Способ определения пола плода

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и найдет широкое применение для определения пола плода в ранние сроки его внутриутробного развития.

Медицинским показанием к определению пола плода на ранних сроках беременности является наличие семейного анамнеза по генетическим заболеваниям, сцепленным с полом (гемофилия А и В; различные формы умственной отсталости, сцепленные с X хромосомой [синдром Мартина-Белла, прогрессирующие мышечные дистрофии Дюшенна и Беккера]), нефрогенный несахарный диабет, некоторые формы гидроцефалии, х-сцепленная глухота и др.

На сегодняшний день известно более 300 наследственных заболеваний и признаков, связанных именно с тендерной принадлежностью. Для этих болезней характерна передача патологического гена обычно здоровыми женщинами-носительницами их сыновьям. При рождении мальчиков вероятность их поражения составляет 50%, в то время как девочки рождаются здоровыми, но 50% из них становятся носителями мутантного гена, и у них могут в будущем родиться больные сыновья.

Поскольку определение пола плода представляет собой крайне важную проблему для решения вопроса прерывания беременности или ее пролонгирования, разработка безопасного и с высокой точностью получаемого результата представляет цель данного изобретения.

Известен способ пренатального генетического определения пола плода по крови матери - генетический лабораторный метод диагностики, позволяющий определить пол плода на ранних сроках беременности (Медико-генетический центр. Лаборатория молекулярной патологии. Москва, Подольское шоссе, дом 8, корпус 5. Лицензия № ЛО-77-01-010099 от 21 апреля 2015 г.). Данный генетический метод позволяет обнаружить X (женская принадлежность) или У (мужская принадлежность) хромосомы плода. Но применительно к задаче раннего определения пола плода добавляется проблема - получение материала (клеток, фрагментов ДНК) плода.

Ученые доказали наличие в крови беременных внеклеточной ДНК плода. Попытка внедрить в широкую практику раннее определение пола плода этим методом не дала результата, так как очень часто этот метод сопровождался большим количеством ошибок из-за очень низкого содержания плодного материала в крови матери.

Этот генетический способ диагностики пола плода возможно применять только с 10 недель беременности (Josso N., Belville С., di Clemente N., Picard J.Y. АМН and АМН receptor defects in persistent Mullerian duct syndrome. Human Reprod Update 2005; 11: 351-356). Тесты, которые используют вместо крови мочу для определения пола, точны лишь на 41%, (DianaBianki) Диана Бьянки - репродуктивный генетик (Т.И. Устинкина, С.Б. Шустов. Антимюллеров гормон в дифференцировке, развитии и функции репродуктивной системы. Пр. эндокр., 6, 2011).

Существует способ определения пола плода с использованием биопсии хориона. При биопсии ворсин хориона через зонд, пропущенный через влагалище и шейку матки, либо путем пункции брюшной стенки, забирается биологический материал - клетки плодной оболочки. Эта процедура довольна сложная и может привести к непоправимым последствиям для плода. Она чревата кровотечениями, проникновением инфекций в матку, выкидышем.

Первый традиционный и самый распространенный способ определения пола плода - это УЗИ-диагностика. Но недостаток этого способа состоит в том, что идентификация пола плода возможна только с 15-й недели беременности. К тому же определение происходит визуально, поэтому точность такого анализа во многом зависит от человеческого фактора, и достоверно определить пол ребенка можно лишь ближе к 23-25 недели беременности.

Основными недостатками вышеописанных способов определения пола плода является, прежде всего, или травматичность, или более поздний срок возможной идентификации, а также низкий процент достоверности.

Прототипом данного изобретения избран способ определения пола плода по крови матери, предложенный канадскими учеными, которые разработали методику выделения фетальной ДНК в крови беременной женщины (Stewart T.L. Extraction of nucleic acids from bone. / T.L. Stewart, V. Mann. // Bone Research Protocols: Methods in Molecular Medicine. - 2003. - V. 80. - P. 425-432).

Сущность способа состоит в том, что у женщины в сроки беременности 9-10 недель в крови определяют ДНК плода и поиск У хромосомы. При обнаружении У хромосомы делается заключение о том, что женщина беременна мальчиком, если У хромосома отсутствует, то она беременна девочкой.

Данный способ обладает рядом несовершенств:

1. Очень низкое содержание плодного материала в крови матери обусловливает большое количество диагностических ошибок.

2. В случае не обнаружения У хромосомы результат трактуется как «неоднозначен».

3. Для выполнения метода требуется высококвалифицированный специалист генетик.

Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.

Задача изобретения: разработка способа, позволяющего с высокой точностью диагностировать пол плода.

Поставленная задача решается следующим образом: у женщины осуществляют взятие крови из вены натощак, в сыворотке которой определяют содержание антимюллерова гормона (АМГ) в 7 недель беременности и в 9-10 недель, и при увеличении его содержания в 2,6 раза и более в сроки 9-10 недель, относительно его уровня в крови при 7 неделях беременности, диагностируют мужской пол плода.

Технический результат, получаемый при использовании данного способа в клинической практике, состоит в том, что при выявлении установленных величин АМГ в 7 недель и 9-10 недель диагностируется пол плода.

Гонадный пол складывается под воздействием генетического материала первичных половых клеток при наличии в них У-хромосомы, вследствие чего клетки примитивной гонады дифференцируются в тестикулярные. Сначала образуются клетки Сертоли, которые сразу начинают секретировать фактор регрессии мюллеровых протоков, или антимюллеров гормон (АМГ), затем - клетки Лейдига, продуцирующие тестостерон (Т.И. Устинкина, С.Б. Шустов. Антимюллеров гормон в дифференцировке, развитии и функции репродуктивной системы. Пр. эндокр., 6, 2011).

Участие двух отдельных тестикулярных гормонов в установлении мужского пола впервые обнаружил французский ученый A. Jost (1953) (A. Jost. Problems of fetal endocrinology: the gonodal and hypophyseal hormones. Recent ProgHorm Res. 1953; 8: 379-418).

При наличии в первичных половых клетках двух Х-хромосом примитивные гонады дифференцируются в яичники, клетки которых в этот период не секретируют ни АМГ, ни тестостерон. В отсутствии данных гормонов гениталии плода развиваются по женскому типу. Установлено (Invivo analysis of the regulation of the anti-Mullerian hormone as a marker of Sertoli cell differentiation during testicular development reveals a multi-step process Charlotte Beanetal. // Mol. Reprod. - 2001, Vol. 59. №3, p 256-269), что до 7 недель внутриутробного развития плод имеет зачатки тех и других половых органов, но развивается по женскому типу. В этот период клетки Вольфова протока редуцированы. Однако на 6-10 неделе в эмбриональных яичках начинает вырабатываться АМГ, под действием которого редуцируется мюллеров проток. Этот процесс наблюдается в случае увеличения продукции АМГ более чем в 2,6 раза в 8-10 недель беременности. Таким образом, от уровня продукции АМГ зависит формирование плода мужского или женского пола.

Пример 1.

Пациентка З-кова, 27 лет. Поступила в отделение патологии беременных ФГБУ (РНИИАП) 15.04.15 г. Ds: беременность 9-10 недель, угроза прерывания беременности. В сыворотке крови проведено определение уровня АМГ иммуноферментным методом. Величина его составила 11,33 нг/мл. Определение содержания АМГ в сыворотке крови в сроке 7 нед беременности (амбулаторно) соответствовало 4,3 нг/мл. В 9-10 недель беременности наблюдалось увеличение продукции АМГ в 2,6 раза, позволяющее заключить наличие у женщины плода мужского пола. В сроке 24 недели беременности при УЗИ было подтверждено, что женщина беременна плодом мужского пола.

Пример 2.

Пациентка Л-ва, 24 года. Поступила 19.03.15. Ds: беременность 9-10 недель (в анамнезе - ребенок страдает гемофилией). У женщины (19.03.15) осуществлено взятие крови из вены для определения содержания АМГ, которое составило 11,32 нг/мл. У данной женщины с целью идентификации пола плода при проведении биопсии хориона в сроке 7 недель беременности (ребенок от первой беременности мужского пола болен гемофилией) в ворсинах хориона обнаружена У хромосома, что свидетельствует о наличии у женщины плода мужского пола. Одновременно в венозной крови было определено содержание АМГ, величина которого соответствовала 3,7 нг/мл. У данной беременной содержание АМГ в сроке 9-10 недель по сравнению с 7 неделями увеличилось в 3,06 раза.

Повышение уровня АМГ в крови матери более чем в 2,6 раза подтверждает, что женщина беременна плодом мужского пола.

Пример 3.

Пациентка А-рова, 28 лет. Ds: беременность 9-10 недель, сахарный диабет I типа. Поступила в отделение патологии беременных с целью проведения лечения по поводу сахарного диабета. В сыворотке крови проведено определение содержания АМГ, которое соответствовало 3,12 нг/мл. В сроке 7 недель (амбулаторное обследование) величина АМГ была равна 2,08 нг/мл.

Сопоставление содержания в сыворотке крови АМГ у женщины в 7 нед и 9-10 нед беременности показало, что повышение уровня АМГ в сыворотке крови у женщины с 7 нед до 9-10 нед составило 1,5 раз. Полученный результат свидетельствовал о том, что женщина беременна плодом женского пола. Проведение УЗИ в 22 недели беременности данной пациентки констатировало наличие плода женского пола.

Пример 4.

Пациентка Т-ян, 24 года. Поступила 28.04.15 г. Ds: беременность 9-10 недель (ребенок от первой беременности болеет гемофилией).

28.04.15 г. (амбулаторно, в поликлинике ФГБУ «РНИИАП») произведено взятие крови из вены для определения уровня АМГ, величина которого соответствовала 1,67 нг/мл в сроке 7 недель, и в 9-10 недель - 2,34 нг/мл. Увеличение содержания АМГ в сыворотке крови за период с 7 недель и до 9-10 недель произошло в 1,4 раза, что свидетельствует о беременности данной женщины плодом женского пола. Это положение было подтверждено в 18 недель по данным УЗИ.

По заявляемому способу определение содержания АМГ в сыворотке крови проведено у 81 женщины в сроки 6-7 недель и 9-10 недель беременности, среди которых у 51 увеличение уровня АМГ с 6-7 недель до 9-10 недель беременности было от 2,6 до 2,9, а у 40 - от 1,21 до 1,5. У всех женщин, в сыворотке крови которых увеличение содержания АМГ с 6-7 недель до 9-10 недель было в 2,6 раз и выше, диагностирован плод мужского пола. Если увеличение продукции АМГ было в 1,5 раз и ниже, то эти женщины были беременны плодом женского пола.

Вышеизложенное подтверждает диагностическую ценность заявляемого метода.

Таким образом, заявляемый способ более эффективен по сравнению с известными и обладает рядом преимуществ:

1. Обладает высокой точностью. В 99,9% случаев был правильно определен пол плода.

2. Исключает необходимость многократного проведения исследования.

3. Клиническое применение способа позволяет своевременно предупредить рождение детей, сцепленных генетическими заболеваниями с полом (гемофилия А и В; различные формы умственной отсталости, сцепленные с X хромосомой [синдром Мартина-Белла, прогрессирующие мышечные дистрофии Дюшенна и Беккера]), нефрогенный несахарный диабет, некоторые формы гидроцефалии, х-сцепленная глухота и др.).