СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АДАПТОГЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства из растительного сырья, обладающего адаптогенной активностью.

В последнее десятилетие вследствие возрастающего эколого-социального прессинга отмечается существенное снижение общей сопротивляемости, связанное с депрессией адаптационно- компенсаторных механизмов. В этих условиях особую значимость приобретают профилактические мероприятия, направленные на повышение неспецифической резистентности организма. Одним из методов достижения этого состояния является применение фармакологических средств, обладающих адаптогенной активностью и повышающих сопротивляемость к широкому спектру стрессогенных факторов. Наиболее перспективным направлением является разработка новых препаратов на основе сырья природного происхождения, растущий интерес к которым отмечается во всем мире.

Связано это с тем, что препараты, получаемые из сырья растительного и животного происхождения, продуктов моря и пчеловодства, обладают рядом преимуществ по сравнению с синтетическими средствами: содержат широкий спектр биологически активных веществ; обладают несколькими видами фармакологической активности; характеризуются плавным нарастанием фармакологического эффекта. Кроме того, препараты природного происхождения отличаются низкой токсичностью и отсутствием побочных реакций при длительном приеме [5].

Перспективным направлением поиска и разработки новых адаптогенных препаратов природного происхождения является исследование средств неспецифического действия из арсенала тибетской медицины, рекомендуемых для ослабленных, а также лиц преклонного возрастав качестве общеукрепляющих, «дающих долголетие и здоровье».

На основе рецептурной прописи «солодка-7», в показаниях к применению: «при болях в области почек, поясницы, тугоподвижность конечностей, внезапные приливы жара в разных частях тела»[14] разработан растительный экстракт сухой (РЭС) из корненей и корневищ солодки уральской (Glyzyrrhiza uralensis Fisch), древесины караганы гривастой (Caragana jubata (Pall.) Poir, корней купены душистой (Polygonatum odoratum (Mill) Druse, корней купены приземистой (Polygonatum humile Fisch ex Maxim), клубней ятрышника мужского (Orchis mascula (L.), корней ревеня обыкновенного (Rheum rhabarbarum L.), корней и корневищ марены красильной (Rubia tinctorum (L.).

Компоненты данного средства содержат широкий набор биологически активных веществ, относящихся к различным классам химических соединений: терпены (глицирризиновая кислота, диосгенин, сапонин РО-2, РО-3), флавоноиды (ликвиритин, кверцетин, рутин, витексин, мирицитин, хризориол, апигенин и их гликозиды), фенолкарбоновые кислоты (кофейная, хлорогеновая, неохлорогеновая, галловая, кумаровая, коричная), антоцианы (хрезатемин, серанин, цианин), антрахиноны (хризофанол, эмодин, ализарин, пурпурин, луцидинпримверозид, руберитриновая кислота) и др. [9, 10, 11, 12].

Фармакологическая активность данных видов известна, так извлечения солодки проявляют противовоспалительную и иммуномоделирующую активность [10]; караганы - гипогликемическую, противовоспалительную [10]; купены душистой - иммуномо-дулирующую[12], купены приземистой - коагулянтную[12]; ятрышника- антиоксидантную[12]; ревеня - противовоспалительную [9]; марены красильной - желчегонную и антибактериальную [11].

Таким образом, по данным народной и научной медицины препараты из корненей и корневищ солодки уральской, древесины караганы гривастой, корней купены душистой, корневищ купены приземистой, клубней ятрышника мужского, корней ревеня обыкновенного, корней и корневищ марены красильной обладают выраженным антиоксидантным и иммуномодулирующим действием, что указывает на целесообразность применения данной композиции в качестве адаптогенного средства.

Целью изобретения является повышение адаптогенной активности средства за счет более высокого содержания действующих веществ (терпеноидов, флавоноидов, оксикоричных кислот, антоцианов).

Для достижения указанной цели растительный материал (сырье) - 178.57 г корненей и корневищ солодки уральской; 321.42 г древесины караганы гривастой; 53.57 г корней купены душистой; 53.57 г корней купены приземистой; 178.57 г клубней ятрышника мужского; 107.14 г корней ревеня обыкновенного; 107.14 г корней и корневищ марены красильной измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито №10 ГОСТ 214-83) и экстрагируют 50% этиловым спиртом в соотношении сырье: экстрагент, равном 1:16 (с учетом коэффициента водопоглощения), при температуре 60°С и постоянном перемешивании. Процесс повторяют трижды. Время экстракции при 1-ом и 2-ом контактах фаз - 60 мин, при 3-ем контакте фаз - 30 мин. Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 270.0 г готового продукта, что составляет 27.0±0.5% от массы воздушно-сухого сырья.

Предложенный способ позволяет получить конечный продукт, сухой экстракт, представляющий собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и сладковатым вкусом, с содержанием влаги - не более 5%.

Способ иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример

Растительный материал (сырье) - 178.57 г корней и корневищ солодки уральской; 321.42 г древесины караганы гривастой; 53.57 г корней купены душистой; 53.57 г корней купены приземистой; 178.57 г клубней ятрышника мужского; 107.14 г корней ревеня обыкновенного; 107.14 г корней и корневищ марены красильной измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито №10 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 16 л 50% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент равном 1:16 с учетом коэффициента водопоглощения сырья. Экстрагируют при температуре 60°С и постоянном перемешивании в течение 60 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 30 мин, подавая каждый раз в экстрактор 50% спирт в количестве равном объему слитого извлечения (1-ый слив - 10.85 л, 2-ой слив - 9.80 л, 3-ий слив - 9.60 л). Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 270.3 г готового продукта, что составляет 27.06% от массы воздушно-сухого сырья. Экстракт сухой представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и сладковатым вкусом; комкуется, содержание влаги - 4.05%.

Острая токсичность экстракта (РЭС) определялась на белых беспородных мышах-самцах с исходной массой 20.0±1.0 г при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введениях растворенного в воде экстракта. Каждую дозу экстракта испытывали на 10 животных. Наблюдение за животными вели в течение 14 дней. Регистрировали наблюдаемые признаки интоксикации, проводили вскрытие и осмотр погибших животных. Результаты исследований показали, что при внутрибрюшинном введении больших доз экстракта сухого белым мышам наблюдаются признаки интоксикации, выражающиеся в замедлении ориентировочной реакции, резких движениях, появлением тонических, а затем тонико-клонических судорог. Животные погибали при явлениях сердечнососудистой недостаточности преимущественно в течение суток от введения экстракта сухого. LD50 по Керберу при внутрибрюшинном введении экстракта сухого 1960±60.76 мг/кг. При внутрижелудочном введении данного средства в максимально возможной дозе, гибель животных не регистрировалась, и не наблюдалось явных признаков интоксикации. Эти данные позволяют отнести испытуемый экстракт сухой к группе малотоксичных веществ по классификации Сидорова [13].

Влияние экстракта сухого на физическую выносливость и устойчивость к гипоксии.

Исследования проведены на 55 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, содержащихся на стандартном рационе вивария.

Для определения общей физической выносливости использовали общепринятую методику плавания с грузом 5% от массы тела [6]. Водный раствор РЭС вводили внутрижелудочно в объеме 1.0 мл/100 г, содержащим 0.5; 1.0; 3.0% раствора экстракта однократно за 1 час до тестирования, а также многократно в течение 7 дней в объеме 1.0 мл/100 г, содержащим 3.0 мл водного настоя 1 раз в день до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалколизированный раствор экстракта элеутероккока жидкого в объеме 1 мл/ 100 г [6]. Оценивали продолжительность плавания животных до полного утомления, критерием которого служило 10-секундное погружение в воду. Полученные данные приведены в таблице 1.

Как следует, из данных, приведенных в таблице 1, однократное введение РЭС в объеме 0.5 и 1.0 мл/ кг не оказывало существенного влияния на продолжительность плавания животных, тогда как при использовании его в объеме 3.0 мл/ кг отмечалось повышение общей физической выносливости на 20% по сравнению с данными животных контрольной группы. Исходя из этого, в дальнейших экспериментах, в качестве эксперементально-терапевтического был использован объем РЭС, соответствующий 3.0 мл/ кг.

Семидневное превентивное введение РЭС в объеме 3.0 мл/кг сопровождалось более существенным повышением общей физической выносливости, о чем свидетельствует увеличение продолжительности плавания животных опытной группы в среднем на 30% по сравнению с показателями контрольной группы.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что РЭС оказывает стимулирующее действие на общую физическую выносливость, характеризующуюся преобладанием аэробных процессов энергообеспечения тканей. Установлено, что наиболее выраженной актопротективной активностью испытуемое средство обладает при введении в объеме 3.0 мл/ кг, содержащей 3.0 мл водного настоя; эффективность повышается при многократном введении.

Влияние РЭС на физическую выносливость и устойчивость к гипоксии.

Исследования проведены на 55 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, содержащихся на стандартном рационе вивария.

Для определения скоростной физической выносливости использовали общепринятую методику бега животных на 10-дорожечном третбане при скорости движения полотна 40 м/мин [7]. Острую гипобарическую гипоксию воспроизводили в борокамере при отмосферном давлении 198.8 мм ртутного столба, парциальном давлении кислорода 50 мм ртутного столба, что соответствует «подьему» животных на высоту 1000 м над уровнем моря. Для воспроизведения гистотоксической гипоксии животным внутрибрюшиннон однократно вводили натрия нитропруссид в дозе 20 мг/кг [8]. Устойчивость к гипоксии оценивали по продолжительности жизни животных.

Водный раствор экстракта вводили внутрижелудочно в объеме 1.0 мл/100 г, содержащим 3.0% раствора экстракта однократно за 1 час до тестирования, а также многократно в течение 7 дней в объеме 1.0 мл/100 г, содержащим 3.0 мл водного настоя 1 раз в день до приема пищи. Животным контольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалколизированный раствор экстракта элеутероккока жидкого в объеме 1 мл/ 100 г. Полученные данные приведены в таблице 2.

Как следует из таблицы, превентивно-курсовое введение экстракта сопровождается увеличением продолжительности бега на 26% по сравнению с данными животных контрольной группы. Установлено, что профилактическое введение экстракта увеличивало время жизни крыс при гистотоксической и гипобарической гипоксии на 20 и 38% соответственно, по отношению к контролю. При этом актопротективная и антигипоксическая активность экстракта была аналогичной таковой у препарата сравнения «экстракта элеутероккока».

Влияние экстракта сухого на выраженность катаболических изменений органов белых крыс при иммобилизационнном и эмоциональном стрессе.

Исследования проведены на 55 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, содержащихся на стандартном рационе вивария. Иммобиллизационный стресс воспроизводили общепринятым методом путем фиксации животных на спине в течение 20 ч. Для воспроизведения эмоционального стресса, животных иммобилизировали в пластиковых пеналах и погружали в воду (23 С) по мечевидный отросток грудины на 2 часа [6, 7]. Статистическую обработку результатов проводили с использованием U-критерия Манна-Уитни.

Как видно из таблицы 3, в результате иммобилизационного и эмоционального стресса у животных развивается комплекс дистрофических изменений внутренних органов, характерных для стесс-реакции: инволюция лимфоидных органов, гипертрофия надпочечников, появление деструктивных поражений слизистой оболочки желудка. Более выраженные изменения внутренних органов отмечены при иммобилизационном стрессе, что очевидно связано с более длительным стрессорным воздействием. Профилактическое введение растительного экстракта сухого в объеме 3.0 мл/ 100 г, оказало выраженное антистрессорное действие, о чем свидетельствует уменьшение относительной массы надпочечников крыс опытной группы при иммобилизационном и эмоциональном стрессе в среднем на 27.9%; увеличении относительной массы тимуса - на 30% и селезенки - на 18% по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы. Антистессорная активность испытуемого средства была сопоставима с таковой у препарата сравнения - экстракта элеутероккока.

Таким образом, исследование адаптогенной активности растительного экстракта сухого показало, что его превентивное введение в объеме 3.0 мл/100 г сопровождается повышением сопротивляемости организма животных к действию экстремальных факторов различной природы: интенсивных физических нагрузок (общих и скоростных); гипобарической и тканевой гипоксии; иммобилизационного и эмоционального стресса. Можно полагать, что в основе адаптационной перестройки организма, развивающейся под влиянием испытуемого средства, лежит ряд функциональных и метаболических изменений, происходящих на различных уровнях биологической организации и обеспечиваемых широким спектром биологически активных веществ, входящих в его состав, таких как терпеновые, флавоноиды, антоцианы, фенолкарбоновые кислоты. Можно полагать, что указанные биологически активные вещества стимулируют эрготропные и трофотропные процессы в клетках и тем самым формируют состояние неспецифически повышенной сопротивляемости организма к действию экстремальных факторов различной природы. В частности, при интенсивных физических нагрузках, реализация актопротективного эффекта испытуемого средства связана с оптимизацией энергетического обмена в клетках, обеспечивающего активацию ресинтеза АТФ и уменьшении метаболического анида, являющегося, как известно главным лимитирующим фактором физической работоспособности. Показано, что активация ресинтеза АТФ под влиянием растительного экстракта сухого обеспечивается как повышением кислородтранспортной функции крови, так и оптимизацией лимитирующих звеньев энергетического обмена в клетках, что подтверждается полученными данными о выраженной антигипоксической активности растительного экстракта сухого при кислород-дефицитных состояниях различного генеза.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что растительный экстракт сухой обладает широким спектром адаптогенной активности, что аргументирует перспективность его дальнейшего исследования и внедрения в клиническую практику в качестве средства, предназначенного для повышения неспецифической сопротивляемости организма, предупреждения утомления при физических и психических нагрузках, а также для повышения работоспособности.

Методом ВЭЖХ в полиэкстракте сухом установлено наличие десяти маркерных компонентов, сырьевым источником которых является ревень обыкновенный (дезоксирацонтицин, рапонтицин, рапонтигенин, кофейная кислота), солодка уральская (ликвиритин, глицирризиновая кислота), марена красильная (ализарин, пурпурин, руберитриновая кислота, луцидинпримверозид) рисунок 1.

Рис. 1. Хроматограмма (ВЭЖХ) спиртового извлечения из экстракта «Солодка-7 Числами обозначены соединения: 1 - кофейная кислота; 2 - дезоксирапонтицин; 3 - ликвиритин; 4 - рапонтицин; 5 - луцидинпримверозид; 6 - руберитриновая кислота; 7 - рапонтигенин; 8 - ализарин; 9 - глицирризиновая кислота; 10 - пурпурин.

Доминирующими соединениями экстракта «солодка 7» являются антрахиноны, содержание которых составило 7.65 мг/г; содержание стельбенов 6.13 мг/г; терпенов (глицирризиновой кислоты) 1.67 мг/г, на долю флавоноидов и фенолкарбоновых кислот приходится 2.07 и 1.12 мг/г, соответственно.

Количественное определение

Для количественного анализа полиэкстракта предложено использование содержания глицирризиновой кислоты [3, 4]. Предложено использовать государственные стандартные образцы глицирама (моноаммониевая соль глицирризиновой кислоты) поскольку глицирризиновая кислота вещество нестабильное, что препятствует использованию данного соединения в качестве государственного стандартного образца.

При количественном определении содержания глицирризиновой кислоты в электронном спектре полиэкстракта содержится один интенсивный максимум поглощения при длине волны 258±2 нм (рис. 2), коррелирующий с таковым глицирризиновой кислоты и глицирама [3].

Методика количественного определения содержания глицирризиновой кислоты в полиэкстракте сухом.

0.5 г (точная навеска) полиэкстракта помещают в колбу коническую со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 20 мл спирта 95% и перемешивают. Далее добавляют 50 мл 3% ацетонового раствора кислоты трихлоруксусной и нагревают в течение 10 мин. После охлаждения полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр, колбу промывают двумя порциями 3% ацетонового раствора кислоты трихлоруксусной по 10 мл, фильтруя через тот же фильтр. К полученному фильтрату прибавляют по каплям раствор аммиака концентрированный до появления обильного осадка (рН от 8,3 до 8,6 по универсальному индикатору). Раствор с осадком переносят на беззольный фильтр, помещенный в воронку Бюхнера. Колбу и фильтр промывают 50 мл ацетона в три приема. Осадок с фильтром переносят в колбу, в которой проводилось осаждение, растворяют в 50 мл воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл и доводят объем раствора водой до метки (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре при длине волны 258 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б ГСО глицирама. Содержание глицирризиновой кислоты в полиэкстракте в пересчете на глицирам в процентах (X) рассчитывают по формуле:

где D - оптическая плотность испытуемого раствора (Б) при длине волны 258 нм; D_O - оптическая плотность раствора ГСО глицирама (Б) при длине волны 258 нм; m - масса сухого экстракта в г; m_o - масса ГСО глицирама в граммах

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью составляет 4,78% (табл. 1).

Определено, что суммарное содержание сапонинов, в пересчете на глицирризиновую кислоту в полиэкстракте сухом при доверительной вероятности 95% составило 0.55%. Ошибка единичного определения не превышает 5%, результаты эксперимента можно считать удовлетворительными.

Предложенный способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получать продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях, выпускающих лекарственные препараты.

Для выявления оптимальных технологических режимов нами были изучены основные факторы, влияющие на процесс экстрагирования растительного сырья: природа экстрагента, его соотношение с сырьем, температурный режим, степень измельчения сырья, продолжительность и количество экстракций.

Количественная оценка проводилась по выходу экстрактивных веществ [1, 2] и суммы терпенов в перечете на глицирризиновую кислоту. Метрологические характеристики представлены в таблице 7.

В качестве экстрагентов были использованы вода и этиловый спирт различных концентраций (20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 96%).

Как видно из таблицы 8, 50- 55% спирт является оптимальным экстрагентом, так как позволяет добиться максимального выхода суммы терпенов с учетом выхода экстрактивных веществ.

Выявление оптимальной степени измельчения сырья проводили для сбора вцелом. Количественную оценку проводили по выходу экстрактивных веществ и суммы терпенов. На основании полученных данных (таблица 9) и с учетом того, что слишком мелкое измельчение растительного материала ведет к загрязнению извлечения трудно-фильтруемыми высокомолекулярными соединениями, измельчение каждого вида сырья следует проводить совместно - 1 мм.

В связи с тем, что в исходном растительном сырье содержатся термолабильные вещества, изучение влияния температуры на процесс экстракции проводили в интервале температур от 20 до 60°С. Данные представлены в таблице 10, оптимальная температура - 60±5°С.

При изучении влияния соотношения сырье-экстрагент на процесс экстракции установлено (таблица 11), что с увеличением количества экстрагента возрастает выход экстрактивных веществ и суммы терпенов, но рост этот для соотношений 1:16 и выше незначителен, поэтому для предотвращения дополнительного расхода экстрагента выбрано соотношение равное 1:16 (с учетом коэффициента водопоглощения).

Для определения продолжительности и необходимого количества экстракций установлено время достижения равновесных концентраций экстрактивных веществ и терпенов в системе сырье-экстрагент в ходе трехкратной экстракции. Для этого проводили экстракцию измельченного сырья 50% этиловым спиртом в соотношении 1:16 на водяной бане при температуре 60°С и постоянном перемешивании в колбе с обратным холодильником. Извлечения полученные через определенные промежутки времени (15, 30, 45, 60, 75, 90 мин) в процессе трех экстракций, анализировали на содержание экстрактивных веществ и терпенов. Установлено, что равновесные концентрации устанавливаются при 1-ом и 2-ом контактах фаз через 60 мин, при 3-ем контакте фаз через 30 мин (таблица 12). Трехкратная экстракция обеспечивает достаточно полное истощение сырья - извлекается до 96% действующих веществ.

Предлагаемый способ позпозволяет получить препарат постоянного состава с более высокой адаптогенной активностью за счет более высокого содержания действующих веществ.

Посчитать экономическую эффективность предлагаемого способа в настоящее время не представляется возможным, однако вышеуказанные преимущества в сочетании с простой схемой получения способствуют рациональному использованию лекарственного растительного сырья и открывают перспективу внедрения данного способа в фармацевтическую промышленность.

Источники информации

1. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

2. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

3. Егоров М.В., Куркин В.А. Совершенствование методов стандартизации корней солодки // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2011. - Т. 13, №1(8). - С. 1992-1995.

4. Егоров М.В., Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Быков В.А. Валидация методик качественного анализа сырья и препаратов солодки // Фармация. - 2005. - Т. 53, №1. - С. 9-12.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М., 2008. - 1200 с.

6. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств. - М., 1990. - 57 с.)

7. Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище. Методологические указания. - М., 1999. - 87 с.

8. Перцов С.С. Язвенные поражения желудка у крыс Август и Вистар при остром и эмоциональном стрессе // Бюл. эксп. биол. и медицины. - 1995. - №11. - С. 469-473].

9. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. В 6 т. Т. 1. Семейства Magnoliaceae - Julandaceae, Ulmaceae, Moraceae, Cannabaceae, Urticaceae. / сост. Беленовская Л.М., Лесиовская Е.Е., Бобылева Н.С. - СПб., М, 2008. - 421 с.

10 Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. В 6 т. Т. 3. Семейства Fabaceae-Apiaceae. / сост. Л.М. Беленовская, Е.Е. Лесиовская, Н.С. Бобылева - СПб., М, 2010. - 601 с.

11 Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. В 6 т. Т. 4. Семейства Caprifoliaceae-Lobeliaceae /сост. Л.М. Беленовская, Е.Е. Лесиовская, Н.С. Бобылева - СПб., М, 2011. - 513 с.

12 Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. В 6 т. Т. 6. Семейства Butomaceae-Typhaceae) / сост. Беленовская Л.М., Лесиовская Е.Е., Бобылева Н.С. - СПб., М, 2014. - 391 с.

13. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах ведения // Токсикология новых промышленных химических веществ. - М. - 1973. - Вып. 13. - С. 47-51.

14. Сумати Праждня. Большой рецептурник Агинского дацана. Ксилограф Агинского дацана. - Нач. ХХ в. - 151 л. Рукопись, перевод Дашиева Д.Б.

15. D.N. Olennikov, N.I. Kashchenko, N.K. Chirikova, A Novel HPLC-Assisted Method for Investigation of the Fe2+-Chelating Activity of Flavonoids and Plant Extracts-2014. Molecules, 19, 18296-18316.

16. D.N. Olennikov, N.I. Kashchenko, N.K. Chirikova, S.S. Kuz'mina. Phenolic Profile of Potentilla anserina L. (Rosaceae) Herb of Siberian Origin and Development of a Rapid Method for Simultaneous Determination of Major Phenolics in P. anserina Pharmaceutical Products by Microcolumn RP-HPLC-UV - 2015. Molecules, 20, 224-248.