Результат интеллектуальной деятельности: Вакцина против вирусного гепатита утят типа I

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности, к производству вакцин для специфической профилактики вирусного гепатита утят типа I (инфекционный гепатит уток).

Вирусный гепатит утят типа 1 (ВГУ-1) занимает одно из приоритетных мест по распространению в странах мира, заболеваемости и летальности. ВГУ-1 - высоко контагиозная, остропротекающая болезнь утят до 4-6 - недельного возраста, характеризующаяся некродистрофическими и воспалительными процессами, преимущественно в печени, геморрагическим диатезом и летальностью до 95% [1, 2], санитарным кодексом МЭБ (2008) ВГУ-1 включен в перечень особо опасных болезней [8].

Возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Picornaviridae, роду Avihepatovirus.

Наиболее эффективным способом борьбы против вирусного гепатита утят типа I (ВГУ-I) является вакцинопрофилактика. Наряду с применением цитратной крови, сыворотки крови уток - реконвалесцентов, гипериммунных сывороток, полученных на различных биологических моделях, используются живые аттенуированные и инактивированные вакцины против вирусного гепатита утят [5, 9].

Известна вирусвакцина против гепатита утят и способ профилактики вирусного гепатита утят [5].

Вакцина содержит культуральную жидкость, штамм «ВГНКИ-К-ДЕП» с биологической активностью не ниже 10⁵ ЭЛД₅₀/0,2 см³. Способ профилактики заболевания предусматривает введение вакцины утятам до 30-дневного возраста однократно в объеме 0,5 см³. Ремонтный молодняк вакцинируют двукратно: первый раз в 60-70-дневном возрасте, второй раз в 140-150 - дневном возрасте в объеме 1,0 см³. Через 6 месяцев проводят ревакцинацию взрослой утки. Вакцину вводят дважды с интервалом в 15 дней в дозе 1,0 см³.

Однако, эта вакцина даже при двукратном применении не создает длительного напряженного иммунитета у птиц на весь репродуктивный период.

Известна инактивированная эмульсия-вакцина, которая применяется для иммунизации ремонтного молодняка уток. Вакцину вводят парентерально трехкратно в возрасте 8, 16 и 22 недель. Трансовариальный иммунитет передается потомству на срок до 22 дней [9].

В качестве вакцинного препарата, являющегося прототипом заявленного изобретения выбрана инактивированная эмульгированная вакцина из штамма 3М-УНИИП против вирусного гепатита утят типа I в смеси с масляным адъювантом Монтанид ISA-70, недостатком которой является использование штамма вируса гепатита, выделенного на Украине и масляного адъюванта Montanide ISA 70 производства фирмы «SEPPIC» (Франция) [3], что экономически не выгодно для производства вакцинного препарата.

Задачей, решаемой в рамках заявленного изобретения, является создание инактивированной вакцины против вирусного гепатита утят типа I, применяемой в условиях промышленного утководства, фермерских хозяйств, создающей длительный напряженный иммунитет у уток родительского стада на весь репродуктивный период, сокращающей количество вакцинаций с целью уменьшения стрессов и нагрузки на иммунную систему птицы при одновременном сохранении безвредности, антигенной активности и длительности хранения вакцинного препарата.

Поставленная задача решена путем создания вакцины, содержащей инактивированный аминоэтилэтиленимином антиген вируса гепатита утят типа I штамма «ВН-3» с активностью 7,0-7,5 lg ЭЛД₅₀/см³ в смеси с химическим реагентом для приготовления масляных эмульсий, АБ-4М В/М [4], взятых в соотношении 1:1-1:4, причем концентрация аминоэтилэтиленимина составляет не менее 0,1%.

Способ вакцинации против вирусного гепатита утят типа I включает подкожное введение заявленного вакцинного препарата птице родительского стада однократно за 30 суток до предполагаемой яйцекладки в дозе 2,5⋅10⁴-2,5⋅10⁵ ЭЛД₅₀/см³. Как правило, показанием к применению вакцины является неблагополучие в хозяйствах по вирусному гепатиту утят типа I.

Штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae используется для приготовления вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I [6].

Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского, ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под №2859.

Вакцинный штамм №2859 получают методом селекции. Штамм имеет следующие морфологические, физиологические и культуральные характеристики.

Вирионы сферической формы диаметром 30-50 нм; нуклеокапсид содержит РНК. В культуре клеток под агаровым покрытием индуцируется образование бляшек с ровными краями размером 1-2 мм. Вирус репродуцируется на утиных эмбрионах 11-12 - дневного возраста, вызывая острую форму инфекции с выраженным отставанием в росте, гемопоэзом, гепатитом через 24 ч в титрах 7,0-7,5 lg ЭЛД₅₀/СМ³. Штамм апатогенен для утят, лабораторных млекопитающих при парентеральном введении в дозах, в 100 раз превышающих вакцинальную, не обладает гемагглютинирующей и гемадсорбирующей активностью, устойчив к воздействию эфира и хлороформа, выдерживает температуру 60°С в течение 60 минут, имеет полное антигенное родство с вирулентным вирусом, вызывающим заболевание в утководческих хозяйствах.

Содержание и количественное соотношение ингредиентов в вакцине диктуется ее функциональными особенностями.

Изменение соотношения антигена и адъюванта АБ-4М В/М в сторону увеличения количества антигена влечет за собой сокращение срока хранения вакцины и перерасход антигена, что экономически не выгодно. При большем содержании адъюванта АБ-4М В/М по отношению к антигену снижается активность вакцины и вырабатывается недостаточный для защиты от заболевания иммунитет.

Для получения вакцины компоненты, входящие в ее состав, смешивают в гомогенизаторе в течение 5-10 минут при скорости 3000 об/мин.

Вакцина представляет собой однородную эмульсию розовато-беловатого цвета с высокой стабильностью в процессе хранения при t=+(2-8)°С.

Способ вакцинации птиц заключается во введении вышеупомянутой инактивированной вакцины в организм птицы подкожно в нижнюю треть шеи однократно в дозе 2,5⋅10⁴-2,5⋅10⁵ ЭЛД₅₀/см³.

Как правило, показанием к применению вакцины является неблагополучие по вирусному гепатиту утят типа I. Вакцинируют всю клинически здоровую птицу родительского стада за 30 сут перед началом репродуктивного периода. Препарат вводят подкожно в объеме 1,0 см³/голову.

Сущность и практическая применимость заявленной группы изобретений иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1: Приготовление инактивированной вакцины в различных соотношениях 1:4; 1:2,33; 1:1,5; 1:1.

Вакцину против вирусного гепатита утят типа I готовят по стандартной методике получения инактивированных эмульгированных препаратов. К 100 объемам инактивированного антигена добавляют 400, 233, 150 и 100 объемов адъюванта АБ-4М В/М соответственно. Полученная смесь тщательно перемешивается и разливается во флаконы, хранится при температуре + (2-8)°С.

Вакцину использовали для профилактики вирусного гепатита утят типа I в условиях опытной базы ВНИВИП.

Иммуногенную активность контролировали путем выявления специфических антител к вирусу гепатита утят типа I в реакции нейтрализации и методом иммуноферментного анализа согласно способу определения специфических антител, к вирусу гепатита утят типа I [7].

Полученные результаты испытаний представлены в таблице 1.

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, оптимальным является соотношение антигена и адъюванта 1:2,33. Препарат безвреден для птицы, обладает выраженной антигенной и иммуногенной активностью.

Пример 2. Применение инактивированной вакцины против вирусного гепатита утят типа I.

Полученную вакцину использовали в условиях опытной базы ВНИВИП. Для профилактики вирусного гепатита утят типа I вакцинный препарат вводили в объеме 1,0 см³/голову однократно в дозе 2,5⋅10⁴-2,5⋅10⁵ ЭЛД₅₀/см³ подкожно в организм птицы родительского стада за 30 суток до начала репродуктивного периода. Полученные результаты испытаний представлены в таблице 2.

Как следует из приведенных данных, вакцина в испытанных дозах вызывает напряженный иммунитет у уток.

Препарат в 5-кратной дозе (5,0 см³/гол.) безвреден для птицы. Однократное применение инактивированной вакцины по сравнению с живой вирусвакциной (1) более экономично и технологично и вызывает длительный иммунитет на весь период яйцекладки.

Источники информации

1. Князев В.П. Болезни водоплавающих птиц: монография / Владимир, 2013; 325 с.

2. Паникар И.И. Вирусный гепатит утят: эпизоотология, диагностика и специфическая профилактика. Пробл. зооинженерии и вет. мед.: сб. науч. статей, повящ. 150-летию со дня основания Харьковского зооветеринарного ин-та. Харьков, 2001; 9 (1): 24-27.

3. Трефилов Б.Б., Никитина Н.В., Явдошак Л.И., Трубицын М.М. Инактивированная эмульгированная вакцина против вирусного гепатита утят типа I // Ветеринария, №2, 2018. - С. 20-23.

4. Химический реагент для приготовления масляных эмульсий. АБ-4М В/М. ТУ 2631-061-54651030-2010.

5. RU №2035918 С1, 23.10.1991.

6. RU №2675995 С1, 08. 05. 2018.

7. RU №2684417 С1, 08.05.2018.

8. Chen L.L., Xu Q., Zhang R.H. et al. Improved duplex RP-CR assay for differential diagnosis of mixed infection of duck hepatitis A virus typel and type 3 in ducklings. J. Virol. Methods, 2013; 192: 12-17.

9. Woolcock P.R. Duck hepatitis virus type I: studies with inactivated vaccines in bree2-3er ducks / P.R. Woolcock // Avian Pathol. - 1991. - V. 20. - P. 509-522.