(3-АРИЛСУЛЬФОНИЛХИНОЛИН-8-ИЛ)-ДИАЛКИЛ-АМИНЫ - СЕЛЕКТИВНЫЕ АНТАГОНИСТЫ СЕРОТОНИНОВЫХ 5-HT РЕЦЕПТОРОВ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Данное изобретение относится к новым (3-арилсульфонилхинолин-8-ил)-диалкил-аминам - селективным антагонистам серотониновых 5-НТ₆ рецепторов, лекарственным началам и фармацевтическим композициям, содержащим лекарственные начала в виде указанных соединений, а также к способу лечения и предупреждения развития различных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), патогенез которых связан с 5-НТ₆ рецепторами. В основе фармакологического эффекта новых лекарственных начал лежит их способность взаимодействовать с серотониновыми 5-НТ₆ рецепторами, играющими важную роль для лечения заболеваний ЦНС, в частности болезни Альцгеймера (БА), болезни Паркинсона, болезни Гантингтона, шизофрении, нейродегенеративных заболеваний, когнитивных и тревожных расстройств и ожирения.

Использование эффективных и селективных антагонистов серотониновых 5-НТ₆ рецепторов для лечения заболеваний ЦНС, в частности шизофрении, БА и других нейродегенеративных заболеваний и когнитивных расстройств является перспективным направлением для получения новых лекарств [Holenz J., Pauwels P.J., Diaz J.L., Merce R., Codony X., Buschmann H. Medicinal chemistry strategies to 5-НТ₆ receptor ligands as potential cognitive enhancers and antiobesity agents. Drug Disc. Today. 2006; 11:283-299]. Эти рецепторы у млекопитающих находятся исключительно в центральной нервной системе, причем главным образом в участках головного мозга, ответственных за обучение и память [Gerard С., Martres М.-Р., Lefevre К., Miquel М.-С., Verge D., Lanfumey L., Doucet E., Hamon M., El Mestikawy S. Immuno-localisation of serotonin 5-HT₆ receptor-like material in the rat central nervous system. Brain Research. 1997; 746:207-219]. Кроме того, показано [Dawson L.A., Nguyen H.Q., Li P. The 5-НТ₆ receptor antagonist SB-271046 selectively enhances excitatory neurotransmission in the rat frontal cortex and hippocampus. Neuropsychopharmacology. 2001; 25:662-668], что 5-НТ₆ рецепторы являются модуляторами нескольких нейромедиаторных систем, включая холинэргическую, норадренэргическую, глутаматэргическую и допаминэргическую. Учитывая фундаментальную роль этих систем в нормальных когнитивных процессах, а также их дисфункцию при нейродегенерации, становится очевидной исключительная роль 5-НТ₆ рецепторов в формировании нормальной или «патологической» памяти. В большом числе современных работ показано, что блокирование 5-НТ₆ рецепторов приводит к значительному усилению консолидации памяти в различных животных моделях обучения-запоминания-воспроизведения [Foley A.G., Murphy K.J., Hirst W.D., Gallagher H.C., Hagan J.J., Upton N., Walsh F.S., Regan C.M. The 5-HT(6) receptor antagonist SB-271046 reverses scopolamine-disrupted consolidation of a passive avoidance task and ameliorates spatial task deficits in aged rats. Neuropsychopharmacology. 2004; 29:93-100. Riemer C., Borroni E., Levet-Trafit В., Martin J.R., Poli S., Porter R.H., Bos M. Influence of the 5-HT₆ receptor on acetylcholine release in the cortex: pharmacological characterization of 4-(2-bromo-6-pyrrolidin-l-ylpyridine-4-sulfonyl)phenylamine, a potent and selective 5-HT₆ recepor antagonist. J. Med. Chem. 2003; 46:1273-1276. King M.V., Woolley M.L., Topham I.A., Sleight A.J., Marsden C.A., Fone K.C. 5-НТ₆ receptor antagonists reverse delay-dependent deficits in novel object discrimination by enhancing consolidation e an effect sensitive to NMDA receptor antagonism. Neuropharmacology 2004; 47:195-204]. Также показано значительное улучшение когнитивных функций у старых крыс в модели водного лабиринта Моррисона при воздействии антагонистом 5-НТ₆ рецепторов [Foley A.G., Murphy K.J., Hirst W.D., Gallagher H.C., Hagan J.J., Upton N., Walsh F.S., Regan C.M. The 5-НТ₆ receptor antagonist SB-271046 reverses scopolamine-disrupted consolidation of a passive avoidance task and ameliorates spatial task deficits in aged rats. Neuropsychopharmacology. 2004; 29:93-100]. В последнее время достигнуто не только более глубокое понимание роли 5-НТ₆ рецепторов в когнитивных процессах, но более четкое формирование представлений о возможных фармакофорных свойствах их антагонистов [Holenz J., Pauwels P.J., Diaz J.L., Merce R., Codony X., Buschmann H. Medicinal chemistry strategies to 5-НТ₆ receptor ligands as potential cognitive enhancers and antiobesity agents. Drug Disc. Today. 2006; 11:283-299]. Это привело к созданию высокоаффинных селективных лигандов («молекулярных инструментов»), а затем и клинических кандидатов. В настоящее время ряд антагонистов 5-НТ₆ рецепторов находятся на разных стадиях клинических испытаний как лекарственные кандидаты для лечения БА и шизофрении.

В этой связи поиск селективных и эффективных антагонистов серотониновых 5-НТ₆ рецепторов представляется оригинальным и перспективным подходом к созданию новых лекарственных средств для лечения широкого круга заболеваний ЦНС, в том числе неврологических и нейродегенеративных заболеваний и когнитивных расстройств.

В литературе имеется значительное число публикаций, посвященных различным лигандам серотониновых 5-НТ₆ рецепторов (5-НТ₆Р) [A.V.Ivachtchenko, Y.A.Ivanenkov,S.E.Tkachenko, Expert Opin Ther. Pat. 20, 1171-1196 (2010). A.V.Ivachtchenko, Y.A.Ivanenkov. 5НТ₆ receptor antagonists: a patent update. Part 1. Sulfonyl derivatives. Expert Opin. Ther. Patents, 22, 917-964 (2012). A.V.Ivachtchenko, Y.A.Ivanenkov, A.V.Skorenko. 5-НТ₆ receptor modulators: a patent update. Part 2. Diversity in heterocyclic scaffolds. Expert Opin. Ther. Patents, September 7, (2012); doi: 10.1517/13543776.2012.722205].

Так, например, известны 3-фенилсульфонил-хинолины, представляющие собой 8-пиперазин-1-ил-3-фенилсульфонил-хинолин (I, SB-742457) [Upton, N.; Chuang, Т.Т.; Hunter, A.J.; Virley, D.J. 5-НТ₆ receptor antagonists as novel cognitive enhancing agents for Alzheimer's disease. New-other-apeutics, 2008, 5, 458-469], метил-(8-пиперазин-1-ил-3-фенилсульфонил-хинолин-4-ил)-амин (II) [RU 2443697] и N(4),N(8),N(8)-диметил-3-фенилсульфонил-хинолин-4,8-диамин (III) [RU 2443697] и обладающие высокой антагонистической активностью по отношению к 5-НТ₆ рецепторам.

По данным источника US 7,799,774 A соединение SB-742457 проявляет активность к клонированным серотониновым 5-НТ₆ рецепторам порядка pK_i>8.0, или ~10 нМ, а по данным источника WO 2005/026125 еще меньше, порядка pK_i>7.0, или ~100 нМ. Наши исследования этих лигандов показали, что они являются мультимодальными лигандами и наряду с 5-HT₆ рецепторами проявляют активность к ряду других рецепторов. Так, SB-742457 (I), в условиях конкурентного радиолигандного связыывания при концентрации 1 мкмоль·л^-1 (фиг.1) наряду с 5-НТ₆ рецепторами (103%) показывает заметную активность по отношению к другим серотониновым (5-HT_1B (87%), 5-HT_2A (99%), 5-НТ_2В (99%), 5-HT_2C 86%)) и не селективным адренергическим β рецепторам (74%) [А.В.Иващенко, М.Г.Кадиева, О.Д.Митькин. Фармакологическая активность SB-742457. Всероссийская научная конференция (с международным участием): «Успехи синтеза и комплексообразования». Тезисы докладов. Ч.1. Секция «Органическая химия». С.118. М.: РУДН, 2012. 312 с.].

Метил-(8-пиперазин-1-ил-3-фенилсульфонил-хинолин-4-ил)-амин (II, AVN-562) на панели, включающей 33 рецептора (фиг.2), в условиях конкурентного радиолигандного связывания показал широкий спектр фармакологической активности. Этот мультимодальный лиганд II имеет пикомолярную активность по отношению к серотониновым 5-НТ₆ и 5-HT_2A рецепторам и субнаномолярную активность по отношению к серотониновым 5-HT_2B , 5-HT_2C , 5-НТ₇ , адрено α_2A , α_2B , α_2С , β₁ , дофаминовым D₁ , D_2S , гистаминовым H₃ и центральным имидазолиновым I₂ рецепторам [А.В.Иващенко, М.Г.Кадиева, О.Д.Митькин. Синтез и фармакологическая активность метил-(8-пиперазин-1-ил-3-фенилсульфонил-хинолин-4-ил)-амина. Всероссийская конференция «Органический синтез: химия и технология». Сборник тезисов докладов. С-62. Екатеринбург, 2012 г.].

N(4),N(8),N(8)-триметил-3-фенилсульфонилхинолин-4,8-диамин (III) в условиях конкурентного радиолигандного связывания на панели, включающей 35 рецепторов (фиг.3), показал, наряду с активностью по отношению к 5-НТ₆ рецепторам , наномолярную активность по отношению к 5-HT_2AP , 5-HT_2BP и 5-НТ_2СР [А.V.Ivachtchenko^a,b, М.G.Kadieva³, О.D.Mitkin^a, I.М.Okun^b. 3D structure, docking and pharmacophore models of 3-phenylsulfonylquinolin-4,8-diamines - antagonists of serotonine 5-HT₆ receptor (5-HT₆R). The 6^th International Conference "Chemistry of nitrogen containing heterocycles" (CNCH-2012), 12-16 November, 2012, Kharkiv, Ukraine].

В основном известны производные хинолина, имеющие пиперазиниловый или пипиридиниловый заместители в 8-м положение хинолинового фрагмента, раскрытые в источниках US 2007/0027161, WO 2003/080580, WO 2005/026125, WO 2005/113539 для которых заявлено в свойствах сродство к серотониновым 5-НТ₆ рецепторам, но это свойство для них не раскрыто в экспериментальных данных.

Из источника WO 2006/053785 известно производное хинолина с пиперазиниловым заместителем GSK215083 (IV), проявляющее достаточно высокую активность (pK_i=9,82) к серотониновым 5-НТ₆ рецепторам, которое, однако демонстрирует достаточно высокую активность также по отношению к 5-НТ_2В рецеторам и по отношению к 5-HT_2A рецеторам (pK_i=9,14). Кроме того соединение GSK215083 было исследовано на панели всего из 11 рецепторов и содержит меченную радиоактивным изотопом группу.

Также известны из источника WO 2007/039220 производные хинолина, общей формулы V, используемые в качестве селективных модуляторов каннабиноидных СВ2 рецепторов,

где R¹=тетрагидропиранил, морфолинил, или пиридил; R²=галоген, -CN, -CF₃, -OCF₃, -OCHF₂, C_1-3 алкил, C_1-3 алкокси, -CO С_1-3 алкил, -NR⁵R₆, R⁵ и R⁶=Н или С_1-3 алкил; X=-(CR⁷R⁸)m-; R⁷ и R⁸=Н или C_1-3 алкил; m=1-4; n=0-3; R³ и R4=Н, галоген, -CN, -CF₃, -OCF₃, -OCHF₂, С_1-3 алкил, C_1-3 алкокси, -СОС_1-3 алкил, -NR⁵R₆, -CONR⁵R₆;

A представляет собой арил, гетероарил, арил-арил, арил-гетероарил.

С целью разработки новых высокоэффективных лекарственных препаратов авторами данного изобретения выполнены широкие исследования в ряду замещенных сульфонильных производных хинолина, в результате чего найдены новые высокоэффективные и более селективные антагонисты 5-HT₆ рецепторов.

Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения:

«Агонисты» означают лиганды, которые, связываясь с рецепторами данного типа, активно способствуют передаче этими рецепторами свойственного им специфического сигнала и тем самым вызывают биологический ответ клетки.

«Азагетероцикл» означает ароматическую или неароматическую моноциклическую или полициклическую систему, содержащую в цикле, по крайней мере, один атом азота. Азагетероцикл может иметь один или более «заместителей циклической системы». «Алкил» означает алифатическую углеводородную линейную или разветвленную группу с 1-12 атомами углерода в цепи. Предпочтительными алкильными группами являются метил, этил, н-пропил, изо-пропил, циклопропил.

«Алкиламиногруппа» означает C_nH_2n+1NH- или (C_nH_2n+1)(C_nH_2n+1)N-группу, в которой алкил определен в данном разделе. Предпочтительными алкиламино группами являются метиламино, этиламино, н-пропиламино, и изо-пропиламино.

«Аминогруппа» означает -группу, замещенную или незамещенную необязательно одинаковыми «заместителями аминогруппы» и , значение которых определено в данном разделе, например, амино (H₂N-), метиламино, диэтиламино, пирролидино, морфолино, пиперазино, бензиламино или фенетиламино. «Анксиолитик» или «Транквилизатор» означает лекарственное средство, предназначенное для лечения тревожных расстройств.

«Антагонисты» означают лиганды, которые связываются с рецепторами определенного типа и не вызывают активного клеточного ответа. Антагонисты препятствуют связыванию агонистов с рецепторами и тем самым блокируют передачу специфического рецепторного сигнала.

«Антидепрессант» означает лекарственное средство, предназначенное для лечения депрессии.

«Антипсихотик» означает лекарственное средство, предназначенное для лечения психотических заболеваний.

«Арил» означает ароматическую моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 6 до 14 атомов углерода, преимуществено от 6 до 10 атомов углерода. Арил может содержать один или более «заместителей циклической системы», которые могут быть одинаковыми или разными. Представителями арильных групп являются фенил или нафтил, замещенный фенил или замещенный нафтил. Арил может быть аннелирован с неароматической циклической системой или гетероциклом. «Арилсульфонил» означает арил-SO₂-группу, в которой значение арил определено в данном разделе.

«Галоген» означает фтор, хлор, бром и йод. Предпочтительными яляются фтор, хлор и бром.

«Гетероарил» означает ароматическую или неароматическую моноциклическую или полициклическую систему, содержащую в цикле, по крайней мере, один гетероатом. Гетероарил может иметь один или более «заместителей циклической системы».

«Гидрат» означает сольват, в котором вода является молекулой или молекулами растворителя.

«Депрессия» означает большую депрессию; эпизодическую, хроническую и рецидивирующую формы большой депрессии; дистимическое расстройство (дистимию); циклотимию; аффективные расстройства; синдром сезонного аффективного расстройства; биполярные расстройства, включая биполярные расстройства I и II типа; а также другие депрессивные расстройства и состояния. Термин депрессия означает также депрессивные состояния, сопровождающие болезнь Альцгеймера, васкулярную деменцию; расстройства настроения, индуцированные алкоголем и веществами; шизоаффективные расстройства депрессивного типа; расстройства адаптации. Кроме того, депрессия включает депрессивные состояния онкологических больных; при болезни Паркинсона; депрессию после инфаркта миокарда; депрессию бесплодных женщин; педиатрическую депрессию; послеродовую депрессию; а также другие депрессивные состояния, сопровождающие соматические, невралогические и прочие заболевания.

«Заместитель» означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду (фрагменту), например, «заместитель алкильный», «заместитель аминогруппы», «заместитель арила», «заместитель гетероарила», значения которых определено в данном разделе.

«Заместитель аминогруппы» означает заместитель, присоединенный к аминогруппе. Заместитель аминогруппы представляет собой водород, алкил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, ацил, ароил, алкилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкиламинокарбонил, ариламинокарбонил, гетероариламинокарбонил, гетероциклиламинокарбонил, алкиламинотиокарбонил, ариламинотиокарбонил, гетероариламинотиокарбонил, гетероциклиламинотиокарбонил, аннелированный гетероарилциклоалкенил, аннелированный гетероарилциклоалкил, аннелированный гетероарилгетероцикленил, аннелированный гетероарилгетероциклил, аннелированный арилциклоалкенил, аннелированный арилциклоалкил, аннелированный арилгетероцикленил, аннелированный арилгетероциклил, алкоксикарбонилалкил, аралкоксикарбонилалкил, гетероаралкилоксикарбонилалкил.

«Заместитель арила или гетероарила» означает заместитель, присоединенный к арилу или гетероарилу, включая водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил, гетероциклил, аралкил, гетероаралкил, гидроксигруппа, гидроксиалкил, аминогруппа, аминоалкил, алкокси, арилокси, ацил, ароил, галоген, нитрогруппа, цианогруппа, карбоксигруппа, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил, аралкоксикарбонил, алкилоксиалкил, арилоксиалкил, гетероциклилоксиалкил, арилалкилоксиалкил, гетероциклилалкил-оксиалкил, алкилсульфонил, арилсульфонил, гетероциклилсульфонил, алкилсульфинил, арилсульфинил, гетероциклилсульфинил, алкилтио, арилтио, гетероциклилтио, алкилсульфонилалкил, арилсульфонилалкил, гетероциклилсульфонилалкил, алкилсульфинилалкил, арилсульфинилалкил, гетероциклилсульфинилалкил, алкилтиоалкил, арилтиоалкил, гетероциклилтиоалкил, арилалкилсульфонилалкил, гетероциклилалкилсульфонилалкил, арилалкилтиоалкил, гетероциклилалкилтиоалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклил, гетероцикленил, амидино, , , -, или , где и представляют собой независимо друг от друга «заместители аминогруппы», значение которых определено в данном разделе, например, водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный аралкил или необязательно замещенный гетероаралкил, или заместитель , в котором может быть ацил или ароил, а значение определено выше, или «заместителем циклической системы» являются или , в котором и вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют через и 4-7 членный гетероциклил или гетероцикленил.

«Когнитивные расстройства или нарушения когнитивных функций (cognitive disorder)» означают нарушение (ослабление) умственных возможностей, включающих внимание, память, мышление, познание, обучение, речевые, мыслительные, исполнительные и творческие способности, ориентацию во времени и пространстве, в частности, когнитивные расстройства, связанные с болезнями Альцгеймера, Паркинсона и Гантингтона; старческое слабоумие; возрастные расстройства памяти (age-associated memory impairment, AAMI); дисметаболические энцефалопатии; психогенные нарушения памяти; амнезия; амнестические расстройства; транзиторная глобальная амнезия; диссоциативная амнезия; васкулярная деменция; легкие (или умеренные) когнитивные нарушения (mild cognitive impairment, MCI); синдром нарушения внимания с гиперактивностью (attention deficit hyperactivity disorder, AD/HD); когнитивные нарушения, сопровождающие психотические заболевания, эпилепсию, делирий, аутизм, психозы, синдром Дауна, биполярные расстройства и депрессию; СПИД-ассоциированная деменция; деменция при гипотиреоидизме; деменция, индуцированная алкоголем, веществами, вызывающими зависимость, и нейротоксинами; деменция, сопровождающая нейродегенеративные заболевания, например, мозжечковую дегенерацию и амиотрофический латеральный склероз; когнитивные расстройства, развивающиеся при инсульте, инфекционных и онкологических заболеваниях головного мозга, а также при черепно-мозговых травмах; нарушения когнитивных функций, ассоциированные с аутоиммунными и эндокринными заболеваниями; и прочие когнитивные расстройства.

«Лекарственное начало» (лекарственная субстанция, лекарственное вещество, drug-substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного средства (препарата).

«Лекарственное средство (препарат)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции) в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей и др. готовых форм, предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего. «Лиганды» (от латинского ligo - связывать) представляют собой химические вещества (малая молекула, неорганический ион, пептид, белок и прочее), способные взаимодействовать с рецепторами, которые трансформируют это взаимодействие в специфический сигнал.

«Нейродегенеративное заболевание» означает специфическое состояние и заболевание, характеризующиеся повреждением и первичной гибелью популяций нервных клеток в определенных областях центральной нервной системы. Нейродегенеративные заболевания включают, но не ограничивают, болезни Альцгеймера и Паркинсона; болезнь (хорею) Хантингтона; рассеянный склероз; мозжечковую дегенерацию; амиотрофический латеральный склероз; деменцию с тельцами Леви; спинальную мускульную атрофию; периферическую нейропатию; губчатый энцефалит («коровье бешенство», Creutzfeld-Jakob Disease); СПИД-ассоциированную деменцию; мультиинфарктную деменцию; лобно-височную деменцию; лейкоэнцефалопатию (болезнь исчезающей белого вещества); хронические нейродегенеративные заболевания; инсульт; ишемическое, реперфузионное и гипоксическое повреждение мозга; эпилепсия; церебральная ишемия; глаукома; черепно-мозговая травма; синдром Дауна; энцефаломиелит; менингит; энцефалит; нейробластома; шизофрения; депрессия. Кроме того, нейродегенеративные заболевания включают патологические состояния и расстройства, развивающиеся при гипоксии, злоупотреблении веществами, вызывающими зависимость, при воздействии нейротоксинов, инфекционных и онкологических заболеваниях головного мозга, а также нейрональные повреждения, ассоциированные с аутоиммунными и эндокринными заболеваниями; и прочие нейродегенеративные процессы.

«Низший алкил» означает линейный или разветвленный алкил с 1-4 атомами углерода.

«Ноотропы» или «ноотропики», они же нейрометаболические стимуляторы - вещества, принимаемые для улучшения умственных способностей.

«Психические расстройства» (психические заболевания) - это болезни или болезненные состояния, связанные с нарушением и/или расстройством психики. Психические расстройства включают аффективные расстройства (биполярные аффективные расстройства, большая депрессия, гипомания, малая депрессия, маниакальный синдром, синдром Котара, циклотимия, шизоаффективное расстройство и др.); интеллектуально-мнестические расстройства, мании (гипомания, графомания, клептомания, магазиномания, мания преследования, мономания, порнографомания, эротомания и др.); расстройство множественной личности, аменцию, белую горячку, бред, бредовый синдром, галлюцинаторный синдром, галлюцинации, галлюциноз, гомицидоманию, делирий, иллюзию, кверулянтство, клиническую ликантропию, макропсию, манихейский бред, микропсию, наркоманию, нервную анорексию, онейроидный синдром, пароноид, паранойю, парафрению, псевдогаллюцинации, психоз, синдром Котара, шизоаффективное расстройство, шизотипическое расстройство, шизофрению, шизофреноподобное расстройство, шизофреноморфное расстройство, синдром Шребера, Даниэль Пауля); фобии (агарофобию, арахнофобию, аутофобию, верминофобию, гидрозофобию, гидрофобию, демофобию, зоофобию, канцерофобию, клаустрофобию, климакофобию, ксенофобию, мизофобию, радиофобию, светобоязнь, сколицефобию, скотофобию, социофобию, тетрафобию, трискаидефобию, эротофобию); алкогольные психозы, алкогольный палимпсест, аллотриофагию, афазию, графоманию, диссоциативные фуги, диссоциативные расстройства, дисфории, интернет-зависимости, ипохондрию, истерию, копрофемию, манию преследования, меланхолию, мизантропию, обсессию, панические атаки, синдром Аспергера, синдром Капгра, синдром Мюнхгаузена, синдром Ретта, синдром Фреголи, синдром дефицита внимания и гиперактивности, синдром навязчивых состояний, синдром последствий хронической наркотизации, синдром психического автоматизма, синдром раннего детского аутизма, сумашествие, тафофилию, тревожные состояния, синдром Хикикомори, эротографоманию и др.

«Психотические заболевания» это все виды шизофрении; шизофреноподобные заболевания; шизотипические расстройства; шизоаффективные расстройства, включая биполярный и депрессивный типы; бредовые расстройства, включая бред отношения, преследования, величия, ревности, эротомании, а также ипохондрический, соматический, смешанный и недифференцируемый бред; кратковременные психотические расстройства; индуцированные психотические расстройства; индуцированные веществами психотические расстройства; а также другие психотические расстройства.

«Рецепторы» (от латинского recipere - получать, узнавать) представляют собой биологические макромолекулы, расположенные на цитоплазматической мембране клетки или внутриклеточно, способные специфически взаимодействовать с ограниченным набором физиологически активных веществ (лигандов) и трансформировать сигнал об этом взаимодействии в определенный клеточный ответ.

«Тревожные расстройства» (anxiety) означает генерализованную (неконкретную) тревогу; острое неконтролируемое беспокойство; паническое заболевание; фобии, например, агорафобию (сильная боязнь людных мест) или социальную фобию (сильную боязнь унижения перед другими людьми) или любую конкретную фобию (сильную боязнь конкретных предметов, животных или ситуаций, в виде боязни высоты, медицинских процедур, лифтов, открытого пространства и т.п.); навязчивые состояния (обсессивно-компульсивное расстройство); посттравматическиое стрессовое расстройство и острое стрессовое расстройство. Кроме того, к тревожным расстройствам относятся тревожные состояния, индуцированные алкоголем или веществами; тревога при расстройствах адаптации; а также смешанные формы тревожных расстройств и депрессии.

«Шизофрения» означает все известные типы, формы и варианты заболевания, в том числе: простую, гебефреническую, параноидную, гипертоксическую (фебрильную), кататоническую, шизоаффективную, остаточную или недифференцируемую шизофрению и/или формы шизофрении, определенные в классификации Американской Психиатрической Ассоциации (American Psychiatric Association; in: Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, IV Edition, Washington D.C. 2000) или в Международной классификации (International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems) или любые другие известные формы.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение формулы 1 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлимых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как, консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как, парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, алгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения, в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения. Фармацевтические композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем.

«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально, исходя из очищенного свободного основания заявленного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные. (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Соли заявленных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид и бикарбонат калия, поташ, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли заявленных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как, холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты - лизин, орнитин и аргинин.

Предметом настоящего изобретения являются новые (3-арилсульфонил-хинолин-8-ил)-диалкил-амины общей формулы 1, их возможно кристаллические формы, поликристаллические формы, фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты,

где Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный в положении 3 атомом галогена, или нафтил. R₁ и R₂ представляют собой незамещенный метил или этил.

Предпочтительными (3-арилсульфонил-хинолин-8-ил)-диалкил-аминами общей формулы 1 являются:

диметил-(3-фенилсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.1,

диметил-[3-(3-хлорфенилсульфонил)-хинолин-8-ил]-амин 1.2,

диметил-[3-(3-фторфенилсульфонил)-хинолин-8-ил]-амин 1.3,

диэтил-(3-фенилсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.4,

диэтил-[3-(3-хлорфенилсульфонил)-хинолин-8-ил]-амин 1.5,

диметил-(3-нафталин-1-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.6,

диметил-(3-нафталин-2-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.7,

диэтил-(3-нафталин-1-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.8, и

диэтил-(3-нафталин-2-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.9.

Новые (3-арилсульфонил-хинолин-8-ил)-амины общей формулы 1 получают восстановительным аминированием формальдегидом или ацетальдегидом 3-арилсульфонилхинолин-8-иламина общей формулы 2 по следующей схеме:

Следует отметить, что новые соединения общей формулы 1, в которых R=Me или Et, обладают особенно высокой антагонистической активностью по отношению к 5-HT₆ рецепторам. В частности соединение 1.1 (R=Me, Ar=Ph) в условиях функционального анализа активности по отношению к 5-НТ₆Р имеет , в то время, как в тех же условиях полученные нами соединения 2.1 (также соответствующее общей формуле 1, в которой R=H, Ar=Ph) с и соединения 4.1 (также соответствующее общей формуле 1, в которой один из R=H, а другой R=Me и Ar=Ph) с уступают соединению 1.1 по активности на 2 порядка.

Соединения общей формулы 1 имеют высокую селективность взаимодействия с 5-HT₆ рецепторами. Так, например, соединений 1.1 в условиях конкурентного радиолигандного связывания [I. Okun, S.E. Tkachenko, A. Khvat, O. Mitkin, V. Kazey, A.V. Ivachtchenko. From Anti-allergic to Anti-Alzheimer's: Molecular Pharmacology of Dimebon™. Current Alzheimer Research, 2010, 7, 97-112] на панели, включающей 35 рецептора (фиг.4), демонстрирует наряду с высокой активностью по отношению к 5-HT₆ рецепторам только некоторую активность еще и по отношению к 5-НТ₂в рецеторам.

Данные представленные в таблице 1 убедительно свидетельствуют о более высокой селективности взаимодействия соединений 1.1 по сравнению с селективностью известных лигандов SB-742457 (I), AVN-562 (II) и III, фармакологические профайлы активности которых представлены на фигурах 1-3.

Предметом настоящего изобретения являются также селективные антагонисты серотониновых 5-HT₆ рецепторов, представляющие собой соединения общей формулы 1, их кристаллические формы, поликристаллические формы, фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты.

Предметом данного изобретения являются также соединения общей формулы 1, их кристаллические формы, поликристаллические формы, фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты в качестве лекарственного начала для фармацевтических композиций и лекарственных средств.

Предметом данного изобретения является лекарственное начало для фармацевтических композиций и лекарственных средств, представляющее собой, по крайней мере, один селективный антагонист сератониновых 5-HT₆ рецепторов, представляющий собой соединения общей формулы 1, их кристаллические формы, поликристаллические формы, фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты.

Предметом данного изобретения является также фармацевтическая композиция для лечения и предупреждения развития состояний и заболеваний ЦНС людей и теплокровных животных, патогенез которых связан с 5-HT₆ рецепторами, содержащая фармацевтически эффективное количество нового лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере, одно соединение общей формулы 1, его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат.

Фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемые эксципиенты. Под фармацевтически приемлемыми эксципиентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители. Фармацевтическая композиция наряду с лекарственным началом по настоящему изобретению может включать и другие активныеингредиенты, при условии, что они не вызывают нежелательных эффектов, например, аллергических реакций.

При необходимости использования фармацевтических композиций по настоящему изобретению в клинической практике они могут смешиваться для изготовления различных форм, при этом они могут включать в свой состав традиционные фармацевтические носители; например, пероральные формы (такие как, таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, растворы или суспензии); формы для инъекций (такие как, растворы или суспензии для инъекций, или сухой порошок для инъекций, который требует лишь добавления воды для инъекций перед использованием); местные формы (такие как, мази или растворы).

Носители, используемые в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, представляют собой носители, которые применяются в сфере фармацевтики для получения распространенных форм, в том числе: в пероральных формах используются связующие вещества, смазывающие агенты, дезинтеграторы, растворители, разбавители, стабилизаторы, суспендирующие агенты, бесцветные агенты, корригенты вкуса; в формах для инъекций используются антисептические агенты, солюбилизаторы, стабилизаторы; в местных формах используются основы, разбавители, смазывающие агенты, антисептические агенты.

Предметом данного изобретения является также способ получения новой фармацевтической композиции смешением с инертным наполнителем и/или растворителем лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере, одно из соединений общей формулы 1 или его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат.

Предметом данного изобретения является лекарственное средство в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, для профилактики и лечения заболеваний центральной нервной системы, патогенез которых связан с 5-HT₆ рецепторами, у теплокровных животных и людей, представляющее собой, по крайней мере одно из соединений общей формулы 1 или его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат.

Более предпочтительным является лекарственное средство в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, для профилактики и лечения болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Гантингтона, включающее фармацевтически эффективное количество нового лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере, одно из соединений общей формулы 1, его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, или фармацевтическую композицию, содержащую новое лекарственное начало.

Предметом данного изобретения является также лекарственное средство в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, для профилактики и лечения психических расстройств и шизофрении, включающее фармацевтически эффективное количество лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере, одно из соединений общей формулы 1, его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, или фармацевтическую композицию, содержащую новое лекарственное начало.

Более предпочтительным является лекарственное средство (анксиолитик или транквилизатор) для профилактики и лечения тревожных расстройств, включающее фармацевтически эффективное количество лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере, одно из соединений общей формулы 1, его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, или фармацевтическую композицию, содержащую новое лекарственное начало.

Более предпочтительным является лекарственное средство (ноотропик) для профилактики и лечения гиперкинетических расстройств, в частности для улучшения умственных способностей, включающее фармацевтически эффективное количество лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере одно из соединений общей формулы 1, его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, или фармацевтическую композицию, содержащую новое лекарственное начало.

Предметом данного изобретения является также терапевтический коктейль для профилактики и лечения различных заболеваний, патогенез которых связан с 5-HT₆ рецепторами у животных и людей, включающий лекарственное средство в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, включающее фармацевтически эффективное количество лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере одно из соединений общей формулы 1, его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, или фармацевтическую композицию, содержащую новое лекарственное начало.

Предметом данного изобретения является также терапевтический коктейль для профилактики и лечения неврологических расстройств, нейродегенеративных и когнитивных заболеваний у животных и людей, в том числе для профилактики и лечения болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Гантингтона, психических расстройств и шизофрении, гипоксии-ишемии, гипогликемии, судорожных состояний, мозговых травм, латиризма, бокового амиотрофического склероза, ожирения и инсульта, включающий фармацевтически эффективное количество лекарственного начала, представляющего собой, по крайней мере одно из соединений общей формулы 1, его кристаллическая форма, поликристаллическая форма, фармацевтически приемлемая соль и/или гидрат, или фармацевтическую композицию, содержащую новое лекарственное начало.

Терапевтические коктейли для профилактики и лечения невралгических расстройств, нейродегенеративных и когнитивных заболеваний у животных и людей, в том числе для профилактики и лечения болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Гантингтона, психических расстройств и шизофрении, гипоксии-ишемии, гипогликемии, судорожных состояний, мозговых травм, латиризма, бокового амиотрофического склероза и инсульта, наряду с лекарственными средствами по данному изобретению, могут включать другие лекарственные средства, такие как: нестероидные противовоспалительные препараты (Ортофен, Индометацин, Ибупрофен и т.п.); ингибиторы ацетилхолинэстеразы (Такрин, Амиридин, Физостигмин, Арисепт, Phenserine и т.п.); эстрогены (например, Эстрадиол); антагонисты NMDA-рецепторов (например, Мемантин, Neramexane); ноотропные препараты (например, Пирацетам, Фенибут и т.п.); модуляторы АМРА рецепторов (например, Ampalex); антагонисты каннабиноидных рецепторов СВ-1 (например, Rimonabant); ингибиторы моноаминооксидазы МАО-В и/или МАО-А (например, Rasagiline); антиамилоидогенные препараты (например, Tramiprosate); вещества, понижающие нейротоксичность бета-амилоида (например, Индол-3-пропионовая кислота); ингибиторы гамма- и/или бета-Секретазы; агонисты мускариновых рецепторов Ml (например, Cevimeline); хелаторы металлов (например, Clioquinol); антагонисты ГАМК(В) рецепторов (например, CGP-36742); моноклональные антитела (например, Bapineuzumab); антиоксиданты; нейротрофические агенты (например, Церебролизин); антидепрессанты (например, Имипрамин, Сертралин и т.п.) и прочие.

В соответствии с данным изобретением способ профилактики и лечения различных заболеваний центральной нервной системы, патогенез которых связан с 5-HT₆ рецепторами у животных и людей, заключается во введении фармацевтически эффективного количества нового лекарственного начала, новой фармацевтической композиции, нового лекарственного средства или нового терапевтического коктейля.

Лекарственные средства могут вводиться перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно или местно). Клиническая дозировка лекарственного начала (субстанции), фармацевтической композиции или лекарственного средства, включающих фармацевтически эффективное количество лекарственного начала, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 2~500 мг, предпочтительно - 50~300 мг. Поэтому во время приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 2~500 мг, предпочтительно - 2~300 мг. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно - от одного до шести раз).

Изобретение поясняется чертежами.

Фиг.1. Спектр фармакологической активности 1 мкмоль·л^-1 SB-742457 (I) в условиях конкурентного радиолигандного связывания на панели, включающей 33 рецептора.

Фиг.2. Спектр фармакологической активности метил-(8-пиперазин-1-ил-3-фенилсульфонил-хинолин-4-ил)-амина (II, AVN-562) в условиях конкурентного радиолигандного связывания на панели, включающей 33 рецептора.

Фиг.3. Спектр фармакологической активности N(4),N(8),N(8)-триметил-3-фенилсульфонилхинолин-4,8-диамина (III) в условиях конкурентного радиолигандного связывания на панели, включающей 35 рецептора.

Фиг.4. Спектр фармакологической активности диметил-(3-фенилсульфонилхинолин-8-ил)-амина (1.1) в условиях конкурентного радиолигандного связывания на панели, включающей 35 рецептора.

Фиг.5. Улучшение памяти у самцов мышей линии BALB/c, нарушенной скополамином, под действием соединения 1.1 и препаратом сравнения (мемантин) в тесте «Пассивное избегание мышей в челночной камере». Время, через которое животные делают первый заход в темную камеру. Отличие от скополамина: * - по LS-тесту Фишера.

Фиг.6. Улучшение памяти у самцов мышей линии BALB/c, нарушенной скополамином, под действием соединения 1.1 и препаратом сравнения (мемантин) в тесте «Пассивное избегание мышей в челночной камере». Время, в течение которого животные находятся в светлой камере. Отличие от скополамина: * - по LS-тесту Фишера.

Фиг.7. Улучшение памяти у самцов мышей линии BALB/c, нарушенной скополамином, под действием соединения 1.1 и препаратом сравнения (мемантин) в тесте «Пассивное избегание мышей в челночной камере». Число заходов в темную камеру. Отличие от скополамина: * - по LS-тесту Фишера.

Фиг.8. Влияние соединения 1.1 на препульсное торможение вздрагивания в ответ на акустический стимул. Отличие от апоморфина: * - по LS-тесту Фишера; & - по критерию Хи-квадрат.

Фиг.9. Продолжительность депрессивно-подобного поведения и плавания мышей в центре и на периферии бассейна в тесте Порсолта (средняя величина±стандартная ошибка) после введения мышам в течение 4 дней в дозе 1 мг/кг соединения. Отличие от группы, получавшей плацебо: * - p<0,05.

Представленные ниже примеры иллюстрируют, но не ограничивают данное изобретение.

Пример 1. Общий способ получения (3-арилсульфонилхинолин-8-ил)-диалкил-аминов общей формулы 1. К раствору (2,75 ммоль) 3-арилсульфонилхинолин-8-иламина гидрохлорида 2-HCl в 14 мл ацетонитрила добавили 2 мл (27,5 ммоль) альдегида, 518 мг (8,25 ммоль) цианоборгидрида натрия и 0,2 мл уксусной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре 0,5 часа, затем добавили еще 0,2 мл уксусной кислоты. Перемешивали еще 0,5 часа в тех же условиях. Продукт реакции экстрагировали диэтиловым эфиром, промыли 5% водным раствором гидроксида натрия, затем рассолом, органический слой сушили над сульфатом натрия и хроматографировали на силикогеле смесью этилацетат: гексан (7:3). Получали (3-арилсульфонилхинолин-8-ил)-диалкил-амины общей формулы 1.

Диметил-(3-фенилсульфонилхинолин-8-ил)-амин 1.1 LC-MS (М+1) 313. ¹H ЯМР-спектр (ДМСО-d₆), δ, м.д.: 9,15 (с, 1H), 8,96 (с, 1Н), 8,07 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,67 (м, 4Н), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 7,22 (м, 1Н), 3,09 (с, 6Н). Диметил-[3-(3-хлорфенилсульфонил)-хинолин-8-ил]-амин 1.2 LC-MS (М+1) 347. Диметил-[3-(3-фторфенилсульфонил)-хинолин-8-ил]-амин 1.3 LC-MS (М+1) 331. Диэтил-(3-фенилсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.4 LC-MS (М+1) 341. Диэтил-[3-(3-хлорфенилсульфонил)-хинолин-8-ил]-амин 1.5 LC-MS (М+1) 375. Диметил-(3-нафталин-1-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.6 LC-MS (М+1) 363. Диметил-(3-нафталин-2-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.7 LC-MS (М+1) 363. Диэтил-(3-нафталин-1-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.8 LC-MS (М+1) 391. Диэтил-(3-нафталин-2-илсульфонил-хинолин-8-ил)-амин 1.9 LC-MS (М+1) 391.

Пример 2. Определение антагонистической активности соединений общей формулы 1 по отношению к 5-HT₆ рецепторам. Соединения общей формулы 1 были испытаны на их способность препятствовать активации 5-HT₆ рецепторов серотонином. 5-HT₆ рецепторе был суб-клонирован в вектор T-Rex (Invitrogen, Carlsbad, СА), который, в свою очередь, был экспрессирован в клетках НЕК-293 (5-HT₆R-HEK). Клетки выращивали в инкубаторе при 37°C в атмосфере 5%:95% CO₂:воздух (100% влажность) в Т-175 культуральных флаконах в среде ДМЕМ с добавлением 10% FBS, 1% AAS, blasticidine S, and zeocin (все реагенты были приобретены в Invitrogen, Carlsbad, СА). Экспрессия 5-HT₆ рецепторов активировалась добавлением раствора тетрациклина (1 мкг/мл) в соответствии с рекоммендациями производителя T-Rex вектора. Тетрациклин добавляли за сутки до начала экспериментов. В день экспериментов, клетки переводили в суспензию с помощью кратковременной обработки (5-10 мин) 6 мМ ЭДТА, промывали HBSS солевой средой и осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 6 минут. К образовавшемуся осадку клеток добавляли ДМЕМ среду без сыворотки и количество клеток определялось с помощью камеры Горяева. Клетки ресуспендировали до концентрации 0.67×10⁶ в СБ2 буфере, состоящем из HBSS с добавлением 5 mM HEPES, pH 7.4, 0.05% BSA, 1 mM IBMX (SigmaAldrich, St. Louis, МО) и Alexa Fluor 647-anti cAMP antibody (PerkinElmer, Waltham, MA). По 6 мкл клеточной суспензии (~4000 клеток/лунку) было перенесено в лунки 384-луночной плашки (PerkinElmer White OptiPlate). Испытуемые соединения в разных концентрациях были предварительно смешаны с сертотонином (Sigma, МО) и эти растворы (6 мкл) были добавлены с помощью BIOMEK NX в ячейки, содержащие клеточную суспензию в среде СБ2 (конечные концентрации: серотонин - 10 нМ, ДМСО - 0.32%, IBMX - 500 мкМ). Каждая плашка, кроме того, содержала наборы разных концентраций серотонина и цАМФ для посторения калибровочных кривых. После 2 часов инкубации со смесями серотонин/тест-соединение, клетки обрабатывали в соответствии с протоколом, прилагаемом к тест-набору cAMP LANCE (PerkinElmer, Waltham, MA). LANCE сигнал измеряли с помощью мультимодального плашечного ридера VICTOR 3 (PerkinElmer, Waltham, MA), используя встроенный алгоритм для LANCE детекции. Зависимости клеточных ответов на серотонин в присутствии разных концентраций тест-соединений и вычисления концентраций полумаксимального ингибирования (IC₅₀) проводили на основе 4-х параметрического уравнения используя Prism 5 (Graph-Pad, СА). Все эксперименты проводили в дубликатах. Стандартные отклонения (SD) рассчитывались с помощью встроенного в Призм статистического анализа. Величины констант ингибирования для блокирования 5-HT₆ рецепторов в функциональном тесте вычисляли с помощью модифицированного уравнения Ченг-Пруссова [31]: , где IC₅₀ - это концентрация антагониста, вызывающая 50% блокаду вызванного серотонином клеточного ответа; [Ag] - это концентрация серотонина (10 нМ), при которой измерялась клеточная реакция, и ЕС₅₀ - это концентрация серотонина вызывающая 50% от максимального клеточного сигнала, вычисляемая по калибровочной серотониновой кривой. По данным 4-х независимых экспериментов, проведенных в различные дни в 4-5 повторениях (разные плашки измеряемые в каждый день), средняя величина ЕС₅₀ в 5-HT₆R-НЕК клетках была равна 1.91±0.13 нМ.

Как видно из представленных в таблице 2 данных, испытанные соединения проявляют высокую антагонистическую активность по отношению к серотониновым 5-HT₆ рецепторам.

Пример 3. Получение лекарственного средства в форме таблеток. Смешивают 1600 мг крахмала, 1600 мг измельченной лактозы, 400 мг талька и 1000 мг соединения 1.1 и спрессовывают в брусок. Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 560 мг каждая.

Пример 4. Получение лекарственного средства в форме капсул. Тщательно смешивают соединение 1.1 с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.

Пример 5. Получение лекарственного средства в форме инъекционных композиций для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций. Смешивают 500 мг соединения 1.1 с 300 мг хлорбутанола, 2 мл пропиленгликоля и 100 мл инъекционной воды. Полученный раствор фильтруют и помещают по 1 мл в ампулы, которые запаивают.

Пример 6. Ноотропное действие (улучшение памяти нарушенной скополамином) соединений общей формулы 1 в тесте «Пассивное избегание мышей в челночной камере». Использовалась челночная камера (Ugo Basile, Италия), которая состояла из двух отсеков. Все стенки одного из отсеков были непрозрачными, а второй отсек имел прозрачную крышку. Отсеки соединялись отверстием, которое могло закрываться вертикальной дверцей. Пол состоял и поперечных металлических прутьев, на которые могли подаваться импульсы постоянного тока. Эксперименты проведены на взрослых самцах мышей линии BALB/c весом 20-24 г.

В первый день опыта за 30 минут до обучения мышам внутрибрюшинно вводили физиологический раствор, скополамин (0,3 мг/кг) или скополамин в сочетании с соединением 1.1. В каждой группе использовалось не менее 8 животных. Животных помещали в светлый отсек и регистрировали латентный период первого захода в темную камеру. При этом дверцу между отсеками закрывали, и животное в течение 3 секунд получало наказание током 0,6 мА. После этого животное возвращали в жилую клетку. Через 22-24 часа животное вновь помещали в светлый отсек челночной камеры и регистрировали латентный период первого захода в темный отсек, общее время пребывания в светлом отсеке и число заходов в темный отсек. Продолжительность наблюдения составляла 5 минут.

Эксперимент проводили в светлое время суток в изолированном лабораторном помещении с использованием "белого шума" интенсивностью около 70 дБ над порогом слышимости человека.

Скополамин вызывает нарушение обучения (памяти), которое выражается в виде увеличения латентного периода 1-го захода в темный отсек, увеличения времени пребывания в светлом отсеке и уменьшении числа заходов в темный отсек.

Способность соединения 1.1 улучшать обучение, нарушенное скополамином, рассматривается как свидетельство наличия у них ноотропного действия. Полученные результаты (фиг.5-7) свидетельствуют о способности соединения 1.1 оказывать более эффективно ноотропное действие.

Пример 7. Аптипсихотическая активность соединений общей формулы 1 в тесте «Препульсное торможение вздрагивания у мышей». В экспериментах использовали мышей линии SHK массой 24-30 г.Эксперименты проводили в светлое время суточного цикла животных. Апоморфина гидрохлорид и галоперидол были получены от компании Сигма Кемикалз, США. Апоморфина гидрохлорид растворяли в 0,1% растворе аскорбиновой кислоты, приготовленном на стерилизованной воде, и вводили подкожно за 15 минут до теста. Галоперидол растворяли в стерилизованной воде с использованием эмульгатора Твин 80 и вводили внутрибрюшинно за 60 минут до теста. Соединение 1.1 растворяли в стерилизованной воде и вводили подкожно за 60 минут до теста. Объем вводимой жидкости составлял 10 мл/кг. Контрольным животным вводили 0,1%» раствор аскорбиновой кислоты, приготовленный на стерилизованной воде с Твином 80.

Аппарат состоял из камеры, выполненной из прозрачного плексигласа (производитель - компания Коламбус Инструменте, США), размещенной на платформе, которая находилась внутри звукоизолирующего кабинета. В 2 см от платформы находилась высокочастотная звуковая колонка, через которую передавались звуковые стимулы. При вздрагивании животного возникали колебания платформы, которые улавливались аналоговым преобразователем и регистрировались компьютером. Уровень фонового шума составлял 65 дБ. Животные получали по 4 предъявления одиночного тестирующего («пульсового») стимула длительностью 50 мс и громкостью 105 дБ или предваряющего («пре-пульсового») стимула длительностью 20 мс громкостью 85 дБ, за которым через 30 мс следовал пульсовой стимул длительностью 50 мс громкостью 105 дБ. Интервал между повторными предъявлениями пульсового или пре-пульсового в сочетании с пульсовым стимулов составлял 10 с. Ослабление вздрагивания в ответ на пульсовой стимул при наличии пре-пульсового стимула рассчитывали в процентах по отношению к амплитуде вздрагивания в ответ на изолированный пульсовой стимул. Введение апоморфина, который используется в экспериментах на животных для моделирования психото-подобных состояний, вызывало уменьшение препульсного торможения вздрагивания, что отражает снижение способности ЦНС фильтровать сенсорные стимулы. Результаты эксперимента показывают (фиг.8), что галоперидол (1 мг/кг) и исследуемое соединение 1.1 (1 мг/кг) предупреждали нарушение препульсного торможения вздрагивания при введении апоморфина.

Пример 8. Антидепрессантное действие антагонистов общей формулы 1 в тесте «Поведение мышей в тесте вынужденного плавания Порсолта». Использовался аппарат представляющий собой пластмассовый сосуд, заполненный водой при температуре 20-22°C до высоты 18 см. Эксперименты проводили на взрослых самцах мышей линии BALB/c весом 20-24 г.Животное помещали в воду и в течение 15 минут регистрировали продолжительность неподвижного зависание в воде - так называемое поведение "отчаяния" считающегося мерой депрессивно-подобного состояния. Для анализа использовали последние 5 мин теста. В экспериментах использовалось автоматизированное распознавание движений с помощью видеосистемы и программы Any-maze. Способность соединения 1.1 после введения в течении 4 дней в дозе 1 мг/кг уменьшать данный показатель (фиг.9) рассматривается как свидетельство наличия антидепрессантного действия.