Результат интеллектуальной деятельности: Способ прогнозирования рецидива немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования раннего рецидивирования немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря (НМИРМП), включающего иммуноферментный анализ (ИФА), для определения цитокинового состава тканей опухоли и перитуморальной зоны (IL-1β, IL-6, IL-10, IL-18, TNF-α, INF-γ, хемокины IL-8). Изобретение обеспечивает прогнозирование риска рецидивирования заболевания, проведение объективного контроля за развитием опухолевого процесса (немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря), возможность включения больных в группу риска для интенсивного наблюдения, своевременное принятие мер для назначения адъювантного лечения.

Важной задачей клинической онкологии остается активный поиск предиктивных критериев возникновения и развития рецидивов после хирургических вмешательств независимо от локализации опухоли. Это особенно актуально в случае немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря (НМИРМП), поскольку, 75% всех впервые выявленных случаев рака мочевого пузыря отводится на НМИРМП. Несмотря на довольно позитивные результаты комплексного лечения НМИРМП (хирургическое и адъювантная внутрипузырная химиотерапия), исследование данной группы больных остается актуальной проблемой в онкоурологической практики, в связи с высокой частотой рецидивирования (60-80%), и прогрессированием в 10-30% случаев в зависимости от стадии опухоли. С связи с этим существует необходимость динамического наблюдения за больными и выполнение повторных цистоскопий, что делает лечение этой нозологии крайне дорогостоящим. Положительным свойством факторов прогноза рецидивирования считается неинвазивность, диагностическая точность, простота применения и дешевизна. Обнаружение таких предикторных маркеров рецидивирования и прогрессирования рака способствует выбору тактики адъювантного лечения и определяет сроки и качество жизни больных (см. Белякова Л.И., Шевченко А.Н., 2020).

А.А. Блинников и Е.В. Рязанцев предположили прогностическую значимость содержания цитокинов фактора некроза опухоли α и интерферона γ в сыворотке для оценки риска рецидива заболевания после операции, однако в исследованной ими группе больные имели различную распространенность процесса от рТа до рТ3 (см. Молчанов Р.Н., Шпонька И.С., 2014).

Из тех же источников известен способ прогноза течения рака мочевого пузыря на основании мочевой экскреции матриксных металлопротеиназ. В исследовании А.Н. Шевченко и соавт. была установлена корреляция повышенного количества ММП 9 в моче со стадией первичного РМП (Та-Т1), степенью дифференцировки опухоли, прогнозом прогрессирования заболевания. Однако в связи с низкими показателями чувствительности и специфичности данный вид исследования весьма сомнителен в применении. Также, в исследовании Ткачук В.Н., Аль-Шукри 2011 г. было установлено, что концентрация ферментов протеолиза ММП-2 и ММП-9 в моче, определяемых методом цимографии, зависит от глубины инвазии и степени дифференцировки опухоли и указывает на прогноз течения болезни. Однако данный способ прогнозирования течения рака мочевого пузыря обнаруживает связь уровня матриксных металлопротеиназ-2 и -9 и рецидивирования опухоли лишь косвенно, указывая на сопряжение их содержания с инвазивным потенциалом опухоли в статичном состоянии в независимых группах, а не в динамике в одной и той же выборке. Кроме того, используемый авторами в данном исследовании метод цимографии, несмотря на преимущество в диагностической точности, сложен в использовании и дорогостоящий.

Из литературных источников известен способ прогнозирования рецидивов и прогрессирования рака мочевого пузыря без мышечной инвазии на основании клинико-морфологических параметров (см. Ролевич А.И., Мишустин С.И., 2016). Авторы ретроспективно оценили клинические и морфологические факторы прогноза рецидивов и прогрессирования опухоли в 905 случаев хирургического комбинированного лечения пациентов и провели моно- и мультивариантный анализы с использованием модели пропорциональных рисков Кокса. Было выявлено, что основными факторами прогноза рецидивов и прогрессии при НМИРМП были мультифокальность поражения мочевого пузыря и степень дифференцировки, что не вносит новизны в прогноз и имеет широкую известность.

Кроме того, клинико-морфологические показатели, несмотря на высокую диагностическую значимость каждого по отдельности, многочисленны, имеют эпидемиологическую, а не патогенетическую связь с прогрессированием рака и, в частности, с рецидивированием. Наиболее адекватным, с клинической точки зрения, может быть одновременное определение небольшого числа взаимодополняющих показателей, которые могут максимально полно охарактеризовать злокачественный потенциал опухоли.

Рак мочевого пузыря (РМП) является одной из главных проблем в мире, на 2021 год занимает в структуре общей онкологической заболеваемости (оба пола) 9-е место, уступая лишь злокачественным образованиям простаты в онкоурологической практике 7-е место у мужчин (см. IARC, Cancer Today, 2022). Согласно последним данным GLOBOCAN, на рак мочевого пузыря приходится 3% всех диагнозов рака в мире, особенно распространен в развитых странах (см. Saginala K., Barsouk A., 2020) без соответствующей и своевременной помощи данная злокачественная патология может привести к тяжелой инвалидизации и значительному ухудшению качества жизни больных. В общей сложности 90% диагнозов рака мочевого пузыря ставятся в возрасте 55 лет и старше, и это заболевание встречается у мужчин в четыре раза чаще, чем у женщин (см. Globocan, 2021). РМП находится на 17-ом месте у женщин в мире. Первые три места по частоте встречаемости заболевания занимают такие страны, как: Греция, Нидерланды и Италия.

В структуре общей (оба пола) онкологической заболеваемости в Российской Федерации РМП занимает 13-е место (6,3 на 100,000 случаев), уступая ЗНО простаты (43,7 на 100,000 случаев), почки (10,3 на 100,000 случаев). У мужчин данная патология занимает 9-е место (4,6%), и 16-е - среди женщин, тем самым формирует довольно значимую по удельному весу группу злокачественных новообразований органов мочеполовой системы, составляя 25,1 % всех ЗНО. Показатель заболеваемости на 100 тыс. населения («грубые» показатели на 100 000 населения) составляет: 19,55 у мужчин; 5,05 для женщин. Прирост заболеваемости для обоих полов за последние 10 лет («грубые» показатели на 100 000 населения) - 30,8 %. Среднегодовой темп прироста - 1,92%. Заболеваемость РМП в России также продолжает расти, кроме того, отмечен рост числа больных с поздними стадиями, что косвенно указывает на позднюю диагностику данного заболевания.

Абсолютное число впервые установленного диагноза РМП в России в 2020 году - у мужчин 13314, у женщин 3976. В России пациенты с возрастом старше 65 лет преобладают по возрастному составу и составляют 78,4 %. Средний возраст заболевших в России мужчин - 66,7 лет, женщин - 68,8 лет (см. Каприн А. Д., Старинский В. В. 2021). Абсолютное число заболевших мужчин в ЮФО ЗНО мочевого пузыря - 1496, женщин - 376. Стандартизованный показатель на 100 тыс. населения в ЮФО у мужчин составил 12,06, у женщин 1,80. В Южном федеральном округе в 2020 г. были поставлены на учет 1680 человек с впервые диагностированным РМП, в Ростовской области - 400 человек (см. Каприн А.Д., Старинский В. В., 2021).

Распространенность заболеваемости РМП в России в 2020 г. составила 77,1 на 100 тыс. населения.

Удельный вес больных с диагнозом РМП, подтвержденным морфологически, от числа больных с впервые в жизни установленным диагнозом злокачественного новообразования в России в 2020 году составил 98,5%. Стоит отметить, что удельный вес больных с ЗНО РМП, выявленных активно, от числа больных с впервые в жизни установленным диагнозом с 2009 по 2019 гг. растет, в 2009 году он составлял 4,5%, а 2019году 19,4%, в 2020 году показатели несколько снизились и составили 18,3%. Удельный вес ЗНО мочевого пузыря, выявленный на I-II стадии в России в 2019 г. составил 78,0, на III стадии 11,0, в IV стадии 9,6. Летальность больных в России в течение года с момента установления диагноза ЗНО РМП с каждым годом уменьшается, в 2009 году составляла 22,6%, в 2019 году составила 14,3%, а в 2020 году 14,0% (см. Каприн А.Д., Старинский В.В., 2021).

Несмотря на современные методы и подходы в лечении данная патология без соответствующей и своевременной помощи может привести к инвалидизации и значительному снижению качества жизни больных. Это связано со многими анатомо-физиологическими особенностями, способностью опухоли к рецидивированию (частота рецидивов заболевания при раке мочевого пузыря достигает 65,5% при I стадии данной патологии, от 31,5% при Т2а и при T2b стадии достигает 70,1%).

Примерно у 75% пациентов с впервые выявленным РМП опухоль имеет немышечно-инвазивный характер (НМИРМП) (с инвазией не глубже слизистого, подслизистого слоя по системе TNM: Та,T1N0M0)) (см. Burger M., Catto J.W., Dalbagni G., 2013).

Существуют множество тест-систем (BTA, NMP 22, Bladder Chek, Immunocyt, UroVysion и т.д.), которые могут применяться для ранней диагностики рецидива рака мочевого пузыря. В клинической практике нашли применение диагностические системы для определения уровня онкомаркеров: UBC, BTA, NMP-22, CYFRA 21-1 и целый ряд других. Каждый из методов имеет относительные преимущества и недостатки. На результаты исследования влияют особенности метода, условия забора, хранения и обработки материала, гистологическая структура опухоли, наличие хронического сопутствующего воспаления уротелия, мочекаменной болезни, недавно произведенные оперативные вмешательства на мочевых путях (см. Михаленко Д.С., Сивков А.В., 2015).

В настоящее время методы лечения и прогнозирование дальнейшего течения РМП основываются на классификации TNM и для НМИРМП на группах прогноза, учитывая ряд факторов. Несмотря на это, отдаленные результаты лечения больных, относящихся к одним и тем же классификационным группам и получающих идентичное лечение, могут значительно разниться. В связи с этим, для полноценного прогнозирования течения РМП необходимо не только определить гистологическую структуру опухоли, степень ее дифференцировки, а также следует учитывать влияние индивидуальных факторов, которые определяют клиническое поведение и биологическую агрессивность опухоли (см. Кит О.И., Шевченко А.Н., 2015).

Прогнозирование риска развития НМИРМП у пациентов имеет значение для определения частоты и характера наблюдения, проведения адъювантного лечения, а также влияет на выбор методики оперативного вмешательства и дальнейшего наблюдения.

В последнее время остро встает вопрос о ранней предикции и превенции развития РМП, от чего зависит течение заболевания и его исход, а также, возможность своевременного оказанная квалифицированной помощи. В этом вопросе зачастую приходится соотносить два взаимодополняющих процесса: воспаление и опухолевый процесс. Хроническое воспаление уже давно принято считать одной из движущих сил канцерогенеза при многих видах рака, в том числе и при РМП. В результате биологических, физико-химических изменениях в клетках, в основе которых лежат: перекисное окисление липидов, изменение активности сигнальных путей, - происходит инактивация соответствующего ряда транскрипционных факторов, контролирующих экспрессию генов, кодирующих цитокины, хемокины, рецепторы иммунокомпетентных клеток, молекулы клеточной адгезии, факторы роста и реактанты острой фазы, которые в свою очередь могут обладать канцерогенными свойствами.

В реализации воспалительной реакции, а также в регулировании активности различных звеньев иммунной системы и, собственно, в прогрессировании опухолей различной локализации важную роль отводят цитокинам, обеспечивающие тонкие механизмы межклеточных и межсистемных взаимодействий, в ходе которых возникают каскадные реакции для обеспечения реализации иммунного ответа (ИО). Увеличение уровня цитокинов, хемокинов и факторов роста, включая трансформирующий фактор роста-β (TNF-β), IL-6 и фактор роста фибробластов играет важную роль как медиаторы эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП) в опухолевых клетках. Результатом ЭМП является закономерные биологические, метаболические, физиологические и морфологические изменения клеток, что обуславливает их свойства к миграционному потенциалу и возможности к инвазии и развитию метастатического процесса.

Настоящее изобретение относится к новому способу прогнозирования раннего рецидивирования НМИРМП с помощью оценки цитокинового профиля при исследовании опухолевой ткани и перитуморальной зоны. Увеличение содержания провоспалительных цитокинов: IL-8 и IL-1β в опухоли мочевого пузыря человека по сравнению с их содержанием в перитуморальной зоне, может служить диагностическим маркером НМИРМП и характеризует наиболее частый процесс рецидивирования.

Настоящее изобретение относится к способу диагностики НМИРМП и включает следующие стадии: получение образцов биоматериала (фрагменты ткани опухоли и перитуморальной зоны) первичных больных, динамическое наблюдение за пациентами, получение образцов биоматериала у больных с рецидивом заболевания (фрагменты ткани опухоли и перитуморальной зоны).

Техническим результатом изобретения является разработка способа, позволяющего прогнозировать рецидивирование немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря.

Задачей изобретения является выявление критериев прогноза раннего рецидивирования у больных немышечно-инвазивным раком мочевого пузыря путем изучения цитокинового профиля опухолевой ткани и перитуморальной зоны для ранней диагностики рецидивирования НМИРМП у больных с впервые выявленным раком мочевого пузыря,

Технический результат достигается тем, что проводят иммуноферментный анализ для определения цитокинового состава тканей опухоли и перитуморальной зоны: IL-1β, IL-6, IL-10, IL-18, TNF-α, INF-γ, хемокин IL-8, при уровне экспрессии провоспалительных цитокинов в опухолевой ткани: IL-6 ≥ 9,1 пг/мл, IL -8 > 24,6 пг/мл, TNF-α ≥ 10,9 пг/мл, IL-1β ≥ 25,6 пг/мл, IL-18 ≥ 36,0 пг/мл и при уровне экспрессии провоспалительных цитокинов в перитуморальной зоне: IL-6 > 6,6 пг/мл, IL-8 > 0,7 пг/мл, TNF-α > 5,2 пг/мл, IL-1β > 18,2 пг/мл, IL-18 > 31,1 пг/мл и при повышенном уровне экспрессии противовоспалительных цитокинов в перитуморальной зоне: IL-10 > 6,8 пг/мл, INF-γ > 17,5 пг/мл и в опухолевой ткани: IL-10> 7,5 пг/мл, INF-γ ≥ 9,9 пг/мг, прогнозируют развитие рецидива после проведенного комплексного лечения в ближайшие 6-9 месяцев.

Способ осуществляют следующим образом.

Интраоперационно, при операции в объеме трансуретральной резекции мочевого пузыря (ТУР), производят забор образцов ткани опухоли и перитуморальной зоны. Образцы опухолевой ткани и перитуморальной зоны размерами 0,5×0,5×0,5 см, подвергают механическому дроблению на более мелкие фрагменты. Приготовленный материал погружают в одноразовый контейнер для гомогенизации тканей (Medicons, 50μm, «Becton Dickinson and Company», США) и добавляют 2 мл промывочного раствора для клеток (Cellwash, США). Контейнер помещают в прибор для гомогенизации тканей (BD Medimachine, «Becton Dickinson and Company», США) на 30 сек. Полученную суспензию клеток переносят в пластиковые одноразовые пробирки (пробирки Falcon® на 5 мл, круглодонные, нестерильные, без крышки, 12×75 мм) и осаждают с помощью лабораторной центрифуги ЦЛМН-Р10-01 (ООО «Элекон М», Россия) при 1,5 тыс. об/мин в течение 10 минут. В результате получали разделенную на две фракции смесь (жидкая полупрозрачная часть сверху и более плотный осадок снизу), из которой, после центрифугирования, с помощью механического дозатора (Biohit Proline) с использованием одноразовых наконечников получали надосадочную жидкость (супернатант). Супернатант с помощью дозатора аликвотировали в отдельные пробирки типа Эппендорф по 200 мкл в каждую и хранили в морозильной камере при температуре -25°С не более 6 мес. для последующего определения концентрации цитокинов. В предварительно размороженных образцах супернатанта, с помощью «сэндвич»-варианта ИФА, согласно инструкции производителя, определялся уровень цитокинов: провоспалительных и противовоспалительных цитокинов (TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-18, IL-10, IFN-γ) с использованием тест-систем «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия). Оценку результатов количественного определения цитокинов осуществляли на анализаторе иммуноферментных реакций АИФР-01 (УНИПЛАН, Россия) при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620 нм. Результаты выражали в виде удельного содержания в пересчете на 1 г белка гомогената, оцениваемого биуретовым методом (пг/мл/г белка). Концентрацию общего белка определяли биуретовым методом с использованием наборов «Общий белок Ольвекс» (Ольвекс-диагностикум, Россия) в соответствии с инструкцией фирмы производителя. Результаты реакции оценивали на полуавтоматическом биохимическом анализаторе BS-3000Р (Sinnowa Medical Science & Technology Co., КНР).

При уровне экспрессии провоспалительных цитокинов в опухолевой ткани: IL-6 ≥ 9,1 пг/мл, IL -8 > 24,6 пг/мл, TNF-α ≥ 10,9 пг/мл, IL-1β ≥ 25,6 пг/мл, IL-18 ≥ 36,0 пг/мл и при уровне экспрессии провоспалительных цитокинов в перитуморальной зоне: IL -6 > 6,6 пг/мл, IL-8 > 0,7 пг/мл, TNF-α > 5,2 пг/мл, IL-1β > 18,2 пг/мл, IL-18 > 31,1 пг/мл и при уровне экспрессии противовоспалительных цитокинов в опухолевой ткани IL-10 > 7,5 пг/мл, INF-γ ≥ 9,9 пг/мл и в перитуморальной зоне: IL -10 > 6,8 пг/мл, INF-γ > 17,5 пг/мл то, прогнозируют развитие рецидива после проведенного комплексного лечения (ТУР мочевого пузыря + 6 курсов внутрипузырной химиотерапии) в ближайшие 6-9 месяцев.

Приводим примеры клинического применения способа.

Пример №1.

Пациент Б., 27.10.1952 г.р., поступил 21.09.2020 г. в отделение онкоурологии ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России с жалобами на примесь крови в моче. Из анамнеза: считает себя больным в течение 3х месяцев,

Данные обследования: МРТ брюшной полости, малого таза от 07.09.2020 г. В мочевом пузыре солидной структуры опухоль, размерами ~ 25×39×37 мм, с признаками ограничения диффузии (ADC 0,9-1,0*10-3 мм²/сек).

С диагнозом: (С67.2) ЗНО мочевого пузыря T1N0M0, St.I, кл.гр. 2.

23.09.2020 г. - выполнена операция в объеме трансуретральная резекция мочевого пузыря.

Интраоперационно взят фрагмент опухолевой ткани и перитуморальной зоны для проведения ИФА (определение цитокинового профиля см. табл.1).

Послеоперационный период протекал без особенностей. В п/о периоде пациент получал внутрипузырную химиотерапию № 6.

При гистологическом исследовании: - фрагменты стенки мочевого пузыря с инвазивной уротелиальной карциномой, high-grade, с очагами некроза, с ростом в подслизистый слой.

В последующем пациент проходил контрольное обследование, и на контрольном обследовании через 7 мес. у пациента при плановой цистоскопии выявлен рецидив заболевания.

05.04.2021 г. в НМИЦ онкологии МЗ РФ проведено комплексное лечение (ТУР+ФДТ+ВПХТ)

По данным обследования: МРТ брюшной полости, малого таза от 07.03.2021 г. В шейке мочевого пузыря с ростом по ходу простатической части уретры солидной структуры опухоль, размерами ~ 25×39×37 мм. Глубокие паховые лимфоузлы справа до 10 мм по короткой оси, предпузырные до 6 мм. Мочевой пузырь равномерно заполнен.

Полученные результаты показывают, что в рецидивной ОП повышается секреция провоспалительных (IL-6, IL-8) и противовоспалительных (INF-γ, IL-10) цитокинов.

Пример № 2.

Пациент А., 27.10.1952 г.р., поступил 21.09.2020 г. в отделение онкоурологии ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России с жалобами на примесь крови в моче. Из анамнеза: считает себя больным в течение полугода, примесь крови в моче последние 2 недели.

Данные обследования: СРКТ ОМТ от 18.01.2021 г. Мочевой пузырь: обычной формы, стенка не деформирована, неравномерно утолщена в области вершины в виде узлового образования опухоль до 1,6×1,5 см.

Установлен диагноз: (С67.1) ЗНО мочевого пузыря T1N0M0, St.I, кл.гр. 2.

21.08.2020 г. - выполнена операция - трансуретральная резекция мочевого пузыря.

Интраоперационно взят фрагмент опухолевой (ОП) и перитуморальной зоны (ПЗ) для ИФА (определение цитокинового профиля см. табл.2).

При гистологическом исследовании: папиллярная уротелиальная карцинома, G2.

Послеоперационный период протекал без особенностей.

В п/о периоде пациент получал внутрипузырную химиотерапию № 6.

В последующем пациент проходил контрольное обследование, в настоящее время данных за рецидив не выявлено.

Полученные результаты показывают, что в рецидивной ОП повышается секреция провоспалительных (IL-6, IL-8) и противовоспалительных (INF-γ, IL--10) цитокинов, что может свидетельствовать об их усиленной продукции опухолевыми клетками. Повышенная экспрессия провоспалительных цитокинов также может свидетельствовать о том, что у данных больных процесс воспаления протекает более ярко, что может, в частности, способствовать последующему развитию рецидива заболевания. У пациентов с рецидивом заболевания рост опухоли может развиваться на фоне высокой экспрессии провоспалительных цитокинов, которые способны изменять ответ опухолевых клеток на действие иммунной системы и возможно предотвратить их от элиминации из организма, тем самым сохраняя пул опухолевых клеток интактных к иммунной системе, что в последующем может привести к развитию рецидива заболевания.

Эти данные позволяют предполагать развитие рецидива заболевания, основываясь на полученных данных первичной ткани пациентов.

Приведенный клинический пример демонстрирует возможность прогнозирования рецидива заболевания.

Технико-экономическая эффективность способа заключается в том, что его применение позволит в дальнейшем, прогнозировать риски развития рецидива заболевания, а также, поможет оценить результаты проведенного комплексного лечения. Все это может являться основой для определения вероятности механизмов рецидивирования и ответа на терапию при немышечно-инвазивном раке мочевого пузыря.

Список литературы:

1. Белякова Л.И., Шевченко А.Н., Сагакянц А.Б., Филатова Е.В. Маркеры рака мочевого пузыря: их роль и прогностическая значимость (обзор литературы). Онкоурология 2021;17(2):145-56. DOI: 10.17650/1726- 9776-2021-17-2-145-156.

2. Блинников А.А., Рязанцев Е.В. Динамика некоторых цитокинов плазмы крови в структуре хирургического лечения рака мочевого пузыря. Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина 2008; 8:280-4. Blinnikov A.A., Ryazantsev E.V. The dynamics of some cytokines of plasma in the structure of surgical treatment of urinary bladder cancer. Vestnik Rossiyskogo Universiteta Druzhby Narodov. Seriya: Meditsina = RUDN Journal of Medicine 2008; 8:280-4. (In Russ.).

3. Молчанов Р.Н., Шпонька И.С. Иммуногистохимическая оценка рака мочевого пузыря, протекающего на фоне хронического воспаления. Морфология 2014;8(3):42-9.

4. Ткачук В.Н., Аль-Шукри А.С., Данильченко Д.И. Значение определения матрикс-металлопротеиназ в моче у больных раком мочевого пузыря // Урологические ведомости. - 2011. - №1. - С. 30-32.

5. Ролевич А.И., Мишустин С.И. Прогностическая классификация при раке мочевого пузыря без мышечной инвазии // Онкологический журнал. - 2016. - Т. 10, №1(37). - С. 64-70.

6. IARC, Cancer Today. Estimated number of new cases in 2020, worldwide, both sexes, all ages. 2021. 2022. https://gco.iarc.fr/today/online-analysis-table.

7. Saginala K, Barsouk A, Aluru JS, Rawla P, Padala SA, Barsouk A. Epidemiology of bladder cancer. Med Sci. 2020; 8(1):15. https://doi.org/10.3390/medsci8010015.

8. Hyuna Sung, Jacques Ferlay, Rebecca L. Siegel et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 2021 May; 71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660.

9. Злокачественные новообразования в России в 2020 году (заболеваемость и смертность). Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, А.О. Шахзадовой М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2021. 252 с. Malignant tumors in Russia in 2020 (morbidity and mortality). Eds.: А.D. Kaprin, V.V. Starinskiy, A.O.Shahzadova Moscow: MNIOI im. P.A. Gertsena - filial FGBU “NMITS radiologii” Minzdrava Rossii, 2021. 252 p. (In Russ.)

10. Состояние онкологической помощи населению России в 2020 году. Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, А.О. Шахзадовой.М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2020, 239 с.

11. Burger M., Catto J.W., Dalbagni G. et al. Epidemiology and risk factors of urothelial bladder cancer. Eur Urol 2013;63(2):234-41. DOI: 10.1016/j.eururo.2012.07.033.

12. Михайленко Д.С., Перепечин Д.В., Ефремов Г.Д., Сивков А. В., Аполихин О. И. Определение мутаций генов FGFR3 и PIK3CA в ДНК из осадка мочи у больных раком мочевого пузыря. Экспериментальная и клиническая урология. 2015; (4):38-41.

13. Кит О.И., Шевченко А.Н., Комарова Е.Ф. и др. Влияние сопряжения полиморфизма генов матричных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов с активностью внеклеточного протеолиза компонентов базальной мембраны на раннее рецидивирование у больных поверхностным раком мочевого пузыря. Уральский медицинский журнал 2015; 7(130):73-8. Kit O.I., Shevchenko A.N., KomarovaE.F.et al. Effect of conjugation matrix metalloproteinase genes polymorphism and their tissue inhibitors with the activity of extracellular proteolysis basement membrane components at early recurrence in patients with superficial bladder cancer. Ural’skiy meditsinskiy zhurnal = Ural Medical Journal 2015; 7(130):73-8. (In Russ.)