеарата, холестерина и дицетилфосфата (молярное соотношение 47,5:47,5:5 соответственно) растворяют в 15 мл Диэтилового эфира и эмульгируют в присутствии 2 мл водной фазы, содержащей действующее вещество (диклофенак натрия) в концентрации 5 мг/мл. Органический растворитель удаляют при пониженном давлении при комнатной температуре. Полученный гель затем гидратируют в присутствии 3 мл фосфатно-солевого буфера (pH 7,4). Смесь выдерживают при пониженном давлении до завершения гидратации. Эффективность включения действующего вещества составила 47,01±1,83% [3].

Рассмотренный способ имеет ряд существенных недостатков. В частности, в качестве органической фазы используется диэтиловый эфир, имеющий низкую температуру кипения, а также способный образовывать взрывоопасные смеси с воздухом и при хранении - нестойкие пероксиды, которые могут быть причиной самовоспламенения при комнатной температуре. В этом способе также отсутствует описание стандартизованных параметров температуры и времени этапа гидратации ниосомального геля, что может приводить к получению серий ниосомальных препаратов с разными показателями качества.

Наиболее близким изобретением к описываемому способу по технической сущности является способ получения ниосомальной формы офлоксацина путем обращенно-фазовой отгонки. Хлороформенный раствор сорбитана моностеарата, холестерина, полиэтиленгликоля-4000 и дицетилфосфата в молярном соотношении 35:27:1:5 соответственно, смешивают с 0,025 М раствором калия фосфорнокислого, содержащего офлоксацин в соотношении 5:1 по объему и эмульгируют с помощью ультразвукового дезинтегратора в течение 5 мин. Затем удаляют хлороформ путем отгонки при пониженном давлении с использованием роторного испарителя, к полученному ПАВ-липидному гелю добавляют 20% от первоначального объема водной фазы и проводят гидратацию геля в течение 1 ч при (50±1)°C, после чего дисперсию ниосом выдерживают при температуре (22±2)°С в течение 12 ч. Эффективность включения антибиотика составила 71,2% [4].

Рассмотренный способ имеет ряд недостатков, основными из которых является отсутствие стандартных условий обращенно-фазной отгонки и низкая эффективность включения для гидрофильных соединений, таких как антибиотики цефалоспоринового ряда.

Целью изобретения является разработка способа получения ниосомальной формы цефотаксима на основе неионных ПАВ.

Технический результат предлагаемого изобретения достигается путем оптимизации технологии конструирования ниосом, состава и соотношения структурообразующих компонентов. Применение в качестве основных структурных компонентов сложных эфиров стеариновой и олеиновой кислот в количестве до 60 мол. %, обеспечивает устойчивость дисперсии к окислению и высокую эффективность включения цефотаксима, а также биосовместимость и низкую токсичность. Введение в состав дисперсии дицетилфосфата индуцирует отрицательный заряд на поверхности ниосом, что препятствует агрегации везикул при хранении. Наличие в составе ниосом полиэтиленгликоля позволяет повысить эффективность включения антибактериальных препаратов в ниосомы и создает стерические препятствия для взаимодействия с белками in vivo, что способствует увеличению времени циркуляции ниосом в организме. Проведение трехэтапной обращенно-фазной отгонки позволяет эффективно и воспроизводимо удалить хлороформ из готового препарата, без неконтролируемого вскипания смеси.

Заявляемый способ обладает следующими отличительными от прототипа признаками:

- Стандартизованные условия обращенно-фазной отгонки;

- Контролируемое и полное удаление хлороформа из готового препарата;

- Поддержание постоянного pH препарата за счет использования буферного раствора в качестве водной фазы;

- Повышенная эффективность включения гидрофильных соединений;

- Высокая гомогенность ниосомальной дисперсии.

Способ осуществляется следующим образом.

Сорбитан моностеарата (Span 60), холестерин, полиэтиленгликоль-4000 и дицетилфосфат в молярном соотношении 60:34:5:1 растворяли при перемешивании в хлороформе (38 ммоль компонентов на 50 мл хлороформа). К смеси добавляли раствор цефотаксима (3 мг/мл) в 0,01 М фосфатно-солевом буфере pH 7,40, соотношение органической и водной фаз составляет 5:1. Смесь подвергают воздействию ультразвукового дезинтегратора (Soniprep 150, США) в течение 5 минут, амплитуда 7,5 мкм, частота 20 кГц. Эмульсию перемещают в круглодонную колбу с тефлоновой мешалкой и отгоняют хлороформ на роторном испарителе в режиме в течение 20 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°С и 150 оборотах в минуту, затем 25 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (55±1)°С, 200 оборотах в минуту. Далее к смеси добавляют 20% первоначального объема водной фазы и продолжают отгонку в течение 45 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°С и 140 оборотах в минуту. Препарат переносят в чистую посуду и оставляют при (20±5)°С на 12 ч.

Определение эффективности включения препарата в ниосомы осуществляли по следующей методике.

К навеске ниосом с включенным в них цефотаксимом добавляют 4-кратный объем изопропилового спирта, выдерживают в течение 15 минут и тщательно перемешивали. Затем фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и центрифугировали при 2700 g в течение 10 минут. Супернатант использовали для количественного анализа содержания цефотаксима. Количественный анализ на содержание антибиотика проводили методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией и использованием калибровочных растворов цефотаксима в качестве стандарта. Проводят не менее пяти измерений для каждого раствора. Эффективность включения антибиотика определяют относительно исходной концентрации по формуле:

где ЭВ - эффективность включения цефотаксима в ниосомы, %; С - концентрация антибиотика в супернатанте, мг/мл; Сисх - исходная концентрация антибиотика в растворе, мг/мл.

Визуализация частиц в составе препарата проводится методом сканирующей зондовой микроскопии в электронном микроскопе для биологических исследований «EVO LS 10» («Carl Zeiss», NTS Германия).

Для получения препаратов пригодных к изучению в электронном микроскопе взвесь везикул разводили в дистиллированной воде по стандарту мутности Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов (ГИСК) им. Л.А. Тарасевича. За единицу мутности была принята мутность суспензии живых клеток бактерий-возбудителей тифа в физиологических растворах, содержащих в 1 мл 100 млн клеток. Полученный раствор соответствующей мутности затем разводили водой I типа в соотношении 1:50 по объему. На двухсторонний углеродный диск наносили 1 мкл полученной взвеси, равномерно распределяя по поверхности. Полученные препараты высушивали на воздухе и сканировали в электронном микроскопе для определения формы и размера микрочастиц.

Расчет индекса полидисперсности определяли по формуле:

где rw - среднемассовый радиус, rn - среднечисленный радиус, Ni - общее количество измеренных микровезикул, ri - результат отдельного измерения радиуса частицы.

Исследование гомогенности дисперсий с помощью проточной цитометрии проводили на приборе «Attune». Параметры измерения: объем пробы - 300 мкл, скорость потока - 100 мкл/мин. Условия прекращения регистрации: 10000 частиц, 5 мин. Для анализа результатов выбирают следующие оси соответствующих гистограмм: VL1-H - VL2-H.

Возможность практического применения заявленного способа подтверждается примерами его конкретного выполнения с использованием совокупности заявляемых признаков.

Пример 1.

В 50 мл хлороформа растворяли при перемешивании 0,4902 г сорбитана моностеарата (Span 60), 0,2567 г холестерина, 0,2567 г полиэтиленгликоля PEG-4000 и 0,2567 г дицетилфосфата в молярном соотношении составляют 60:34:5:1 соответственно. К смеси добавляли 10 мл раствор цефотаксима (3 мг/мл) в 0,01 М фосфатно-солевом буфере pH 7,40. Смесь подвергают воздействию ультразвукового дезинтегратора (Soniprep 150, США) в течение 5 минут, амплитуда 7,5 мкм, частота 20 кГц. Эмульсию перемещают в круглодонную колбу с тефлоновой мешалкой и отгоняют хлороформ на роторном испарителе в режиме в течение 20 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°С и 150 оборотах в минуту, затем 25 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (55±1)°С, 200 оборотах в минуту. Далее к смеси добавляют 2 мл воды I типа и продолжают отгонку в течение 45 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°С, 140 оборотах в минуту. Препарат переносят в чистую посуду и оставляют при (20±5)°С на 12 ч.

Эффективность включения цефотаксима составила 63,7±1,2%. Опытные препараты ниосом содержат сферические или овальные микровезикулы со средним размером частиц 280±45 нм. Индекс полидисперсности препаратов составил 0,21; частицы на гистограмме VL1-H - VL2-H формируют одну субпопуляцию.

Пример 2.

Отличается от примера 1 тем, что молярное соотношение сорбитана моностеарата, холестерина, ПЭГ-4000 и дицетилфосфата было 50:44:5:1.

Эффективность включения цефотаксима составила 55,3±1,5%. Опытные препараты ниосом содержат сферические или овальные микровезикулы со средним размером частиц 248±50 нм. Индекс полидисперсности препаратов составил 0,20; частицы на гистограмме VL1-H - VL2-H формируют одну субпопуляцию.

Пример 3.

Отличается от примера 1 тем, что молярное соотношение сорбитана моностеарата, холестерина, ПЭГ-4000 и дицетилфосфата было 40:54:5:1.

Эффективность включения цефотаксима составила 49,2±1,3%. Опытные препараты ниосом содержат сферические или овальные микровезикулы со средним размером частиц 275±48 нм. Индекс полидисперсности препаратов составил 0,22; частицы на гистограмме VL1-H - VL2-H формируют одну субпопуляцию.

Пример 4.

Отличается от примера 1 тем, что вместо сорбитана моностеарата (Span 60) использовали сорбитан моноолеат (Span 80).

Эффективность включения цефотаксима составила 51,1±2,2%. Опытные препараты ниосом содержат сферические или овальные микровезикулы со средним размером частиц 288±42 нм. Индекс полидисперсности препаратов составил 0,19; частицы на гистограмме VL1-H - VL2-H формируют одну субпопуляцию.

Пример 5.

Отличается от примера 1 тем, что вместо сорбитана моностеарата (Span 60) использовали Tween 60.

Эффективность включения цефотаксима составила 25,7±1,4%. Опытные препараты ниосом содержат сферические или овальные микровезикулы со средним размером частиц 252±55 нм. Индекс полидисперсности препаратов составил 0,21; частицы на гистограмме VL1-H - VL2-H формируют одну субпопуляцию.

Таким образом, была разработана методика получения ниосомальной формы цефотакима путем обращенно-фазовой отгонки с высокой эффективностью инкапсуляции действующего вещества ((до 63,7±1,2%)).

Используемая литература

1. Патент РФ №2320323. Опубликован 27.03.2008 Бюл. №9.

2. Luciani A., Olivier J.-C, Clement О., Siauve N., Brillet P.-Y., Bessoud В., Gazeau F., Uchegbu I., Kahn E., Frija G., Cuenod C. Glucose-Receptor MR imaging of tumors: study in mice with PEGylated paramagnetic niosomes // Radiology - 2004. - V. 231 (1). - P. 135-142.

3. Marwa A., Omaima S., Hanaa E.-G., Mohammed A.-S. Preparation and in-vitro evaluation of diclofenac sodium niosomal formulations // IJPSR - 2013. - V. 4 (5). - P. 1757-1765.

4. Патент РФ №2583135. Опубликован 10.05.2016 Бюл. №13.

Способ получения ниосомальной формы цефатоксима путем обращенно-фазовой отгонки, отличающийся тем, что хлороформенный раствор сорбитана моностеарата (Span 60), холестерина, полиэтиленгликоля-4000 и дицетилфосфата в молярном соотношении 60:34:5:1 соответственно (38 ммоль компонентов на 50 мл хлороформа) смешивали с раствором цефотаксима (3 мг/мл) в 0,01 М фосфатно-солевом буфере pH 7,4 в соотношении органической и водной фаз 5:1, затем смесь подвергают воздействию ультразвукового дезинтегратора течение 5 минут, амплитуда 7,5 мкм, частота 20 кГц, эмульсию перемещают в круглодонную колбу с тефлоновой мешалкой и отгоняют хлороформ на роторном испарителе в течение 20 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°C и 150 оборотах в минуту, затем 25 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (55±1)°C, 200 оборотах в минуту, далее к смеси добавляют 20% первоначального объема водной фазы и продолжают отгонку в течение 45 минут при давлении 0,175 Бар, температуре (26±1)°C и 140 оборотах в минуту, препарат переносят в чистую посуду и оставляют при (20±5)°C на 12 ч.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-3 of 3 items.
16.05.2019
№219.017.5284

Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии

Настоящее изобретение относится к способу определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающему изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002687493
Дата охранного документа: 14.05.2019
20.05.2023
№223.018.674c

Обогащенная питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду плотную для выращивания биомассы бруцелл, включающую ферментативный гидролизат хлорофитума, листьев (ФГХЛ), нормальную лошадиную сыворотку, содержащую следующие ингредиенты: пептон сухой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002756601
Дата охранного документа: 04.10.2021
17.06.2023
№223.018.802e

Способ получения магнитных сорбентов для концентрирования патогенов с последующей постановкой масс-спектрометрии

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения магнитных сорбентов для концентрирования патогенов с последующей постановкой масс-спектрометрии. Способ заключается в окислении растворенного в дистиллированной воде 2,5 г FeSO в присутствии раствора КОН, модифицировании...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002762805
Дата охранного документа: 23.12.2021
Showing 1-10 of 57 items.
10.04.2014
№216.012.b039

Питательная среда для выращивания легионелл

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой получение питательной среды, создающей оптимальные условия для выращивания легионелл, содержащей: ферментативный гидролизат легкого свиньи, ферментативный гидролизат желтка куриного яйца, калий фосфорнокислый...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002510828
Дата охранного документа: 10.04.2014
10.04.2014
№216.012.b03b

Способ получения микрогравиметрического иммуносенсора

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен способ получения микрогравиметрического иммуносенсора. Сначала активируют поверхность кварцевого резонатора путем плазменного напыления полиэтиленимина с молекулярной массой менее 10 000 Да в течение 10 с в вакуумной установке при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002510830
Дата охранного документа: 10.04.2014
20.08.2014
№216.012.e9b5

Питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению питательных сред для культивирования возбудителя листериоза. Питательная среда содержит ферментативный гидролизат бобов сои, ферментативный гидролизат из активированной эмбрионально-яичной массы перепелов, натрий хлористый, калий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525637
Дата охранного документа: 20.08.2014
20.08.2014
№216.012.ea02

Способ получения эмбрионов овец in vitro

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к клеточной инженерии. Способ предусматривает извлечение ооцит-кумулюсных комплексов из яичников, культивирование их до стадии метафазы II, совместное культивирование ооцитов и сперматозоидов, культивирование оплодотворенных яйцеклеток....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525714
Дата охранного документа: 20.08.2014
10.09.2014
№216.012.f327

Среда высушивания жидкая для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма ev

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой жидкую среду высушивания для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма EV. Среда содержит 8,0-12,0 г/л желатина медицинского; 80,0-120,0 г/л сахарозы; 8,0-12,0 г/л тиомочевины; 2-3 мл 20%...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002528069
Дата охранного документа: 10.09.2014
10.09.2014
№216.012.f347

Питательная среда для культивирования легионелл

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к питательной среде для культивирования легионелл. Питательная среда для культивирования легионелл, в состав которой входит: ферментативный гидролизат сои бобов, калий фосфорнокислый 1 - замещенный, калий фосфорнокислый 2 -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002528101
Дата охранного документа: 10.09.2014
27.09.2014
№216.012.f827

Бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для выделения и выращивания бруцеллезного микроба. Питательная среда включает плотную и жидкую фазы. Плотная фаза содержит мясную воду, пептон сухой ферментативный, печеночный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529364
Дата охранного документа: 27.09.2014
10.01.2015
№216.013.1c46

Препарат для нормализации процессов перекисного окисления липидов у животных

Изобретение относится к ветеринарной фармации, в частности к препаратам для нормализации процессов перекисного окисления липидов в организме у животных, обладающим антиоксидантными свойствами. Препарат для нормализации процессов перекисного окисления липидов у животных включает, мас.%:...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002538666
Дата охранного документа: 10.01.2015
10.04.2015
№216.013.38a3

Способ определения внутренней энергии биоспецифически взаимодействующей суспензии реакции агглютинации объемной

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для определения внутренней энергии биоспецифически реагирующей суспензии реакции агглютинации объемной (РАО) с бруцеллезными или туляремийными растворами антител и суспензиями клеток. Для этого проводят измерение разницы температур...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545987
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.05.2015
№216.013.4820

Способ консервации иммунопероксидазного конъюгата

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии производства иммунопероксидазных конъюгатов, используемых для выявления антигенов возбудителей инфекционных болезней в твердофазном иммуноферментном анализе. Изобретение заключается в разработке способа консервации иммунопероксидазного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002549971
Дата охранного документа: 10.05.2015
+ добавить свой РИД