СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ УВЕИТА У ДЕТЕЙ С ЮВЕНИЛЬНЫМ ИДИОПАТИЧЕСКИМ АРТРИТОМ

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано в качестве метода прогнозирования развития увеита у детей с ювенильным идиопатическим артритом.

Ювенильный идиопатический артрит (ЮИА) - артрит неустановленной причины, длительностью более 6 недель, развивающийся у детей в возрасте не старше 16 лет при исключении другой патологии суставов. ЮИА - одно из наиболее частых и самых инвалидизирующих ревматических заболеваний, встречающихся у детей. Заболеваемость ЮИА составляет 2-16 на 100 тыс. детского населения в возрасте до 16 лет. Одним из экстраартикулярных проявлений ЮИА является воспалительное заболевание сосудистого тракта глаза. Известно, что увеит является аутоиммунным заболеванием, в основе которого лежит нарушение цитокиновой регуляции иммунных реакций. Важность оценки системной выработки цитокинов определяется способностью некоторых из них к дистантным эффектам и проникновению через гематоофтальмический барьер. Особое внимание уделяется поиску иммунных медиаторов воспаления, отвечающих за ключевые звенья патогенеза увеита. В биологических жидкостях выявлен целый ряд провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α, ИЛ-5, ИЛ-10, ИФН-γ) и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10, TGF-β). В настоящее время опубликованы результаты изучения нарушения цитокиновой сети при ряде инфекционных и неинфекционных увеитов, а также заболеваниях соединительной ткани у детей и взрослых. Однако данные о результатах исследований иммунопатогенеза увеита на фоне ЮИА представлены лишь в единичных работах, при этом практически отсутствуют сведения о сравнении иммунного статуса у детей, страдающих ЮИА без признаков увеита и с клиническими проявлениями увеита. В тоже время эта группа пациентов заслуживает особого внимания ввиду тяжести основного заболевания, усугубляющего течение увеита.

Способу прогнозирования развития увеита у детей, ассоциированного с ювенильным идиопатическим артритом, уделяется большое внимание.

Патентный поиск

Способу прогнозирования развития увеита у детей, ассоциированного с ювенильным идиопатическим артритом, уделяется большое внимание. При проведении патентного поиска нами были изучены следующие патенты.

1. Способ прогнозирования течения увеитов, ассоциированных с поражением суставов у детей. Авторы: Катаргина Людмила Анатольевна (RU), Старикова Александра Викторовна (RU). RU 2002131179. 51, МПК G01N 33/569 (2000.01), заявка: 2002131179/15, 20.11.2002.

2. Способ прогнозирования течения эндогенных увеитов у детей. Автор(ы): Катаргина Л.А., Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П. RU 2199123, МПК G01N 33/52, Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца, заявка: 2001116520/14.

3. Способ прогнозирования течения увеитов, ассоциированных с ревматическими заболеваниями, у детей в условиях терапии ингибиторами фактора некроза опухоли альфа по поводу основного заболевания. Авторы: Катаргина Людмила Анатольевна (RU), Слепова Ольга Семеновна (RU), Денисова Екатерина Валерьевна (RU), Любимова Наталья Валерьевна (RU), Петровская Мария Станиславовна (RU) RU 2479848, МПК G01N 33/68 (2006.01), Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца, заявка: 2011152764/15, 23.12.2011.

4. Способ прогнозирования неблагоприятного течения увеитов. Авторы: Слепова Ольга Семеновна, Быковская Галина Николаевна, Катаргина Людмила Анатольевна, Денисова Екатерина Валерьевна, Величко Татьяна Владимировна, RU 2298188, МПК G01N 33/68 (2006.01), аявка 2005128953/15, 19.09.2005.

5. Способ прогнозирования течения травматического увеита. Тарасова Л.Н., Киселева Т.Н., Орлова Н.С. RU 94035707, МПК A61B 5/00 (1995.01). Уральский институт усовершенствования врачей, заявка 94035707/14 20.09.1994.

6. Способ прогнозирования течения травматического увеита. Азнабаев М.Е., Газдалиева Л.М., Никитин Н.А., Даутова З.A. RU 2003118152, МПК G01N 33/48 (2000.01). Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней. 2001118152/15 16.06.2003.

7. Способ прогноза неблагоприятного затяжного течения ревматоидного увеита. Шевчук Н.Е., Габдрахманова А.Ф., Мальханов В.Б., Зайнутдинова Г.X. RU 2325657, МПК G01N 33/68 (2006.01). Государственное учреждение «Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней» Академии наук Республики Башкортостан. Заявка 2007113135/15 30.03.2007.

8. Способ прогноза течения ревматоидного увеита. Зайнутдинова Г.X., Мальханов В.Б., Шевчук Н.Е., Марванова З.P. RU 2287164, МПК G01N 33/68 (2006.01). Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней. Заявка 2005121103/15 05.07.2005.

9. Способ прогнозирования течения посттравматического увеита при проникающем ранении глазного яблока. Марачева Н.М. RU 2387417, МПК A61F 9/00 (2006.01), A61B 8/10 (2006.01). Заявка 2009110651/14 23.03.2009.

10. Способ прогнозирования неблагоприятного течения посттравматического увеита. Винькова Г.А., Вавилова Г.И., Климова З.Ф. RU 2153283, МПК A61B 5/04 (2000.01), A61B 5/00 (2000.01). Уральская государственная медицинская академия дополнительного образования. Заявка 99101993/14 02.02.1999.

11. Способ прогнозирования развития хронического течения посттравматического увеита. Винькова Г.А., Камилова Ф.X. RU 2149408, МПК G01N 33/68 (2000.01). Уральская государственная медицинская академия дополнительного образования. Заявка 98121199/14 23.11.1998.

12. Способ прогнозирования осложненного течения периферического увеита. Чудинова О.В., Хокканян В.М. RU 2149408, МПК A61B 8/06 (2006.01). Заявка 2009142010/14 13.11.2009.

Прототипом соответственно решаемой нами задачи рассматривается изобретение Е.А. Дроздовой и Л.Н. Тарасовой «Способ прогнозирования течения увеитов при системных и синдромных заболеваниях» (157541, МПК G01N 33/68 (2000.01) №2157541 от 10.10.2000). В данном изобретении прогноз течения увеитов при системных и синдромных заболеваниях ставится путем исследования слезной жидкости (СЖ) в которой определяют содержание ИЛ-4 и ИЛ-6 в слезе с подсчетом прогностического коэффициента по формуле: ПК=ИЛ-6/ИЛ-4*100. По величине прогностического коэффициента прогнозируют форму течения РУ. Так, при ПК=0,59±0,04 свидетельствуют о средней тяжести с благоприятным течением. ПК=2,05±0,1 дает возможность прогнозировать хроническое часто рецидивирующее течение. При ПК=5,39±0,3 отмечается осложненное течение увеита с генерализацией воспалительного процесса. В стадии ремиссии ПК=0,267±0,04.

Предложенный нами способ отличается более высокой точностью прогноза развития увеита, ассоциированного с ЮИА, поскольку позволяет на раннем этапе заболевания, основываясь на определении иммунорегуляторных цитокинов на системном уровне (в сыворотке крови), выделить среди пациентов с ЮИА группу риска по развитию увеита. Преимуществом данного метода является раннее диспансерное наблюдение этой группы пациентов врачом-офтальмологом и своевременное назначение терапии.

Целью изобретения является повышение точности прогноза развития увеита при ювенильном идиопатическом артрите для профилактики развития осложнений (осложненная катаракта, вторичная глаукома, рецидивирующий кистозный макулярный отек), приводящих к слепоте и слабовидению детей.

Поставленная цель достигается путем определения содержания ИЛ-10 и ИНФ-γ в сыворотке крови и подсчета коэффициента по формуле:

по величине которого прогнозируют риск развития увеита у детей с ЮИА.

Цитокины, секретируемые клетками иммунной системы, - близкодействующие медиаторы, обуславливающие локальные взаимодействия клеток в очагах развития процессов в тканях. ИЛ-10 секретируется моноцитами, макрофагами, активированными Th-2 клетками. ИЛ-10 оказывает мощное иммуносупрессивное влияние, тем самым подавляет выработку ИНФ-γ лимфоцитами и натуральными киллерами. INF-γ высвобождается CD4+ T-клетками (Th-0 и Th-1), CD8+ T-клетками и активированными натуральными киллерами. ИНФ-γ является провоспалительным цитокином. Дисбаланс в соотношении цитокинов на системном уровне может привести к истощению и дисрегуляции иммунной системы, тем самым, создавая благоприятные условия для возникновения заболевания.

Содержание ИЛ-10 в сыворотке крови определяли в иммуноферментном анализе с помощью реагентов фирмы «Вектор-Бэст», г. Новосибирск на аппарате Personal Lab. (Adaltis, Italy). Во все лунки планшета внесли по 100 мкл раствора для разведения образцов. В дублях, начиная с верхних лунок первых двух стрипов, внесли по 100 мкл калибровочных образцов 0;. 20; 40; 200; 500; и 1000 пг/мл. В следующую пару лунок внесли по 100 мкл контрольного образца. В остальные лунки внесли по 100 мкл исследуемых образцов. Отрезали липкую пленку требуемого размера. Стрипы заклеили пленкой и инкубировали при температуре 37°C в течение 120 мин в термостатируемом шейкере с частотой 700 об/мин. По окончании инкубации сняли липкую пленку и поместили ее в сосуд с дезинфицирующим раствором. С помощью промывочных устройств лунки планшета промыли 5 раз раствором 1, чередуя аспирацию и немедленное заполнение лунок каждого стрипа. В каждую лунку вносили не менее 350 мкл жидкости в процессе каждого цикла промывки. Время между заполнением и опорожнением лунок составило не менее 30 сек. По окончании промывки остатки влаги из лунок тщательно удалили, постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге. На следующем этапе в лунки планшета внесли по 100 мкл конъюгата №1 (использовали пластиковую ванночку и одноразовые наконечники, входящие в состав набора). Стрипы закрывали пленкой и помещали в шейкер. Инкубировали 60 мин при температуре 37°C, при 700 об/мин. По окончании инкубации планшет промыли 5 раз по методике, описанной выше. Далее в лунки планшета внесли по 100 мкл конъюгата №2. Стрипы закрыли пленкой и поместили в шейкер. Инкубировали 30 мин при температуре 37°C, при 700 об/мин. По окончании инкубации вновь промывали планшет 5 раз. Затем во все лунки внесли по 100 мкл раствора тетраметилбензидина (ТМБ) плюс. Планшет выдержали в защищенном от света месте в течение 25 минут при температуре 18-25°C. Внесли в лунки по 100 мкл стоп-реагента с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор тетраметилбензидина. Оптическую плотность измеряли с помощью спектрофотометра в двухволновом режиме: основной фильтр - 450 нм, референс-фильтр - в диапазоне 620-655 нм. Измерение проводили через 2-3 мин после остановки реакции. Время между остановкой реакции и измерением оптической плотности не превышало 10 мин. Проводилось построение калибровочного графика зависимости оптической плотности (ось ординат) от концентрации ИЛ-10 (ось абсцисс) в калибровочных образцах. Результаты выражали в пг/мл.

Содержание ИНФ-γ в сыворотке крови определяли в иммуноферментном анализе с помощью реагентов фирмы «Вектор-Бэст», г. Новосибирск на аппарате Personal Lab. (Adaltis, Italy). Во все лунки планшета внесли по 100 мкл раствора для разведения образцов. В дублях, начиная с верхних лунок первых двух стрипов, внесли по 100 мкл калибровочных образцов 0;. 20; 40; 200; 500; и 1000 пг/мл. В следующую пару лунок внесли по 100 мкл контрольного образца. В остальные лунки внесли по 100 мкл исследуемых образцов. Отрезали липкую пленку требуемого размера. Стрипы заклеили пленкой и инкубировали при температуре 37°C в течение 120 мин в термостатируемом шейкере с частотой 700 об/мин. По окончании инкубации сняли липкую пленку и поместили ее в сосуд с дезинфицирующим раствором. С помощью промывочных устройств лунки планшета промыли 5 раз раствором 1, чередуя аспирацию и немедленное заполнение лунок каждого стрипа. В каждую лунку вносили не менее 350 мкл жидкости в процессе каждого цикла промывки. Время между заполнением и опорожнением лунок составило не менее 30 сек. По окончании промывки остатки влаги из лунок тщательно удалили, постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге. На следующем этапе в лунки планшета внесли по 100 мкл конъюгата №1 (использовали пластиковую ванночку и одноразовые наконечники, входящие в состав набора). Стрипы закрывали пленкой и помещали в шейкер. Инкубировали 60 мин при температуре 37°C, при 700 об/мин. По окончании инкубации планшет промыли5 раз по методике, описанной выше. Далее в лунки планшета внесли по 100 мкл конъюгата №2. Стрипы закрыли пленкой и поместили в шейкер. Инкубировали 30 мин при температуре 37°C, при 700 об/мин. По окончании инкубации вновь промывали планшет 5 раз. Затем во все лунки внесли по 100 мкл раствора тетраметилбензидина (ТМБ) плюс. Планшет выдержали в защищенном от света месте в течение 25 минут при температуре 18-25°C. Внесли в лунки по 100 мкл стоп-реагента с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор тетраметилбензидина. Оптическую плотность измеряли с помощью спектрофотометра в двухволновом режиме: основной фильтр - 450 нм, референс-фильтр - в диапазоне 620-655 нм. Измерение проводили через 2-3 мин после остановки реакции. Время между остановкой реакции и измерением оптической плотности не превышало 10 мин. Проводилось построение калибровочного графика зависимости оптической плотности (ось ординат) от концентрации ИНФ-γ (ось абсцисс) в калибровочных образцах. Результаты выражали в пг/мл. Проведенные исследования позволили выявить группу риска по развитию увеита на фоне ЮИА. У каждого больного были определены ПК, которые характеризовались диапазоном от 60,3±14,5 у пациентов с увеитом, ассоциированным с ЮИА, и 31,8±4,7 у пациентов с ЮИА без увеита (p≤0,000).

Для подтверждения представленных материалов приведем клинические примеры.

Пример 1: Больной П., 10 лет, наблюдался у детского ревматолога с диагнозом: ЮИА, олигоартикулярный вариант, РФ (-), активность 1, ФК 2, с 7 лет. Получал базисную терапию метотрексат 15 мг/неделю. Ремиссия по суставному синдрому была достигнута. Ребенок направлен на осмотр к офтальмологу в плановом порядке. На осмотре: передний иридоциклит правого глаза средней степени тяжести. ОД - легкая перикорнеальная инъекция глазного яблока, на эндотелии роговицы небольшое количество преципитатов мелких и средних, по зрачковому краю радужки на 19.00 задние синехии, деформирующие зрачок; в передних слоях стекловидного тела легкая взвесь воспалительных клеток. Глазное дно не изменено. Острота зрения ОД - 0,8, не корригируется. ОС - здоров. ИЛ-10=29,808 пг/мл, ИНФ-γ=28,058, ПК=106,24.

Проведено усиленное противовоспалительное лечение как системное, так и локальное. Доза метотрексата была увеличена до 20 мг/неделю. В течение 1 месяца увеит купирован, суставной синдром неактивный, зрение восстановилось до 1,0. Ребенок наблюдается в течение года - обострений увеита не было.

Пример 2. Больной З., 8 лет наблюдается у детского ревматолога с диагнозом: ЮИА, олигоартикулярный вариант, РФ (-), активность 1, ФК 2 с 5 лет. Получает базисную терапию метотрексатом 15 мг/неделю, суставной синдром неактивный. На плановом осмотре офтальмолога патологии не выявлено. ИЛ-10=4,8 пг/мл, ИНФ-γ=18,667, ПК=25,7.

За время наблюдения в течение 2 лет воспалительный процесс сосудистой оболочки глаз не диагностирован.