Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ НОВОРОЖДЕННОГО МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа получения препарата для повышения резистентности новорожденных телят и поросят и способа повышения резистентности и может быть использовано для повышения сохранности новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных.

Известен способ повышения резистентности организма телят с применением неспецифического иммуноглобулина (Ю.Н. Федоров, Г.Р. Реджепова «Оценка иммунологического статуса у новорожденных телят». Бюл. ВИЭВ, вып. 66, М., 1988, с. 8-9).

Однако, из-за недостаточной активности препарата и частичной потери свойств при транспортировке и хранении, способ малоэффективен.

Известен способ повышения резистентности организма новорожденных телят с применением препарата, содержащего, мас.%: сульфапиридазин - 3,8-4,2; кальция глюконата или глюкозы - 1,8-2,2; тиамина бромид - 0,10-0,14; кормовые дрожжи - остальное, который используют для лечения путем введения 2 раза в день до выздоровления в дозах 0,7-0,9 г/кг массы животного (патент RU № 2010565, МПК А61К 31/00, опуб. Бюл. № 7 от 15.04.94 г.).

Недостатком этого способа является сложность композиции и длительность применения препарата.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ получения препарата для повышения резистентности новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных, включающий применение неспецифического иммуноглобулина, выделенного из сыворотки крови животных путем обработки полиэтиленгликолем с включением микроэлементов (Антонов B.C., Михайлова С.А., Руденко Е.П. Комплексные металлоглобулиновые препараты для повышения резистентности и лечения болезней молодняка животных // Материалы международной научно-произв. конф., посвящ. 100-летию А.А. Авдорова. - Воронеж, 2006. - с. 414-418).

Недостатком способа является низкая эффективность препарата из-за неполноценности минерального состава металлоглобулинового комплекса, поскольку водно-солевой состав раствора металлоглобулина далек от оптимального, так как содержит всего 0,02% железа, 0,02% кобальта, 0,002% меди, 0,002% марганца и 0,003% цинка, что явно недостаточно при гипоминерализации организма при желудочно-кишечных расстройствах.

В этом же источнике информации (см. выше) описан и способ повышения резистентности молодняка животных, включающий применение вышеприведенного препарата и его подкожное введение в дозе 0,5 см³/кг массы тела с профилактической целью и в дозе 0,7-1,0 см³/кг массы тела с лечебной целью.

Этот способ повышения резистентности по причинам, изложенным выше при описании известного способа получения препарата, обладает низкой эффективностью, недостаточной при гипоминерализации организма при желудочно-кишечных расстройствах.

Предлагаемое изобретение направлено на достижение технического результата, заключающегося в повышении эффективности полученного препарата, основанного на усилении (аддитивности) эффектов, составляющих компонентов композиции, а также повышения жизнеспособности и сохранности молодняка при анемии и гипотрофии.

Для получения указанного технического результата в предлагаемом способе получения препарата для повышения резистентности новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных, включающем применение неспецифического иммуноглобулина, выделенного из сыворотки крови животных путем обработки полиэтиленгликолем с включением микроэлементов, в качестве источника микроэлементов используют 3,5-4%-ный раствор этанолового экстракта цветочной пыльцы с неспецифическим иммуноглобулином в соотношении 1:9 соответственно, смесь перемешивают, стерилизуют путем фильтрации, затем разливают во флаконы емкостью 250-500 см³, герметично закрывают и хранят при температуре 4-6°С. А этаноловый экстракт получают путем высушивания свежесобранной пыльцы при температуре 38-40°С до влажности 10%, далее пыльцевые зерна измельчают на гомогенизаторе, затем экстрагируют в 70%-ном этаноле в течение 20-21 суток, фильтруют и разводят стерильной водой до 3,4-4%-ной концентрации.

Для достижения указанного технического результата в предлагаемом способе повышения резистентности новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных, включающем применение неспецифического иммуноглобулина, выделенного из сыворотки крови животных путем обработки полиэтиленгликолем с включением микроэлементов и подкожным введением в организм, в качестве источника микроэлементов используют 3,5-4%-ный раствор этанолового экстракта цветочной пыльцы с неспецифическим иммуноглобулином в соотношении 1:9 соответственно, смесь перемешивают, стерилизуют путем фильтрации, затем трехкратно с интервалом 5 суток вводят телятам в дозе 0,8-1,0 см³/кг массы животного, а поросятам - в дозе 0,4-0,5 см³/кг массы животного.

Отличительными признаками предложенного способа получения препарата является использование в качестве источника микроэлементов 3,5-4%-ного раствора этанолового экстракта цветочной пыльцы с неспецифическим иммуноглобулином в соотношении 1:9 соответственно, перемешивание смеси, стерилизацию путем фильтрации, разливку во флаконы емкостью 250-500 см³, герметичное закрытие и хранение при температуре 4-6°С, а также получение этанолового экстракта путем высушивания свежесобранной пыльцы при температуре 38-40°С до влажности 10%, измельчение на гомогенизаторе пыльцевых зерен, экстрагирование в 70%-ном этаноле в течение 20-21 суток, фильтрование и разведение стерильной водой до 3,4-4%-ной концентрации.

Отличительными признаками предложенного способа повышения резистентности является применение полученного препарата и трехкратное введение его с интервалом 5 суток телятам в дозе 0,8-0,1 см³/кг массы животного, а поросятам - в дозе 0,4-0,5 см³/кг массы животного.

Это позволяет повысить эффективность полученного препарата, повысить жизнестойкость, полностью сохранить новорожденный молодняк и, кроме того, расширить спектр иммунофармакологического действия.

Введение экстракта цветочной пыльцы потенцирует фармакологическое действие неспецифического иммуноглобулина.

Механизм лечебного действия глобулина состоит в том, что иммуноглобулины обладают противоинфекционным, иммунорегуляторным, иммуномодулирующим и заместительным действием. Иммуноглобулины представляют собой гетерогенный пул антител. Эти антитела способны прикрепляться к поверхности микробных клеток или нейтрализовать их компоненты (антигены, эндотоксин). Прикрепление к клеткам или антигенным детерминантам осуществляется с помощью Fab-фрагмента антител. Связывание антигена и антитела имеет характер не ковалентного, а комплементарного, т.е. за счет пространственной гомологии взаимодействующих фрагментов. На противоположном свободном Fc-фрагменте антител располагаются области связывания комплемента и фагоцитов. При прикреплении Fab-фрагмента антитела к поверхности клетки становятся доступной область Fc-фрагмента, где располагаются области активации комплемента и связывания фагоцита. Таким образом, сам процесс активации системы комплемента представляет собой систему наведения фагоцитов на микробные клетки и усиливает фагоцитоз.

Благодаря наличию нейтрализующих и опсонирующих антител в препаратах иммуноглобулинов увеличивается бактерицидная активность сыворотки, стимулируется фагоцитоз, нейтрализуются некоторые бактериальные токсины. Иммуноглобулины в очаге воспаления угнетают хемотаксис лейкоцитов, что приводит к уменьшению выраженности симптомов воспалительного процесса, а наличие в иммуноглобулине антител против наиболее распространенных болезнетворных агентов, оказывает на них нейтрализующий эффект и далее, благодаря наличию в составе препарата минералов и витаминов, положительно влияет на процессы обмена веществ, повышая естественную резистентность. Кроме того, микроэлементы, входящие в состав фитоглобулинов (глобулин - экстракт цветочной пыльцы) стимулируют кроветворение, повышают уровень гемоглобина и эритроцитов в крови, что делает препараты эффективными при профилактике анемии у молодняка животных.

Цветочная пыльца представляет собой комплекс биологически активных веществ, созданный самой природой. Белок пыльцы содержит все незаменимые и заменимые аминокислоты, т.е. «весь строительный материал» для живых клеток. Пыльцу можно назвать естественным концентратом почти всех известных витаминов: аскорбиновая кислота, тиамин, рибофлавин, пиридоксин, никотиновая кислота, пантотеновая кислота, биотин, фолиевая кислота, каротин, кальциферол, токоферол, рутин и др. Причем каротина в пыльце лилии и желтой акации в 20 раз больше, чем в красной моркови. Цветочная пыльца содержит до 17 мг% рутина - витамина молодости. В связи с этим она является биологическим стимулятором для стареющего организма. Кроме этого, цветочная пыльца очень богата минеральными солями и биоэлементами. Она содержит кальций, магний, калий, медь, железо, кремний, фосфор, серу, хлор, титан, марганец, барий, серебро, золото, палладий, ванадий, вольфрам, иридий, кобальт, цинк, мышьяк, олово, платину, молибден, хром, кадмий, стронций. Каждое из этих 27 минеральных веществ имеет исключительно важное и специфическое значение в нормальной жизнедеятельности организма человека и животных.

Пыльца содержит ферменты, выполняющие роль биологических катализаторов и гормональные вещества: эстрон - женские половые фолликулярные гормоны. Кроме того, в пыльце обнаружен стимулятор роста (Йориш Н.П. Продукты пчеловодства и их использование. М.: Россельхозиздат, 1976. - 175 с.).

Следовательно, при использовании композиционного фитоглобулинового препарата достигается синергизм (усиление) иммунотерапевтического, иммуномодулирующего, иммуностимулирующего, антибактериального, детоксицирующего и метаболизмстимулирующего эффектов составляющих компонентов.

Способ получения препарата для повышения резистентности организма новорожденного молодняка и способ повышения резистентности иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Эффективность препарата в зависимости от качественного и количественного соотношения компонентов.

Перед постановкой опытов получали варианты композиционного препарата, содержащие различные соотношения компонентов. Для приготовления смеси предварительно готовили 1,0; 2,0; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0; 10,0; 20,0%-ные растворы этанолового экстракта цветочной пыльцы на стерильном изотоническом растворе. Полученные растворы смешивали с неспецифическим иммуноглобулином в соотношениях 1:9; 2:8; 3:7; 4:6; 5:5; 6:4; 7:3; 8:2; 9:1. Смеси хорошо встряхивали и вводили белым мышам однократно подкожно в дозе 0,1 мл. В опытах использовали 180 белых мышей, разделенных на 18 групп по 10 животных в каждой. Для оценки уровня естественной резистентности организма (ЕРО) определяли лизоцимную активность сыворотки крови по В.Г. Дорофейчуку (1968), функциональную активность нейтрофилов (ФАН) - по реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) in vitro по А.И. Маянскому и др. (1977).

Установлено, что композиция биологически активных веществ цветочной пыльцы и глобулинов, содержащая 1 часть 3,5-4,0%-ного раствора этанолового экстракта цветочной пыльцы и 9 частей иммуноглобулина обеспечивала выраженное повышение всех показателей естественной резистентности организма (ЕРО). Любые изменения как концентрации этанолового экстракта, так и соотношения компонентов иммуноглобулин - фитопрепарат (экстракт цветочной пыльцы) приводили к снижению изучаемых показателей ЕРО.

Пример 2. Обоснование лечебной дозы и кратности введения препарата для телят.

Телят в возрасте 1-7 дней с явно выраженными клиническими признаками болезни разделили на 6 групп по 10 голов в каждой. Телятам первых 5 групп (1-я, 2-я, 3-я, 4-я и 5-я) подкожно вводили смесь неспецифического глобулина и экстракта цветочной пыльцы в нарастающих дозах 0,7; 0,8; 0,9; 1,0 и 1,1 см³/кг соответственно. Животным 6-й (контрольной) группы препарат не вводили. Смесь вводили подкожно одно-, двух-, трех-, 4-х и 5-кратно с интервалами 1, 2, 3, 4, 5, 6 дней.

Установлено, что наилучшие результаты (95-100% выживаемости соответственно) получены при трехкратном с интервалом 5 дней подкожном введении им фитоглобулинового препарата в дозе 0,8-1,0 см³/кг. При снижении или увеличении дозы и кратности введения препарата происходило снижение выживаемости животных.

Пример 3. Обоснование лечебной дозы ии кратности введения препарата для поросят.

Поросят в возрасте 1-7 дней с явными признаками желудочно-кишечного расстройства разделили на 6 групп по 10 животных в каждой. Поросятам первых 5 групп (1-я, 2-я, 3-я, 4-я и 5-я) подкожно вводили смесь фитоглобулина в нарастающих дозах 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 см³/кг соответственно. Смесь вводили 1-, 2-, 3-, 4- и 5-кратно с интервалами 1, 2, 3, 4, 5 и 6 дней. Оценку лечебной эффективности препарата проводили по интегральному показателю - выживаемости больных животных.

Установлено, что наилучшие результаты (максимальная выживаемость - 100%) были получены при трехкратном с интервалом 5 дней подкожном введении им испытуемого препарата в дозах 0,4-0,5 см³/кг. Снижение или увеличение дозы, а также кратности введения нецелесообразно из-за отсутствия положительного эффекта.

Пример 4. Влияние комплексного препарата на основе глобулинов и этанолового экстракта цветочной пыльцы на иммунологическую реактивность и неспецифическую резистентность телят с признаками гипотрофии.

Опыты проводили на телятах месячного возраста с клиническими признаками гипотрофии. Телятам 1-й группы (n=10) подкожно вводили смесь экстракта цветочной пыльцы и глобулина трехкратно с интервалом 5 дней в дозе 1,0 см³/кг, телятам 2-й группы (n=10) по аналогичной схеме были сделаны инъекции комплексного металлоглобулина. Телятам контрольной группы (n=5) по той же схеме вводили физиологический раствор. Контрольные иммунологические исследования проводили на 5, 7 сутки. Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2.

Из данных табл. 1 видно, что у телят были выражены все признаки иммунодефицитного состояния. Кроме того; у подопытных животных наблюдается весьма слабая активность факторов неспецифической резистентности (см. табл. 2). Применение на этом фоне композиционного препарата глобулин + экстракт цветочной пыльцы обуславливает выраженный стимулирующий эффект на клеточную и гуморальную системы иммунитета и неспецифической резистентности, что может иметь положительное значение как в комплексной терапии инфекционных заболеваний, так и в индуцировании антиинфекционной защиты. Стимуляция клеточного, гуморального иммунитета и факторов неспецифической резистентности приводит к значительному повышению выживаемости гипотрофиков, которая составляла 100% (1-я группа, глобулин + экстракт цветочной пыльцы), 80% (2-я группа, металлоглобулины), 70% (3-я группа, биологический контроль).

Пример 5. Оценка противоанемического действия комплексного фитоглобулинового препарата глобулин + экстракт цветочной пыльцы.

Изучение гематологической (антианемической) активности фитоглобулинового препарата глобулин + цветочная пыльца проводили в сравнении с металлоглобулином и ферроглюкином на новорожденных поросятах. В 4-дневном возрасте поросятам 1-й группы (n=6) подкожно инъецировали в объеме 1,0 см³ (0,4 см³/кг), поросятам 2-й группы (n=6) инъецировали металлоглобулин в том же объеме, поросятам 3-й группы в той же дозе вводили ферроглюкин, а поросятам 4-й группы - физиологический раствор в том же объеме. В 8-дневном и 12-дневном возрасте инъекции препаратов повторили, увеличив их дозу до 1,5 и 2,0 см³ соответственно. Кровь для гематологического исследования брали в день первой инъекции препаратов и через 7 дней повторного и третьего введения препаратов.

Результаты исследований представлены в таблице 3.

Результаты гематологических исследований свидетельствуют о выраженном стимулирующем действии фитоглобулинового препарата на систему гемопоэза, чем металлоглобулин и превосходили по эффективности антианемический железосодержащий препарат ферроглюкин в 1,26 раза (Р<0,05). В крови поросят 1-й группы показатели содержания эритроцитов и гемоглобина были достоверно выше по отношению к уровню у их сверстников из 3-й и контрольной групп. Достоверно высокий уровень показателей БАСК и ФАЛ у телят опытных групп (табл.2) указывает на выраженную стимуляцию факторов неспецифической резистентности иммунной системы на фоне применения фитоглобулинового препарата (глобулин + экстракт цветочной пыльцы).

Следует отметить, что у поросят 1-й опытной группы в течение 15 дней (срок ежедневного наблюдения) не было отмечено ни одного случая диареи. У поросят 2-й и 3-й групп регистрировали в 2, 3 случаях из 6 легкое течение диареи, в то время как у всех поросят контрольной группы за этот период постоянно регистрировали признаки диспепсии, что не могло не отражаться на их ростовой активности. В 30-дневном возрасте средний вес поросят 1-й группы составил 4,9 кг, 2-й - 4,6 кг, 3-й - 4,1 кг, против 3,8 кг у животных контрольной группы.

Полученные данные убедительно свидетельствуют о том, что фитоглобулиновый препарат глобулин + экстракт цветочной пыльцы оказывает выраженное стимулирующее действие как на систему иммуногемопоэза, так и на факторы антиинфекционной защиты и интенсивность обменных процессов.

Таким образом, предлагаемые способы позволили повысить эффективность препарата, расширить спектр иммунофармакологического действия против болезней новорожденных телят и поросят, протекающих по типу острых желудочно-кишечных расстройств (колибактериоз, диареи, диспепсия), гипотрофии и анемии. Разработанный препарат повышает защитные силы организма животных, их резистентность к неблагоприятным факторам внешней среды. Сохранность животных непосредственно связана с поступлением в организм необходимого количества синерически действующих биологических активных веществ (иммуноглобулинов, микроэлементов, гормонов, витаминов).