ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И НАБОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, а именно к новым фармацевтическим композициям и фармацевтическим наборам для лечения бактериальных инфекций и нового способа лечения заболеваний, связанных с бактериальными инфекциями, в том числе туберкулеза.

До последнего времени изыскания в области терапии туберкулеза шли по направлению поиска новых действующих веществ и их комбинаций с известными лекарственными средствами (WO 1995/13807, опубл. 26.05.1995; ЕР 0650728 A1, опубл. 03.05.1995; EP 0398165 А1, опубл. 22.11.1990; US 5399558, опубл. 21.03.1995) либо создания новых лекарственных форм для таких известных лекарственных средств, как изониазид, рифампицин, этамбутол (WO 88/006038, опубл. 25.08.1988; US 5811088, опубл. 22.091998; RU 2143900 C1, опубл. 10.01.2000; RU 2087146 C1, опубл. 20.081997; RU 2125451 C1, опубл. 27.01.1999).

Известна эффективная группа антибиотиков рифамицинов, относящихся к классу анзамицинов, образуемых при биосинтезе одним из видов актиномицетов, а также их полусинтетические производные. Наиболее широкими спектрами антимикробного действия и хорошей всасываемостью обладают, например, Рифампицин и Рифалазил - полусинтетические производные рифамицина SV.

К Рифампицину чувствительны многие грамположительные микроорганизмы (минимальная подавляющая концентрация 0,001-0,1 мкг/мл) и большое число грамотрицательных бактерий (минимальная подавляющая концентрация 1-10 мкг/мл). В низких концентрациях действует на Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Helicobacter pylory, Clostridium difficile, Bructlla spp., Legionella pntumophila, Rickettsia typhi, Mycobacterium leprae, Staphylococcus aureus, в т.ч. на метициллинрезистентные штаммы, Staphylococcus epidermidis, стрептококки; в высоких концентрациях - на некоторые грамотрицательные микроорганизмы (Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Neisseria meningitides, Neisseria gonorrhoeae, в т.ч. бета-лактамазообразующие). Активен в отношении Haemophilus influenza (в т.ч. устойчивых к Ампициллину и Хлорамфениколу), Haemophilus ducreyi и других грамположительных анаэробов. Уникальным свойством Рифампицина является высокая активность против микобактерий туберкулеза (минимальная подавляющая концентрация 0,005-0,5 мкг/мл), что определяет ведущее место этого антибиотика в основных схемах лечения туберкулеза. Рифампицин обладает высокой активностью против грамположительных кокков, в т.ч. множественноустойчивых, включая так называемые метициллинрезистентные. Более 95% пиогенных стрептококков, устойчивых к пенициллину и другим антибиотикам, а также пневмококки чувствительны к Рифампицину. К Рифампицину высокочувствительны возбудители сибирской язвы и патогенные клостридии. Рифампицин активен против многих штаммов бактероидов, протеев, провиденсий, возбудителей болезни легионеров, бруцеллеза. Рифампицин является одним из наиболее активных препаратов в лечении лепры. Он превосходит тетрациклины по активности в отношении хламидий - возбудителей трахомы, пситтакоза, лимфогранулемы. Рифампицин высокоэффективен против риккетсий Провачека.

Механизм антимикробного действия Рифампицина отличается от всех других антибиотиков. Он подавляет синтез РНК путем образования комплекса с ДНК-зависимой РНК-полимеразой. Этот эффект достаточно избирателен. Рифампицин действует бактерицидно на бактерии, находящиеся в стадии пролиферации, проникает внутрь клетки, подавляя находящегося там возбудителя. Устойчивость к Рифампицину быстро развивается, в процессе лечения. Для преодоления развития устойчивости к Рифампицину препарат назначают в сочетании с другими антибиотиками.

Установлен синергизм Рифампицина с Эритромицином (в отношении стафилококков), с Тетрациклином (в отношении сальмонелл, эшерихий, шигелл), с Новобиоцином (в отношении сальмонелл). В отношении многих микроорганизмов выявлен синергидный или аддитивный эффект с Триметопримом. Поэтому применяют фиксированные сочетания Рифампицина с Триметопримом (препарат рифаприм). При лечении туберкулеза Рифампицин назначают лишь с другими туберкулостатиками (стрептомицином, этамбутолом, изониазидом). Рифампицин обладает высокой эффективностью при приеме внутрь: в некоторых тканях обнаруживается в концентрациях, превышающих наблюдаемую в сыворотке крови. Он проникает через гематоэнцефалический барьер, плацентарный барьер, клеточные мембраны; выводится главным образом с желчью.

Рифалазил, также известный как КРМ-1648 или benzoxazinorifamycin [US 4690919, опубл. 01.09.1987; US 4983602, опубл. 08.01.1991; US 6316433, 13.11.2001; US 6566354, опубл. 20.05.2003], обладает антибактериальной активностью в отношении широкого спектра патогенов (включая Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Helicobacter pylory Clostridium difficile, микобактерии, метициллинорезистентные штаммы Staphylococcus aureus и другие грамположительные полирезистентные бактерии и внутрибольничные инфекции), длительным периодом полувыведения (более 100 часов), а также высоким проникновением в клетки (>300:1). Все вышеизложенное свидетельствует о более высокой эффективности Рифалазила по сравнению со стандартными схемами терапии при целом ряде заболеваний, в том числе при туберкулезе и негонококковых уретритах.

Рифалазил используют также для комбинированного лечения бактериальных инфекций, например, совместно с бета-лактамными ингибиторами, аминогликазидами, тетрациклинами, липопептидами, макролидами, кетолидами, линкозамидами, стрептогаминами, сульфаниламидами, оксазолидинонами, хинолонами, ципрофлоксацином и др. [US 20110117154, опубл. 19.05.2011].

Рифабутин, так же как и вышеописанные препараты, обладает широким спектром антибактериального действия [http://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_2345.htm]. Селективно ингибирует ДНК-зависимую РНК-полимеразу у чувствительных штаммов Высокоэффективен в отношении вне- и внутриклеточно расположенных Mycobacterium spp., b т.ч. Mycobacterium tuberculosis, комплекса Mycobacterium avium-intracellulare, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium xenopi. Более активен, чем Рифампицин, в отношении внутриклеточных микобактерий туберкулеза (при концентрациях, в 2,5 раза меньших). Для лечения активного туберкулеза применяется применять в комбинации с другими противотуберкулезными средствами. Оказывает иммуностимулирующее действие.

Рифаксимин [http://www.rlsnet.ru/tn_index_id_36028.htm#opisanie-lekarstvennoj-formy] является антибактериальным препаратом широкого спектра действия. Необратимо связывается с бета субъединицей фермента бактерий, ДНК-зависимой РНК полимеразой и, следовательно, ингибирует синтез РНК и белков бактерий. В результате необратимого связывания с ферментом Рифаксимин проявляет бактерицидные свойства в отношении чувствительных бактерий. Препарат обладает широким спектром противомикробной активности, включающим большинство грамотрицательных и грамположительных, аэробных и анаэробных бактерий, вызывающих желудочно-кишечные инфекции, включая диарею путешественников. Высокоэффективен в отношении аэробов Staphylococcus spp., Enterococcus spp. и анаэробов Peptostreptococcus spp. и др. Препарат применяется для лечение желудочно-кишечных инфекций, вызываемых бактериями, чувствительными к рифаксимину, в т.ч. острых желудочно-кишечных инфекций, диареи путешественников, синдрома избыточного роста микроорганизмов в кишечнике, печеночной энцефалопатии, неосложненного дивертикулезного заболевания ободочной кишки и хронического воспаления кишечника.

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) указывает на необходимость создания новых комбинированных противотуберкулезных препаратов, содержащих специально подобранный набор лекарственных веществ с фиксированными дозам в одной таблетке, обеспечивающих оптимальный терапевтический эффект (Consilium Medicum, 1999, т.2, с.170-171. Ремедиум, 2000, 7, 8).

Авторы данного изобретения неожиданно обнаружили, что рифамицины, в том числе Рифампицин и Рифалазил, в комбинации с индукторами интерферона, по сравнению с одним рифамицином или одним индуктором интерферона, проявляют высокий синергизм - более чем на порядок выше антиинфекционную активность.

Предметом данного изобретения является фармацевтическая композиция в виде таблеток капсул или инъекций, помещенных в приемлемую упаковку, для лечения заболеваний, обусловленных бактериальными и внутрибольничными инфекциями, включающая рифамицин и индуктор интерферона в фармакологически эффективных дозах.

Предпочтительным является использование в качестве Рифамицина Рифампицин, Рифалазил, Рифапентин, Рифаксимин или Рифабутин, а в качестве индуктора интерферона:

Циклоферон, Ларифан, Амиксин, Гипорамин, Бропиримина, Имиквимода (Imiquimod), Резикуимода или IМО-2125.

Индуктор интерферона Бропиримин описан в заявке WO 2007133800, опубл. 22.11.2007; Резикуимод описан в заявке US 20050239733, опубл. 27.10.2005; IMO-2125 описан в "IMO-2125, an agonist of TLR9, that induces endogenous IFN-alpha up-regulates broader range of gene expression profiles compared to exogenously added IFN-alpha in human PBMCS". J Hepatol 2010, 52 (Suppl. I): Abst 692.

Более предпочтительной является фармацевтическая композиция, включающая в качестве рифамицина Рифампицин и в качестве индуктора интерферона Циклоферон.

Также более предпочтительной является фармацевтическая композиция, включающая в качестве рифамицина Рифалазил и в качестве индуктора интерферона Циклоферон.

В соответствии с данным изобретением фармацевтическая композиция предназначена для лечения заболеваний обусловленных Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Helicobacter pylory.

Фармацевтическая композиция также может содержать в качестве вспомогательных компонентов стабилизаторы, носители, разбавители и прочие добавки, обычно используемые для образования лекарственных форм.

Предметом данного изобретения является фармацевтический набор, помещенный в приемлемую упаковку, для лечения заболеваний обусловленных бактериальными и внутрибольничными инфекциями, включающий в фармакологически эффективных дозах рифамицин в виде таблеток, капсул или инъекций, индуктор интерферона в виде таблеток капсул, или инъекций и инструкцию для администрирования компонентов этого фармацевтического набора.

Предпочтительным является фармацевтический набор, предназначенный для лечения заболеваний, обусловленных Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Helicobacter pylory.

Предпочтительно фармацевтический набор включает в качестве рифамицина Рифампицин, Рифалазил, Рифапентин, Рифаксимин или Рифабутин, а в качестве индуктора интерферона Циклоферон, Ларифан, Амиксин, Гипорамин, Бропиримин, Имиквимод, Резикуимод или IMO-2125.

Более предпочтительным является фармацевтический набор, включающий в фармакологически эффективных дозах Рифампицин в виде таблеток, капсул или инъекций, Циклоферон в виде таблеток, капсул или инъекций и инструкцию для администрирования компонентов этого фармацевтического набора.

Также более предпочтительным является фармацевтический набор, включающий в фармакологически эффективных дозах Рифалазил в виде таблеток, капсул или инъекций, Циклоферон в виде таблеток, капсул или инъекций и инструкцию для администрирования компонентов этого фармацевтического набора.

Предметом данного изобретения является также способ лечения заболеваний, связанных с бактериальными и внутрибольничными инфекциями, чувствительными к рифамицину, путем введения субъекту фармакологически эффективного количества новой фармацевтической композиции или эффективного количества комбинации рифамицина и индуктора интерферона из нового фармацевтического набора.

Предметом данного изобретения является также способ лечения туберкулеза, туберкулеза, осложненного СПИДом, и других заболеваний, обусловленных Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Helicobacter pylory.

Изобретение поясняется чертежами.

На фиг.1 представлены результаты испытаний противотуберкулезной активности тестируемых препаратов на модели мышей, зараженных Mycobacterium tuberculosis (острая туберкулезная инфекция).

Обозначения на фиг.1: Т3-титры микобактерий на день 3 (момент заражения); Т10 - титры микобактерий на день 10 (начало введения препаратов); Т31 - (CMC)- титры микобактерий в контроле (CMC) на день 31 (окончание введения препаратов); RMP - Рифампицин; R - Рифалазил; C - Циклоферон, CFU - (colonie-forming units)-инфекфионные (колониеобразующие) единицы в легких мыши.

На фиг.2 представлены результаты испытаний активности тестируемых препаратов на модели мышей, зараженных Helicobacter pylori (инфицирует различные области желудка и двенадцатиперстной кишки)

Обозначения на фиг.2: T1 - титры бактерий на день 1 (начало введения плацебо и препаратов); Т3 - титры бактерий на день 3; Т7 - (CMC)- титры бактерий в контроле (CMC) на день 7 (окончание введения препаратов); RMP - Рифампицин; R - Рифалазил; C - Циклоферон, CFU - (colonie-forming units)- инфекционные (колоние-образующие) единицы в желудке мыши.

Изобретение иллюстрируется, но не ограничивается следующими примерами.

Пример 1. Фармацевтический набор. Фармацевтический набор включает 7 таблеток Рифампицина, содержащих по 250 мг активной субстанции, 7-16 таблеток Циклоферона, содержащих по 300 мг активной субстанции, и инструкцию по применению.

Пример 2. Фармацевтический набор. Фармацевтический набор включает 7 таблеток Рифалазила, содержащих по 25 мг активной субстанции, 7-16 таблеток Циклоферона, содержащих по 150 мг активной субстанции, и инструкцию по применению.

Пример 3. Получение фармацевтических композиций. Смешивают один из рифамицинов и один из индукторов интерферона, в соотношении указанном в таблице, с соответствующими компонентами. Получают фармацевтические композиции.

Пример 4. Получение лекарственного средства в форме таблеток. Смешивают 11200 мг крахмала, 11200 мг измельченной лактозы, 2800 мг талька, 1000 мг Рифалазила и 6000 мг Циклоферона. Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 370 мг каждая.

Пример 5. Получение лекарственного средства в форме капсул. Тщательно смешивают Рифалазил и Циклоферон с порошком лактозы в соотношении 1:6:4. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 275 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.

Пример 6. Получение лекарственного средства в инъекционной форме. Растворяют 0,15 г Рифампицина и 0,15 г Циклоферона в 2,5 мл стерильной воды для инъекций, энергично встряхивают ампулу с порошком до полного растворения, полученный раствор разводят в 125 мл 5% раствора глюкозы. Получают инъекционный раствор для внутриывенного введения.

Пример 7. Определения противотуберкулезной активности тестируемых препаратов на модели мышей, зараженных Mycobacterium tuberculosis (острая туберкулезная инфекция).

Самки мышей линии BALB/c весом 19-20 г. заражались Mycobacterium tuberculosis Erdman (каталог АТСС 35801) в камере для аэрозольной инфекции (Glas-Col, Terra Haute, IN). В распылитель вводили 10 мл суспензии микобактерий, содержащей 5 млн/мл инфекционных (колониеобразующих) единиц. Через 3, 10 и 31 день после инфекции не получавшие тестируемые препараты мыши подвергались эвтаназии при помощи асфиксии углекислым газом, обе половины легких удаляли и гомогенизировали в стерильных условиях в 3 мл стерильного раствора Хэнкса (Hanks Balanced Salt Solution, HBSS). Серийные 10-кратные разведения суспензий в растворе Хэнкса высевали на 6-луночные планшеты с агаром (Middlebrook 7H11). Планшеты инкубировали при 37°С в течение 18-21 дня, после чего определяли титры инфекционных (колониеобразующих) единиц.

Тестируемые вещества (Рифампицин, Рифалазил, Циклоферон, Рифампицин+Циклоферон, Рифалазил + Циклоферон) растворяли в 0,5% карбоксиметилцеллюлозы, и 200 мкл вводили мышам (8 мышей в дозовой группе) внутрижелудочно ежедневно на 10-14, 17-21 и 24-28-й день после инфекции. Всех мышей, получивших тестируемые вещества или плацебо (0,5% карбоксиметилцеллюлозу), подвергали эвтаназии на 31-й день после инфекции и определяли титры инфекционных единиц в гомогенатах легких.

Эвтаназия. Помещают мышей в камеру с углекислым газом. Убеждаются в том, что все животные подверглись эвтаназии. Помещают мышей в 70% раствор этилового спирта на 10 минут.

Получение легочных тканей. Помещают 2-3 стерильные салфетки на операционный столик. Извлекают мышь из раствора спирта, распластывают на столике. Фиксируют при помощи булавок. Делают разрез вдоль диафрагмы и через ребра. Вскрывают грудную клетку, фиксируют ребра по обе стороны при помощи игл (сменить иглы для каждого животного, чтобы избежать контаминации). Аккуратно извлекают легкие и помещают их в пробирку с раствором Хэнкса, которую помещают на лед. Заворачивают оставшиеся части в салфетку и помещают в контейнер для биологических отходов.

Обработка тканей. Обрабатывают гомогенизатор 70% этанолом, затем стерильным физиологическим раствором, протирают стерильной салфеткой. Гомогенизируют образцы легких 10-20 секунд или до тех пор, пока не будут наблюдаться маленькие кусочки тканей. Перед каждым новым образцом обрабатывают гомогенизатор 70% этанолом, затем стерильным физиологическим раствором и протирают стерильной салфеткой. Обрабатывают пробирку с гомогенатом ультразвуком в течение 15 секунд при помощи соникатора. Вносят 100 мкл. гомогената в лунку 24-луночного планшета и перемешивают. Приготавливают серийные 10-кратные разбавления. Вносят по 100 мкл разбавлений в 6-луночные планшеты с агаром. Распределяют разбавления равномерно по поверхность агара и высушивают на воздухе. Переворачивают планшеты с агаром и помещают в инкубатор при 37°С. Инкубируют как минимум 18 дней, после чего подсчитывают колонии микобактерий.

Снижение титров микобактерий в легких мышей после 3-недельной администрации препаратов по сравнению с контролем (CMC) на день 31:

Рифалазил, 2.5 мг/кг/день 87 раз;

Циклоферон, 30 мг/кг/день 1.08 раз;

Рифалазил, 2.5 мг/кг/день + Циклоферон, 30 мг/кг/день 1222 раза;

Рифампицин, 20 мг/кг/день + Циклоферон, 30 мг/кг/день 561 раз.

Как видно из представленных данных, Циклоферон в дозе 30 мг/кг/день не активен, Рифалазил (2.5 мг/кг/день) в 87 раз снижает титры микобактерий в легких мышей после 3-недельной администрации препаратов по сравнению с контролем (CMC) на день 31, а комбинация Рифалазила (2.5 мг/кг/день) с Циклофероном (30 мг/кг/день) дала синергизм и в 1222 раза снизила титры микобактерий в легких мышей после 3-недельной администрации препаратов по сравнению с контролем (CMC) на день 31, таким образом, эта комбинация в 14 раз (1222: 87=14,04) активнее чистого Рифалазила.

Определение активности тестируемых препаратов на модели мышей, зараженных Mycobacterium avium complex (микобактериоз) или Chlamydia pneumonia (пневмония), проводили аналогично описанному выше. Фармацевтические композиции Рифалазил+Циклоферон и Рифампицин+Циклоферон показали синергетический эффект.

Пример 8. Определения активности тестируемых препаратов на модели мышей, зараженных Helicobacter pylori (инфицирует различные области желудка и двенадцатиперстной кишки)

Мыши линии С57В1/6 заражались Helicobacter pylori штамм SS1. Им вводили по 10⁷ инфекционных (колониеобразующих) единиц. Через 1, 3 и 7 день после инфицирования не получавшие тестируемые препараты мыши подвергались эвтаназии при помощи асфиксии углекислым газом, желудок удаляли и гомогенизировали в стерильных условиях в 3 мл стерильного раствора Хэнкса (Hanks Balanced Salt Solution, HBSS). Серийные 10-кратные разведения суспензий в растворе Хэнкса высевали на 6-луночные планшеты с агаром (Middlebrook 7H11). Планшеты инкубировали при 37°С, после чего определяли титры инфекционных (колониеобразующих) единиц.

Тестируемые вещества (Рифампицин, Рифалазил, Циклоферон, Рифампицин+Циклоферон, Рифалазил+Циклоферон) растворяли в 0,5% карбоксиметилцеллюлозы, и 200 мкл вводили мышам (5 мышей в дозовой группе) внутрижелудочно по два раза ежедневно в течение 7 дней не менее чем через неделю после инфицирования. Всех мышей, получивших тестируемые вещества или плацебо (0,5% карбоксиметилцеллюлозу), подвергали эвтаназии через 12 часов после последней дозы препарата и определяли титры инфекционных единиц в гомогенатах желудков. Далее исследования и определение активности проводят аналогично примеру 7.

Снижение титров бактерий в желудках мышей после недельной администрации препаратов по сравнению с контролем (CMC) на день 7:

Рифалазил, 1 мг/кг/день 64 раза;

Рифампицин, 20 мг/кг/день 37 раза;

Циклоферон, 30 мг/кг/день 1.03;

раз Рифалазил, 1 мг/кг/день + Циклоферон, 30 мг/кг/день 704 раза;

Рифампицин, 20 мг/кг/день + Циклоферон, 30 мг/кг/день 349 раз.

Как видно из представленных данных, Циклоферон в дозе 30 мг/кг/день не активен, Рифалазил (1 мг/кг/день) в 64 раз и Рифампицин (20 мг/кг/день) в 37 раз снижает титры бактерий в желудках мышей после недельной администрации препаратов по сравнению с контролем (CMC) на день 7, а комбинация Рифалазила (1 мг/кг/день) с Циклофероном (30 мг/кг/день) дала синергизм и в 704 раза снизила титры бактерий в желудках мышей после недельной администрации препаратов по сравнению с контролем (CMC) на день 7, таким образом эта комбинация в 11 раз (704: 64=11) активнее чистого Рифалазила. Комбинация Рифампицина (20 мг/кг/день) с Циклофероном (30 мг/кг/день) также дала синергизм и в 349 раз снизила титры бактерий в желудках мышей после недельной администрации препаратов по сравнению с контролем (CMC) на день 7, таким образом эта комбинация в 9 раз (349: 37=9,43) активнее чистого Рифампицина.