×
16.09.2018
218.016.887d

Способ применения дигидрохлорида N,N’-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527) для подавления репродукции вируса гепатита С

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине и касается способа подавления репликации вируса гепатита С при помощи ингибитора ферментов катаболизма биогенных полиаминов N,N'-бис(2,3-бутадиенил)-1,4-бутандиамин гидрохлорида (MDL72.527). Соединение подавляет репродукцию вируса гепатита С в микромолярных концентрациях в культурах инфицированных клеток и в культуре клеток, несущих субгеномный репликон вируса. Способ позволяет расширить арсенал противовирусных средств. 3 пр., 2 ил.
Реферат Свернуть Развернуть

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно, к новому способу ингибирования репликации вируса гепатита С (ВГС) за счет ингибирования катаболизма биогенных полиаминов спермина и спермидина. Данное изобретение может быть использовано для создания противовирусных препаратов, том числе для терапии ВГС-инфекции.

Уровень техники

Известно, что вирус гепатита С является широко распространенным и опасным патогеном человека. По оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) им инфицировано около 71 млн пациентов с хроническим гепатитом С [Hepatitis С. WHO fact sheet #164, октябрь 2017]. Эта же организация оценивает количество смертей от гепатита С как 399 тыс в год [Hepatitis С. WHO fact sheet #164, октябрь 2017]. Первичное заражение вирусом переходит к хроническому гепатиту в 60-80% случаев. Хронический гепатит С резко повышает риски развития у пациента цирроза и рака печени, которые и являются основными причинами его смерти. Так, риск развития цирроза за 20 лет у пациентов с хроническим гепатитом С оценивается как 15-30% [Hepatitis С. WHO fact sheet #164, октябрь 2017].

Терапия хронического гепатита С основана на использовании интерферона альфа и его производных или/и препаратов прямого действия, которые являются ингибиторами РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса (белок NS5B), протеазы (белок NS3) или ингибиторами функций регуляторного белка NS5A [European Association for the Study of the Liver. EASL Clinical Practice Guidelines: Management of hepatitis С virus infection. J. Hepatol., 2014., 60(2)392-420; L.M. Hagan et al., All-oral, interferon-free treatment for chronic hepatitis C: cost-effectiveness analyses. J Viral Hepat. 2013, 20(12), 847-857]. Их использование в различных сочетаниях позволяет излечивать более 95% пациентов с хроническим гепатитом С.Одним из факторов, резко ограничивающих использование таких препаратов, является их крайне высокая стоимость, делающая терапию недоступной для большинства пациентов [L.M. Hagan et al., All-oral, interferon-free treatment for chronic hepatitis C: cost-effectiveness analyses. J Viral Hepat. 2013, 20(12), 847-857]. В то же время отсутствуют лекарственные препараты, одобренные для лечения гепатита С, которые бы блокировали его репродукцию за счет воздействия на белки клетки-хозяина. Считается, что преимуществом таких препаратов может быть воздействие в отношении всех генотипов и изолятов вируса и неспособность последнего вырабатывать к ним резистентность [J.M. Baugh et al. Host-targeting agents in the treatment of hepatitis C: A beginning and an end? Antiviral Res., 100, 555-561].

Соединения такого класса как биогенные полиамины играют важную роль в разнообразных процессах прокариотических и эукариотических клеток [L. Miller-Fleming et al. Remaining Mysteries of Molecular Biology: The Role of Polyamines in the Cell. J. Mol. Biol, 2015., 427, 3389-3406; A.E. Pegg., Mammalian polyamine metabolism and function. IUBMB Life. 2009, 61(9), 880-894]. К этому классу соединений относятся спермин и спермидин, а также их метаболитический предшественник путресцин. Спермин и спермидин присутствуют в клетках и тканях в субмилимолярных и милимолярных концентрациях. Уровни полиаминов в клетках регулируются несколькими ферментами их метаболизма. Скорость-лимитирующая стадия биосинтеза полиаминов заключается в превращении орнитина в путресцин, катализируемая орнитиндекарбоксилазой (ODC). Катаболизм полиаминов происходит по двум путям. Первый заключается в ацетилировании спермина и сперминида спермидин/спермин-К'-ацетилтрансферазой (SSAT) с последующим превращением ацетилполиаминов в спермидин и путресцин, соответственно, при участии ацетилполиаминоксидазы (АРАО). Второй представляет собой прямое превращение спермина в спермидин, катализируемое сперминоксидазой (SMO). Реакции, катализируемые SSAT и SMO, являются скорость-лимитирующими стадиями катаболизма полиаминов.

Изменение их концентраций часто имеет место при развитии разнообразных заболеваний, включая онкологические, аутоиммунные и бактериальные инфекции [L. Miller-Fleming et al. Remaining Mysteries of Molecular Biology: The Role of Polyamines in the Cell. J. Mol. Biol, 2015, 427, 3389-3406; R.A. Casero and A.E. Pegg. Polyamine catabolism and disease. Biohem J. 2009. 421, 323-338; V. Broshtilova et al, Polyamine metabolism changes in psoriasis. Indian J Dermatol. 2013, 58(4), 306-309] В связи с этим, одним из перспективных подходов к лечению онкологических и аутоиммунных заболеваний считается воздействие на уровни полиаминов при помощи химических ингибиторов или индукторов ферментов их метаболизма. К таким соединениям относят DFMO и DENSpm [L. Miller-Fleming et al. Remaining Mysteries of Molecular Biology: The Role of Polyamines in the Cell. J. Mol. Biol, 2015, 427, 3389-3406; R.A. Casero and A.E. Pegg. Polyamine catabolism and disease. Biohem J. 2009. 421, 323-338; R.A. Casero Jr and L.J. Maton. Targeting polyamine metabolism and function in cancer and other hyperproliferative diseases. Nat Rev Drug Discovery. 2007, 6, 373-390]. DFMO является необратимым ингибитором ODC и вследствие этого блокирует биосинтез полиаминов, a DENSpm представляет собой индуктор SSAT, способный вызывать ускорение катаболизма полиаминов. Оба вещества вызывают снижение уровней полиаминов и поэтому рассматриваются как потенциальные противораковые препараты.

Данные о связи полиаминов с вирусными инфекциями немногочисленны. С 1990х годов опубликовано всего несколько работ, описывающих взаимосвязь полиаминов с вирусами Эбола и Марбурга [М.Е. Olsen et al, mBio. 2016, 7(4), e00882-16], Зика и Чикунгунья [B.C. Mounce et al, Interferon-Induced Spermidine-Spermine Acetyltransferase and Polyamine Depletion Restrict Zika and Chikungunya Viruses. Cell Host & Microbe, 2016, 20, 167-177] и вируса гепатита С [О.А. Smirnova et al. Biochemical and Biophysical Research Communicationsio 2017, 483, 904-909]. Кроме того, показано, что дифторметилорнитин (DFMO, eflornithine), ингибитор биосинтеза полиаминов обладает противовирусной активностью против широкого спектра вирусов, не включающего впрочем вируса гепатита С [B.C. Mounce et al. Inhibition of polyamine biosynthesis is a broad-spectrum strategy against RNA viruses. J.Virol, 90 (21), 9683-9692]. Описана также противовирусная активность DENSpm (индуктора катаболизма полиаминов) против вирусов коксаки и везикулярного стоматита [B.C. Mounce et al. Inhibition of polyamine biosynthesis is a broad-spectrum strategy against RNA viruses. J.Virol, 90 (21), 9683-9692].

Раскрытие изобретения

Сущность изобретения заключается в использовании дигидрохлорида N,N'-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527), известного ингибитора сперминсинтазы и ацетилполиаминоксидазы и представляющего собой производное путресцина, для подавления репликации вируса гепатита С.

Задачей предлагаемого изобретения является создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов для лечения вируса гепатита С.

Результатом является новый способ блокирования репродукции вируса гепатита С при помощи дигидрохлорида N,N'-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527). Найдено, что при использовании данного вещества возможно ингибировать репликацию вируса в неинфекционной системе репликона вируса и в инфекционной системе репродукции вируса (HCVcc). Следует отметить, что до настоящего момента ингибиторы ферментов катаболизма полиаминов не рассматривались как противовирусные агенты. Более того, это является первым примеров использования веществ - регуляторов метаболизма полиаминов для подавления репродукции вируса гепатита С.

Краткое описание фигур

Фиг 1. Показывает относительные уровни РНК вируса гепатита С в клетках Huh7, несущих полноразмерный репликон вируса в контроле (H2O) и в присутствии 25 мкМ MDL72.527. Уровни РНК вируса нормализованы на уровни мРНК (3-актина. За "1" принят относительный уровень РНК ВГС в отсутствии MDL72.527.

Фиг 2. Показывает относительные уровни РНК вируса гепатита С в клетках Huh7.5, обработанных 1-100 мкМ MDL72.527, инфицированных вирусом гепатита С через 24 ч после внесения веществ и выдержанных в течение дополнительных 6 суток. Уровни РНК вируса нормализованы на уровни мРНК р-глюкоронидазы. За "1" принят относительный уровень РНК ВГС в клетках в отсутствии MDL72.527.

Осуществление изобретения

Далее изобретение будет проиллюстрировано примерами, предназначенными для обеспечения лучшего понимания сущности заявленного изобретения, но которые при этом не должны рассматриваться как ограничивающие данное изобретение.

Пример 1 Оценка цитотоксичности MDL72.527

Цитотоксичность препарата оценивали путем добавления его разведений в воде к клеткам печени/гепатомы Huh7 или Huh7.5 в среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки телят и 2 мМ глутамин, помещенной в лунки 96-луночного планшета ("ТРР", Швецария), до конечных концентраций 5-100 мкМ (по три лунки на каждую дозу) с последующим культивированием при 37°С в течение 3 суток. Посевная концентрация составляла 4×104 клеток на лунку. Контролем служили клетки без добавления препарата. Жизнеспособность клеток подсчитывали через 72 ч после внесения веществ при помощи окраски живых клеток красителем МТТ с последующим количественным измерением образующегося формазана. Токсичность различных доз препарата определяли по жизнеспособности клеток относительно контроля, по полученным результатам строили дозозависимую кривую и определяли концентрацию, на 50% снижающую жизнеспособность клеток (ЦТД50). Даже при 100 мкМ концентрации количество жизнеспособных клеток не достигало 50% от контроля.

Пример 2

Оценка способности MDL72.527 подавлять репродукцию вируса гепатита С в неинфекционной системе репликона вируса in vitro

Влияние исследуемых соединений на репродукцию вируса гепатита С в системе репликона в культуре клеток Huh7 исследовали путем добавления его разведений в воде к клеткам печени/гепатомы Huh7, несущим репликон I389/NS3-3'/LucUbiNeo/ET [Frese et al, J. Gen Virol, 2003, 74, 1253-1259] в среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки телят и 2 мМ глутамин, помещенной в лунки 6-луночного планшета ("ТРР", Швецария), до конечной концентрации 25 мкМ (по три лунки) с последующим культивированием при 37°С в течение 3 суток. Посевная концентрация составляла 5×105 клеток на лунку. Контролем служили клетки без добавления препарата. Титр репликона определяли лизированием клеток, выделением тотальной РНК, получением соответствующей кДНК при помощи гексамерного олигонуклеотида случайной последовательности и обратной транскриптазы Mint (Евроген, Москва) и измерением уровня РНК вируса полимеразной цепной реакцией в режиме реального времени, нормируя уровни мРНК вируса на урвони мРНК Р-актина.

Из Фиг. 1 видно, что MDL72.527 эффективно подавлял репликацию вируса гепатита С, снижая титр его РНК на два порядка.

Пример 3

Оценка способности MDL72.527 подавлять репродукцию вируса гепатита С в инфекционной клеточной системе вируса in vitro

Влияние исследуемых соединений на репродукцию вируса гепатита С в инфекционной системе репликации вируса в культуре клеток Huh7.5 исследовали путем добавления его разведений в воде к клеткам Huh7.5 в среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки телят и 2 мМ глутамин, помещенной за 24 ч в лунки 6-луночного планшета ("ТРР", Швецария), до конечных концентраций 1-100 мкМ (по три лунки на каждую дозу) с внесением вируса гепатита С (множественность инфекции составляла 0,1 вирион/клетка) через 24 ч после добавления вещества и инкубированием в течение дополнительных шести дней. Посевная концентрация составляла 3×105 клеток на лунку. Контролем служили клетки без добавления препарата. Титр РНК вируса определяли лизированием клеток, выделением тотальной РНК, получением соответствующей кДНК при помощи гексамерного олигонуклеотида случайной последовательности и обратной транскриптазы Mint (Евроген, Москва) и измерением уровня РНК вируса полимеразной цепной реакцией в режиме реального времени, нормируя уровни мРНК вируса на урвони мРНК Р-глюкоронидазы. Противовирусную активность различных доз препарата определяли по титру РНК вируса относительно контроля.

Из Фиг. 2 очевидно, что MDL72.527 эффективно подавлял репликацию вируса гепатита С, снижая титр его РНК в клетках.

Способ применения дигидрохлорида N,N'-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527) для подавления репродукции вируса гепатита С путем добавления к клеткам печени/гепатомы, несущим репликон вируса гепатита С или инфицированных данным вирусом.
Способ применения дигидрохлорида N,N’-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527) для подавления репродукции вируса гепатита С
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 72 items.
10.03.2014
№216.012.a9ae

Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии

Изобретение относится к молекулярной генетике. Способ включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002509153
Дата охранного документа: 10.03.2014
27.05.2014
№216.012.c8cf

Новые 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста mycobacterium tuberculosis

Изобретение относится к новым 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильным производным 2'-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина, подавляющим рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющим формулы 1 и 2, соответственно 1 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517173
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.08.2014
№216.012.eadf

Способ получения кассетных генетических конструкций, экспрессирующих несколько рнк-шпилек

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генотерапии. Способ предусматривает проведение следующих операций: дизайн кассетной конструкции, синтез олигонуклеотидов; попарный отжиг и достройка частично комплементарных олигонуклеотидов; осаждение и рестрикция фрагментов кассеты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525935
Дата охранного документа: 20.08.2014
27.08.2014
№216.012.f0c6

Ингибиторы поли(адф-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила

Изобретение относится к новым ингибиторам поли(АДФ-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила общей формулы (I), (II), (III) и (IV). Ингибиторы поли(АDР-рибозо)полимераз-ферментов участвуют в репарации ДНК. В общей формуле (I), (II), (III) и (IV) R=Н, Cl, Br, I, метил, этил,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527457
Дата охранного документа: 27.08.2014
10.10.2014
№216.012.fcf3

Ингибитор образования цинк-зависимых димеров бета-амилоида

Настоящее изобретение относится к использованию эналаприлата, водорастворимого вещества на основе дипептида [L-аланил]-[L-пролин], в области медицины. Предложно применение эналаприлата в качестве средства для ингибирования образования цинк-зависимых димеров бета-амилоида. Технический результат...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002530601
Дата охранного документа: 10.10.2014
10.11.2014
№216.013.0467

Экзогенно-индуцируемая животная модель болезни альцгеймера

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается создания модели болезни Альцгеймера. Для этого используют трансгенных мышей линии B6C3-Tg(APPswe,PSEN1dE9)85Dbo/J. В кровеносную систему этих животных вводят препарат, содержащий в своем составе синтетический аналог изомеризованного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532525
Дата охранного документа: 10.11.2014
10.11.2014
№216.013.05a5

Способ диагностики гриппа с

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики гриппа С. Представленный способ включает выявление РНК вируса в мазках из носоглотки человека и животных путем проведения этапов обратной транскрипции и амплификации в одной пробирке методом полимеразной цепной реакции в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532843
Дата охранного документа: 10.11.2014
20.03.2015
№216.013.34aa

Способ создания клеточных моделей болезни альцгеймера.

Изобретение относится к способу создания клеточных моделей болезни Альцгеймера, предназначенных для тестирования лекарственной эффективности химических веществ с целью их дальнейшего использования в медицине, более конкретно в сфере лечения нейродегенеративных заболеваний человека,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002544957
Дата охранного документа: 20.03.2015
20.03.2015
№216.013.34ab

Способ защиты клеток от повреждения при гипоксии путем глутатионилирования каталитической субъединицы na, к-атфазы

Изобретение относится к способам защиты клеток и тканей от гипоксического повреждения и может быть использовано для разработки средств защиты от повреждения при гипоксии и ишемии. Разработанный способ защиты основан на обработке клеток веществами, увеличивающими уровень глутатионилирования...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002544958
Дата охранного документа: 20.03.2015
10.04.2015
№216.013.38ab

Способ диагностики светлоклеточной почечноклеточной карциномы и набор для его осуществления

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности онкологии и молекулярной биологии. Предложены способ и набор праймеров и зонда с последовательностями SEQ ID NO: 1, 2 и 3 для осуществления полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для диагностики...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545995
Дата охранного документа: 10.04.2015
Showing 1-10 of 45 items.
10.06.2013
№216.012.49ae

Способ вибрационной диагностики и прогнозирования внезапного отказа двигателя и носитель

Изобретение относится к испытаниям двигателей. При вибрационной диагностике и прогнозировании внезапного отказа вследствие разрушения межроторного подшипника турбореактивного двигателя, содержащего два ротора и один межроторный подшипник (МРП), вибросигналы датчиков виброскорости и/или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002484442
Дата охранного документа: 10.06.2013
27.05.2014
№216.012.c8cf

Новые 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста mycobacterium tuberculosis

Изобретение относится к новым 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильным производным 2'-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина, подавляющим рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющим формулы 1 и 2, соответственно 1 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517173
Дата охранного документа: 27.05.2014
27.06.2014
№216.012.d7bf

Способ получения композиционного материала al-alo

Способ получения композиционного материала Аl-АlO относится к технологии композиционных материалов - керметов и может быть использовано для получения уплотнительных элементов, применяемых для плотного сопряжения деталей и конструкций высокотемпературных энергетических установок. В соответствии...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002521009
Дата охранного документа: 27.06.2014
20.07.2014
№216.012.dd7d

Способ получения конструкционной алюмооксидной керамики

Изобретение относится к технологии пористых керамических материалов конструкционного назначения и может быть использовано для изготовления изделий, сочетающих высокие показатели по пористости и прочности при невысокой теплопроводности (теплоизоляция, фильтры для очистки жидких и газовых сред,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522487
Дата охранного документа: 20.07.2014
27.03.2015
№216.013.35da

Способ получения конструкционной алюмооксидной керамики

Изобретение относится к технологии керамических материалов конструкционного назначения и может быть использовано для изготовления пористых изделий для высокотемпературной теплоизоляции или теплозащиты, носителей катализаторов и фильтров очистки жидких и газовых сред. Для получения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545270
Дата охранного документа: 27.03.2015
10.04.2015
№216.013.389e

Способ получения композиционного материала alo-al

Изобретение относится к керметам, а именно к получению композиционного материала AlO-Al. Сплав Al-Mg с содержанием магния 15-25 мас.% обрабатывают водным раствором едкого натра до образования в маточном растворе осадка в виде гранул. Осадок отделяют от маточного раствора и отмывают водой до...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002545982
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.04.2015
№216.013.3fec

Способ получения конструкционной алюмооксидной керамики

Изобретение относится к технологии конструкционной керамики и может быть использовано для изготовления износостойких изделий, используемых в качестве подшипников, нитеводителей, водителей для проволоки, шаровых клапанов в устройствах для перекачки суспензий, а также в качестве деталей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547852
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.08.2015
№216.013.6b02

(r)- и (s)-изомеры 3-метилспермидина

Изобретение относится к новым тригидрохлоридам (R)- и (S)-изомеров 1,8-диамино-3-метил-4-азаоктана (3-метилспермидина), соответствующих нижеуказанным структурным формулам, и к способу их получения. Указанные соединения могут быть использованы in vitro и in vivo для изучения индивидуальных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558952
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.08.2015
№216.013.6b03

(r,r)- и (s,s)-диастереомеры 2,11-диметилспермина и 3,10-диметилспермина

Изобретение относится к новым (R,R)- и (S,S)-диастереомерам 1,12-диамино-2,11-диметил-4,9-диазадодекана и 1,12-диамино-3,10-диметил-4,9-диазадодекана, соответствующим структурным формулам, указанным ниже, и способам их получения Указанные соединения являются оригинальными инструментами...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558953
Дата охранного документа: 10.08.2015
20.08.2015
№216.013.7080

Гибридное эпокситрифенольное связующее с использованием новолачной смолы

Изобретение относится к гибридным связующим на основе эпокситрифенольной смолы, предназначенным для армированных пластиков с повышенной коррозионной стойкостью и термостабильностью. В одном варианте связующее содержит: эпокситрифенольную смолу ЭТФ, разбавитель-пластификатор, представляющий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002560370
Дата охранного документа: 20.08.2015
+ добавить свой РИД