Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ МОРФОМЕТРИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ПРОГНОЗА ТЕЧЕНИЯ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИИ ПОСЛЕ СПЛЕНЭКТОМИИ

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для морфометрической оценки прогноза течения апластической анемии (АА) после спленэктомии путем определения массы селезенки и ее маргинальной зоны в гистологических срезах. Встречаются лишь единичные работы, посвященные описанию структуры селезенки и изменению ее архитектоники при АА. В литературе отсутствуют сведения, касающиеся влияния массы маргинальной зоны селезенки на течение патологического процесса при АА. Применяемые высокотехнологичные методы лечения предъявляют более жесткие требования к поиску новых критериев прогнозирования течения этого тяжелого заболевания системы крови, характеризующегося замещением клеточного костного мозга жировым и, как следствие, панцитопенией в периферической крови.

Целью изобретения является разработка способа морфометрической оценки прогноза течения АА после спленэктомии по массе маргинальной зоны селезенки.

Близким техническим решением к предлагаемому изобретению является известный способ оценки функционального состояния составляющих белой пульпы селезенки с применением антител, экспрессирующихся только на CD20+ и CD3+ лимфоцитах, позволяющий оценить функциональное состояние белой пульпы селезенки при портальной гипертензии (Li Z., Zhang S., Lv G. et al. / Changes in count and function of splenic lymphocytes from patients with portal hypertension // World J. Gastroenterol. - 2008. - Vol.14 (15). - P.2377-2382). Данный метод не позволяет количественно точно оценить состояние белой пульпы селезенки и ее составляющих, трудоемкий, высоко затратный и требует большое количество дорогостоящих расходных материалов.

Способа морфометрической оценки прогноза течения АА после спленэктомии по массе селезенки и ее маргинальной зоны не существует. В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в соответствии с планом НИР.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследования выполнены на образцах селезенок от 31 больных АА в возрасте от 18 до 65 лет (12 - с легкой формой заболевания и 19 - с тяжелой). Согласно морфометрическому анализу благоприятное течение заболевания установлено у 11 пациентов (8 - с легкой формой; 3 - тяжелой). У 20 больных определен неблагоприятный прогноз (16 - при тяжелой форме и 4 - легкой). Группу сравнения составили образцы селезенок, взятых от 20 лиц, не имевших в анамнезе заболеваний системы крови.

После спленэктомии определяют массу удаленной селезенки, выполняют гистологическую проводку образцов послеоперационного материала общепринятым способом. На гистологических срезах толщиной 3-5 мкм, приготовленных из парафиновых блоков селезенок, проводят морфометрический анализ на световом микроскопе со встроенной фото- и видеокамерой фирмы «Leica» с помощью программного обеспечения анализа изображения ImageScope Color, версии М с окуляром ×10, при объективе ×20. При изучении белой пульпы селезенки, с применением стандартного метода окрашивания гематоксилином и эозином, маргинальную зону в препаратах различают по цветовой гамме. Для определения средней площади маргинальной зоны с помощью морфометрического анализа проводят измерения в 50 полях зрения для каждого образца, начиная расчеты по направлению от капсулы вглубь лимфоидного органа. Исходя из полученных результатов, вычисляют массу маргинальной зоны селезенки по формуле: M=m×D%/100%,

где M - масса маргинальной зоны (г),

m - общая масса селезенки (г),

D - средняя площадь маргинальной зоны, %.

В ходе обработки данных была рассчитана средняя масса маргинальной зоны селезенки у больных АА. В процессе проведения исследований у больных АА морфометрически в гистологических срезах селезенки при окраске гематоксилином и эозином измеряют среднюю площадь маргинальной зоны и вычисляют ее массу по формуле. Благоприятный прогноз течения АА констатируют при значениях массы маргинальной зоны ≤1,9 г, а при величинах >1,9 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания.

Результаты исследований представлены в примерах, подтверждающих возможность заявляемого способа осуществлять морфометрическую оценку прогноза течения АА.

Пример 1

Больной Т., 21 год, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 19.07.1999 г. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 79 г/л, гранулоциты 0,3×10⁹/_л, тромбоциты 15,0×10⁹/_л. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Больному назначено лечение по отработанному в клинике способу (патент на изобретение №2412708 от 27.11.2008 г.). Выполнена операция (03.08.99 г.): срединная лапаротомия, спленэктомия - без осложнений. Масса селезенки больного (m) составила 100 г. Проведено морфометрическое исследование гистологических образцов селезенки, окрашенных гематоксилином и эозином. Средняя площадь маргинальной зоны (D) составила 2,0%. Определена масса маргинальной зоны селезенки (M) - 2,0 г. Установленная величина получена в ходе следующего расчета: M=100,0 г×2,0%/100%.

Заключение: с помощью полученных данных установлено, что у больного неблагоприятный прогноз течения АА.

Пример 2

Больной Е., 39 лет, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 06.04.1995 г. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 36 г/л, гранулоциты 0,37×10⁹/_л, тромбоциты 15,0×10⁹/_л. Выполнена операция (11.05.95 г.): срединная лапаротомия, спленэктомия без осложнений. Масса селезенки составила 170,0 г. Проведена морфометрическая оценка гистологических образцов селезенки, окрашенных гематоксилином и эозином. Средняя площадь маргинальной зоны (D) составила 0,6%. Вычислена масса маргинальной зоны селезенки (M) - 1,02 г по ранее приведенной формуле. Установленная величина получена в ходе следующего расчета: M=170,0 г×0,6%/100%.

Заключение: с помощью полученных гистологических данных установлено, что у больного благоприятный прогноз течения АА.

Заявляемое изобретение обладает новизной, дает при использовании положительный результат, заключающийся в возможности по массе селезенки, морфометрическому анализу площади маргинальной зоны и ее массе прогнозировать характер течения заболевания у больных АА после спленэктомии. Предлагаемый способ прост в реализации и может быть использован в практической гематологии, морфологических и гистологических лабораториях в качестве дополнительного критерия при прогнозировании течения АА, независимо от тяжести заболевания, и позволяет дифференцированно подходить при назначении терапии.