Результат интеллектуальной деятельности: ЛЕКАРСТВЕННАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ДИАРЕИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ

Группа изобретений относится к ветеринарной медицине и касается профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят, а именно диареи.

Желудочно-кишечные заболевания являются одной из самых распространенных патологий молодняка крупного рогатого скота, особенно телят раннего постнатального периода. Среди патологий желудочного-кишечного тракта у новорожденных телят наибольшее распространение имеет диспепсия. На молочных фермах и комплексах уровень заболеваемости диспепсией среди телят может составлять 80-95%, с летальностью от 15 до 70% (Мосолков А.Е. Диспепсия новорожденных телят: этиопатогенез, диагностика, лечение: автореферат дис. канд. вет. наук, Барнаул, 2006, http://www.dissercat.com/content/dispepsiyanovorozhdennykh-telyat-etiopatogenez-diagnostika-lechenie).

Желудочно-кишечные заболевания новорожденных телят, сопровождающиеся диареей, обусловлены интенсивным развитием условно-патогенных микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте на фоне снижения резистентности организма. Основными механизмами защиты животных от воздействия условно-патогенных микроорганизмов является антагонистическое воздействие симбиотических микроорганизмов, влияние колострального иммунитета и неспецифических факторов резистентности. Диарейные заболевания новорожденных животных характеризуются в первую очередь нарушением неспецифической резистентности и дефицитом гуморального звена иммунитета, на фоне которых развиваются диспепсические явления. Поэтому так важно в период формирования общей резистентности организма новорожденного создать оптимальные условия кормления и содержания беременных животных.

Известен способ профилактики желудочно-кишечных инфекций, заключающийся в пероральном введении вакцины, содержащей живые клетки непатогенного штамма Escherichia coli 0,83 CNCTC 325/71, которые подвергались лиофилизации (а.с. ЧССР № 264572, МПК А61К 31/66, опубл. 15.11.87).

Однако эффективность профилактических мероприятий данного способа низка, поскольку вакцина содержит клетки непатогенного штамма, вызывающего антагонистическое взаимоотношение бактерий. Кроме того, необходимо проводить систематические ревакцинации. Способ не обеспечивает профилактику заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Известен способ профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка, заключающийся в парентеральном введение беременным животным за 15-30 дней до родов токсина, выделенного из энтеротосигенных штаммов E. coli. Кроме этого, способ предусматривает оральное введение токсина беременным животным в течение 3-х недель перед парентеральным введением. В качестве токсина выступает взвесь клеток, разрушенных температурой и обработанных формалином в течение 30 мин. Способ позволил молодняку приобретать усиленный иммунитет через молозиво (Патент Великобритании № 1560934, МПК А61К 35/74, опубл. 13.02.80).

Однако использование токсина в виде взвеси клеток приводит к выработке в организме матери антител, которые в дальнейшем при передаче новорожденному молодняку через молозиво могут привести к подавлению нормальной кишечной микрофлоры. Поэтому эффективность профилактики способа незначительна ввиду использования в препарате корпускулярного антигена. Кроме того, способ длителен, так как предусматривает введение препарата в течение 3-х недель орально, а затем парентерально.

Техническим результатом изобретения является повышение уровня резистентности новорожденных телят, эффективности профилактики заболевания, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Технический результат достигается применением лекарственной композиции для профилактики диареи у новорожденных телят, полученной путем растворения 36,0 г порошка селимакцида в 500 мл теплой кипяченой воды с последующим смешиванием полученного раствора с предварительно подготовленной суспензией культуры гриба Fusarium sambucinum ВКПМ F-139 и разбавленной в 500 мл кипяченой воды с конечной концентрацией клеток культуры гриба 10⁸КОЕ/мл, при тщательном перемешивании полученной смеси, и которую применяют в период внутриутробного развития телят стельным коровам перорально ежедневно в течение 12 дней до отела по 500 мл, два раза в день с интервалом 6-8 часов.

Предлагаемая композиция и способ ее использования обеспечивает повышение общей резистентности организма молодняка, эффективности профилактики заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки, за счет синергетического действия компонентов лекарственной композиции, подавляет рост условно патогенной микрофлоры кишечника, препятствующий возникновению и развитию секундарной инфекции.

Селимакцид-диэтиламмоневая соль N-метиламино-1-фенилметансульфоновой кислоты относится к новым химическим соединениям класса аминометансульфонатов и представляет собой кристаллический порошок белого цвета со специфическим запахом, хорошо растворим в воде, спирте, диметилсульфоксиде. Средство получают из сырья отечественного производства.

Селимакцид - эффективное химиотерапевтическое средство для лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных, которое содержит диэтиламмониевую соль N-метиламино-1-фенилметан сульфоновой кислоты из групп сероорганических соединений, синтезированный сотрудниками ИОФХ им. Арбузова и условно названный селимакцид (Патент RU №2111962, МПК С07С 309/24, С07С 303/32, A61K 31/255, опубл. 27.05.1998).

Селимакцид обладает бактерицидной активностью в отношении возбудителей желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят. Препарат не оказывает отрицательного действия на естественную и иммунологическую резистентность организма животных. Препарат повышает функционально метаболическую активность лейкоцитов, бактерицидные свойства сыворотки крови, а по лечебной активности при желудочно-кишечных болезнях превосходит препараты из группы левомицетина, тетрациклина и сопоставим с гентамицином (Методические рекомендации по применению селимакцида при желудочно-кишечных заболеваниях животных. Казань, 2016. с. 15-25).

Штамм Fusarium sambucinum var.sambuvinum 52434, регистрационный номер коллекции: ВКПМ F-139. Штамм выделен из почвы ризосферы озимой пшеницы, Самаркандская область, Узбекистан. Область применения штамма: продуцент кормового и пищевого белка.

Штамм Fusarium sambucinum var.sambuvinum ВКПМ F-139 имеет следующие культуральные и физиологические признаки: на сусло-агаре образует белые войлочные колонии, розовеющие при старении, плодовых тел не образует, пряжки не выявлены. Имеет два вида спороношения конидии и хламидоспоры, конидии серповидной формы с 2-5 перегородками. При культивировании в жидкой питательной среде образует многоклеточный нитевидный мицелий с перегородками аскомицетного типа с тельцами Воронина.

Штамм является аэробом, растет в интервале температур 22-28°С и в интервале рН 4,5-7,0, оптимальное значение рН-5,8. Желатин не разжижает. Усваивает глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, раффинозу, а также крахмал, этанол, глицерин, уксусную кислоту, маннит, ксилит.

Характеристика. Биомасса монокультуры высшего гриба Штамм Fusarium sambucinum var.sambuvinum ВКПМ F-139 содержит низкомолекулярные олигопептидные соединения, щелочные олигопептиды, 18 аминокислот (в т.ч. незаменимые: триптофан, лизин, метионин), содержание аспарагиновой и глутаминовой аминокислот приближается к их содержанию в животных белках; ненасыщенные жирные кислоты (50%-линоленовая кислота); углеводы представлены гликанами органическими кислотами (в т.ч. яблочной, лимонной, янтарной); витамины группы В (фолиевая кислота), никотиновая кислота и убихиноны Q6, Q9, Q10. Минеральный состав - 22 жизненно важных микро- и макроэлемента.

Фармдействие. Обладает укрепляющим действием. Повышает устойчивость организма к неблагоприятным воздействиям (загрязнение среды, влияние патогенной микрофлоры, воздействие высоких и низких температур, токсические эффекты этанола и т.д.). Ускоряет восстановление организма после перенесенных нагрузок и заболеваний различной этиологии. Оказывает гепатопротекторное действие, нормализует нарушенную дезинтоксикационную и белковообразующую функцию печени (Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание: в 2 т. - М.: Медицинский совет, 2009. - Т. 2, ч. 1 - 568 с.; 4.2 - 560 с.).

Использование лечебной композиции (селимакцида и штамма Fusarium sambucinum ВКПМ F-139) и способ ее применения позволяет усилить иммунотерапевтический, иммуномодулирующий, иммуностимулирующий эффект составляющих компонентов и повысить продуктивность животных. Ежедневное выпаивание композиции глубоко стельным коровам, за 12 суток до отела 2 раза в день с интервалом 6-8 часов, обеспечивает рождение диарееустойчивых телят с оптимальным составом кишечного биоценоза, обеспечивает устойчивость новорожденных телят к диарее, повышает иммунный статус, предотвращает обезвоживание организма и сокращает количество абортов глубокостельных коров.

Апробацию эффективности разрабатываемой композиции и способа ее применения для профилактики диареи у новорожденных телят проводили следующим образом.

Композицию для профилактики диареи у новорожденных телят получают следующим образом.

Порошок селимакцида в количестве 36,0 г растворяли в 500 мл теплой кипяченой воды из расчета 80 мг/кг живой массы (Методические Рекомендации по применению селимакцида при желудочно-кишечных заболеваниях животных. Казань, 2016. - 26 с.).

Предварительно культуру гриба Fusarium sambucinum ВКПМ F-139 выращивали на картофельно-глюкозном агаре в пробирках на косяках, в течение 5 суток при Т = 28°С. Выращенный мицелий гриба смывали дистиллированной водой в количестве 30 мл с каждого косяка. Общую массу мицелиального гриба Fusarium sambucinum ВКПМ F-139 суспендировали и разбавляли в 500 мл кипяченой воды с конечной концентрацией клеток культуры гриба 10⁸ КОЕ/мл, которую достигали с помощью ФЭК, длина волны 540 нм при зеленом светофильтре.

Все полученные компоненты смешивали при тщательном перемешивании до однородной консистенции. Полученную композицию можно хранить в течение 7 суток при температуре 4-6°С.

Пример 1. Определение оптимального состава Fusarium sambucinum ВКПМ F-139 в лекарственной композиции.

Перед постановкой опытов получали варианты композиционного препарата, содержащие различные соотношения компонентов Fusarium sambucinum ВКПМ F-139 10²; 10³; 10⁴; 10⁵; 10⁶; 10⁷; 10⁸; 10⁹; 10¹⁰ КОЕ/мл.

Для определения оптимального соотношения компонентов применяли in vitro тест. Для этого у больных колибактериозом телят брали кровь из яремной вены в количестве 100 мл, добавляли препарат фиколл-гипак в количестве 9%, центрифугировали при 3000 об/мин, супернатант декантировали, а осевшие лимфоциты разводили до концентрации 1×10⁵ КОЕ/мл. Выделенные лимфоциты инкубировали в ростовой среде РМПИ в присутствии используемых соотношений компонентов лечебной композиции при температуре 27°С в течение 24 часов. Через 24 часа готовили мазки из осадка лимфоцитов, окрашенных азур-эозином. Оценку активности различных соотношений компонентов композиции учитывали подсчетом живых (неокрашенных) и мертвых (окрашенных) клеток лимфоцитов. Установлено, что максимальная выживаемость лимфоцитов была достигнута при содержании в композиции штамма мицелиального гриба Fusarium sambucinum ВКПМ F-139 10⁸ КОЕ/мл.

Пример 2. Обоснование доз выпаивания композиции стельным коровам с целью профилактики диареи новорожденных телят.

Исследования проводили в Высокогорном районе «Коллективно-фермерском хозяйстве Л.Л. Ибрагимова» РТ.

Стельных коров распределяли на пять групп по 25 голов в каждой. Композицию выпаивали в течение 20 дней до отела 2 раза в день.

Коровам первой опытной группы выпаивали лекарственную композицию по 300 мл, второй группе - 400 мл, ей группе - 500 мл, 4-й - 600 мл, контроль - без применения композиции.

Результаты исследований представлены в таблице 1.

Из результатов испытаний следует, что наиболее эффективной дозой является выпаивание 500 мл на животное.

Увеличение дозы свыше 500 мл нецелесообразно, поскольку не оказывает влияния на эффективность профилактики диареи.

Пример 3. Обоснование эффективности сроков введения композиции стельным коровам для профилактики диареи новорожденных телят.

Стельных коров распределяли на четыре опытные группы, по 25 голов в каждой, в зависимости от сроков отела с 8 по 20 день, вели учет новорожденных телят и количество молодняка, заболевших к 30-дневному возрасту.

Результаты исследований представлены в таблице 2.

Из таблицы следует, что стопроцентная сохранность молодняка достигается при выпойке композиции стельным коровам за 12 дней до отела. Выпойка лекарственной композиции стельным коровам более чем за 12 дней до отела является нецелесообразным.

Пример 4. Профилактика диареи телят путем применения предлагаемой композиции.

Для опыта были отобраны глубоко стельные коровы в количестве 24 голов, содержащиеся в родильном отделении за 30 дней до отела. Животные были разделены на две группы по 12 голов в каждой.

Животным первой группы в целях профилактики диареи новорожденных телят ежедневно выпаивали по 500 мл композиции 2 раза в сутки. Животные второй группы служили контролем и не подвергались профилактике. У 4-х новорожденных телят от непрофилактированных коров проявились признаки желудочно-кишечного заболевания - акт частой дефекации, жидкий стул со зловонным запахом. У телят, рожденных от профилактированных коров, таких признаков не наблюдалось.

Результаты исследований микробиологического пейзажа кишечника новорожденных телят представлены в таблице 3.

Из анализа данных таблицы 3 видно, что уровень патогенной кишечной микрофлоры новорожденных телят (кишечная палочка и энтерококки) от профилактированных коров на 36,4 и 20% соответственно ниже, чем от непрофилактированных, а содержание лактобактерий у профилактированных телят на 2% выше.

Гематологические показатели новорожденных телят на фоне применения композиции на глубоко стельных коровах представлены в таблице 4.

Из данных таблицы видно, что гематологические показатели крови новорожденных телят, полученных от профилактированных коров, отличаются от непрофилактированных. Так например, у непрофилактированных показатели Т и В лимфоциты ниже показателей профилактированных животных на 6,4 и 4,1% соответственно.

Полученные данные свидетельствуют о том, что профилактика глубоко стельных коров испытуемой композицией в течение 30 суток до отела повышает иммунный статус организма и обеспечивает получение устойчивых к диарее телят. При этом устраняется дисбаланс кишечного биоценоза у больных животных и улучшаются гематологические показатели крови. Применение предлагаемой композиции способствует получению здоровых телят.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить эффективность профилактики диареи телят. Разработанная композиция повышает защитные силы организма животных, их резистентность к неблагоприятным факторам внешней среды и сохранность животных за счет синергетического действия компонентов композиции: селимакцида и Fusarium sambucinum ВКПМ F-139.