Результат интеллектуальной деятельности: Способ определения жизнеспособности эхинококка

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике паразитарных заболеваний и может быть использовано для определения жизненной способности эхинококка.

В литературе известен способ определения жизнеспособных протосколексов эхинококка в пробе invitro. Включающий обработку пробы химическим агентом, микроскопию (SU 1635961A1, 4414753/14, 23.03.91. Бюл. №11 Способ определения жизнеспособных протосколексов эхинококка в пробе INVITRO).

Известен также другой способ диагностики эхинококкоза путем инкубации крови с эхинококковой жидкостью с последующей регистрацией иммунологической реакции (Патент РФ №2024874, МПК G01N 33/53, 1990.01. Способ диагностики эхинококкоза. Заявитель: Киргизский государственный медицинский институт).

Недостатками данных способов являются:

- длительный срок диагностики;

- травматичность методов ввиду необходимости хирургического вмешательства для забора материала;

- невозможность прижизненной диагностики;

- данные способы не позволяют определить фазу жизнедеятельности паразита.

В качестве прототипа выбран способ определения жизнеспособности эхинококкоза, при котором у больного выявляют в реакции пассивной гемагглютинации соотношение титра сывороточных антител к термостабильным и термолабильным антигенам эхинококка при соотношении титров 1:1 - 1:2 определяют эхинококк нежизнеспособным, а при соотношении 1:5 и более - жизнеспособным (SU1291878A1, 3923522/28-14, 23.02.87 Бюл. №7 Способ определения жизнеспособности эхинококка).

Недостатками данного способа являются:

- по предложенному способу не происходит полная элиминация антител к нежизнеспособным паразитам.

- большое количество ложноотрицательных результатов.

Предлагаемое изобретение направлено на повышение точности диагностики эхинококкоза, а именно определение его жизнеспособности на основании исследования специфического антигенного спектра живого (активная форма) и мертвого (не активная форма) паразита, а также, выявление специфических маркеров присутствующих только у живого паразита и отсутствующих в мертвом.

Указанный технический результат достигается тем, что во время хирургического вмешательства у больных с эхинококковой кистой из ее просвета берут два биоматериала, относящихся к жизнеспособной и нежизнеспособной формам эхинококка и помещают их в 0,9% NaCl, далее из полученных жизнеспособных и нежизнеспособных форм эхинококка готовят экстракты, после чего ими иммунизируют двух лабораторных кроликов, полученные гипериммунные антисыворотки подвергают процедуре иммуносорбции, заключающейся в получении моноспецифической антисыворотки, содержащей белковый антиген гликопротеиновой природы, c электрофоретической подвижностью альфа 2-глобулинов, с молекулярной массой примерно 38 кДа, по данным электрофореза в 7% ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия из антител полученных от лабораторного кролика с жизнеспособной формой, и в дальнейшем при отрицательной иммунологической реакции между полученной антисывороткой и кровью больного эхинококкозом определяют эхинококк нежизнеспособным, а при положительной реакции определяют эхинококк жизнеспособным.

Предлагаемый способ пояснен клиническим примером.

Пример: Больная Б. 1990 г. рождения, 21.01.19 г. оперирована в плановом порядке с диагнозом эхинококкоз печени. Во время операции у больной обнаружены в печени две эхинококковые кисты, при этом в одной кисте после ее вскрытия обнаружены жизнеспособный эхинококк, а в другой кисте выявлен нежизнеспособный эхинококк. Два указанных биоматериала, относящихся к жизнеспособной и нежизнеспособной формам эхинококка помещены 0,9% NaCl. Следующим этапом из жизнеспособных и нежизнеспособных форм эхинококка, получили фрагменты мембран путем гомогенизации ткани с одновременным экстрагированием компонентов экстрактов. После чего полученными экстрактам иммунизировали лабораторных кроликов при помощи полного адъванта Фрейнда. Каждому кролику вводили смесь 0,5 мл полученного антигена из соответствующего экстракта с 0,5 мл полного адъванта Фрейнда. Полученную смесь антиген-полный адъвант Фрейнда в количестве 1 мл вводили внутрикожно в подушечки стоп всех четырех конечностей. Последующую иммунизацию проводили через 8 недель после первой, таким же количеством антигена в 0,5 мл 0,15 М NaCl. В первый день последующей иммунизации антиген вводили внутримышечно в верхнюю часть бедра, а на 2-й и 3-й дни внутривенно в ухо. Через неделю иммунизацию повторяли по той же схеме. Забор крови производили через 7 дней. В дальнейшем полученные гипериммунные антисыворотки подвергали процедуре иммуносорбции при помощи 2,5% раствора глутарового альдегида, заключающейся в том что, из антител полученных от лабораторного кролика с жизнеспособной формой эхинококка элиминировали антитела полученные от лабораторного кролика с нежизнеспособной формой. В дальнейшем при отрицательной иммунологической реакции между полученной антисывороткой и кровью больной К. 1963 г. рождения, оперированной в плановом порядке 30.03.2019 с диагнозом эхинококкоз печени с подтвержденным нежизнеспособным эхинококком, определяли эхинококк нежизнеспособным. При положительной реакции с кровь больной Т. 1972 г. рождения, оперированной в плановом порядке 15.07.2019 с диагнозом эхинококкоз печени с подтвержденным жизнеспособным эхинококком определяли эхинококк жизнеспособным.