Результат интеллектуальной деятельности: Способ диагностики пищевой аллергии у детей

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, иммунологии, и может применяться в диагностике аллергических заболеваний у детей.

Известен способ диагностики аллергических заболеваний путем определения общего и специфического иммуноглобулина Е (IgE общ. и sIgE). Данной метод является основным и широко используемым в клинической практике. (Т.П. Маркова, Диагностика, профилактика и лечение аллергических заболеваний. РМЖ, 2006, №7, стр. 548).

Известен метод дегрануляции тучных клеток (ДТК), которой заключается в регистрации in vitro процентного соотношения дегранулировавших тучных клеток перитонеальной жидкости крыс после добавления к ней сыворотки крови обследуемого ребенка и испытуемого аллергена (положительным считается результат более 10% без деструкции в контроле (0-3%)). Метод не относится к стандартизованным, поскольку имеет ограничения в связи с низкой специфичностью, существенно коррелирует с периодом (обострение/ремиссия) и не позволяет судить о патогенетическом механизме аллергического реагирования (Радунская С.Ф. Тест непрямой дегрануляции ТК крыс, как метод оценки специфической активности инфекционных аллергенов. Автореферат дисс.канд.биол.наук Москва, 1982, стр. 16).

Известен метод кожного тестирования (R.М. O'Brien. Skin prick testing and in vitro assays for allergic sensitivity. Australian Prescriber 1 Jul 2002; 25:91-3). Он имеет ограничения в связи с возрастом пациента, кожной чувствительностью и наличием кожного заболевания, более того, он неприемлем в период обострения аллергического заболевания, когда диагностика является наиболее актуальной, при интеркуррентных инфекциях в связи с риском системных реакций и ложноположительных реакций.

Ближайшим к заявляемому является способ определения общего и специфического иммуноглобулина Е сыворотки крови (М. Lloyd Interpretation of IgE-mediated allergy tests (RAST). Current allergy and clinical immunology. June 2015, vol. 28, N 2, p. 90-94 https://journals.co.za/content/caci/28/2/EJC172586).

Недостатком способа, выбранного в качестве прототипа, является то, что он не подходит для диагностики нe-IgE-зависимых реакций, распространенных в педиатрической практике, а также имеет ограничения по чувствительности и специфичности (отсутствие в сыворотке крови свободных IgE не исключает возможности участия в патогенезе IgE-зависимого механизма аллергической реакции, что наиболее актуально в младших возрастных группах; антитела sIgG (IgG4) в ряде случаев могут быть причиной ложноотрицательных результатов; при повышенных уровнях общего IgE возможно и неспецифическое связывание IgE с аллергеном.

Задачей настоящего изобретения является повышение эффективности диагностики не-IgE-зависимой пищевой аллергии у детей.

Технический результат поставленной задачи достигается тем, что в способе диагностики пищевой аллергии у детей, заключающемся в исследовании общего и специфического IgE сыворотки крови, определяют содержание суммарных свободных легких каппа- и лямбда-цепей иммуноглобулинов, специфичных к аллергену (св. СЛЦ) и при повышении их уровня выше 0,100 диагностируют He-IgE-зависимую пищевую аллергию.

Моноклональные свободные легкие каппа/лямбда цепи иммуноглобулинов синтезируются активированными аллергеном В-лимфоцитами, они имеют специфический вариабельный участок для связывания с аллергеном и способны вызывать антиген-специфичную клеточную активацию. Этот путь может быть альтернативным вариантом инициирования аллергического иммунного ответа. Т. о., обнаружение в сыворотке крови является новым лабораторным тестом диагностики пищевой аллергии даже при отсутствии IgE-антител в свободном кровотоке, т.е. способом диагностики не-IgE-зависимой пищевой аллергии.

Способ осуществляется следующим образом. Пациенты с проявлениями пищевой аллергии проходят комплексное клинико-лабораторное обследование. Всем детям берется сыворотка крови для определения IgE общего и специфического к белкам коровьего молока методом иммуноферментного анализа на анализаторе «Immulite». Определяется содержание специфичных к белку коровьего молока свободных легких каппа- и лямбда-цепей иммуноглобулинов в сыворотке крови с использованием твердофазного ИФА-наборов фирмы «Алкор Био» (св. СЛЦ). При получении результатов формируется группа детей с fgE-зависимым механизмом аллергической реакции (с повышенными значениями общего и специфического IgE). Дети с отрицательными результатами тестирования IgE, но с превышением пороговых значений, т.е. повышении уровня св. СЛЦ выше 0,100 относятся к группе пациентов с He-IgE-зависимым механизмом реагирования.

Чувствительность и специфичность метода изучалась на 33 контрольных сыворотках с применением позитивного и отрицательного контроля. Была показана высокая чувствительность (до 95%) и достаточная специфичность (90-93%) методик определения уровней свободных легких каппа- и лямбда цепей иммуноглобулинов, специфичных к аллергену (св. СЛЦ), при помощи твердофазного ИФА.

Пример 1. Больная Я., 1 г. Мать обратилась в МЦ 21 ВЕК 02.02.17 с жалобами на высыпания, вздутие живота и неустойчивый стул, периодически со слизью, в течение 7 месяцев, снижение весовых прибавок. Нам момент осмотра ребенок вскармливался адаптированной гипоаллергенной молочной смесью + прикорм 3, за исключением молочного прикорма. Диагностирована пищевая аллергия к белку коровьего молока, для подтверждения диагноза выполнено иммуннологическое исследование крови по заявляемому способу. Общий IgE 2 ME (норма до 10), специфический IgE к белку коровьего молока - 0. Свободные легкие цепи иммуноглобулинов каппа/лямбда к молоку (св. СЛЦ) - 0,180. Диагноз: Атопический дерматит, сенсибилизация к белку коровьего молока. Интестинальная пищевая аллергия. Гипотрофия 1-2 степени. Т.о., подтверждена He-IgE-зависимая пищевая аллергия. Ребенку назначен глубокий казеиновый гидролизат и продолжение гипоаллергенной безмолочной диеты, наружная терапия увлажняющими средствами, спустя 1 месяц девочка вошла в стойкую ремиссию, наладился стул и улучшились показатели переваривания питательных веществ в копрограмме, возросли до нормы весовые прибавки.

Пример 2. Больной С., 8 мес. Семья обратилась в клинику СПбГПМУ 30.01.17 с жалобами на кожные высыпания у ребенка в течение 2 мес., которые постепенно нарастали (со слов, появились после введения молочного прикорма). На момент обращения у ребенка распространенные зудящие высыпания на лице, туловище и конечностях, расчесы. В кл. ан. крови без воспалительных изменений, стул не нарушался. Диагноз: Пищевая аллергия? Дерматоз? Выполнена диагностика по заявляемому способу.

Свободные легкие цепи к белку коровьего молока (св. СЛЦ) - 0,038. Учитывая, что данные за аллергическую природу заболевания получены неубедительные, была проведена консультация дерматолога и дополнительная диагностика. Посев на среду с кожи на Staphilococus aureus отр. Соскоб на чесотку (+) Scabies. Диагноз: Чесотка. После назначения этиотропной наружной терапии отмечалось клиническое улучшение. Высыпания не рецидивировали.

Заявляемый способ является информативным, чувствительным и высокоспецифичным для диагностики пищевой аллергии у детей. Он позволяет эффективно дифференцировать He-IgE-зависимую пищевую аллергию, что важно для выбора правильной тактики лечения и диетотерапии у детей, в т.ч. самого раннего возраста.

Благодаря применению заявляемого способа возможно обоснованное назначение элиминационной диеты даже в случаях сомнительного и отрицательного тестирования общего и sIgE.

Выполнение заявляемого способа, который является качественным и количественным, дает возможность не только эффективно диагностировать пищевую аллергию, но и контролировать уровень сенсибилизации к аллергену в динамике, что важно при расширении диеты. Способ доступен врачам-аллергологам, педиатрам и является удобным диагностическим алгоритмом для определения механизма аллергической реакции.