×
20.09.2015
216.013.7c05

СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
№ охранного документа
0002563346
Дата охранного документа
20.09.2015
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области иммунологии, в частности к стабильным составам антител против рецептора программируемой смерти PD-1 человека. Указанные составы могут быть жидкими или лиофилизированными, при этом содержат 25-100 мг/мл антитела против PD-1 человека, приблизительно 70 мг/мл сахарозы, приблизительно 0,2 мг/мл полисорбата 80 и приблизительно 10 мМ гистидинового буфера при pH 5,0-6,0, где антителом против PD-1 человека является h409A11. Изобретение позволяет получать стабильные фармацевтические составы для лечения пациентов со злокачественным новообразованием или хронической вирусной инфекцией. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 18 ил., 6 табл., 3 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По данной заявке испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США № 61/470121, зарегистрированной 31 марта 2011 года, включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к стабильным составам антител против рецептора программируемой смерти PD-1 человека или их антигенсвязывающих фрагментов. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам лечения различных злокачественных новообразований и хронических инфекций с использованием стабильных составов антител против PD-1 человека или их антигенсвязывающих фрагментов.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Белок программируемой смерти 1 (PD-1), член костимуляторного семейства генов CD28, умеренно экспрессируется на наивных T-, B- и NKT-клетках и повышающе регулируется передачей сигнала через T/B-клеточные рецепторы на лимфоцитах, моноцитах и миелоидных клетках (1). PD-1 имеет два известных лиганда с различными профилями экспрессии, PD-L1 (B7-H1) и PD-L2 (B7-DC). Экспрессия PD-L2 относительно ограничена, и ее обнаруживают на активированных дендритных клетках, макрофагах и моноцитах и на эндотелиальных клетках сосудов (1-3). Наоборот, PD-L1 экспрессируется более широко, включая экспрессию на наивных лимфоцитах, и его экспрессия индуцируется на активированных B- и T-клетках, моноцитах и дендритных клетках. Кроме того, посредством мРНК он экспрессируется в нелимфоидных тканях, включая эндотелиальные клетки сосудов, эпителиальные клетки и мышечные клетки.

PD-1 рассматривают как важный элемент в иммунной регуляции и поддержании периферической толерантности. Показано, что у мыши для этого необходима экспрессия PD-L1 в периферических тканях и лигандирование PD-1 на потенциально аутореактивных T-клетках для негативной модуляции активации T-клеток, включающей последовательность ITIM в цитоплазматическом домене PD-1 (1, 4).

В зависимости от конкретного генетического фона у мыши pdcdl-/- спонтанно развивается волчаночноподобные явления или дилатационная кардиомиопатия (5, 6). Кроме того, показано, что индуцированная антителами блокада пути PD-1/PD-L1 ускоряет начало аутоиммунного инсулита и диабета у мышей NOD (7).

Обнаруживали, что в злокачественных новообразованиях человека, возникающих в различных тканях, гиперэкспрессируются PD-L1 или PD-L2. На больших наборах образцов, например, рака яичника, почек, колоректального рака, рака поджелудочной железы, печени и меланомы, показано, что экспрессия PD-L1 коррелирует с неблагоприятным прогнозом и сниженной общей выживаемостью независимо от последующего лечения (15-26). Аналогично, обнаруживали, что экспрессия PD-1 на инфильтрирующих опухоль лимфоцитах является признаком дисфункциональных T-клеток при раке молочной железы и меланоме (27-28) и коррелирует с неблагоприятным прогнозом при раке почки (29). С использованием первичных образцов пациентов показано, что блокада PD-1 или PD-L1 in vitro приводит к повышению опухолеспецифичной активация T-клеток человека и продукции цитокинов (30). Таким образом, в нескольких моделях опухолей сингенных мышей, блокада PD-1 или PD-L1 значительно ингибировала рост опухоли или индуцировала полную регрессию.

Блокирующие PD-1 mAb (h409A11) обнаруживали и разрабатывали для использования в лечении людей-пациентов со злокачественными опухолями и пациентов с хронической вирусной инфекцией (описано в совместно рассматриваемой заявке WO2008/156712).

Примером дисфункции антиген-специфичных T-клеток или толерантности является суммарная утрата потенциала продукции интерлейкина 2 (ИЛ-2), фактора некроза опухоли (ФНО), перфорина, интерферона (ИФН) γ (8) и неспособность развивать пролиферативный ответ на запуск T-клеточного рецептора (1). Путь PD-1 контролирует толерантность антиген-специфичных T-клеток, и обнаруживали, что он используется при вирусной инфекции и развитии опухоли для контроля и уклонения от эффективного T-клеточного иммунитета.

При хронической инфекции LCMV (мыши), ВИЧ, HBV или HCV (человека) обнаруживали, что антиген-специфичные T-клетки экспрессировали аномально высокие уровни PD-1, коррелирующие с состоянием анергии или дисфункции (9). Показано, что блокирование взаимодействия PD-1-PD-L1 in vivo (LCMV) или in vitro (ВИЧ, HCV, HBV) восстанавливает противовирусную активность T-клеток (10-12). Блокада PD-1 у макак, недавно инфицированных вирусом иммунодефицита обезьян, приводит к значительному снижению вирусной нагрузки и повышению выживания (13). Аналогично, снижение вирусной нагрузки подтверждали во втором исследовании с использованием длительно инфицированных SIV макак-резусов (14).

В общем, путь PD-1/PD-L1 является хорошо проверенной мишенью для разработки терапевтических средств на основе антител для лечения злокачественных опухолей. Антитела против PD-1 также применимы для лечения хронической вирусной инфекции. CD8+T-клетки памяти, возникающие после острой вирусной инфекции, являются высоко функциональными и представляют собой важный компонент защитного иммунитета. Наоборот, хронические инфекции часто отличаются различными степенями функционального нарушения (истощение) вирус-специфичных T-клеточных ответов, и этот дефект является основной причиной неспособности хозяина элиминировать персистирующий патоген. Хотя функциональные эффекторные T-клетки исходно возникают на ранних стадиях инфекции, они постепенно теряют функцию в течение хронической инфекции. Barber et al. (Barber et al., Nature 439:682-687 (2006)) показали, что у мышей, инфицированных лабораторным штаммом LCMV, развивалась хроническая инфекция, приводящая к высоким уровням вируса в крови и других тканях. У этих мышей исходно развивается устойчивый T-клеточный ответ, но, в конечном итоге, они погибают от инфекции после истощения T-клеток. Авторы обнаруживали, что снижения количества и функции эффекторных T-клеток у хронически инфицированных мышей можно реверсировать инъецированием антитела, блокирующего взаимодействие между PD-1 и PD-L1.

Также показано, что PD-1 значительно экспрессируется на T-клетках ВИЧ-инфицированных индивидуумов, и что экспрессия рецептора коррелирует с нарушением функции T-клеток и прогрессированием заболевания (Day et al., Nature 443:350-4 (2006); Trautmann L. et al, Nat. Med. 12:1198-202 (2006)). In В обоих исследованиях блокада пути PD-1 с использованием антител против лиганда PD-L1 значительно повышает экспансию ВИЧ-специфичных продуцирующих ИФН гамма клеток in vitro.

В других исследованиях также учитывали важность пути PD-1 в контроле вирусной инфекции. Нокаутные по PD-1 мыши проявляют лучший контроль аденовирусной инфекции, чем мыши дикого типа (Iwai et al., Exp. Med. 198:39-50 (2003)). Кроме того, адоптивный перенос HBV-специфичных T-клеток в HBV-трансгенных животных инициировал гепатит (Isogawa M. et al., Immunity 23:53-63 (2005)). Течение заболевания у этих животных меняется вследствие распознавания антигена в печени и положительной регуляции PD-1 клетками печени.

Для блокирования активности цитокинов можно использовать терапевтические антитела. Существенным ограничением использования антител в качестве терапевтического средства in vivo является иммуногенность антител. Т.к. большинство моноклональных антител получают из не являющихся человеком видов, повторное использование у людей приводит к возникновению иммунного ответа против терапевтического антитела. Такой иммунный ответ приводит, как минимум, к утрате терапевтической эффективности и потенциально к фатальному анафилактическому ответу. Таким образом, антитела со сниженной иммуногенностью у людей, такие как гуманизированные или полностью человеческие антитела, предпочтительны для лечения людей. Примеры терапевтических антител, специфичных для PD-1 человека, описывают в принадлежащих одному и тому же правообладателю публикации патентной заявки США № US2010/0266617 и международной патентной публикации № WO2008/156712, описания которых, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме.

Антитела для применения у людей необходимо хранить до использования и транспортировать к месту, в котором осуществляют введение. Для воспроизводимого достижения желаемого уровня терапевтических антител у индивидуума необходимо хранить лекарственное средство в составе, сохраняющем биологическую активность лекарственного средства. Существует потребность в стабильных составах антител против PD-1 человека для фармацевтического применения, например, для лечения различных злокачественных новообразований и инфекционных заболеваний. Предпочтительно, такие составы будут иметь длительный срок хранения, являться стабильными при хранении и транспортировке и пригодными для введения в высоких концентрациях, например, для применения при подкожном введении, а также низких концентрациях, например, для внутривенного введения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к стабильным составам антител против рецептора программируемой смерти PD-1 человека или их антигенсвязывающих фрагментов. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам лечения различных злокачественных новообразований и хронических инфекций с использованием стабильных составов антител против рецептора программируемой смерти PD-1 человека или их антигенсвязывающих фрагментов.

В определенных вариантах осуществления изобретение относится к лиофилизированному составу антител против PD-1 человека или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащему: a) указанное антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент; b) гистидиновый буфер; c) полисорбат 80; и d) сахарозу.

В определенных вариантах осуществления после восстановления состав имеет pH от 5,0 до 6,0.

В определенных вариантах осуществления лиофилизированный состав позволяет восстанавливать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации приблизительно от 25 мг/мл до 100 мг/мл.

В определенных вариантах осуществления полисорбат 80 присутствует в массовом отношении приблизительно 0,02% (мас./об.).

В определенных вариантах осуществления сахароза присутствует в массовом отношении приблизительно 7% (масс./об.).

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к лиофилизированному фармацевтическому составу антитела против PD-1 человека или его антигенсвязывающего фрагмента, полученному лиофилизацией водного раствора, содержащего: a) 25-100 мг/мл антитела против PD-1 или его антигенсвязывающего фрагмента; b) приблизительно 70 мг/мл сахарозы; c) приблизительно 0,2 мг/мл полисорбата 80; и d) приблизительно 10 мМ гистидинового буфера при pH 5,0-6,0.

В определенных вариантах осуществления антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент присутствуют в водном растворе в концентрации приблизительно 25 мг/мл. В определенных вариантах осуществления водный раствор имеет pH приблизительно 5,5.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к лиофилизированному фармацевтическому составу антитела против PD-1 человека или его антигенсвязывающего фрагмента, после восстановления содержащему: a) 25-100 мг/мл антитела против PD-1 человека или его антигенсвязывающего фрагмента; b) приблизительно 70 мг/мл сахарозы; c) приблизительно 0,2 мг/мл полисорбата 80; и d) приблизительно 10 мМ гистидинового буфера при pH приблизительно 5,0-6,0.

В определенных вариантах осуществления антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент присутствует в восстановленном растворе в концентрации приблизительно 25 мг/мл. В определенных вариантах осуществления восстановленный раствор имеет pH приблизительно 5,5.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к жидкому фармацевтическому составу антитела против PD-1 человека или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему: a) 25-100 мг/мл антитела против PD-1 или его антигенсвязывающего фрагмента; b) приблизительно 70 мг/мл сахарозы; c) приблизительно 0,2 мг/мл полисорбата 80; и d) приблизительно 10 мМ гистидинового буфера при pH 5,0-6,0.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к фармацевтическому составу антитела против PD-1 человека или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащему: a) указанное антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент; b) гистидиновый буфер; c) полисорбат 80, и d) сахарозу. В определенных вариантах осуществления после восстановления состав имеет pH от 5,0 до 6,0. В определенных вариантах осуществления полисорбат 80 присутствует в массовом отношении приблизительно 0,02% (масс./об.). В определенных вариантах осуществления сахароза присутствует в массовом отношении приблизительно 7% (масс./об.).

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к любому из составов, описываемых в настоящем описании, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат легкую цепь, содержащую три последовательности CDR, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9, 10, 11, 15, 16 и 17.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к любому из составов, представленных в настоящем описании, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат тяжелую цепь, содержащую три последовательности CDR, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 13, 14, 18, 19 и 20.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к любому из составов, представленных в настоящем описании, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат: i) легкую цепь, содержащую три последовательности CDR SEQ ID NO: 15, 16 и 17; и ii) тяжелую цепь, содержащую три последовательности CDR SEQ ID NO: 8, 19 и 20.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к любому из составов, представленных в настоящем описании, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотные остатки с 20 по 130 из SEQ ID NO: 32.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к любому из составов, представленных в настоящем описании, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 31.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к любому из составов, представленных в настоящем описании, где антитело или его антигенсвязывающ фрагмент содержат: i) легкую цепь, содержащую аминокислотные остатки с 20 по 237 из SEQ ID NO: 36, и ii) тяжелую цепь, содержащую аминокислотные остатки с 20 по 466 из SEQ ID NO: 31.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к любому из составов, представленных в настоящем описании, где антитело выбрано из группы, состоящей из h409A11, h409A16 и h409A17.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения хронической инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего, включающему введение эффективного количество любого из составов, представленных в настоящем описании.

В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у нуждающегося в этом млекопитающего, включающему введение эффективного количества любого из составов, представленных в настоящем описании. В определенных вариантах осуществления эффективное количество содержит дозу антитела против PD-1 человека, выбранную из группы, состоящей из 1,0, 3,0 и 10 мг/кг.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фигурах 1A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11 при pH 5,5, хранящихся при 5°C (24 месяца).

На фигурах 2A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11 при pH 5,5, хранящихся в условиях 25H (25°C, 60% RH, 12 месяцев).

На фигурах 3A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11 при pH 5,5, хранящихся в условиях RH4 (40°C, 75% RH, 6 месяцев).

На фигурах 4A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11, хранящихся при 5°C (24 месяца).

На фигурах 5A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11 при pH 5,5, хранящихся в условиях 25H (25°C, 60% RH, 6 месяцев).

На фигурах 6A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11 при pH 5,5, хранящихся в условиях RH4 (40°C, 75% RH, 6 месяцев).

На фигурах 7A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11, хранящихся при 5°C (24 месяца).

На фигурах 8A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11 в условиях 25H (25°C, 60% RH, 6 месяцев).

На фигурах 9A-B представлены данные о стабильности для лиофилизированных составов h409A11 в условиях RH4 (40°C, 75% RH, 6 месяцев).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее изобретение относится к составам антител против PD-1 и их применению для лечения различных злокачественных новообразований и инфекционных заболеваний.

Антитело против PD-1 h409A11 является примером антитела в стабильных составах, представленных в настоящем описании. Три гуманизированных моноклональных антитела против PD-1 (т.е. h409A11, h409A16 и h509A17), подходящих для настоящих составов, описывают в находящейся на одновременном рассмотрении патентной публикации WO2008/156712. Кроме того, составы, представленные в настоящем описании, применимы для лечения конкретных злокачественных новообразований, а также хронических инфекций. В таблице 2 представлен список соответствующих последовательностей CDR для h409A11. В таблице 6 представлен список последовательностей примеров антител против PD-1.

В соответствии с настоящим изобретением можно использовать общепринятые способы молекулярной биологии, микробиологии, экспрессия и очистки белков, антител и способы рекомбинантной ДНК, известные в этой области техники. Такие способы полностью описаны в литературе. См., например,

I. Определения

Как применяют в настоящем описании, термин "антитело" относится к любой форме антитела, проявляющей желаемую биологическую активность. Таким образом, его используют в самом широком смысле, и он конкретно включает моноклональные антитела (включая полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), химерные антитела, гуманизированные антитела, полностью человеческие антитела и т.д. при условии, что они проявляют желательную биологическую активность.

Адъювант

Как применяют в настоящем описании, термин "адъювант" относится к соединению или смеси, повышающим иммунный ответ на антиген. Адъювант может служить в качестве тканевого депо, медленно высвобождающего антиген, а также активатора лимфоидной системы, неспецифически повышающего иммунный ответ (Hood et al., Immunology, Second Ed., 1984, Benjamin/Cummings: Menlo Park, California, p. 384). Зачастую, первичное введение антигена в отдельности в отсутствие адъюванта не будет вызывать гуморальный или клеточный иммунный ответ. Адъюванты включают, в качестве неограничивающих примеров, полный адъювант Фрейнда, неполный адъювант Фрейнда, сапонин, минеральные гели, такие как гидроксид алюминия, поверхностно-активные вещества, такие как лизолецитин, полиолы-плюроники, полианионы, пептиды, масла или углеводородные эмульсии, гемоцианины морского блюдца и потенциально применимые адъюванты человека, такие как N-ацетил-мурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетил-нор-мурамил-L-аланил-D-изоглутамин, N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-(1'-2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)-этиламин, BCG (бацила Кальмета-Герена) и Corynebacterium parvum. Предпочтительно, адъювант является фармацевтически приемлемым.

Цитокин

Термин "цитокин" представляет собой общий термин для белков, высвобождаемых одной популяции клеток, действующих на другую клетку в качестве межклеточных медиаторов. Примерами таких цитокинов являются лимфокины, монокины, хемокины и общепринятые полипептидные гормоны. Примеры цитокинов включают: ИЛ-2, ИФНγ, ИЛ-6, ФНО, ИЛ-17 и ИЛ-5 человека.

Цитотоксическое средство

Как применяют в настоящем описании, термин "цитотоксическое средство" относится к веществу, ингибирующему или предотвращающему функционирование клеток и/или вызывающему разрушение клеток. Термин предназначен для включения радиоактивных изотопов (например, I131, I125, Y90 и Re186), химиотерапевтических средств и токсинов, таких как ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения или их фрагменты.

Терапевтическое использование и способы

Блокирующие PD-1 средства включают средства, специфически связывающиеся с PD-1 человека, их можно использовать для повышения, усиления, стимуляции или повышенной регуляции иммунного ответа. Желаемые индивидуумы включают пациентов-людей, нуждающихся в усилении иммунного ответа, включая пациентов со злокачественным новообразованием и/или хронической вирусной инфекцией.

Злокачественное новообразование

Термины "злокачественное новообразование" или "злокачественный" относятся к, или с помощью них описывают физиологическое состояние у млекопитающих, как правило, отличающееся неконтролируемым ростом клеток. Примеры злокачественного новообразования включают, в качестве неограничивающих примеров, карциному, лимфому, лейкоз, бластому и саркому. Более конкретные примеры таких злокачественных новообразований включают плоскоклеточную карциному, миелому, мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, глиому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, злокачественное новообразование желудочно-кишечного тракта, рак почки, рак яичников, рак печени, лимфобластный лейкоз, лимфоцитарный лейкоз, колоректальный рак, рак эндометрия, рак почки, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, меланому, хондросаркому, нейробластому, рак поджелудочной железы, мультиформную глиобластому, рак шейки матки, злокачественное новообразование головного мозга, рак желудка, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстого кишечника и рак головы и шеи.

Блокирующие PD-1 средства включают средства, используемые для лечения злокачественного новообразования (т.е. для ингибирования роста или выживания опухолевых клеток). Предпочтительные злокачественные новообразования, рост которых можно ингибировать с использованием антител против PD-1, таких как гуманизированное антитело против PD-1 h409A11, включают злокачественные новообразования, как правило, восприимчивые к иммунотерапии, но также и злокачественные новообразования которые до сих пор не связывали с иммунотерапией. Неограничивающие примеры предпочтительных злокачественных новообразований для лечения включают меланому (например, метастазирующую злокачественную меланому), рак почки (например, светлоклеточный рак), рак предстательной железы (например, гормонорезистентный рак предстательной железы), аденокарциному поджелудочной железы, рак молочной железы, рак толстого кишечника, рак легких (например, немелкоклеточный рак легких), рак пищевода, плоскоклеточную карциному области головы и шеи, рак печени, рак яичников, рак шейки матки, рак щитовидной железы, глиобластому, глиому, лейкоз, лимфому и другие злокачественные новообразования. Злокачественные новообразования, проявляющие улучшенную безрецидивную и общую выживаемость в отношении наличия инфильтрирующих опухоль лимфоцитов в биопсийном или хирургическом материале, например, меланома, колоректальный рак, рак печени, почки, желудка/пищевода, молочной железы, поджелудочной железы и рак яичников, включают в способы и средства лечения, представленные в настоящем описании. Известно, что такие подтипы злокачественных новообразований восприимчивы к иммунному контролю T-лимфоцитами. Дополнительно включают рефрактерные или рецидивирующие злокачественные новообразования, рост которых можно ингибировать с использованием антител, представленных в настоящем описании. Особенно предпочтительные злокачественные новообразования включают отличающиеся повышенной экспрессией PD-1 и/или его лигандов PD-L1 и/или PD-L2 в тестируемых образцах ткани, включая: рак яичника, почки, колоректальный рак, рак поджелудочной железы, молочной железы, печени, желудка, пищевода и меланому. Дополнительные злокачественные новообразования, при которых полезным может являться лечение с использованием антител против PD-1, таких как гуманизированное антитело против PD-1 h409A11, включают ассоциированные с персистирующей инфекцией вирусами, такими как вирусы иммунодефицита человека, вирусы гепатита A, B и C, вирус Эпштейна-Барр, вирусы папилломы человека, о которых известно, что они причинно связаны, например, с саркомой Капоши, раком печени, назофарингеальной карциномой, лимфомой, раком шейки матки, злокачественными новообразованиями наружных женских половых органов, раком анального канала, раком полового члена и полости рта.

Химиотерапевтическое средство

"Химиотерапевтическое средство" является химическим соединением, применимым в лечении злокачественного новообразования. Антитела против PD-1 можно использовать с любым одним или несколькими подходящими химиотерапевтическими средствами. Примеры таких химиотерапевтических средств включают алкилирующие средства, такие как тиотепа и циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и methylamelamines, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфамид, триэтилентиофосфамид и триметилоломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; CC-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CBI-TMI); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлоретамина, мелфалан, новэмбихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урацила иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гамма-1I и калихеамицин фи-1I, см., например, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994); динемицин, включая динемицин A; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также хромофор неокарциностатин и родственные ему хромофоры хромопротеиновых энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карцинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин C, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналовые вещества, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; наполнитель на основе фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамида гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демекольцин; диазиквон; эльфорнитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглуцид; нитрат галлия; гидроксимочевину; лентинан; лонидаинин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2"-трихлортриэтиламин; трихотецены (особенно токсин T-2, верракурин A, роридин A и ангвидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид ("Ara-C"); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например, паклитаксел и доксетаксел; хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин; новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; CPT-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из указанного выше. Кроме того, включают противогормональные средства, действующие, регулируя или ингибируя действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (SERM), включая, например, тамоксифен, ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен (Фарестон); ингибиторы ароматазы, ингибирующие фермент ароматазу, регулирующие продукцию эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрола ацетат, экземестан, форместан, фадрозол, ворозол, летрозол и анастрозол; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, леупролид и гозерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из указанного выше.

Ингибирующее рост средство

Как применяют в настоящем описании, "ингибирующее рост средство" относится к соединению или композиции, ингибирующей рост клеток, особенно злокачественных клеток, гиперэкспрессирующих любой из генов, определенных в настоящем описании, in vitro или in vivo. Таким образом, ингибирующее рост средство является средством, значительно снижающим процентную долю клеток, гиперэкспрессирующих такие гены в S-фазе. Примеры ингибирующих рост средств включают средства, блокирующие прохождение клеточного цикла (в любой момент, кроме S-фазы), такие как средства, индуцирующие арест клеточного цикла в G1-фазу и M-фазу. Классические блокаторы M-фазы включают таксаны барвинка (винкристин и винбластин) и ингибиторы топоизомеразы II, такие как доксорубицин, эпирубицин, даунорубицин и этопозид. Те средства, которые вызывают арест в G1-фазе, также вызывают арест в S-фазе, например, ДНК-алкилирующие средства, такие как дакарбазин, мехлоретамин и цисплатин. Дополнительную информацию можно найти в The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, под названием "Cell cycle regulation, oncogens, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (WB Saunders: Philadelphia, 1995).

Антитело или фрагменты антител в комбинации с дополнительными средствами

Антитело против PD-1 или фрагменты антител можно использовать в отдельности или в комбинации с: другими противоопухолевыми средствами или иммуногенными средствами (например, аттенуированными злокачественными клетками, опухолевыми антигенами (включая рекомбинантные белки, пептиды и молекулы углеводов), антигенпредставляющие клетки, такие как дендритные клетки, активированные антигеном или нуклеиновыми кислотами, полученными из опухоли, иммуностимулирующими цитокинами (например, ИЛ-2, ИФНα2, ГМ-КСФ) и клетками, трансфицированными с использованием генов, кодирующих иммуностимулирующие цитокины, такие как, в качестве неограничивающих примеров, ГМ-КСФ); стандартными способами лечения злокачественных опухолей (например, химиотерапией, лучевой терапией или хирургическим вмешательством); или другими антителами (включая, в качестве неограничивающих примеров, антитела против VEGF, EGFR, Her2/neu, рецепторов VEGF, рецепторов других факторов роста, CD20, CD40, CD-40L, CTLA-4, OX-40, 4-1BB и ICOS).

Инфекционные заболевания

Антагонистические антитела против PD-1 или фрагменты антител также можно использовать для профилактики или лечения инфекций и инфекционного заболевания. Эти средства можно использовать в отдельности или в комбинации с вакцинами для стимуляции иммунного ответа на патогены, токсины и аутоантигены. Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты можно использовать для стимуляции иммунного ответа на вирусы, патогенные для людей, включая, в качестве неограничивающих примеров: вирусы иммунодефицита человека, вирусы гепатита A, B и C, вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус человека, вирусы папилломы человека и вирусы герпеса. Антагонистические антитела против PD-1 или фрагменты антител можно использовать для стимуляции иммунного ответа на инфекцию бактериальными или грибковыми паразитами и другими патогенами. Инфекции вирусами гепатита B и C и ВИЧ, среди прочего, считают хроническими вирусными инфекциями.

Как применяют в настоящем описании, термины "PD-1-связывающий фрагмент", "его антигенсвязывающий фрагмент", "его связывающий фрагмент" или "его фрагмент" включают фрагмент или производное антитела, по существу сохраняющее его биологическую активность связывания с антигеном (PD-1 человека) и его ингибирующую активность (например, блокирование связывания PD-1 с PDL1 и PDL2). Таким образом, термин "фрагмент антитела" или "PD-1-связывающий фрагмент" относится к части полноразмерного антитела, как правило, его антигенсвязывающей части или вариабельной области. Примеры фрагментов антител включают Fab-, Fab'-, F(ab')2- и Fv-фрагменты; диатела, линейные антитела, одноцепочечные молекулы антител, например, sc-Fv, и полиспецифические антитела, полученные из фрагментов антител. Как правило, связывающий фрагмент или производное сохраняет, по меньшей мере, 10% его ингибирующей PD-1 активности. Предпочтительно, связывающей фрагмент или производное сохраняет, по меньшей мере, 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или 100% (или более) его ингибирующей PD-1 активности, хотя применимым будет являться любой связывающий фрагмент с аффинностью, достаточной для проявления желаемого биологического эффекта. Также предполагают, что PD-1-связывающий фрагмент может включать варианты, имеющие консервативные аминокислотные замены, по существу не изменяющие его биологическую активность.

"Доменное антитело" является иммунологически функциональным фрагментом иммуноглобулина, содержащим только вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи. В некоторых случаях две или более областей VH ковалентно соединяют с пептидным линкером для получения бивалентного доменного антитела. Две области VH бивалентного доменного антитела могут являться направленными против одного или разных антигенов.

"Бивалентное антитело" содержит два антигенсвязывающих участка. В некоторых случаях два участка связывания имеют одинаковую специфичность против антигена. Однако бивалентные антитела могут являться биспецифическими. Как применяют в настоящем описании, термин "биспецифическое антитело" относится к антителу, как правило, моноклональному антителу, имеющему специфичность связывания, по меньшей мере, для двух различных эпитопов антигена. В одном из вариантов осуществления эпитопы происходят из одного антигена. В другом варианте осуществления эпитопы принадлежат двум различным антигенам. В этой области известны способы получения биспецифических антител. Например, биспецифические антитела можно получать рекомбинантно с использованием коэкспрессии двух пар тяжелых цепей/легких цепей иммуноглобулина. См., например, Milstein et al. (1983) Nature 305:537-39. Альтернативно, биспецифические антитела можно получать с использованием химического соединения. См., например, Brennan et al. (1985) Science 229:81. Биспецифические антитела включают фрагменты биспецифических антител. См., например, Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-48, Gruber et al. (1994) J. Immunol. 152:5368.

Как применяют в настоящем описании, термин "одноцепочечное Fv" или антитело "scFv" относится к фрагментам антител, содержащим домены VH и VL антитела, где эти домены присутствуют в единой полипептидной цепи. Как правило, полипептид Fv дополнительно содержит полипептид линкер между доменами VH и VL, позволяющий sFv образовывать желаемую структуру для связывания антигена. Обзор sFv см. в Pluckthun (1994) THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315.

Моноклональные антитела в настоящем описании также включают камелизированные однодоменные антитела. См., например, Muyldermans et al. (2001) Trends Biochem. Sci. 26:230; Reichmann et al. (1999) J. Immunol. Methods 231:25; WO 94/04678; WO 94/25591; патент США № 6005079. Также включают однодоменные антитела, содержащие два домена VH с такими модификациями, что образуются однодоменные антитела.

Как применяют в настоящем описании, термин "диатела" относится к небольшим фрагментам антител с двумя антигенсвязывающими участками, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) в той же полипептидной цепи (VH-VL или VL-VH). С использованием линкера, слишком короткого для образования пары между двумя доменами на одной цепи, домены заставляют образовывать пары с комплементарными доменами другой цепи и образовывать два антигенсвязывающих участка. Диатела более подробно описывают, например, в EP 404097; WO 93/11161; и Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448. Обзор вариантов сконструированных антител, в общем, см. Holliger and Hudson (2005) Nat. Biotechnol. 23:1126-1136.

Как применяют в настоящем описании, термин "гуманизированное антитело" относится к формам антител, содержащим последовательности из не принадлежащих человеку антител (например, мыши), а также антител человека. Такие антитела содержат минимальную последовательность, получаемую из не принадлежащего человеку иммуноглобулина. В основном, гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все из гипервариабельных петель соответствуют таковым из не принадлежащего человеку иммуноглобулина, и все или по существу все из областей FR происходят из последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело, необязательно, также будет содержать, по меньшей мере, часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило, иммуноглобулина человека. Гуманизированные формы антител грызунов, как правило, будут содержать те же последовательности CDR родительских антител грызуна, хотя можно включать конкретные замены аминокислот для повышения аффинности, повышения стабильности гуманизированного антитела или по другим причинам.

Антитела по настоящему изобретению также включают антитела с модифицированными (или блокированными) Fc-областями для получения измененных эффекторных функций. См., например, патент США № 5624821, WO2003/086310, WO2005/120571, WO2006/0057702, Presta (2006) Adv. Drug Delivery Rev. 58:640-656. Такую модификацию можно использовать для усиления или супрессирования различных реакций иммунной системы с возможным положительным влиянием на диагностику и терапию. Изменения Fc-области включают изменения аминокислот (замены, делеции и инсерции), гликозилирование или дегликозилирование и добавление множественных Fc. Изменения Fc также могут изменять время полужизни антител в терапевтических антителах, и более длительное время полужизни будет приводить к менее частому введению доз с последующим повышением удобства и снижению использования материала. См. Presta (2005) J Allergy Clin. Immunol. 116:731 at 734-35.

Термин "полностью человеческое антитело" относится к антителу, содержащему только белковые последовательности иммуноглобулина человека. Полностью человеческое антитело может содержать углеводные цепи мыши при продукции в мыши, в клетке мыши или в гибридоме, полученной из клетки мыши. Аналогично, "антитело мыши" относится к антителу, содержащему только последовательности иммуноглобулина мыши. Полностью человеческое антитело можно получать с использованием человека, трансгенного животного, имеющего последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека, фагового дисплея или других способов молекулярной биологии.

Как применяют в настоящем описании, термин "гипервариабельная область" относится к аминокислотным остаткам антитела, ответственным за связывание антигена. Гипервариабельная область содержит аминокислотные остатки из "определяющей комплементарность области" или "CDR" (например, остатки 24-34 (CDRL1), 50-56 (CDRL2) и 89-97 (CDRL3) в вариабельном домене легкой цепи и остатки 31-35 (CDRH1), 50-65 (CDRH2) и 95-102 (CDRH3) в вариабельном домене тяжелой цепи (Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)) и/или остатки из "гипервариабельной петли" (т.е. остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в вариабельном домене легкой цепи и 26-32 (H1), 53-55 (H2) и 96-101 (H3) в вариабельном домене тяжелой цепи (Chothia и Lesk (1987) J Mol. Biol. 196:901-917)). Как применяют в настоящем описании, термин остатки "каркаса" или "FR" относится к остаткам вариабельного домена, иным, чем остатки гипервариабельной области, представленные в настоящем описании как остатки CDR. Указанная выше нумерация остатков относится к системе нумерации по Kabat и не обязательно детально соответствует нумерации последовательности в сопутствующем списке последовательностей.

Термин "консервативно модифицированные варианты" или "консервативная замена" относится к заменам аминокислот, известным специалистам в этой области, и их, как правило, можно осуществлять без изменения биологической активности получаемой молекулы, даже в важных областях полипептида. Примеры таких замен предпочтительно осуществляют в соответствии с приведенным в таблице 1 ниже:

Кроме того, специалисты в этой области признают, что, в основном, отдельные замены аминокислот во второстепенных областях полипептида не изменяют биологическую активность существенно. См., например, Watson et al. (1987) Molecular biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Edition).

Фраза "по существу состоит из" или варианты, такие как "по существу состоит из" или "по существу, состоящий из", как применяют на всем протяжении описания и формулы изобретения, означает включение любых перечисленных элементов или группы элементов и необязательное включение других элементов аналогичной или иной природы, чем перечисленные элементы, не меняющие существенно основные или новые свойства определенного режима дозирования, способа или композиции. В качестве неограничивающего примера, связывающее соединение, по существу состоящее из указанной аминокислотной последовательности, также может включать одну или несколько аминокислот, включая замены одного или нескольких аминокислотных остатков, не влияющих существенно на свойства связывающего соединения.

"Иммунное состояние" или "иммунное нарушение" включает, например, патологическое воспаление, воспалительное нарушение и аутоиммунное нарушение или заболевание. "Иммунное состояние" также относится к инфекциям, персистирующим инфекциям и пролиферативным состояниям, таким как злокачественное новообразование, опухоли и ангиогенез, включая инфекции, опухоли и злокачественные новообразования, устойчивые к эрадикации иммунной системой. "Злокачественное новообразование" включает, например, злокачественное новообразование, злокачественные клетки, опухоли, ангиогенез и предраковые состояния, такие как дисплазия.

Антитело или связывающая композиция, получаемая из антигенсвязывающего участка антитела, из предполагаемого состава или способа связывается со своим антигеном с аффинностью, составляющей по меньшей мере в два раза больше, предпочтительно по меньшей мере в десять раз больше, более предпочтительно по меньшей мере в 20 раз больше, и наиболее предпочтительно по меньшей мере в 100 раз больше, чем аффинность к неродственным антигенам. В предпочтительном варианте осуществления антитело будет иметь аффинность больше приблизительно 109 литров/моль, как определяют, например, с помощью анализа Скэтчарда. Munsen et al. (1980) Analyt. Biochem. 107:220-239.

Определения, касающиеся фармацевтической композиции

Термин "объемообразующие средства" включают средства, обеспечивающие структуру лиофилизированного продукта. Общие примеры, используемые в качестве объемообразующих средств, включают маннит, глицин, лактозу и сахарозу. В дополнение к обеспечению фармацевтически приемлемого лиофилизата, объемообразующие средства также могут придавать полезные качества в отношении модификации температуры разрушения, обеспечения защиты при замораживании-оттаивании и повышения стабильности белка при длительном хранении. Эти средства также могут служить в качестве модификаторов тоничности.

Термин "буфер" включает средства, поддерживающие pH раствора в приемлемом диапазоне до лиофилизации, и они могут включать сукцинат (натрия или калия), гистидин, фосфат (натрия или калия), Трис (трис(гидроксиметил)аминометан), диэтаноламин, цитрат (натрия) и т.п. Буфер по настоящему изобретению имеет pH в диапазоне от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,0, и предпочтительно имеет pH приблизительно 5,5. Примеры буферов, контролирующих pH в этом диапазоне, включают сукцинатный (такой как сукцинат натрия), глюконатный, гистидиновый, цитратный и другие буферы на основе органических кислот. При определении в примере состава, гистидиновый, ацетатный и цитратный буферы в диапазоне pH 5,0-6,0 исследовали на применимость. Гистидиновая и ацетатная буферные системы действовали лучше, чем цитратная система. Гистидиновый буфер является предпочтительной буферной системой, т.к. ацетатные буферные системы несовместимы со способом лиофилизации.

Как правило, термин "криопротекторы" включает средства, обеспечивающие стабильность белка при индуцируемом замораживанием стрессе, предположительно, преимущественно путем исключения из поверхности белка. Они также могут обеспечивать защиту при первичном и вторичном высушивании и длительном хранении продукта. Примерами являются полимеры, такие как декстран и полиэтиленгликоль; сахара, такие как сахароза, глюкоза, трегалоза и лактоза; поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты; и аминокислоты, такие как глицин, аргинин и серин.

Термины "лиофилизация", "лиофилизированный" относятся к способу, которым подлежащий высушиванию материал сначала замораживают и затем лед или замороженный растворитель удаляют возгонкой в вакууме. В предварительно лиофилизированные составы можно включать эксципиент для повышения стабильности лиофилизированного продукта после хранения.

Термин "лиопротектор" включает средства, обеспечивающие стабильность белка в течение высушивания или "дегидратации" (циклов первичного и вторичного высушивания), предположительно, обеспечивая аморфную полимерную матрицу в стеклообразном состоянии и связываясь с белком посредством водородных связей, заменяя молекулы воды, удаляемые при высушивании. Это помогает поддерживать конформацию белка, минимизировать деградацию белка в течение цикла лиофилизации и улучшать стабильность продукта при длительном хранении. Примеры включают полиолы или сахара, такие как сахароза и трегалоза.

Термин "фармацевтический состав" относится к препаратам, находящимся в такой форме, которая позволяет активным ингредиентам быть эффективными, и несодержащим дополнительных компонентов, токсичных для индивидуумов, которым будут вводить состав.

"Фармацевтически приемлемые" эксципиенты (вспомогательные средства, добавки) являются эксципиентами, которые можно соответствующим образом вводить млекопитающему для обеспечения эффективной дозы используемого активного ингредиента.

"Время восстановления" является временем, необходимым для регидратации лиофилизированного состава с использованием раствора до несодержащего частицы прозрачного раствора.

"Стабильный" состав является составом, в котором белок по существу сохраняет свою физическую стабильность, и/или химическую стабильность и/или биологическую активность после хранения. В этой области доступны различные аналитические способы измерения стабильности белка, и их обзор приведен в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) и Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 (1993). Стабильность можно измерять при выбранной температуре в течение выбранного периода времени.

"Стабильный" состав лиофилизированного антитела является составом лиофилизированного антитела без значительных изменений, наблюдаемых при температуре охлаждения (2-8°C) в течение по меньшей мере 12 месяцев, предпочтительно 2 лет, и более предпочтительно 3 лет; или при комнатной температуре (23-27°C) в течение по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев, и более предпочтительно 1 года. Типичные приемлемые критерии стабильности являлись следующими. Не более 10%, предпочтительно 5%, мономера антитела деградирует, что измеряют с помощью SEC-ВЭЖХ. Регидратированный раствор, как правило, является бесцветным, или от прозрачного до немного опалесцирующего при визуальном осмотре. Концентрация, pH и осмоляльность состава имеет не более +/-10% изменение. Активность, как правило, находится в диапазоне 50-150% от референсного значения. Наблюдают не более чем 10%, предпочтительно 5% укорочение. Образуется не более 10%, предпочтительно 5% агрегатов.

"Стабильный" состав фармацевтического антитела (включая лиофилизированный состав, восстановленный жидкий, а также жидкий состав, являющийся "конечным" составом (т.е. не являющийся предварительно лиофилизированным)) является фармацевтическим составом антитела без значительных изменений, наблюдаемых при температуре охлаждения (2-8°C) в течение по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев, и более предпочтительно 1 года, и даже более предпочтительно до 2 лет. Дополнительно, "стабильный" жидкий состав включает состав, проявляющий желаемые свойства при температурах, включающих 25°C и 40°C, в течение периодов времени, включающих 1 месяц, 3 месяца, 6 месяцев, 12 месяцев и/или 24 месяца. Типичные приемлемые критерии стабильности являлись следующими. Как правило, не более приблизительно 10%, предпочтительно приблизительно 5% мономера антитела деградируют, что измеряют с помощью SEC-ВЭЖХ. Фармацевтический состав антитела является бесцветным или от прозрачного до немного опалесцирующего при визуальном осмотре. Концентрация, pH и осмоляльность состава имеет не более чем +/-10% изменение. Как правило, активность составляет 50-150% референсного значения. Как правило, наблюдают не более приблизительно 10%, предпочтительно приблизительно 5% укорочение. Как правило, образуется не более приблизительно 10%, предпочтительно приблизительно 5% агрегатов.

Антитело "сохраняет свою физическую стабильность" в фармацевтическом составе, если оно не демонстрирует значительно повышение агрегации, осаждения и/или денатурации при визуальной оценке цвета и/или чистоты, или как измеряют с помощью рассеяния УФ-излучения, эксклюзионной хроматографии (SEC) и динамического рассеяния света. Изменения конформации белка можно оценивать посредством флуоресцентной спектроскопии, с помощью которой определяют третичную структуру белка, и спектроскопии FTIR, с помощью которой определяют вторичную структуру белка.

Антитело "сохраняет свою химическую стабильность" в фармацевтическом составе, если оно не демонстрирует значительных химических изменений. Химическую стабильность можно оценивать посредством определения и количественного анализа химически измененных форм белка. Процессы деградации, часто изменяющей химическую структуру белка, включают гидролиз или укорочение (оцениваемые способами, такими как эксклюзионная хроматография и SDS-PAGE), окисление (оцениваемое способами, такими как пептидное картирование в комбинации с масс-спектроскопией или MALDI/TOF/MS), деамидирование (оцениваемое способами, такими как ионообменная хроматография, капиллярное изоэлектрофокусирование, пептидное картирование, измерение изоаспарагиновой кислоты) и изомеризация (оценивая посредством измерения содержания изоаспарагиновой кислоты, пептидного картирования и т.д.).

Антитело "сохраняет свою биологическую активность" в фармацевтическом составе, если биологическая активность антитела в указанное время находится в заранее определенном диапазоне биологической активности, проявляемой во время приготовления фармацевтического состава. Биологическую активность антитела можно определять, например, с помощью анализа связывания антигена.

Термин "изотонический" означает, что интересующий состав имеет, по существу, то же осмотическое давление, что и кровь человека. Изотонические составы, как правило, будут иметь осмотическое давление приблизительно 270-328 мОсм. Немного гипотоническим давлением является 250-269 мОсм, и немного гипертоническим давлением является 328-350 мОсм. Осмотическое давление можно измерять, например, с использованием парового или криоскопического осмометра.

Модификаторы тоничности: Соли (NaCl, KCl, MgCl2, CaCl2 и т.д.) используют в качестве модификаторов тоничности для контроля осмотического давления. Кроме того, в качестве модификаторов тоничности могут служить криопротекторы/лиопротекторы и/или объемообразующие средства, такие как сахароза, маннит, глицин и т.д.

Аналитические способы

Аналитические способы, подходящие для оценки стабильности продукта, включают эксклюзионную хроматографию (SEC), тестирование динамического рассеяния света (DLS), дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC), количественный анализ изоаспарагиновой кислоты, анализ активности, анализ рассеяния УФ-излучения при 340 нм, УФ-спектроскопию и FTIR. С помощью SEC (J. Pharm. Scien., 83:1645-1650, (1994); Pharm. Res., 11:485 (1994); J. Pharm. Bio. Anal., 15:1928 (1997); J. Pharm. Bio. Anal., 14:1133-1140 (1986)) измеряют процент мономеров в продукте и получают информацию о количестве растворимых агрегатов. С помощью DSC (Pharm. Res., 15:200 (1998); Pharm. Res., 9:109 (1982)) получают информацию о температуре денатурации белка и температуре стеклования. С помощью DLS (American Lab., 11 (1991)) измеряют средний коэффициент диффузии и получают информацию о количестве растворимых и нерастворимых агрегатов. С помощью анализа рассеяния УФ-излучения при 340 нм измеряют интенсивность рассеянного света при 340 нм и получают информацию о количествах растворимых и нерастворимых агрегатов. С помощью УФ-спектроскопии измеряют поглощение при 278 нм и получают информацию о концентрации белка. С помощью FTIR (Eur. J. Pharm. Biopharm., 45:231 (1998); Pharm. Res., 12:1250 (1995); J. Pharm. Scien., 85:1290 (1996); J. Pharm. Scien., 87:1069 (1998)) измеряют ИК-спектр в амидной области и получают информацию о вторичной структуре белка.

Содержание изоаспарагиновой кислоты в образцах измеряют с использованием системы Isoquant Isoaspartate Detection System (Promega). В наборе используют фермент изоаспартил-метилтрансферазу (PIMT) для специфического определения наличия остатков изоаспарагиновой кислоты в целевом белке. PIMT катализирует перенос метильной группы с S-аденозил-L-метионина на изоаспарагиновую кислоту в альфа-карбоксильном положении, в процессе приводя к образованию S-аденозил-L-гомоцистеина (SAH). Он является относительно низкомолекулярным соединением, и, как правило, его можно выделять и количественно оценивать с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием стандартов SAH для ВЭЖХ, предоставленных в наборе.

Активность или биоидентичность антитела можно измерять по его способности связываться со своим антигеном. Специфическое связывание антитела с его антигеном можно количественно анализировать любым способом, известным специалистам в этой области, например, с помощью иммунологического анализа, такого как ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ).

"Восстановленный" состав является составом, полученным растворением лиофилизированного белкового состава в разбавителе таким образом, что белок диспергируют в восстановленном составе. Восстановленный состав подходит для введения, например парентерального введения, и необязательно может подходить для подкожного введения.

Гуманизированные антитела против PD-1

Конструкции ДНК, кодирующие вариабельные области тяжелых и легких цепей гуманизированных антител h409A11, h409A16 и h409A17, описывают в WO2008/156712.

Представленное выше описание считают достаточным, чтобы позволить специалисту в этой области практически осуществлять изобретение. Настоящее изобретение не предназначено для ограничения по объему culture deposited, т.к. зарегистрированный вариант осуществления предназначен для иллюстрирования одного аспекта изобретения и любая culture, являющаяся функционально эквивалентной, находится в объеме настоящего изобретения. Представление материала в настоящем описании не означает признания того, что приведенное в настоящем описании является недостаточным для практического осуществления любого аспекта изобретения, включая его лучший способ, и это не следует рассматривать как ограничение объема формулы изобретения конкретной иллюстрацией, которую она представляет. Фактически, различные модификации по изобретению в дополнение к показанному и представленному в настоящем описании, будут очевидны специалистам в этой области из представленного выше описания и попадут в объем заявляемой формулы изобретения.

Представлены последовательности для примеров антител против PD-1 человека; сводную таблицу последовательности представляет собой таблица 6. CDR представлены с различными идентификаторами последовательностей, как указано в таблице 2 для h409A11.

Как правило, варианты аминокислотной последовательности гуманизированного антитела против PD-1 будут иметь аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75% идентичности аминокислотных последовательностей с аминокислотными последовательностями тяжелой или легкой цепи исходного гуманизированного антитела, более предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 95, 98 или 99%. Идентичность или гомология в отношении этой последовательности в настоящем описании определяют как процентную долю аминокислотных остатков в вероятной последовательности, идентичной остаткам гуманизированного антитела против PD-1, после выравнивания последовательностей и вставки пропусков, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательности, и без учета любых консервативных замен, как части идентичности последовательности. Ни один из N-концевых, C-концевых или внутренних участков, делеций или инсерций в последовательности антитела не следует интерпретировать как влияющие на идентичность или гомологию последовательности.

Гуманизированное антитело можно выбирать из любого класса иммуноглобулинов, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE. Предпочтительно, антитело является антителом IgG. Можно использовать любой изотип IgG, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Можно добавлять различные константные домены в гуманизированные области VL и VH, представленные в настоящем описании. Например, если конкретным предполагаемым применением антитела (или фрагмента) по настоящему изобретению являлось появление измененных эффекторных функций, можно использовать константный домен тяжелой цепи, иной, чем в IgG1. Хотя антитела IgG1 обеспечивают длительное время полужизни и эффекторные функции, такие как активация системы комплемента и антителозависимая клеточная цитотоксичность, такие активности могут являться нежелательными для всех областей применения антител. В таких случаях можно использовать, например, константный домен IgG4.

Аналогично, в композициях и способах по настоящему описанию можно использовать любой класс легкой цепи. Конкретно, в настоящих композициях и способах применимы каппа-, лямбда-цепи или их варианты.

Остатки CDR и FR определяют согласно стандартному определению последовательности по Kabat. Kabat et al. (1987) Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda Md.

Сигнальные последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие сигнальные последовательности, можно добавлять в N-конец соответствующих цепей антитела для получения белка-предшественника для секреции из клетки-хозяина. Также можно использовать альтернативные сигнальные последовательности, и некоторые из них можно найти в "SPdb: a Signal Peptide Database." Choo et al. (2005) BMC Bioinformatics 6:249.

Таблица 2
Последовательности CDR h409A11
Антитело Последовательность CDR SEQ ID NO:
h409A11 CDR1 легкой цепи (эквивалент CDR1 легкой цепи hPD-1.09A) RASKGVSTSGYSYLH 15

h409A11 CDR2 легкой цепи (эквивалент CDR2 легкой цепи hPD-1.09A) LASYLES 16
h409A11 CDR3 легкой цепи (эквивалент CDR3 легкой цепи hPD-1.09A) QHSRDLPLT 17
h409A11 CDR1 тяжелой цепи (эквивалент CDR1 тяжелой цепи hPD-1.09A) NYYMY 18
h409A11 CDR2 тяжелой цепи (эквивалент CDR2 тяжелой цепи hPD-1.09A) GINPSNGGTNFNEKFKN 19
h409A11 CDR3 тяжелой цепи (эквивалент CDR3 тяжелой цепи hPD-1.09A) RDYRFDMGFDY 20

Биологическая активность гуманизированного антитела против PD-1

Составы по настоящему изобретению включают антитела и их фрагменты, являющиеся биологически активными после восстановления или в жидкой форме. Как применяют в настоящем описании, термин "биологически активный" относится к антителу или фрагменту антитела, способному связываться с желаемым эпитопом антигена и прямо или косвенно проявляющему биологический эффект. Как правило, эти эффекты являются результатом неспособности PD-1 связываться со своими лигандами. Как применяют в настоящем описании, термин "специфичный" относится к избирательному связыванию антитела с эпитопом антигена-мишени. Антитела можно тестировать на специфичность связывания, сравнивая связывание с PD-1 со связыванием с неродственным антигеном или смесью антигенов в указанной комбинации условий.

Лиофилизированные фармацевтические композиции

Лиофилизированные составы терапевтических белков обладают несколькими преимуществами. В основном, лиофилизированные составы придают лучшую химическую стабильность, чем в составах-растворах, и, таким образом, повышают время полужизни. Лиофилизированный состав также можно восстанавливать в различных концентрациях в зависимости от клинических факторов, таких как путь введения или дозирование. Например, лиофилизированный состав можно восстанавливать при высокой концентрации (т.е. в небольшом объеме), если необходимо для подкожного введения, или при более низкой концентрации при внутривенном введении. Высокие концентрации также могут являться необходимыми, если высокая доза необходима для конкретного индивидуума, в частности, при подкожном введении, когда необходимо минимизировать инъецируемый объем. Один такой лиофилизированный состав антитела описывают в патенте США № 6267958, таким образом, включенном в качестве ссылки в полном объеме. Лиофилизированные составы другого терапевтического белка описывают в патенте США № 7247707, таким образом, включенном в качестве ссылки в полном объеме.

Как правило, лиофилизированный состав получают для последующего восстановления при высокой концентрации лекарственного средства (DP, в примере варианта осуществления гуманизированного антитела против PD-1 h409A11 или его антигенсвязывающего фрагмента), т.е. последующего восстановления в небольшом объеме воды. Затем последующее разведение водой или изотоническим буфером легко можно использовать для разведения DP до меньшей концентрации. Как правило, в лиофилизированный состав по настоящему изобретению включают эксципиенты на уровнях, которые будут приводить к приблизительно изотоническому составу после восстановления при высокой концентрации DP, например, для подкожного введения. Восстановление в большем объеме воды для получения меньшей концентрации DP обязательно будет снижать тоничность восстановленного раствора, но такое снижение может иметь небольшое значение при неподкожном, например внутривенном, введении. Если желательной является изотоничность при более низкой концентрации DP, лиофилизированный порошок можно восстанавливать в стандартном низком объеме воды и затем дополнительно разводить изотоническим разбавителем, таким как 0,9% хлорид натрия.

В варианте осуществления настоящего изобретения гуманизированное антитело против PD-1 (или его антигенсвязывающий фрагмент) составляют в виде лиофилизированного порошка для восстановления и использования для внутривенного введения. Примеры составов приведены в таблицах 3-4 и на фигурах 1-9. В определенных вариантах осуществления антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент) предоставляют в концентрации приблизительно 50 мг/сосуд и восстанавливают с использованием стерильной воды для инъекций перед использованием. При желании, восстановленное антитело можно асептически разводить с использованием 0,9% хлорида натрия USP для инъекций в стерильном контейнере IV. Целевой pH восстановленного состава составляет 5,5±0,5. В различных вариантах осуществления лиофилизированный состав по настоящему изобретению делает возможным восстановление антитела против PD-1 до высоких концентраций, таких как приблизительно 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 100 или более мг/мл.

В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лиофилизированному составу, содержащему гуманизированное антитело против PD-1, гистидиновый буфер при pH приблизительно 5,5 или при pH приблизительно 5,0, например, при приблизительно 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 или 6,0.

Если указан диапазон значений pH, такой как "pH от 5,5 до 6,0", диапазон предназначен для включения указанных значений. Если не указано иначе, pH относится к pH после восстановления лиофилизированных составов по настоящему изобретению. Как правило, pH измеряют при 25ºC с использованием стандартного pH-метра со стеклянной колбой. Как применяют в настоящем описании, раствор, содержащий "гистидиновый буфер при pH X", относится к раствору при pH X и содержащему гистидиновый буфер, т.е. pH предназначен для обозначения pH раствора.

Состав в таблице 3 отражает массу компонентов в составе партии, таком как лиофилизированный состав в сосудах и восстановленный состав. Лиофилизированные составы по определению являются по существу сухими, и, таким образом, представление концентрации не применимо в его описании. Описание лиофилизированного состава в контексте массы компонентов в сосуде с однократной дозой является более применимым, но и проблематичным, т.к. он варьируется для различных доз и размеров сосудов. В описании лиофилизированных составов по настоящему изобретению применимо выражение количества компонента как соотношения массы компонента по сравнению с массой лекарственного средства (DS) в том же образце (например, сосуда). Это соотношение можно выражать в виде процентной доли. Такие соотношения отражают собственное свойство лиофилизированных составов по настоящему изобретению, не зависящее от размера сосуда, дозы и способа восстановления.

В других вариантах осуществления лиофилизированный состав антитела против PD-1 человека или антигенсвязывающего фрагмента определяют в контексте раствора перед лиофилизацией, используемого для получения лиофилизированного состава, такого как раствор перед лиофилизацией. В одном из вариантов осуществления раствор перед лиофилизацией содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации приблизительно 25 мг/мл. Такие растворы перед лиофилизацией могут иметь pH 4,4-5,2 (включая приблизительно 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1 и 5,2), например, предпочтительно pH приблизительно 4,8 или приблизительно pH 5,5.

В других вариантах осуществления лиофилизированный состав антитела против PD-1 человека или антигенсвязывающий фрагмент определяют в контексте восстановленного раствора, получаемого из лиофилизированного состава, такого как восстановленный раствор, представленный в таблице 4.

Восстановленные растворы могут содержать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрациях приблизительно 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 80, 90 или 100 мг/мл или более высоких концентрациях, таких как 150 мг/мл, 200 мг/мл, 250 мг/мл или до приблизительно 300 мг/мл. Такие восстановленные растворы могут иметь pH приблизительно 5,5, или pH может находиться в диапазоне от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,0.

Лиофилизированные составы по настоящему изобретению получают лиофилизацией раствора перед введением. Лиофилизацию осуществляют замораживанием состава и последующей возгонкой воды при температуре, подходящей для первичного высушивания. В этих условиях температура продукта находится ниже эвтектической точки или температуры разрушения состава. Как правило, температура лиофилизации для первичного высушивания будет находиться в диапазоне приблизительно от -30 до 25°C (при условии, что продукт остается замороженным при первичном высушивании) при подходящем давлении, находящемся, как правило, в диапазоне приблизительно от 50 до 250 мторр. Состав, размер и тип контейнера, в котором хранят образец, (например, стеклянного сосуда) и объем жидкости будет определять время, необходимое для высушивания, которое может находиться в диапазоне от нескольких часов до нескольких дней (например, 40-60 часов). Стадию вторичного высушивания можно осуществлять при приблизительно 0-40°C, главным образом, в зависимости от типа и размера контейнера и типа используемого белка. Время вторичного высушивания определяется желаемым уровнем остаточной влаги в продукте и, как правило, составляет по меньшей мере приблизительно 5 часов. Как правило, содержание влаги в лиофилизированном составе составляет менее приблизительно 5%, и предпочтительно менее приблизительно 3%. Давление может являться тем же, что использовали на этапе первичного высушивания. Условия лиофилизации можно варьировать в зависимости от состава и размера сосуда.

В некоторых случаях желательной может являться лиофилизация белкового состава в контейнере, в котором будут осуществлять восстановление, во избежание этапа переноса. В этом случае контейнер может представлять собой, например, сосуд 3, 5, 10, 20, 50 или 100 cc.

Лиофилизированные составы по настоящему изобретению восстанавливают перед введением. Белок можно восстанавливать в концентрации приблизительно 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 80, 90 или 100 мг/мл или более высоких концентрациях, таких как 150 мг/мл, 200 мг/мл, 250 мг/мл или 300 мг/мл, до приблизительно 500 мг/мл. Высокие концентрации белка особенно пригодны, если предполагают подкожную доставку восстановленного состава. Однако, для других путей введения, таких как внутривенное введение, желательными могут являться более низкие концентрации белка (например, приблизительно 5-50 мг/мл).

Как правило, восстановление осуществляют при температуре приблизительно 25°C для обеспечения полной гидратации, хотя при желании можно использовать другие температуры. Необходимое для восстановления время будет зависеть, например, от типа разбавителя, количества эксципиентов и белка. примеры разбавителей включают стерильную воду, бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), pH-забуференный раствор (например, фосфатно-солевой буфер), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

Ожидают, что лиофилизированные составы по настоящему изобретению будут стабильными в течение по меньшей мере приблизительно 36 месяцев (на основании данных о стабильности на фигурах 1-9). Кроме того, ожидают, что жидкий состав будет проявлять стабильность по меньшей мере в течение 24 месяцев, учитывая данные о стабильности за 24 месяца для восстановленного состава h409A11 в полипропиленовых пробирках при 2-8°C.

В соответствии с результатами, представленными на фигурах 1-9, для замороженного восстановленного состава h409A11 наблюдают стабильность в течение 2 лет. Образцы по 2 мл в полипропиленовых пробирках хранили при 5°C и в условиях 25H и RH4 и тестировали в начале, после периодов 1, 3, 6, 9, 12, 18 и 24 месяца. Этот восстановленный состав h409A11 содержит те же вещества в той же концентрации, что и жидкий состав h409A11 (т.е. нелиофилизированный состав), и ожидают, что стабильность будет той же.

Жидкие фармацевтические композиции

Жидкий состав антитела можно получать, взяв лекарственное средство (например, гуманизированное антитело против PD-1), находящееся в жидкой форме (например, h409A11 в водном фармацевтическом составе), и обменивая его с помощью буфера в желаемый буфер, в качестве последнего этапа очистки. В этом варианте осуществления нет этапа лиофилизации. Лекарственное средство в конечном буфере концентрируют до желаемой концентрации. В лекарственное средство добавляют эксципиенты, такие как сахароза и полисорбат 80, и разводят его с использованием подходящего буфера до конечной концентрации белка. Конечное составленное лекарственное средство фильтруют с использованием фильтров 0,22 мкм и наполняют им конечный контейнер (например, стеклянные сосуды). Примером такого жидкого состава является конечный жидкий состав, содержащий 10 мМ гистидин с pH 5,5, 7% сахарозу, 0,02% полисорбат 80 и 25 мг/мл h409A11.

Доступны различные литературные источники для облегчения выбора фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов. См., например,

При выборе подходящей дозы терапевтического средства, такого как гуманизированное антитело против PD-1 (или его антигенсвязывающий фрагмент), учитывают токсичность. Токсичность и терапевтическая эффективность композиций антитела можно определять стандартными фармацевтическими способами в культурах клеток или экспериментальных животных, например, для определения LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной в 50% популяции). Соотношение между токсическими и терапевтическими эффектами дозы является терапевтическим индексом, и его можно выражать как отношение LD50 к ED50. Антитела, демонстрирующие высокие терапевтические индексы, являются предпочтительными. Данные, полученные с помощью таких анализов культур клеток и исследований на животных, можно использовать в составлении диапазона доз для применения у людей. Доза таких соединений предпочтительно попадает в диапазон концентраций в кровотоке, включающих ED50 с небольшой токсичностью или без нее. Доза может варьироваться в этом диапазоне в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения.

Подходящие пути введения могут включать, например, парентеральную доставку, включая внутримышечные, внутрикожные, подкожные, интрамедуллярные инъекции, а также интратекальные, внутрижелудочковые, внутривенные, интраперитонеальные. Лекарственные средства можно вводить множеством общепринятых путей, таких как интраперитонеальный, парентеральный, интрааретриальная или внутривенная инъекция. В способах введения, при которых объем раствора необходимо ограничивать (например, подкожное введение), необходим лиофилизированный состав, делающий возможным восстановление с высокой концентрацией.

С другой стороны, можно вводить антитело местно, а не системно, например, с помощью инъекции антитела непосредственно в вызванное патогеном повреждение, отличающееся иммунопатологией, часто в депо-составе или составе с замедленным высвобождением. Кроме того, можно вводить антитело в направленной системе для доставки лекарственных средств, например, в липосоме, покрытой тканеспецифическим антителом, нацеленной, например, на вызванное патогеном повреждение, отличающееся иммунопатологией. Липосомы будут нацелены на поврежденную ткань и селективно захватываться ею.

Выбор схемы введения для терапевтического средства зависит от нескольких факторов, включая скорость метаболизма средства в сыворотке или ткани, уровень симптомов, иммуногенность средства и доступность клеток-мишеней в биологическом матриксе. Предпочтительно, с помощью схемы введения максимизируют количество терапевтического средства, доставляемого пациенту, соответствующее приемлемому уровню побочных эффектов. Таким образом, количество доставляемого средства частично зависит от конкретного средства и тяжести состояния, подлежащего лечению. Доступны руководства по выбору подходящих доз антител, цитокинов и низкомолекулярных соединений. См., например,

Определение подходящей дозы осуществляет клиницист, например, с использованием параметров или факторов, известных в этой области или, как предполагают в этой области, влияющих на лечение или, как прогнозируют, влияющих на лечение. Подходящая доза ("терапевтически эффективное количество") белка будет зависеть, например, от подлежащего лечению состояния, тяжести и течения состояния, будут ли вводить белок в профилактических или терапевтических целях, предшествующей терапии, анамнеза пациента и ответа на белок, типа используемого белка и решения лечащего врача. Как правило, дозирование начинают с количества, несколько меньшего, чем оптимальная доза, и повышают его понемногу до достижения желаемого или оптимального эффекта относительно любых негативных побочных эффектов. Важные диагностические показатели включают показатели симптомов, например, воспаление или уровень продуцируемых воспалительных цитокинов. Антитело соответствующим образом вводят пациенту однократно или повторно. Антитело можно вводить отдельно или в комбинации с другими лекарственными средствами или терапевтическими средствами.

Фармацевтический состав антитела можно вводить посредством непрерывной инфузии или дозами через интервалы, например, один день, 1-7 раз в неделю, одну неделю, две недели, три недели, ежемесячно, раз в два месяца и т.д. Предпочтительный режим дозирования включает максимальную дозу или частоту дозирования, позволяющую избегать значительных нежелательных побочных эффектов. Суммарная еженедельная доза, как правило, составляет по меньшей мере 0,05 мкг/кг, 0,2 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 1 мкг/кг, 10 мкг/кг, 100 мкг/кг, 0,2 мг/кг, 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 10 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг массы тела или более. См., например, Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu et al. (1999) J Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52:133-144. Желаемая доза низкомолекулярного терапевтического средства, например, пептидомиметика, природного продукта или органического химического вещества, является приблизительно такой же, что и для антитела или полипептида в пересчете на моли/кг.

В определенных вариантах осуществления дозирование будет включать введение индивидууму повышающихся доз 1,0, 3,0 и 10 мг/кг фармацевтического состава, т.е. состава, содержащего h409A11, в течение курса лечения. Состав, содержащий h409A11, может являться восстановленным жидким составом, или он может являться жидким составом, предварительно не лиофилизированным. Продолжительность курса лечения может варьироваться и его можно продолжать при условии, что достигают желаемые эффекты. В определенных вариантах осуществления повышение доз будут продолжать до достижения дозы приблизительно 10 мг/кг. В определенных вариантах осуществления индивидуум будет иметь гистологический или цитологический диагноз меланомы или другой формы солидной опухоли, и в конкретных случаях индивидуум может иметь неопределенное заболевание. В определенных вариантах осуществления индивидуума подвергают лечению другими химиотерапевтическими средствами, в то время как в других вариантах осуществления индивидуум не будет предварительно получать лекарственную терапию.

В дополнительных вариантах осуществления схема дозирования будет включать введение дозы 1, 3 или 10 мг/кг любого из фармацевтических составов, представленных в настоящем описании (т.е. состава, содержащего h409A11), на протяжении всего курса лечения. В случае такой постоянной схемы дозирования интервал между дозами будет составлять приблизительно 14 дней (±2 дня). В определенных вариантах осуществления интервал между дозами будет составлять приблизительно 21 день (±2 дня).

В определенных вариантах осуществления схема дозирования будет включать введение дозы от приблизительно 0,005 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг с повышением дозы для отдельного пациента. В определенных вариантах осуществления дозу 5 мг/кг или 10 мг/кг будут вводить через интервалы каждые 3 недели или каждые 2 недели. В дополнительных вариантах осуществления дозу 3 мг/кг будут вводить через интервалы три недели для пациентов с меланомой или пациентов с другими солидными опухолями. В этих вариантах осуществления пациенты должны иметь неоперабельное заболевание; однако пациенты могут иметь в анамнезе хирургическое вмешательство.

В определенных вариантах осуществления индивидууму будут проводить 30-минутную i.v. инфузию любого из фармацевтических составов, представленных в настоящем описании. В определенных вариантах осуществления для повышения дозы интервал дозирования будет составлять приблизительно 28 дней (±1 день) между первой и второй дозы. В определенных вариантах осуществления интервал между второй и третьей дозами будет составлять приблизительно 14 дней (±2 дня). В определенных вариантах осуществления интервал дозирования будет составлять приблизительно 14 дней (±2 дня) для доз, следующих за второй дозой.

В определенных вариантах осуществления маркеры клеточной поверхности и/или цитокиновые маркеры, как описано в совместно рассматриваемых патентных публикациях WO2012/018538 или WO2008/156712, будут использовать в биологических анализах для мониторинга, диагностики, выбора пациента и/или схемы лечения, включающей блокаду пути PD-1.

Подкожное введение можно осуществлять инъецированием с использованием шприца или с использованием других устройств для инъекций (например, устройства Inject-ease®), шприц-ручек или безыгольных устройств (например, MediJector и BioJector®).

Обширный объем настоящего изобретения будет наиболее понятным с учетом следующих примеров, не предназначенных для ограничения изобретения конкретными вариантами осуществления. Конкретные варианты осуществления, представленные в настоящем описании, предложены исключительно в качестве примера, и изобретение не ограничивают терминами заявленной формулы изобретения вместе с полным объемом эквивалентов, к которым такая формула изобретения относится.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1

Получение антител

h409A11 является гуманизированным моноклональным антителом, связывающимся с PD-1 человека и блокирующим взаимодействие между PD-1 и его лигандами PDL1 и PDL2. Антитело имеет изотип IgG4/каппа со стабилизирующим изменением последовательности S228P в Fc-области. В таблице 2 представлен список последовательностей CDR. Теоретические молекулярные массы тяжелых и легких цепей, полученные из аминокислотных последовательностей, без учета гликозилирования представляют собой 49,3 кДа и 23,7 кДа, соответственно. Родительское антитело (hPD-1.09A) получали иммунизацией мышей с использованием ДНК hPD-1. Антитело h409A11 получали гуманизацией родительского антитела мыши против PD-1 человека в Medical Research Council (Cambridge, UK) с использованием технологии пересадки CDR (например, патент США № 5225539), как описано в совместно рассматриваемой WO2008/156712.

Экспрессирующую плазмиду конструировали для экспрессии тяжелых и легких цепей h409A11. Нуклеотидные последовательности, кодирующие тяжелые и легкие цепи вместе с их соответствующими промоторами и поли-A-сигнальной последовательностью, подтверждали анализом последовательностью ДНК. Затем экспрессирующий вектор использовали для трансфекции клеточной линии CHO. Экспрессирующий антитело клон выбирали для получения Главного банка посевного материала (MSB), основываясь на росте, продуктивности и стабильности продукции. Затем этот MSB использовали для получения антитела и получения Главного банка клеток (MCB).

Клетки из MCB экспансировали во встряхиваемых колбах, культуральных мешках и биореакторе для производства посевного материала для получения инокулята для производственного биореактора для получения продукта антитела. Дальнейшая обработка включала три этапа хроматографии (аффинная с протеином A, катионообменная и анионообменная хроматография), два этапа ортогонального клиренса вируса (инактивация вируса низким pH и снижение вируса фильтрацией), ультрафильтрацию/диафильтрацию и конечный этап фильтрации через фильтры 0,2 мкм.

Структура и свойства h409A11

h409A11 является высокоселективным гуманизированным моноклональным антителом, блокирующим взаимодействие между PD-1 человека и его лигандами PD-L1 и PD-L2. h409A11 гетерогенно гликозилировано по аспарагину 297 в Fc-домене каждой тяжелой цепи, приводя к молекулярным массам, как правило, находящимся в диапазоне от 148,9 до 149,5 кДа, в зависимости от прикрепленных полисахаридных цепей. Аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей h409A11 представлены в SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 36. Легкая цепь без лидерных последовательностей содержит аминокислотные остатки с 20 по 237 из SEQ ID NO: 36, и тяжелая цепь без лидерных последовательностей содержит аминокислотные остатки с 20 по 466 из SEQ ID NO: 31.

Стабильные составы гуманизированного антитела против PD-1

В определенных вариантах осуществления стабильные составы гуманизированного антитела против PD-1, например, h409A11, являются водным раствором, хранящимся в охлажденном состоянии (диапазон температур: как правило, приблизительно 2-8°C, но в конкретных обстоятельствах водный состав может проявлять стабильность при других температурах, включая приблизительно 25°C и приблизительно 40°C в течение периодов времени до приблизительно 12 месяцев) в концентрации >25 мг/мл в 10 мМ гистидиновом буфере при pH 5,0-6,0. В определенных вариантах осуществления стабильные составы гуманизированного антитела против PD-1, например, h409A11, являются водным раствором с концентрацией приблизительно 25 мг/мл в 10 мМ гистидиновом буфере при pH 5,0-6,0. Стабильный состав (т.е. лекарственного средства), как правило, представляет собой раствор от прозрачного до опалесцирующего и может содержать частицы.

В определенных вариантах осуществления жидкий или замороженный раствор h409A11 составляют в гистидиновом буфере (pH 5,5), содержащем сахарозу и полисорбат 80.

Дополнительный пример состава включает: h409A11, составленное в гистидиновом буфере (pH 5,5), содержащем сахарозу и полисорбат 80, в лиофилизированной форме.

В определенных вариантах осуществления стабильный состав гуманизированного антитела против PD-1 представляют в виде лиофилизированного порошка в сосудах, предназначенных для однократного использования.

В определенных вариантах осуществления стабильный состав гуманизированного антитела против PD-1 восстанавливают с использованием воды для инъекции (WFI) и асептически разводят с использованием подходящего объема 0,9% хлорида натрия для инъекций в стерильном контейнере IV для получения смешанного раствора.

Биологическая активность

Биологическую активность гуманизированного антитела против PD-1 измеряют по его способности конкурировать с PD-L1 (природным лигандом PD-1) за связывание с PD-1 человека, количественно оцениваемое в конкурентном ELISA относительно референсного материала. Стабильные составы, представленные в настоящем описании, проявляют биологическую активность в течение длительных периодов времени, включая по меньшей мере до приблизительно восемнадцати месяцев. Стабильность нескольких партий h409A11 в различных условиях хранения приведена на фигурах 1-9.

Стабильные составы гуманизированных антител против PD-1

Лиофилизированные составы антитела против PD-1 получают следующим образом. Пример состава партии для антитела h409A11 представлен в таблице 3. Конечная концентрация антитела составляет 25 мг/мл. Этот состав партии можно использовать для получения лиофилизированных единиц 50 мг/сосуд, как приведено в таблице 4 ниже. Используют полисорбат 80 из растительного источника. Дополнительно можно добавлять соляную кислоту или гидроксид натрия для доведения pH до желаемого значения приблизительно 5,5 (±0,2). Компоненты доводят до конечного объема 14 л с использованием стерильной воды для инъекций (WFI). Соответственно, меньшие партии можно получать пропорциональным снижением количеств, приведенных в таблице 3.

Примеры жидкого состава антитела получают, взяв лекарственное вещество (например, гуманизированное антитело против PD-1 из состава партии, представленного в настоящем описании), находящееся в жидкой форме (например, h409A11 в водном составе), и обменивая с помощью буфера в желаемый буфер в качестве последнего этапа очистки. В этом случае отсутствует предшествующий этап лиофилизации. Лекарственное вещество в конечном гистидиновом буфере концентрируют до желаемой концентрации. К лекарственному веществу добавляют эксципиенты, такие как сахароза и полисорбат 80, и разводят его с использованием подходящего буфера до конечной концентрации белка. Конечное составленное лекарственное вещество фильтруют с использованием фильтров 0,22 мкм и наполняют им конечный контейнер (например, стеклянные сосуды). Такой жидкий состав включает конечный жидкий состав, содержащий 10 мМ гистидин с pH 5,5, 7% сахарозы, 0,02% полисорбата 80 и 25 мг/мл h409A11.

Таблица 3
Состав партии 14,0 л типичного раствора перед лиофилизацией для порошка h409A11 для инъекций, 50 мг/сосуд
Компонент Фармакопейное качество Концентрация (мг/мл) Количество на партию (г)
Антитело h409A11 N/A 25,0 350,0
L-гистидин USP 1,55 21,7
Полисорбат 80 NF 0,2 2,8
Сахароза NF 70 980
Соляная кислотаa NF - -
Гидроксид натрияa NF - для доведения pH
Вода для инъекцийb USP - для доведения до 14,0 л
a Соляную кислоту и гидроксид натрия добавляют при необходимости доведения pH до 5,5
b Воду удаляют возгонкой и десорбцией при лиофилизации

Единица композиции примера конечного лиофилизированного состава гуманизированного антитела против PD-1 представлена в таблице 4.

Таблица 4
Единица композиции лиофилизированного состава для инъекций, 50 мг/сосуд
Компонент Качество Количество (мг/сосуд) Концентрация после восста-новления (мг/мл)b Функция
Антитело h409A11 N/A 50 25 Лекарственное вещество/
Активный фарма-цевтический ингредиент
L-гистидин USP 3,1 1,55 Буфер
Полисорбат 80 NF 0,4 0,2 Поверхностно-активное вещество
Сахароза NF 140 70 Стабилизатор/
Модификатор тоничности
Соляная кислотаc NF - - Доведение pH
Гидроксид натрияc NF - - Доведение pH

Вода для инъекций (sWFI или WFI)d USP для доведения до 2,0 мл - Растворитель
a Избыточный объем 0,4 мл представляют для обеспечения получения 50 мг h409A11 на сосуд.
b После восстановления с использованием 2,3 мл стерильной воды для инъекций.
c Соляную кислоту и гидроксид натрия добавляют при необходимости доведения pH до 5,5
d Воду удаляют возгонкой и десорбцией при лиофилизации

Единица состава из таблицы 4 содержит 1/20000-ную состава партии из таблицы 3 после лиофилизации для удаления воды. Добавляют 50 мг DS как 2,0 мл из 25 мг/мл состава партии из таблицы 3. Каждый сосуд наполняют 2,4 мл и восстанавливают с использованием 2,3 мл sWFI, получая приблизительно 2,4 мл восстановленного раствора по причине объема расширения лиофилизата.

Лекарственное средство упаковывают в стерильные стеклянные цилиндрические сосуды типа 1, 6R DIN, с горлышком 20 мм, закрытые 20-мм серыми бутилрезиновыми пробками и запаянные алюминиевыми обжимными пробками. Сосуды хранят при 2-8°C и охлаждают при перевозке.

Составление включает следующие этапы. Добавление требуемого количества воды для инъекций (WFI) в тарированный сосуд для составления. Добавление и растворение с перемешиванием сахарозы, гистидина и полисорбата 80 из растительного источника. Измерение pH и, при необходимости, его доведение для получения pH до приблизительно 5,4-5,6. Использование соляной кислоты и/или гидроксида натрия для доведения pH. Уравновешивание лекарственного вещества до температуры окружающей среды и медленное добавление лекарственного вещества в сосуд для составления. Дальнейшее осторожное перемешивание для избегания пенообразования. Снова измерение pH и, при необходимости, его доведение для получения pH до приблизительно 5,5. Добавление WFI до конечной массы нерасфасованного раствора с последующем осторожным перемешиванием.

Фильтрация включает следующие этапы. Присоединение осветлительного вертикального фильтра (0,22 мкм) и стерилизующего фильтра (0,22 мкм) к сосуду для составления. Забор аликвоты нерасфасованного раствора для тестирования биологической нагрузки после этапа осветлительной фильтрации. Осуществление асептической фильтрации с использованием фильтра 0,22 мкм в стерильном контейнере. Забор аликвоты образца после асептической фильтрации для тестирования стерильности нерасфасованного раствора. Тестирование целостности фильтра после фильтрации продукта.

Наполнение включает следующие этапы. С использованием подходящего фасовочного оборудования асептически наполняют раствором продукта стерилизованные цилиндрические стеклянные сосуды типа I для достижения целевого объема наполнения 2,4 мл. Осуществляют проверку массы наполнения при наполнении. Наполненные сосуды частично закупоривают стерилизованными пробками, подходящими для лиофилизации. Наполненные сосуды помещают в подходящий лиофилизатор.

Лиофилизация, закупоривание и запечатывание включают следующие этапы. Лиофилизируют наполненные сосуды с использованием подходящего цикла лиофилизации. После завершения лиофилизации сосуды заполняют фильтрованным через фильтры 0,22 мкм азотом и полностью закупоривают. Закупоренные сосуды вынимают из лиофилизатора и запаивают их.

Полученные сосуды осматривают на наличие видимых дефектов и хранят при 2-8°C. Конечные сосуды с единицами дозирования перевозят в условиях охлаждения.

ПРИМЕР 2

Тестирование стабильности лиофилизированных составов гуманизированных антител против PD-1

На фигурах 1-9 представлены данные о тестировании стабильности лиофилизированных составов гуманизированного антитела против PD-1 человека в различных условиях хранения. Сосуды хранили вертикально. Как подробно описывают ниже, составы по настоящему изобретению демонстрируют стабильность в течение по меньшей мере 24 месяцев для антител, лиофилизированных при pH 5,5 (гистидиновый буфер), а также аналогичных жидких составов.

Стабильность оценивали следующим образом. Образцы лиофилизировали в стеклянных сосудах 6R DIN типа I и закупоривали 20 мм бромбутиловыми пробками, подходящими для лиофилизации (Helvoet Rubber & Plastic Technologies BV, Hellevoetsluis, The Netherlands), и отламывающимися алюминиевыми крышками. Сосуды помещали в пункты для исследования стабильности в следующие условия хранения: 5°C (5±3°C), 25H (25°C, относительная влажность 60%) или RH4 (40°C, относительная влажность 70%). Образцы получали в начальный момент времени, и для конкретных образцов множество моментов времени включают 1, 2, 3, 6, 9, 12, 18 и 24 месяца.

Стабильность образцов иллюстрируют различными характеристиками, представленными в таблицах на фигурах 1-9. Лиофилизированные образцы визуально осматривали, восстанавливали и визуально осматривали восстановленный состав. После восстановления измеряли pH образцов и определяли концентрацию белка по поглощению УФ. Образцы анализировали способом CE-SDS, в котором белок подвергают денатурации с использованием додецилсульфата натрия (SDS) в восстановительных и невосстановительных условиях и разделяют с использованием капиллярного электрофореза (CE). Белки разделяют на основе их кажущейся молекулярная массы. В невосстановительных условиях все молекулы, иные, чем основной пик IgG, классифицируют как примеси. В восстановительных условиях IgG распадаются на тяжелые и легкие цепи. Все другие молекулы классифицируют как примеси.

Чистоту образца дополнительно оценивают с помощью высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (HPSEC), при которой определяют процентную долю мономера, а также процентные доли высокомолекулярных молекул (возможно, агрегатов) и пиков позднего элюирования (возможно, продукты деградации).

Дополнительные данные о характеристике образца представлены на фигурах 1-9. Высокоэффективную ионообменную хроматографию (HP-IEX) использовали для оценки чистоты посредством определения наличия кислых или основных вариантов. Результаты представлены в виде процентной доли от общего исследуемого материала. Образцы дополнительно охарактеризовывали по биологической функции с использованием твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) связывания с PD-1 человека. Концентрацию антитела, необходимую для достижения полумаксимального связывания, называют EC50. Активность тестового образца оценивали путем сравнения кривых связывания тестовых образцов с референсным материалом (или контролем) по EC50. Активность выражали как процент относительно активности референсного материала (или контроля). Содержание влаги в лиофилизированном порошке также определяли с помощью колориметрического титрования. Измерение содержания твердых частиц осуществляли для подсчета частиц >10 мкм и >25 мкм. Используемый для этих измерений способ основан на USP<788>.

Эти результаты демонстрируют высокую стабильность составов по настоящему изобретению в течение по меньшей мере 24 месяцев при приблизительно pH 5,5. Данные не демонстрируют временную тенденцию, которая отражала бы нестабильность образцов в тестируемых условиях хранения.

ПРИМЕР 3: ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ КЛИНИЧЕСКИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Фаза 1 исследования h409All (моноклонального антитела против PD-1) у пациентов с солидными опухолями на поздней стадии

В фазе 1 исследования определяли безопасность, PK, PD и противоопухолевую активность h409A11. Исследование без плацебо с повышением доз проводили на пациентах со злокачественными новообразованиями на поздних стадиях, невосприимчивыми к стандартной химиотерапии. В начальной выборке пациентов с солидными опухолями на поздних стадиях лечили стабильным составом h409A11, как представлено в настоящем описании. Не было ограничений относительно хирургического вмешательства; однако пациенты на текущий момент не являлись кандидатами для хирургического вмешательства. Когорты по 3-6 пациентов включали в исследование (дизайн 3+3) при i.v. дозах 1, 3 или 10 мг/кг. После начальной дозы и 28-дневного цикла 1 пациентам позволяли последовательно принимать многократные дозы, вводимые каждые 2 недели. Для части A фазы 1 трех пациентов лечили при дозе 1 мг/кг, трех пациентов лечили при дозе 3 мг/кг и девять пациентов лечили при дозе 10 мг/кг и всем вводили дозы каждые 2 недели. Не было индивидуальных повышений доз у одного и того же пациента. Каждые 8 недель проводили рентгенографическую оценку с использованием руководства RECIST 1.1.

Девять пациентов, по 3 на каждый уровень доз, завершали период дозолимитирующей токсичности (DLT) (28 дней). Пациенты страдали немелкоклеточным раком легких (NSCLC, n=3), раком прямой кишки (n=2), меланомой (MEL, n=2), саркомой (n=1) или карциноидом (n=1). К настоящему времени всего ввели 63 дозы (медиана 7/пациента; максимум 12) без DLT. Связанные с лекарственным средством побочные эффекты (AE) среди всех доз включали утомляемость степени 1 (n=3), тошноту (n=2), диарею (n=1), дисгевзию (n=1), боль в области молочной железы (n=1) и зуд (n=1). Сообщали об одном связанном с лекарственным средством AE степени 2, представляющем собой зуд. Не наблюдали связанных с лекарственным средством AE степени ≥3. Данные о PK представлены в таблице 5. По результатам RECIST 1 пациент с MEL при терапии >6 месяцев имел частичный ответ, и у 3 дополнительных пациентов со злокачественными новообразованиями на поздних стадиях наблюдали предварительные признаки снижения размера опухоли (стабильное заболевание). Эти результаты свидетельствуют о том, что пациенты хорошо переносили h409A11 без DLT при 3 тестируемых уровнях доз (т.е. 1, 3 и 5 мг/кг). Наблюдали признаки противоопухолевой активности.

Таблица 6
Краткое описание последовательностей в списке последовательностей.
Идентификаторы последовательностей
SEQ ID NO: Описание
1 Вариабельная область тяжелой цепи hPD-1.08A (ДНК)
2 Вариабельная область легкой цепи hPD-1.08A (ДНК)
3 Вариабельная область тяжелой цепи hPD-1.09A (ДНК)
4 Вариабельная область легкой цепи hPD-1.09A (ДНК)
5 Вариабельная область тяжелой цепи hPD-1.08A (а/к)

6 Вариабельная область легкой цепи hPD-1.08A (а/к)
7 Вариабельная область тяжелой цепи hPD-1.09A (а/к)
8 Вариабельная область легкой цепи hPD-1.09A (а/к)
9 CDR1 легкой цепи hPD-1.08A (а/к)
10 CDR2 легкой цепи hPD-1.08A (а/к)
11 CDR3 легкой цепи hPD-1.08A (а/к)
12 CDR1 тяжелой цепи hPD-1.08A (а/к)
13 CDR2 тяжелой цепи hPD-1.08A (а/к)
14 CDR3 тяжелой цепи hPD-1.08A (а/к)
15 CDR1 легкой цепи hPD-1.09A (а/к)
16 CDR2 легкой цепи hPD-1.09A (а/к)
17 CDR3 легкой цепи hPD-1.09A (а/к)
18 CDR1 тяжелой цепи hPD-1.09A (а/к)
19 CDR2 тяжелой цепи hPD-1.09A (а/к)
20 CDR3 тяжелой цепи hPD-1.09A (а/к)
21 Вариабельная область тяжелой цепи 109 A-H (ДНК)
22 Кодон-оптимизированная вариабельная область тяжелой цепи 109 A-H (ДНК)
23 Кодон-оптимизированная полноразмерная тяжелая цепь 409 A-H (ДНК)
24 Вариабельная область легкой цепи K09A-L-11 (ДНК)
25 Вариабельная область легкой цепи K09A-L-16 (ДНК)
26 Вариабельная область легкой цепи K09A-L-17 (ДНК)
27 Кодон-оптимизированная вариабельная область легкой цепи K09A-L-11 (ДНК)

28 Кодон-оптимизированная вариабельная область легкой цепи K09A-L-16 (ДНК)
29 Кодон-оптимизированная вариабельная область легкой цепи K09A-L-17 (ДНК)
30 Вариабельная область тяжелой цепи 109 A-H (а/к)
31 Полноразмерная тяжелая цепь 409 A-H (а/к)
32 Вариабельная область легкой цепи K09A-L-11 (а/к)
33 Вариабельная область легкой цепи K09A-L-16 (а/к)
34 Вариабельная область легкой цепи K09A-L-17 (а/к)
35 Полноразмерная тяжелая цепь 109 A-H (а/к)
36 Полноразмерная легкая цепь K09A-L-11 (а/к)
37 Полноразмерная легкая цепь K09A-L-16 (а/к)
38 Полноразмерная легкая цепь K09A-L-17 (а/к)

Как применяют в настоящем описании, включая заявленную формулу изобретения, слова в единственном числе включают соответствующие слова во множественном числе, если контекст четко не указывает на иное. Если не указано иначе, белки и индивидуумы, указанные в настоящем описании, относятся к белкам человека и индивидуумам-людям, а не к другим видам.

Все цитируемые в настоящем описании источники включены в качестве ссылки в том объеме, как если бы для каждой отдельной публикации, записи в базе данных (например, последовательностей в Genbank или записей в GeneID), патентной заявки или патента конкретно и отдельно указывали о том, что она включена в качестве ссылки. Это заявление о включении путем ссылки определено заявителями согласно 37 C.F.R. § 1.57(b)(1) в отношении каждой отдельной публикации, записи в базе данных (например, последовательностей в Genbank или записей в GenelD), патентной заявки или патента, каждый из которых четко определен в соответствии с 37 C.F.R. § 1,57(b)(2), даже если такая цитата не связана непосредственно со специальным заявлением о включении путем ссылки. Включение специальных заявлений о включении путем ссылки, если имеет место, в описание ни в коей мере не ослабляет это общее заявление о включении путем ссылки. Цитирование ссылки в настоящем описании не является признанием того, что ссылка имеет отношение к уровню техники, также не представляет собой какого-либо признания относительно содержания или даты этих публикаций или документов.

Список последовательностей

<110> Merck Sharp & Dohme Corp.

Sharma, Manoj K.

Narasimhan, Chakravarthy Nachu

Gergich, Kevin

Kang, Soonmo Peter

<120> СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ

<130> 23060 PCT

<150> 61/470,121

<151> 2011-03-31

<160> 38

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 435

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A Вариабельная область тяжелой цепи

<400> 1

atgrgatgga gctgtatcat kctctttttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60

gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg gggcttcagt gaagttgtcc 120

tgcaaggcct ctggctacac cttcaccagt tattatctgt actggatgaa acagaggcct 180

ggacaaggcc ttgagtggat tgggggggtt aatcctagta atggtggtac taacttcagt 240

gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 300

caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtacaag aagggattct 360

aactacgacg ggggctttga ctactggggc caaggcacta ctctcacagt ctcctcagcc 420

aaaacgacac cccca 435

<210> 2

<211> 453

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A Вариабельная область легкой цепи

<400> 2

atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60

gacattgtgc tgacacagtc tcctacttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 120

atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct ttagttattt gcactggtac 180

caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctttc ttgcatccaa cctagagtct 240

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 300

cctgtggagg aggaggacgc tgcaacctat tattgtcagc acagttggga gcttccgctc 360

acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420

atcttcccac catccagtaa gcttgggaag ggc 453

<210> 3

<211> 464

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A Вариабельная область тяжелой цепи

<400> 3

atgraatgca gctgggttat yctctttttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60

gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagttgtcc 120

tgcaaggctt ctggctacac cttcaccaac tactatatgt actgggtgaa gcagaggcct 180

ggacaaggcc ttgagtggat tggggggatt aatcctagca atggtggtac taacttcaat 240

gagaagttca agaacaaggc cacactgact gtagacagtt cctccagcac aacctacatg 300

caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtacaag aagggattat 360

aggttcgaca tgggctttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcagcc 420

aaaacgacac ccccatccgt ytatcccbtg gcccctggaa gctt 464

<210> 4

<211> 438

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A Вариабельная область легкой цепи

<400> 4

atggagwcag acacactsct gytatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggc 60

gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctgggaca gagggccgcc 120

atctcatgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcactggtac 180

caacagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 300

cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga ccttccgctc 360

acgttcggta ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420

atcttcccac catccagt 438

<210> 5

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A Вариабельная область тяжелой цепи

<400> 5

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Leu Tyr Trp Met Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys

115 120

<210> 6

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A Вариабельная область легкой цепи

<400> 6

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Phe Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp

85 90 95

Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 7

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A Вариабельная область тяжелой цепи

<400> 7

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Ser Ser Ser Ser Thr Thr Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys

115 120

<210> 8

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A Вариабельная область легкой цепи

<400> 8

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Ala Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR1 легкой цепи

<400> 9

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR2 легкой цепи

<400> 10

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1-08A CDR3 легкой цепи

<400> 11

Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 12

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR1 тяжелой цепи

<400> 12

Ser Tyr Tyr Leu Tyr

1 5

<210> 13

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR2 тяжелой цепи

<400> 13

Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR3 тяжелой цепи

<400> 14

Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 15

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A CDR1 легкой цепи

<400> 15

Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A CDR2 легкой цепи

<400> 16

Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser

1 5

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A CDR3 легкой цепи

<400> 17

Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 18

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A CDR1 тяжелой цепи

<400> 18

Asn Tyr Tyr Met Tyr

1 5

<210> 19

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A CDR2 тяжелой цепи

<400> 19

Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 20

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.09A CDR3 тяжелой цепи

<400> 20

Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 21

<211> 417

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 109A-H Вариабельная область тяжелой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(57)

<400> 21

atggactgga cctggagcat ccttttcttg gtggcagcac caacaggagc ccactcccaa 60

gtgcagctgg tgcagtctgg agttgaagtg aagaagcccg gggcctcagt gaaggtctcc 120

tgcaaggctt ctggctacac ctttaccaac tactatatgt actgggtgcg acaggcccct 180

ggacaagggc ttgagtggat gggagggatt aatcctagca atggtggtac taacttcaat 240

gagaagttca agaacagagt caccttgacc acagactcat ccacgaccac agcctacatg 300

gaactgaaga gcctgcaatt tgacgacacg gccgtttatt actgtgcgag aagggattat 360

aggttcgaca tgggctttga ctactggggc caagggacca cggtcaccgt ctcgagc 417

<210> 22

<211> 417

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная вариабельная область тяжелой цепи 109A-H

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(57)

<400> 22

atggactgga cctggtctat cctgttcctg gtggccgctc ctaccggcgc tcactcccag 60

gtgcagctgg tgcagtccgg cgtggaggtg aagaagcctg gcgcctccgt caaggtgtcc 120

tgcaaggcct ccggctacac cttcaccaac tactacatgt actgggtgcg gcaggctccc 180

ggccagggac tggagtggat gggcggcatc aacccttcca acggcggcac caacttcaac 240

gagaagttca agaaccgggt gaccctgacc accgactcct ccaccaccac cgcctacatg 300

gagctgaagt ccctgcagtt cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag gcgggactac 360

cggttcgaca tgggcttcga ctactggggc cagggcacca ccgtgaccgt gtcctcc 417

<210> 23

<211> 1398

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная полноразмерная тяжелая цепь 409A-H

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(57)

<400> 23

atggccgtgc tgggcctgct gttctgcctg gtgaccttcc cttcctgcgt gctgtcccag 60

gtgcagctgg tgcagtccgg cgtggaggtg aagaagcctg gcgcctccgt caaggtgtcc 120

tgtaaggcct ccggctacac cttcaccaac tactacatgt actgggtgcg gcaggcccca 180

ggccagggac tggagtggat gggcggcatc aacccttcca acggcggcac caacttcaac 240

gagaagttca agaaccgggt gaccctgacc accgactcct ccaccacaac cgcctacatg 300

gaactgaagt ccctgcagtt cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag gcgggactac 360

cggttcgaca tgggcttcga ctactggggc cagggcacca ccgtgaccgt gtcctccgct 420

agcaccaagg gcccttccgt gttccctctg gccccttgct cccggtccac ctccgagtcc 480

accgccgctc tgggctgtct ggtgaaggac tacttccctg agcctgtgac cgtgagctgg 540

aactctggcg ccctgacctc cggcgtgcac accttccctg ccgtgctgca gtcctccggc 600

ctgtactccc tgtcctccgt ggtgaccgtg ccttcctcct ccctgggcac caagacctac 660

acctgcaacg tggaccacaa gccttccaac accaaggtgg acaagcgggt ggagtccaag 720

tacggccctc cttgccctcc ctgccctgcc cctgagttcc tgggcggacc ctccgtgttc 780

ctgttccctc ctaagcctaa ggacaccctg atgatctccc ggacccctga ggtgacctgc 840

gtggtggtgg acgtgtccca ggaagatcct gaggtccagt tcaattggta cgtggatggc 900

gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagcct cgggaggaac agttcaactc cacctaccgg 960

gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga atacaagtgc 1020

aaggtcagca acaagggcct gccctcctcc atcgagaaaa ccatctccaa ggccaagggc 1080

cagcctcgcg agcctcaggt gtacaccctg cctcctagcc aggaagagat gaccaagaat 1140

caggtgtccc tgacatgcct ggtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggagtgg 1200

gagagcaacg gccagccaga gaacaactac aagaccaccc ctcctgtgct ggactccgac 1260

ggctccttct tcctgtactc caggctgacc gtggacaagt cccggtggca ggaaggcaac 1320

gtcttttcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1380

tccctgtctc tgggcaag 1398

<210> 24

<211> 393

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-11 Вариабельная область легкой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(60)

<400> 24

atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120

ctctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcactggtat 180

caacagaaac ctggccaggc tcccaggctc ctcatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

ggcgtcccag ccaggttcag tggtagtggg tctgggacag acttcactct caccatcagc 300

agcctagagc ctgaagattt tgcagtttat tactgtcagc acagcaggga ccttccgctc 360

acgttcggcg gagggaccaa agtggagatc aaa 393

<210> 25

<211> 393

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-16 Вариабельная область легкой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(60)

<400> 25

atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgc tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 120

atctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcattggtac 180

ctccagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 300

agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgccagc atagtaggga ccttccgctc 360

acgtttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa 393

<210> 26

<211> 393

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-17 Вариабельная область легкой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(60)

<400> 26

atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtctctgg atccagtggg 60

gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 120

atctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcattggtat 180

ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatc ttgcatccta cctagaatct 240

ggagtcccag acaggttcag tggcagtggg tcaggcactg ctttcacact gaaaatcagc 300

agggtggagg ctgaggatgt tggactttat tactgccagc atagtaggga ccttccgctc 360

acgtttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa 393

<210> 27

<211> 390

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная вариабельная область легкой цепи K09A-L-11

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(57)

<400> 27

atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgag 60

atcgtgctga cccagtcccc tgccaccctg tccctgagcc ctggcgagcg ggctaccctg 120

agctgcagag cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatcag 180

cagaagccag gccaggcccc tcggctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc 240

gtgcctgccc ggttctccgg ctccggaagc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc 300

ctggagcctg aggacttcgc cgtgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc 360

tttggcggcg gaacaaaggt ggagatcaag 390

<210> 28

<211> 390

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная вариабельная область легкой цепи K09A-L-16

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(57)

<400> 28

atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgag 60

atcgtgctga cccagtcccc tctgtccctg cctgtgaccc ctggcgagcc tgcctccatc 120

tcctgccggg cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatctg 180

cagaagcctg gccagtcccc ccagctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc 240

gtgcctgacc ggttctccgg ctccggcagc ggcaccgact tcaccctgaa gatctcccgg 300

gtggaggccg aggacgtggg cgtgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc 360

ttcggccagg gcaccaagct ggagatcaag 390

<210> 29

<211> 390

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодон-оптимизированная вариабельная область легкой цепи K09A-L-17

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(57)

<400> 29

atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgac 60

atcgtgatga cccagacccc tctgtccctg cctgtgaccc ctggcgagcc tgcctccatc 120

tcctgccggg cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatctg 180

cagaagcctg gccagtcccc tcagctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc 240

gtgcctgacc ggttctccgg ctccggaagc ggcaccgctt ttaccctgaa gatctccaga 300

gtggaggccg aggacgtggg cctgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc 360

ttcggccagg gcaccaagct ggagatcaag 390

<210> 30

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 109A-H Вариабельная область тяжелой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 30

Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Pro Thr Gly

1 5 10 15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 31

<211> 466

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 409A-H Полноразмерная тяжелая цепь

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 31

Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys

1 5 10 15

Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys

225 230 235 240

Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly

245 250 255

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

260 265 270

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu

275 280 285

Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg

305 310 315 320

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu

340 345 350

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

355 360 365

Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

370 375 380

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

385 390 395 400

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

405 410 415

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp

420 425 430

Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

435 440 445

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu

450 455 460

Gly Lys

465

<210> 32

<211> 130

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-11 Вариабельная область легкой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 32

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu

20 25 30

Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu

115 120 125

Ile Lys

130

<210> 33

<211> 130

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-16 Вариабельная область легкой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 33

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys

130

<210> 34

<211> 130

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-17 Вариабельная область легкой цепи

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 34

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys

130

<210> 35

<211> 469

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 109A-H Полноразмерная тяжелая цепь

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 35

Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys

1 5 10 15

Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

210 215 220

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

225 230 235 240

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

245 250 255

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

260 265 270

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

275 280 285

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

290 295 300

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

305 310 315 320

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

325 330 335

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

340 345 350

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

355 360 365

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

370 375 380

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

385 390 395 400

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

405 410 415

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

420 425 430

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

435 440 445

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

450 455 460

Leu Ser Pro Gly Lys

465

<210> 36

<211> 237

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-11 Полноразмерная легкая цепь

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 36

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu

20 25 30

Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu

115 120 125

Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser

130 135 140

Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn

145 150 155 160

Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala

165 170 175

Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys

180 185 190

Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp

195 200 205

Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu

210 215 220

Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230 235

<210> 37

<211> 237

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-16 Полноразмерная легкая цепь

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 37

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser

130 135 140

Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn

145 150 155 160

Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala

165 170 175

Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys

180 185 190

Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp

195 200 205

Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu

210 215 220

Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230 235

<210> 38

<211> 237

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-17 Полноразмерная легкая цепь

<220>

<221> Сигнальный пептид

<222> (1)..(19)

<400> 38

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser

130 135 140

Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn

145 150 155 160

Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala

165 170 175

Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys

180 185 190

Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp

195 200 205

Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu

210 215 220

Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230 235


СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
СТАБИЛЬНЫЕ СОСТАВЫ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ПРОГРАММИРУЕМОЙ СМЕРТИ PD-1 ЧЕЛОВЕКА И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-1 of 1 item.
20.01.2018
№218.016.0f94

Стабильные составы антител против рецептора программируемой смерти pd-1 человека и относящиеся к ним способы лечения

Изобретение относится к области биохимии. Описан способ лечения злокачественного новообразования у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий введение эффективного количества жидкого фармацевтического состава антитела против PD-1 человека. Указанный способ, содержит 25-100 мг/мл антитела...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002633509
Дата охранного документа: 12.10.2017
Showing 1-10 of 21 items.
10.10.2013
№216.012.72c2

Фармацевтически приемлемые соли 2-{4-[(3s)-пиперидин-3-ил]фенил}-2н-индазол-7-карбоксамида

Настоящее изобретение относится к фармацевтически приемлемым солям амидзамещенного индазола, а именно 4-Метилбензолсульфонату (3S)-3-{4-[7-(аминокарбонил)-2H-индазол-2-ил]фенил}пиперидиния; бензолсульфату (3S)-3-{4-[7-(аминокарбонил)-2H-индазол-2-ил] фенил}пиперидиния и моногидрату...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495035
Дата охранного документа: 10.10.2013
27.10.2013
№216.012.7988

Гетероциклические ингибиторы аспартильной протеазы

Настоящее изобретение относится к соединениям, являющимся ингибиторами аспартильных протеаз, пригодным для лечения сердечно-сосудистых, нейродегенеративных заболеваний и грибковых инфекций, формулы где W представляет собой -C(=O)-; X представляет собой -NH-; U представляет собой -C(R)(R)-; R...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496774
Дата охранного документа: 27.10.2013
20.02.2014
№216.012.a211

Положительные аллостерические модуляторы м1-рецепторов на основе пираниларилметилбензохиназолинона

Изобретение относится к новым пираниларилметилбензохиназолиноновым соединениям формулы (I), которые являются положительными аллостерическими модуляторами рецептора M1 и которые применимы для лечения заболеваний, в которых задействован рецептор M1, таких как болезнь Альцгеймера, шизофрения,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002507204
Дата охранного документа: 20.02.2014
20.04.2014
№216.012.b913

Ингибиторы сетр

Изобретение относится к соединению, имеющему формулу I, или его фармацевтически приемлемой соли, где: X обозначает -O-; Z обозначает -C(=O)-; Y обозначает -(CRR)-, где R выбран из -C-Cалкила; R обозначает H или -C-Cалкил; R обозначает H; R и B каждый выбран из A и A, где один из R и B...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002513107
Дата охранного документа: 20.04.2014
10.08.2014
№216.012.e8cc

Соединения, которые являются ингибиторами erk

Изобретение относится к соединениям формулы 1.0: где Q представляет собой тетрагидропиридинильное кольцо замещенное. R, R выбирают из группы, состоящей из: (1) пиридила, замещенного заместителем, выбираемым из группы, состоящей из: -O-СН, -O-CH, -O-СН(СН), и -О-(СН)-O-СН, R выбирают из группы,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525389
Дата охранного документа: 10.08.2014
10.11.2014
№216.013.03d2

Агенты, ингибирующие р38 киназу

Изобретение относится к соединениям общей формулы (I), обладающим активностью в отношении цитокинов, вариантам фармацевтических композиций на их основе и их применению. Соединения формулы (I) могут найти применение для лечения или предотвращения астмы, COPD, ARDS, ревматоидного артрита,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532376
Дата охранного документа: 10.11.2014
10.05.2015
№216.013.4a39

Аминотетрагидропираны в качестве ингибиторов дипептидилпептидазы-iv для лечения или предупреждения диабета

Настоящее изобретение относится к новым замещенным аминотетрагидропиранам структурной формулы I или к их фармацевтически приемлемым солям, в которой V выбран из групп, имеющих приведенные ниже формулы, Ar представляет собой фенил, незамещенный или замещенный одним-пятью атомами галогена, каждый...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550508
Дата охранного документа: 10.05.2015
10.09.2015
№216.013.75ba

Соединения замещенных диазепанов в качестве антагонистов орексиновых рецепторов

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I или их фармацевтически приемлемым солям. Соединения изобретения обладают свойствами антагониста орексинового рецептора. В формуле I: R является фенилом, замещенным триазолилом, и необязательно Cалкилом, -(С=O)-O-Cалкилом, -СОН, Салкилом,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002561727
Дата охранного документа: 10.09.2015
20.01.2016
№216.013.a013

Экстракты kibdelos porangium в качестве антибактериальных средств

Изобретение относится к антибактериальной композиции, содержащей одно или более очищенных соединений, выбираемых из соединений формулы I:, где R и R независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и галогена; и R выбирают из группы, состоящей из водорода и C-Салкила; и формулы(II), где:R...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002572621
Дата охранного документа: 20.01.2016
13.01.2017
№217.015.6e60

Гетероциклические производные первичных аминдиазениумдиолатов

Изобретение относится к соединениям формулы I или их фармацевтически приемлемым солям, которые обладают антигипертензивным действием. В формуле I X представляет собой О или NR; группа присоединена к любому атому углерода кольца, отличному от атома углерода, к которому присоединены R и R; R...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002596867
Дата охранного документа: 10.09.2016
+ добавить свой РИД