Результат интеллектуальной деятельности: КЛЕТОЧНАЯ ЛИНИЯ КАРЦИНОМЫ ЛЕГКИХ МЫШИ СРХ-1, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ВАКЦИНЫ

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и касается клеточной линии карциномы легких мыши СРХ-1, предназначенной для разработки вакцины. Вакцины, приготовленные на основе опухолевых клеток, состоят из аллогенных, аутологичных и ксеногенных опухолевых клеток или их компонентов. Опухолевая линия СРХ-1 может быть предложена как безопасный иммуногенный субстрат для разработки препарата применяемого для лечения и профилактики карциномы у человека и млекопитающих (кошки, собаки и др.).

Цель изобретения - получение новой клеточной линии карциномы легких мыши и использование ее в разработке противоопухолевой вакцины.

Опухолевая линия СРХ-1 возникла спонтанным мутированием из карциномы легких Льюиса (LLC) мышей в процессе длительного пересева. Полученная клеточная линия обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Хранится в Специализированной коллекции культур клеток ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» Института Цитологии РАН под номером РККК (П) 778Д.

Морфологические признаки клеточной линии СРХ-1.

Культура клеток состоит из полиморфных клеток, большинство которых имеет округлую форму. Значительная часть клетки занята ядром с крупными ядрышками и крупными конденсированными зернами хроматина. Фигуры митозов наблюдается в 36,7% клеток. Цитоплазма не гомогенная.

Генетический анализ клеточной линии СРХ-1:

1. Выявлено присутствие мышиных генов раковых маркеров в хромосомной ДНК: mage А-1, GP100, тирозиназы, her2/neu, раково-эмбрионального антигена.

2. Выявлены белковые продукты экспрессии генов тирозиназы, GP100.

Культуральные свойства клеточной линии СРХ-1.

Опухолевые клетки культивируют в среде RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 1% HEPES, в культуральных флаконах (Costar). Клетки СРХ-1 растут в виде суспензионной культуры. Концентрация клеток при посеве - 10000 кл/мл, кратность рассева - 1:3.

Кариотипирование. Цитогенетический анализ СРХ-1 выявил сильно перестроенный кариотип, большей частью состоящий из акроцентрических хромосом, характерных для мыши, Mus museums. Клетки характеризуются полиплоидным числом хромосом, разброс по числу хромосом варьирует от 78 до 94, модальный класс выражен нечетко. Чаще встречаются клетки четырех вариантов, содержащие 88, 89, 90 и 91 хромосомы. В 22% клеток модальное число хромосом равно 88. Кариотип клеток линии СРХ-1 околотетраплоиден.

ПЦР-анализ клеточной линии СРХ-1. В линии клеток СРХ-1 присутствуют девять микросателлитов, маркирующих восемь разных хромосом мыши. Праймеры для амплификации микросателлитов видоспецифичны для мыши.

Условия криоконсервации.

Состав среды для криоконсервации: 90% инактивированная фетальная бычья сыворотка, 10% DMSO, концентрация клеток - 1,0 млн./ мл. Заморозка производится в программном замораживателе при понижении температуры на 1°/мин. Хранение клеточной линии происходит в жидком азоте при -196°С. Размораживание производится в водяной бане при 37°С. Жизнеспособность клеток после размораживания, определенная методом исключения трипанового синего и составляет 80%.

Контаминация. При длительном наблюдении бактерии и грибы в культуре не обнаружены. Тест на микоплазму отрицателен.

Пример 1. Культивирование клеточной линии СРХ-1.

СРХ-1 перевивается на самках и самцах мышей линии С57В 1/6 подкожным введением. Доза перевивки - 2×10⁵-5×10⁵ живых клеток в физиологическом растворе. Перевиваемость 100%. Средняя продолжительность жизни животных равна 21-31 день. При подкожной имплантации опухоль растет в виде солидного образования.