Результат интеллектуальной деятельности: Способ профилактики рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота

Предполагаемое изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, вирусологии и может быть использовано в неблагополучных по энтеритам новорожденных телят животноводческих хозяйствах.

Колибактериоз (эшерихиоз) - широко распространенное во всем мире инфекционное заболевание новорожденных сельскохозяйственных животных, проявляющееся в виде диареи, сепсиса и сопровождающееся высокой заболеваемостью, смертностью и снижением привесов у переболевших животных.

Массовые энтериты и энтероколиты новорожденных телят, обусловленные рота-, короновирусами имеют высокую инцидентность с E.coli. В этой связи, важное значение придается активной иммунизации коров-матерей с целью получения от них молозива и молока с высоким уровнем антител против рота-, коронавируса и колибактериоза для выпаивания новорожденным телятам и создания у них пассивного иммунитета к данным инфекциям.

Адгезивность микроорганизмов один из основных факторов патогенности. 60% циркулирующих в хозяйствах штаммов E.coli - возбудителей колибактериоза обладают различными адгезивными антигенами и их сочетаниями. Наиболее часто у телят обнаруживают адгезины К99, F41, Att25. Активная защита от факторов адгезии микроорганизмов с помощью специфических препаратов может быть особенно эффективна при кишечных инфекциях животных, особенно вызываемых E.coli [Соколова Н.А., Головко А.Н., Курашвили Т.К. и др. Способ получения вакцины против колибактериоза сельскохозяйственных животных / патент RU 2053792, С1, 10.02.1996].

До настоящего времени для повышения иммунного статуса коров известен, иммуномодулятор «Спленивит» [А.П. Горбунов, В.В. Масанская Способ получения биостимулятора «Спленивита» из селезенки животных, А.С. A23K 1/00, SU 1695869 А1, 1991].

«Спленивит» представляет собой тканевой ветеринарный препарат из селезенки животных, действующим веществом которого являются полипептиды и биологически активные вещества.

Применение его животным повышает общую резистентность, позволяет лучше адаптироваться к новым условиям, снижает заболеваемость, способствует повышению среднесуточных привесов. В организме животных увеличивается содержание общего белка, гаммаглобулинов в сыворотке крови, повышается бактерицидная активность. [Иммуномодулирующая кормовая добавка Дырдуева Н.Б., Бильдуева Д.Г., Булытова З.Д., Лебедева С.Н., Жамсаранова С.Д., Струганов В.Н. патент №2194419]

Известно, что для оздоровления хозяйств от ряда заболеваний крупного рогатого скота, наряду с использованием комплекса симптоматических лечебных средств и ветеринарно-зоотехнических мероприятий, рекомендуется введение иммуномодуляторов. Например, совместное введение иммуномодулятора «Гликопина» с вакциной от некробактериоза «Нековак» [Кучерук О.Д. Оптимальные дозы «Гликопина» при совместном введении с вакциной «Нековак» // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). - 2011. - №1. - С. 39-40; Иммунный ответ у крупного рогатого скота на введение вакцины против некробактериоза с иммуномодулятором «Гликопином» // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). - 2009. - №2. - С. 25-26].

Известен способ специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта лошадей ассоциированной вакциной в условиях табунного содержания, в котором в качестве иммуномодулятора, повышающего иммунный ответ, в вакцину вводят культуральную жидкость бульонной культуры штамма Baccillus subtilis ТНП-3-ДЕП (Прототип). [Патент №2424823 от 27.07.11 г., МПК A61K 39/295. Неустроев М.П., Юров К.П., Алексеенкова С.В., Юров Г.К., Петрова С.Г., и др.]

Задачей исследований являлось - изучение специфического иммунного ответа у коров на введение вакцины против ротавирусного, коронавирусного энтерита и эшерихиоза крупного рогатого с иммуномодулятором «Спленивит».

Известна вакцина, ассоциированная инактивированная против ротавирусного, коронавирусного энтерита и эшерихиоза крупного рогатого скота. В качестве активного вещества вакцина содержит смесь инактивированной суспензии штамма ротавируса РМ, семейства Reoviridae, рода Rotavirus, инактивированной суспензии штамма коронавируса КЛ-2 семейства Coronaviridae, рода Coronavirus, с активностью каждого из вирусных штаммов 10^5,5-10^6,5 ТЦД₅₀ в см³ вакцины и суспензии адгезивных антигенов К99, F41, Att25 бактерий Escherichia coli, взятых в равном соотношении. Вакцину рекомендуется применять в хозяйствах, неблагополучных по таким кишечным заболеваниям вирусно-бактериальной этиологии, как рота-, коронавирусная и колибактериозная инфекция телят [Гулюкин М.И., Мникова Л.А., Ишкова Т.А., Соколова Н.Л., Жидков С.А. Разработка и внедрение в практику эффективной системы диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. 2015. Т. 78. С. 179-186; Мникова Л.А., Соколова Н.Л., Горбатов А.В., Ишкова Т.А., Лощинин М.Н. Разработка и испытание ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиозной диареи новорожденных телят // Ветеринария. - 2018. - №9. С. 12-15].

Иммуномодулятор «Спленивит» применяли глубокостельным коровам в соответствии с техническими условиями (ТУ 9337-002-00668554-03).

Сущность изобретения заключается в следующем.

Вакцина, включающая ротавирус крупного рогатого скота штамм РМ, коронавирус крупного рогатого скота штамм КЛ-2 и очищенные адгезины штаммов E.coli - К99, F41, Att25 вводится двукратно за 40 и 20 дней до отела с последующим введением иммуномодулятора «Спленивит».

Предложенный способ профилактики рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота отражен в следующих вариантах:

Вариант 1. Вакцину вводят стельным животным двукратно за 40 и 20 дней до отела в объеме 5 мл подкожно в область средней трети шеи или в паховую складку. После введения вакцины вводят иммуномодулятор «Спленивит» в дозе 2 см³ внутримышечно.

Вариант 2. Вакцину вводят стельным животным двукратно за 40 и 20 дней до отела в объеме 5 мл подкожно в область средней трети шеи или в паховую складку. После введения вакцины вводят иммуномодулятор «Спленивит» в дозе 4 см³ внутримышечно.

Вариант 3. Вакцину вводят стельным животным двукратно за 40 и 20 дней до отела в объеме 5 мл подкожно в область средней трети шеи или в паховую складку. После введения вакцины вводят двукратно иммуномодулятор «Спленивит» в дозе 7 см³ внутримышечно.

Наиболее эффективным в качестве способа профилактики является вариант 3, что подтверждается производственными испытаниями экспериментальных серий вакцины.

Пример 1. Производственное испытание способа профилактики рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота в опытах на коровах.

Иммуногенные свойства вирусбактериальной вакцины изучались на стельных коровах и телятах в хозяйствах Вологодской области. Были сформированы две группы глубокостельных коров по восемь голов в каждой. Животным первой группы вводили вакцину в среднюю треть шеи подкожно в дозе 5 см³ двукратно с интервалом 20 дней. Коров второй группы иммунизировали по той же схеме, что и животных первой группы, но после вакцины им вводили иммуномодулятор «Спленивит» в дозе 7 см³ внутримышечно. Контрольная группа коров (n=5) оставалась интактной.

За 40 дней до отела от животных всех групп получали сыворотку, после чего вакцинировали обе группы первый раз. Коровам второй группы вместе с вакциной последовательно вводили иммуномодулятор. Через 20 дней после первой иммунизации вновь получали сыворотку в обеих группах, проводили ревакцинацию и вводили иммуномодулятор животным второй группы. В течение двух часов после отела у всех коров отбирали пробы молозива в 1, 2 и 3 сутки наблюдения для обнаружения антител к рота-, коронавирусу и адгезинам Е. coli. Контрольная группа коров не обрабатывалась никакими препаратами.

Каждый теленок получал молозиво от своей матери. Для оценки уровня колострального иммунитета, показателей естественной резистентности у телят брали кровь на третий и седьмой день жизни.

Иммуногенные свойства вакцины, вводимой отдельно, а также совместно с иммуномодулятором «Спленивит» тестировали по оценке уровня антител в сыворотке крови коров и телят, а также молозиве, по степени заболеваемости новорожденных телят, полученных от вакцинированных и контрольных коров.

Анализ полученных данных показал, что одновременное последовательное введение иммуномодулятора и трехвалентной вирус-бактериальной вакцины глубокостельным коровам обеспечивало активацию гуморального иммунитета. Так, у животных второй группы после вакцинации отмечено значительное повышение уровня антител всех учитываемых показателей как к бактериальному компоненту вакцины всех трех групп адгезинов, так и к рота-, и коронавирусам в сравнении с контрольной группой животных.

Та же тенденция сохранилась и для уровня антител тех же показателей в группе применения только вакцины. Результаты отражены в табл. 1. При исследовании сывороток крови коров после отела установлено, что титры антител к рота-, и коронавирусам во второй группе (с применением «Спленивита») в 2 раза превышают титры антител в группе без использования иммуномодулятора.

В молозиве первого дня после отела титры антител в обеих группах были высокими в 8-10 раз выше, чем в сыворотке крови (1:15287 и 19911 для рота- и 1:15822 и 19200 для коронавируса).

Анализ результатов определения уровня антителообразования к адгезивным антигенам показал следующее (табл. 2). В сыворотке крови коров после отела титры антител в группе с применением «Спленивита» были в 2-3 раза выше, чем в группе без использования иммуномодулятора.

В молозиве первого дня такое преимущество наблюдалось только для адгезина К99, титры во 2 группе были в 1,8 раз выше (1:9247 и 1:16987 соответственно).

Таким образом, опыты показали, что применение иммуномодулятора «Спленивита» способствует увеличению образования специфических антител против рота-, коронавирусов и адгезивных антигенов К99, Att-25, F41 в сыворотке крови вакцинированных коров в 2-3 раза.

В молозиве первого дня титры антител против вирусов и адгезинов F41 и Att-25 в обеих группах не отличались. Исключение составляет адгезивный антиген К99. Титры антител против него были почти в 2 раза выше в группе коров, в которой применялся «Спленивит».

Пример 2. Производственное испытание способа профилактики рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота в опытах на телятах.

Иммуногенные свойства вакцины определяли также по степени заболеваемости новорожденных телят, полученных от вакцинированных и контрольных коров (прим. 1). Молозиво выпаивали телятам через 2-4 часа после рождения. За телятами вели наблюдение и ежедневно клинически обследовали, при этом учитывали количество специфических антител, получаемых животным с молозивом матери, частоту, продолжительность, тяжесть болезни телят. Сыворотки крови и фекалии телят отбирали на 3 и 7 день для исследования на наличие антител к рота-, и коронавирусам КРС и бактериальным компонентам вакцины.

В результате проведенных исследований, установлена прямая коррелятивная связь между количеством антител в молозиве коров и наличием их в сыворотке крови и фекалиях телят, которым выпаивали иммунное молозиво. В сыворотке крови 3 дневных телят титры антител против адгезинов К99 и Att25 были одинаковыми в первой и второй группе. Титры антител к адгезину F41 были в 1,8 выше в первой группе, чем во второй с использованием иммуномодулятора. Также в сыворотке крови 3 дневных телят наблюдали 4-кратное увеличение титров антител к ротавирусу в группе с применением «Спленивита» и отсутствие подобного эффекта для коронавируса.

Фекалии телят, которым выпаивали молозиво от вакцинированных коров, содержали антитела в 65% случаев, а в фекалиях телят контрольной группы антитела выявляли лишь у одного теленка. Титры копроантител к адгезивным антигенам у телят от иммунизированных коров в 6-28 раз превышали титры у контрольных животных.

Защитные свойства молозива от иммунизированных коров оценивали по разнице в продолжительности болезни и количестве заболевших телят в обеих группах и контроле (табл. 3). В течение первой недели около 50% телят от коров, вакцинированных с применением «Спленивита» заболели с клиническим проявлением диареи, однако заболевание протекало в легкой форме, длилось не более 3-4 суток и заканчивалось выздоровлением.

У контрольных телят, полученных от неиммунизированных коров, заболевание протекало длительно, в острой форме, сопровождалось тяжелой диареей с большим количеством слизи, обезвоживанием, повышением температуры тела, истощением, и пало 2 теленка.

Таким образом, получены экспериментальные данные о высоком уровне защиты новорожденных телят от вакцинированных коров, в сыворотке которых регистрировали значительное увеличение специфических антител против рота,- коронавирусов и адгезивных антигенов E.coli К99, Att25, F41, входящих в состав вакцины.

Разработанный способ применения вакцины с иммуномодулятором «Спленивит» позволит правильно организовать мероприятия по профилактике и борьбе с желудочно-кишечными болезнями телят и снизить заболеваемость и отход телят, облегчит течение болезни, уменьшит возможность инфицирования здоровых телят.

Вакцина с применением иммуномодулятора «Спленивит» апробирована с положительным результатом на крупном рогатом скоте в неблагополучных хозяйствах Вологодской области в течение 2018 г, что подтверждает безвредность препарата, повышенную иммуногенную активность компонентов вакцины, выраженную в индукции иммунного ответа у коров-матерей к разным вариантам антигенов возбудителей, циркулирующих в хозяйстве.

Учитывая широкое распространение желудочно-кишечных заболеваний в хозяйствах РФ и необходимость вакцинации большого количества животных, экономический эффект от применения разрабатываемого способа профилактики может быть существенным.

Список литературы

1. Горбунов А.П., Масанская В.В. Способ получения биостимулятора «Спленивита» из селезенки животных, А.С. A23K 1/00, SU 1695869 А1, 1991

2. Гулюкин М.И., Мникова Л.А., Ишкова Т.А., Соколова Н.Л., Жидков С.А. Разработка и внедрение в практику эффективной системы диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. 2015. Т. 78. С. 179-186.

3. Дырдуева Н.Б., Бильдуева Д.Г., Булытова З.Д., Лебедева С.Н., Жамсаранова С.Д., Струганов В.Н. Иммуномодулирующая кормовая добавка, патент №2194419

4. Соколова Н.А., Головко А.Н., Курашвили Т.К. и др. Способ получения вакцины против колибактериоза сельскохозяйственных животных / патент RU 2053792, С1, 10.02.1996.

5. Иммунный ответ у крупного рогатого скота на введение вакцины против некробактериоза с иммуномодулятором «Гликопином» // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). - 2009. - №2. - С. 25-26.

6. Кучерук О.Д. Оптимальные дозы «Гликопина» при совместном введении с вакциной «Нековак» // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). - 2011. - №1. - С. 39-40.

7. Мникова Л.А., Соколова Н.Л., Горбатов А.В., Ишкова Т.А., Лощинин М.Н. Разработка и испытание ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиозной диареи новорожденных телят // Ветеринария. - 2018. - №9. С. 12-15.

8. Неустроев М.П., Юров К.П., Алексеенкова С.В., Юров Г.К., Петрова С.Г., и др. Способ специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта лошадей ассоциированной вакциной в условиях табунного содержания Патент №2424823 от 27.07.11 г., МПК A61K 39/295.