×
20.03.2015
216.013.34aa

СПОСОБ СОЗДАНИЯ КЛЕТОЧНЫХ МОДЕЛЕЙ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА.

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к способу создания клеточных моделей болезни Альцгеймера, предназначенных для тестирования лекарственной эффективности химических веществ с целью их дальнейшего использования в медицине, более конкретно в сфере лечения нейродегенеративных заболеваний человека, обусловленных нейротоксическими эффектами бета-амилоидных агрегатов. В качестве молекулярного агента цитотоксического действия используется синтетический аналог изомеризованного по остатку аспарагиновой кислоты в положении 7 ([isoD]) человеческого бета-амилоида 1-42 (аминокислотная последовательность: DAEFRH[isoD]SGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA). Преимуществом таких клеточных моделей болезни Альцгеймера по сравнению с существующими в настоящее время экзогенно-индуцируемыми моделями, в которых цитотоксические эффекты вызываются немодифицированной формой бета-амилоида, является более высокая способность изомеризованного бета-амилоида индуцировать клеточную гибель как по некротическому, так и по апоптозному механизмам. Дополнительным преимуществом данного изобретения является возможность использования в качестве моделей болезни Альцгеймера первичных клеточных культур. 2 ил.
Основные результаты: Способ создания клеточных моделей болезни Альцгеймера, отличающийся тем, что цитотоксический эффект вызывается добавлением в культуральную среду синтетического аналога изомеризованного по остатку аспарагиновой кислоты в положении 7 ([isoD]) человеческого бета-амилоида 1-42 (аминокислотная последовательность: DAEFRH[isoD]SGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA).
Реферат Свернуть Развернуть

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к созданию клеточных моделей болезни Альцгеймера, предназначенных для тестирования лекарственной эффективности химических веществ с целью их дальнейшего использования в медицине, более конкретно в сфере лечения нейродегенеративных заболеваний человека, обусловленных нейротоксическими эффектами бета-амилоидных агрегатов.

Уровень техники

Болезнь Альцгеймера (БА) является смертельной нейродегенеративной патологией, клиническое протекание которой сопровождается неуклонным упадком психомоторных функций пациента на протяжении длительного периода (7). В России число таких больных составляет около полутора миллионов человек (2). Лекарственных средств, способных остановить течение данной патологии, в настоящее время не существует нигде в мире, однако их поиску придается колоссальное значение во всех развитых странах, где с ростом числа лиц пожилого возраста увеличивается и число страдающих от болезни Альцгеймера.

Характерным молекулярным процессом болезни Альцгеймера является конформационное превращение небольшого (39-43 аминокислотных остатка) белка, бета-амилоида (3). Этот белок является нормальным компонентом крови, где присутствует в виде мономера, однако образует олигомеры и надмолекулярные агрегаты (амилоидные бляшки) у пациентов с клинически диагностированной болезнью Альцгеймера (4). Согласно широко принятой амилоидной гипотезе именно полимеризация бета-амилоида, которая приводит к церебральному амилоидозу, является ключевым событием, запускающим весь патогенный каскад болезни Альцгеймера (5).

Молекулярный механизм патогенного действия агрегированных форм бета-амилоида не установлен, однако хорошо известно, что присутствие агрегатов бета-амилоида в тканях организма вызывает явно выраженный цитотоксический эффект (6). В настоящее время для скринирования потенциальных лекарственных средств широко используются клеточные модели болезни Альцгеймера (7-8). При этом используются как экзогенные, так и эндогенные клеточные модели, в которых патология обусловлена избыточным производством бета-амилоида или тау-белка человека.

В патенте США US 5,994,084 описаны трансгенные клеточные модели, которые наряду с перепроизводством тау-белка характеризуются содержанием киназ, ответственных за гиперфосфорилирование тау белка, что вызывает его повышенную агрегацию. В патентной заявке США US 2009/0280110 описана методика контроля ранних клеточных явлений при болезни Альцгеймера, в которой клетки, содержащие белки тау и тубулин, непосредственно контактируют с бета-амилоидом. В патенте США US 6,803,233 описана экзогенно-индуцируемая клеточная модель болезни Альцгеймера, в которой первичная культура клеток из мозга грызунов подвергается действию различных агентов, в том числе бета-амилоида, для индукции в них таких явлений, ассоциированных с БА, как образование нейрофибриллярных клубков, гиперфосфорилирование и/или фрагментация тау-белка и выработка цитокинов TGF-бета, IL-1b или TNF. B патентной заявке WO 2010/112737 описана человеческая нейронная модель, полученная на основе плюропатентных стволовых клеток, содержащих геном пациентов с диагнозом болезнь Альцгеймера. В патентной заявке (США) US 2005/0172344 описана клеточная модель, полученная на основе клеток гиппокампа, выделенных из животной модели БА, содержащих мутации в гене, кодирующем АРР и PS1. B патенте США US 6,548,261 описана методика тестирования препаратов, которые способны ингибировать клеточные явления, ассоциированные с БА, на основе трансфецированных нейрональных клеточных линий млекопитающих. В то же время не было обнаружено никаких сведений о создании и применении экзогенно-индуцируемых клеточных моделей болезни Альцгеймера с использованием модифицированных форм бета-амилоида.

Ранее авторами данного изобретения было показано, что изомеризация остатка аспарагиновой кислоты в положении 7 ведет к цинк-зависимой олигомеризации металлсвязывающего домена 1-16 бета-амилоида (9). Так как амилоидные бляшки содержат до 75% изомеризованного бета-амилоида и избыток ионов цинка, то нами было предположено, что именно цинковые комплексы этой изоформы бета-амилоида могут являться молекулярным агентом, вызывающим олигомеризацию и последующую агрегацию растворимых форм бета-амилоида, то есть тех самых процессов, которые абсолютным большинством исследователей считаются пусковыми механизмами патогенеза болезни Альцгеймера.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к способу создания клеточных моделей болезни Альцгеймера, в которых цитотоксический эффект индуцируется посредством введения в культуральную среду синтетического аналога изомеризованного по остатку аспарагиновой кислоты в положении 7 человеческого бета-амилоида 1-42. Преимуществом таких клеточных моделей болезни Альцгеймера по сравнению с существующими в настоящее время экзогенно-индуцируемыми моделями, в которых цитотоксические эффекты вызываются немодифицированной формой бета-амилоида, является более высокая способность изомеризованного бета-амилоида индуцировать клеточную гибель как по некротическому, так и по апоптозному механизмам. Дополнительным преимуществом данного изобретения является возможность использования в качестве моделей болезни Альцгеймера первичных клеточных культур.

Технический результат

Технический результат, достигаемый при использовании патентуемого изобретения, заключается в создании экзогенно-индуцируемых клеточных моделей болезни Альцгеймера.

Пример осуществления изобретения

В качестве клеточной линии была использована иммортализованная культура нейральных стволовых клеток человека NSC-hTERT (10). Клетки NSC-hTERT были получены с помощью иммортализации введением гена каталитической субъединицы теломеразы (hTERT) в клетки первичной культуры. Первичные культуры нейральных стволовых клеток человека (NSC) были предоставлены И.Н. Сабуриной (Институт биологии гена РАН). Клетки были получены из переднего отдела мозга эмбриона человека (медицинского абортуса) в возрасте 9 недель. Мозг эмбриона механически измельчали, обрабатывали растворами трипсина и Версена, пипетировали и переносили в культуральную среду. Клетки культивировали при 3% кислорода в ростовой среде, состоящей из следующих компонентов: среда DMEM/F12, 2% FetalClone III (Hyclone, США), 10 нг/мл FGF2, 10 нг/мл EGF, 0,11 мг/мл пирувата натрия, 0,32 мг/мл глутамина, однократная концентрация N2supplement (Invitrogen, США) и 40 ед./мл гентамицина. При ведении клеток на такой среде они растут как обычная пластик-адгезивная культура. Пересев осуществляли по достижении монослоя с помощью растворов Версена и трипсин-Версена. При уменьшении концентрации FetalClone III клетки способны переходить к росту в виде нейросфер. Первичные культуры NSC обладают ограниченным пролиферативным потенциалом и в наших условиях были способны достигать уровня около 42 удвоений популяции на сроках около полугода. Трансфекция клеток была осуществлена лентивирусной конструкцией, содержащей кДНКhTERT под CMV-промотором. Конструкция pLA-CMV-hTERT (9645 пар оснований) была любезно предоставлена П.М. Чумаковым (ИМБ РАН). Вирусный концентрат (с титром 108/мл) разводили в два раза полной ростовой средой, добавляли 5 мкг/мл полибрена и добавляли к растущим NSC. Клонирования не производили. Эффективность лентивирусной трансфекции (по параллельному введению GFP) составляла около 75%. Возраст клеток на момент трансфекции был около 9 удвоений популяции. В непрерывном эксперименте длительностью 560 дней было показано, что NSC-hTERT не меняют скорости роста и пролиферировали свыше 100 удвоений популяции. Эти клетки обладают теломеразной активностью, экспрессируют hTERT (определяли с помощью антител) и содержат несколько удлиненные теломеры. В них сохраняется диплоидный кариотип. Они способны образовывать нейросферы. В них экспрессируются гены, связанные со стволовым состоянием (нестин, определен по РНК и белку), нейрональной дифференцировкой (бета-III-тубулин, определен по РНК и белку), нейрон-специфическая енолаза, тирозингидроксилаза, холин-ацетил-трансфераза (определены по РНК) и глиальной дифференцировкой (глиальный фибриллярный кислый белок, определен по РНК и белку) и липофилин (определен по РНК).

Синтетические пептиды Аβ: [H2N]-DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA-[COOH] и isoAβ: [H2N]-DAEFRH[isoD]SGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA-[COOH] были получены от Biopeptide (СА, USA). Все эксперименты и приготовления проводились в стерильных условиях. Синтетические пептиды были растворены в диметилсульфоксиде до конечной концентрации стока 10 мМ. Затем 1 мкл стока был растворен в 5 мкл деионизованной воды. Полученный раствор был добавлен к 500 мкл среды до конечной концентрации пептида 20 мкМ. В эксперименте были использованы дифференцированные нервные клетки, сыворотка в среду не добавлялась. Клетки культивировались в 500 мкл среды в 12-луночных планшетах. В ячейках среда, в которой культивировались клетки, была заменена на среду, содержащую 1 мкл диметилсульфоксида и 5 мкл деионизованной воды (три контрольных ячейки), пептид Αβ (три ячейки) и пептид isoAβ (три ячейки). Затем планшет помещался в термостат при 37°С на 24 часа.

Для снятие клеток использовался следующий протокол: отобрали ростовую среду;1 раз промыли клетки раствором Версена (~120 мкл на 1,9 см2); залили монослой раствором для снятия клеток (0,25% стерильный раствор Трипсина с солями Хенкса (без Са и Mg))(~120 мкл на 1,9 см2); инкубировали при 37°С, периодически аккуратно покачивая, ~1-2 мин; когда клетки полностью отделились от субстрата, добавили полной среды 500 мкл и тщательно диспергировали клетки; провели подсчет количества клеток в счетной камере Горяева под инвертированным микроскопом с предварительным окрашиванием трипановым синим.

Цитометрический анализ клеток проводили на проточном цитофлуориметре GALLIOS (BeckmanCoulter).

Определение процента клеток с поврежденной мембраной. Клетки, обладающие поврежденной мембраной, определяли с помощью пропидиййодида (PI) («Sigma», США) (Ex/Em 535/617 нм). Для этого за 1 минуту до начала измерений к клеточной суспензии добавляли пропидиййодид до конечной концентрации 10 мкг/мл. Регистрировали процент клеток, обладающих флуоресценцией в красной области спектра, при возбуждении лазером с длиной волны 488 нм.

Определение процента апоптических клеток. Определение процента апоптических клеток проводили с помощью Аннексина V, позволяющего детектировать выход фосфатидилсерина на поверхность клеток. Для определения процента апоптических клеток суспензию клеток центрифугировали (800 об/мин, 7 мин), отбирали супернатант и ресуспендировали в буфере для связывания Аннексина V (10 мМ HEPES, 140 мМ NaCl и 2.5 мМ CaCl2, рН 7.4). Затем к 100 мкл суспензии клеток с концентрацией 106 клеток/мл добавляли 5 мкл раствора Аннексина V, меченного флуоресцеином FITC (Invitrogen), длины волн возбуждения и эмиссии Ex/Em которого составляют 494 и 518 нм соответственно. Таким образом, флуоресценцию аннексин-положительных клеток регистрировали в зеленой области спектра при возбуждении лазером с длиной волны 488 нм. Инкубацию проводили в течение 15 минут в темноте при комнатной температуре, после чего добавляли 300 мкл холодного буфера для связывания Аннексина и ставили в лед. Жизнеспособные клетки не окрашивались ни аннексином, ни пропидиййодидом. Окрашенные Аннексином и неокрашенные PI клетки характеризовали как раннеапоптические. Окрашенные PI и Аннексином клетки определяли как позднеапоптические или некротические. Клетки, окрашенные только пропидиййодидом, характеризовали как некротические.

Определение процента гибнущих клеток. К гибнущим клеткам относят клетки с измененной морфологией, характеризующейся снижением размера клеток и возрастанием их гранулярности. Данные параметры при проточной цитометрии оценивают с помощью параметров малоуглового и бокового рассеяния. Таким образом, определение процента гибнущих клеток в популяции проводили, оценивая процент клеток с малым размером и высокой гранулярностью.

Определение процента клеток со сниженным митохондриальным потенциалом

Процент клеток со сниженным митохондриальным потенциалом определяли с помощью красителя DilC1 (5) (Invitrogen), длины волн возбуждения и эмиссии Ex/Em которого составляют 638 и 658 нм соответственно. Таким образом, флуоресценцию окрашенных DilC1 (5) клеток регистрировали в красной области спектра при возбуждении лазером с длиной волны 638 нм. Для окрашивания клетки ресуспендировали в 100 мкл среды до концентрации 1×106 клеток/мл и добавляли к ним 0,5 мкл 10 мкМ DilC1 (5) до конечной концентрации 50 нМ, после чего инкубировали в течение 20 минут в СО2 инкубаторе при 37°С. Краситель проникает в цитозоль клеток и накапливается в митохондриях. За 1 минуту до измерения добавляли пропидиййодид, как описано выше. Процент клеток со сниженным митохондриальным потенциалом регистрировали как процент клеток с неповрежденной мембраной, обладающих сниженной интенсивностью флуоресценции митохондриального красителя. Спектральные характеристики используемых красителей: Аннексин-FITC, DilC1 (5), пропидиййодид позволяют использовать их для одновременного окрашивания и анализа клеток на проточном цитофлуориметре. При этом сначала проводится окрашивание DilC1 (5), а затем окрашивание Аннексином, меченным FITC. PI добавляется к клеткам за 1 минуту до измерения, как описано выше.

Цитофлуометрическое исследование апоптических изменений и морфологических характеристик клеток под действием бета-амилоида и его изоформы позволило установить, что изоформа обладает большим цитотоксическим эффектом по отношению к нейрональным клеткам, чем бета амилоид. Эффект проявляется при культивировании клеток с интактным бета-амилоидом (Ab) и его изомеризованной по остатку аспарагиновой кислоты в положении 7 изоформы (isoAb) в течение 24 часов (Рисунки 1, 2). На рисунке 1 показан процент гибнущих клеток, оцененный как процент клеток с малым размером и высокой гранулярностью. Из представленных данных видно, что доля гибнущих клеток под действием изоформы бета-амилоида возрастает и составляет более 65%.

На рисунке 2 представлен процент раннеапоптических клеток, то есть клеток, находящихся в стадии раннего апоптоза, через 24 часа инкубации с бета-амилоидом и его изоформой. Как следует из приведенных данных, под действием изоформы бета-амилоида происходит значительное возрастание процента раннеапоптических клеток до 55%.

Таким образом, изомеризованный по остатку аспарагиновой кислоты в положении 7 человеческий бета-амилоид 1-42 (isoAb) гораздо эффективнее, чем немодифицированный бета-амилоид 1-42 (Ab), индуцирует как некроз, так и апоптознейральных клеток. Так как клеточная гибель под воздействием различных форм бета-амилоида играет одну из ключевых ролей при болезни Альцгеймера, то очевидно, что isoAb является более сильнодействующим, чем Ab патогенным агентом, а клеточные модели болезни Альцгеймера на основе использования isoAbB качестве экзогенного фактора индукции клеточной гибели представляются более адекватными.

Способ создания клеточных моделей болезни Альцгеймера, отличающийся тем, что цитотоксический эффект вызывается добавлением в культуральную среду синтетического аналога изомеризованного по остатку аспарагиновой кислоты в положении 7 ([isoD]) человеческого бета-амилоида 1-42 (аминокислотная последовательность: DAEFRH[isoD]SGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA).
СПОСОБ СОЗДАНИЯ КЛЕТОЧНЫХ МОДЕЛЕЙ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА.
СПОСОБ СОЗДАНИЯ КЛЕТОЧНЫХ МОДЕЛЕЙ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 81 items.
27.04.2013
№216.012.395b

Устройство очистки воздуха

Изобретение относится к области очистки и стерилизации воздуха бытовых, хозяйственных и производственных помещений, а именно к устройствам для стерилизации, дезодорации и очистке воздуха от вирусов, бактерий, паров и аэрозолей органических и неорганических соединений, в том числе диоксинов,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480244
Дата охранного документа: 27.04.2013
10.09.2013
№216.012.67da

Способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток пациентов с синдромом дауна

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПС клеток) из фибробластов кожи пациентов с синдромом Дауна, включающий в себя предварительную индукцию при помощи лентивирусной трансфекции геном hTERT, дальнейшую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492233
Дата охранного документа: 10.09.2013
27.09.2013
№216.012.6e7b

Cпособ получения жаростойкого высокопористого проницаемого сплава

Изобретение относится к порошковой металлургии, в частности к получению жаростойких высокопористых проницаемых ячеистых сплавов. Может использоваться для получения блочных высокотемпературных носителей катализаторов, высокотемпературных фильтров газов и расплавов. Поверхность заготовки из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493934
Дата охранного документа: 27.09.2013
27.10.2013
№216.012.79e6

Способ лечения экспериментального туберкулеза у мышей линии c57bl/6(h-2)

Изобретение относится к области ветеринарии и клеточных технологий. Предложен способ лечения экспериментального туберкулеза легких у мышей с использованием трансплантации стволовых клеток путем введения в хвостовую вену мышей один раз в неделю суспензии стволовых клеток, выделенных из костей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496868
Дата охранного документа: 27.10.2013
27.02.2014
№216.012.a645

Способ и установка переработки птичьего помета

Группа изобретений может быть использована в области утилизации отходов животноводства и сельского хозяйства, а также в энергетике. Птичий помет обезвоживают в устройстве механического обезвоживания (1), которое соединено сборником отогнанной жидкости (2) посредством последовательно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508280
Дата охранного документа: 27.02.2014
27.02.2014
№216.012.a6b1

Способ и установка для получения древесного угля

Изобретение относится к области получения угля из древесины и ее отходов методом пиролиза. Способ включает стадии загрузки сырья в выемные реторты, сушки сырья, пиролиза, прокаливания, охлаждения и стабилизации угля, при этом сушку проводят при температуре от 160 до 200°С, пиролиз - при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508388
Дата охранного документа: 27.02.2014
10.03.2014
№216.012.a9ae

Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии

Изобретение относится к молекулярной генетике. Способ включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002509153
Дата охранного документа: 10.03.2014
27.05.2014
№216.012.c8cf

Новые 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста mycobacterium tuberculosis

Изобретение относится к новым 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильным производным 2'-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина, подавляющим рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющим формулы 1 и 2, соответственно 1 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517173
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.08.2014
№216.012.eadf

Способ получения кассетных генетических конструкций, экспрессирующих несколько рнк-шпилек

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генотерапии. Способ предусматривает проведение следующих операций: дизайн кассетной конструкции, синтез олигонуклеотидов; попарный отжиг и достройка частично комплементарных олигонуклеотидов; осаждение и рестрикция фрагментов кассеты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525935
Дата охранного документа: 20.08.2014
27.08.2014
№216.012.f0c6

Ингибиторы поли(адф-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила

Изобретение относится к новым ингибиторам поли(АДФ-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила общей формулы (I), (II), (III) и (IV). Ингибиторы поли(АDР-рибозо)полимераз-ферментов участвуют в репарации ДНК. В общей формуле (I), (II), (III) и (IV) R=Н, Cl, Br, I, метил, этил,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527457
Дата охранного документа: 27.08.2014
Showing 1-10 of 64 items.
27.04.2013
№216.012.395b

Устройство очистки воздуха

Изобретение относится к области очистки и стерилизации воздуха бытовых, хозяйственных и производственных помещений, а именно к устройствам для стерилизации, дезодорации и очистке воздуха от вирусов, бактерий, паров и аэрозолей органических и неорганических соединений, в том числе диоксинов,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480244
Дата охранного документа: 27.04.2013
10.09.2013
№216.012.67da

Способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток пациентов с синдромом дауна

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПС клеток) из фибробластов кожи пациентов с синдромом Дауна, включающий в себя предварительную индукцию при помощи лентивирусной трансфекции геном hTERT, дальнейшую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492233
Дата охранного документа: 10.09.2013
20.09.2013
№216.012.6d0d

Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли. Для проведения исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493568
Дата охранного документа: 20.09.2013
27.09.2013
№216.012.6e7b

Cпособ получения жаростойкого высокопористого проницаемого сплава

Изобретение относится к порошковой металлургии, в частности к получению жаростойких высокопористых проницаемых ячеистых сплавов. Может использоваться для получения блочных высокотемпературных носителей катализаторов, высокотемпературных фильтров газов и расплавов. Поверхность заготовки из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493934
Дата охранного документа: 27.09.2013
27.10.2013
№216.012.79e6

Способ лечения экспериментального туберкулеза у мышей линии c57bl/6(h-2)

Изобретение относится к области ветеринарии и клеточных технологий. Предложен способ лечения экспериментального туберкулеза легких у мышей с использованием трансплантации стволовых клеток путем введения в хвостовую вену мышей один раз в неделю суспензии стволовых клеток, выделенных из костей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496868
Дата охранного документа: 27.10.2013
27.02.2014
№216.012.a645

Способ и установка переработки птичьего помета

Группа изобретений может быть использована в области утилизации отходов животноводства и сельского хозяйства, а также в энергетике. Птичий помет обезвоживают в устройстве механического обезвоживания (1), которое соединено сборником отогнанной жидкости (2) посредством последовательно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508280
Дата охранного документа: 27.02.2014
27.02.2014
№216.012.a6b1

Способ и установка для получения древесного угля

Изобретение относится к области получения угля из древесины и ее отходов методом пиролиза. Способ включает стадии загрузки сырья в выемные реторты, сушки сырья, пиролиза, прокаливания, охлаждения и стабилизации угля, при этом сушку проводят при температуре от 160 до 200°С, пиролиз - при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508388
Дата охранного документа: 27.02.2014
10.03.2014
№216.012.a9ae

Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии

Изобретение относится к молекулярной генетике. Способ включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002509153
Дата охранного документа: 10.03.2014
27.05.2014
№216.012.c8cf

Новые 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста mycobacterium tuberculosis

Изобретение относится к новым 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильным производным 2'-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина, подавляющим рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющим формулы 1 и 2, соответственно 1 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517173
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.08.2014
№216.012.eadf

Способ получения кассетных генетических конструкций, экспрессирующих несколько рнк-шпилек

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генотерапии. Способ предусматривает проведение следующих операций: дизайн кассетной конструкции, синтез олигонуклеотидов; попарный отжиг и достройка частично комплементарных олигонуклеотидов; осаждение и рестрикция фрагментов кассеты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525935
Дата охранного документа: 20.08.2014
+ добавить свой РИД