×
20.12.2019
219.017.efa4

Способ дифференциации штаммов Legionella pneumophila путем молекулярно-генетического типирования

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Сущность изобретения заключается в том, что из ДНК исследуемого штамма L. pneumophila выявляют четыре общих INDEL-гена, имеющих делеции определенного размера, а именно IND- А9Р84_02210, А9Р84_08285, А9Р84_03850 и А9Р84_07165, с последующей их амплификацией с помощью сконструированных специфических праймеров, выявляющих два альтернативных аллеля: к гену IND- А9Р84_02210 - праймеры TTCCCCTTATTTAAATGACACCA и AAGCATAATAGGCGGGAAGA, с длиной амплифицированного фрагмента 80 п.н. или 110 п.н., к гену IND- А9Р84_08285 - праймеры CAGAAGACAAAGCGGAATCTG и TGAGGCCGAGTTTCTTGACT, с длиной амплифицированного фрагмента 62 п.н. или 74 п.н., к гену IND- А9Р84 03850 - праймеры CAGGTATCTGCCACGAATCA и TGGTTGTTGTCCATTTGACTG, с длиной амплифицированного фрагмента 63 п.н. или 75 п.н., к гену IND- А9Р84_07165 - праймеры TGGGTATTAAGCAATACGCAAG и AACAGAAACACCATTTATGCTTTG, с длиной амплифицированного фрагмента 84 п.н. или 96 п.н., при этом учет результатов дифференциации проводят визуально после электрофореза в 8% полиакриламидном геле в присутствии маркера молекулярных масс ДНК, причем для каждого штамма устанавливают уникальный INDEL-генотип по четырем INDEL-генам, а путем сравнения выявленных INDEL-генотипов устанавливают общее или различное происхождение исследуемых штаммов L. pneumophila. Изобретение позволяет типировать штаммы возбудителей инфекционных заболеваний, которые используются при микробиологическом и молекулярно-генетическом мониторинге штаммов L. pneumophila, циркулирующих на различных территориях, с целью их дифференциации. 2 з.п. ф-лы, 4 табл., 2 ил., 3 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Предлагаемое изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способам молекулярно-генетического типирования штаммов возбудителей инфекционных заболеваний, которые используются при микробиологическом и молекулярно-генетическом мониторинге штаммов L. pneumophila, циркулирующих на различных территориях, с целью их дифференциации.

В последние годы в различных странах мира отмечается рост заболеваемости легионеллезной инфекции. В связи с этим с 1995 г. под эгидой ВОЗ и Европейской рабочей группы по легионеллезу действует Международная система мониторинга легионеллеза путешественников (travel-associated legionellosis). Эта система позволила выявить более 10 тысяч случаев легионеллеза в 65 странах. Частота ежегодно регистрируемых летальных случаев варьирует от 6 до 15% (1, 2).

Нозокомиальные случаи легионеллеза могут быть вызваны разными серотипами L. pneumophila (не SG1) и другими видами легионелл (L. longbeachae, L. bozemanii и т.д., всего около 50 видов), отличным от L. pneumophila. В общеевропейском исследовании 1335 случаев легионеллеза показано, что 35,9% от числа случаев нозокомиального легионеллеза вызваного L. pneumophila не SG1 (3).

Таким образом, легионеллезная инфекция является актуальной медицинской проблемой и, несмотря на широкий арсенал различных методов лабораторной диагностики (ИФА, ИХА, РИФ (МФА), ПЦР), существует ограниченное количество методов типирования легионелл. На данный момент наиболее распространенными можно считать: использование панелей моноклональных антител, сиквенс-типирование (например сравнение секвенированных фрагментов шести генов: flaA, pilE, asd, mip, mompS и pro A) VNTR-типирование (4).

Известен способ INDEL-типирования штаммов Vibrio cholerae (5), основанный на определении «вставок-делеций» (INsertion-DELetion) в различных генах, что позволяет выявлять индивидуальные различия между штаммами. В виду наличия всего лишь двух аллелей («вставка» и «делеция») указанный метод гораздо проще остальных методов типирования.

Однако, данные об использовании INDEL-маркеров для типирования легионелл отсутствуют, в связи с этим возникла необходимость в разработке нового способа, позволяющего достоверно, быстро и с невысокой себестоимостью осуществлять дифференциацию штаммов L. pneumophila, выделенных в различных регионах, областях и странах.

За прототип выбран способ VNTR-типирование (6), который заключается в выделении ДНК из исследуемой культуры, постановки ПЦР со специфическими праймерами к 10 VNTR-локусам (Lpms1_b, Lpms3, Lpms13, Lpms17, Lpms19_b, Lpms31, Lpms33, Lpms34, Lpms35 и Lpms37) L. pneumophila, учет продуктов ПЦР проводили в 2%-4% агарозном геле его окрашивали 0,5-1,0 мкг/мл бромистым этидием в течение 15-30 минут, промывали водой и фотографировали при ультрафиолетовом освещении, после этого части фрагментов (Lpms31 и Lpms37) требовался капиллярный электрофорез или секвенирования для однозначного определения типа.

Однако данный способ имеет ряд недостатков. Для проведения исследования необходим сложный и дорогостоящий импортный ДНК-секвенатор, а само проведение анализа требует использования дорогостоящих импортных расходных материалов, и сложной процедуры интерпретации полученных результатов с помощью дорогостоящего программного обеспечения. Эти обстоятельства приводит к крайне высокой стоимости анализа, его большой продолжительности во времени (несколько дней) и полной зависимости исследователя от поставок производителем расходных материалов из-за рубежа.

Технической задачей предполагаемого изобретения является разработка нового способа позволяющего достоверно, быстро и с невысокой себестоимостью осуществлять дифференциацию штаммов L. pneumophila, выделенных в различных регионах, областях и странах.

Поставленная задача достигается тем, что в известном способе дифференциации штаммов L. pneumophila путем молекулярно-генетического типирования, включающем выделение ДНК из исследуемого штамма L. pneumophila, постановку ПЦР со специфическими праймерами и учет реакции с помощью электрофореза, из ДНК исследуемого штамма L. pneumophila выявляют четыре общих INDEL-генов, имеющих делеции определенного размера а именно IND- А9Р84_02210, А9Р84_08285, А9Р84_03850 и А9Р84_07165, с последующей их амплификацией с помощью сконструированных специфических праймеров, выявляющих два альтернативных аллеля:

к гену IND- А9Р84_02210 - праймеры TTCCCCTTATTTAAATGACACCA и AAGCATAATAGGCGGGAAGA, с длиной амплифицированного фрагмента 80 п.н. или 110 п.н.,

к гену IND- А9Р84_08285 - праймеры CAGAAGACAAAGCGGAATCTG и TGAGGCCGAGTTTCTTGACT, с длиной амплифицированного фрагмента 62 п.н. или 74 п.н.,

к гену IND- А9Р84_03850 - праймеры CAGGTATCTGCCACGAATCA и TGGTTGTTGTCCATTTGACTG, с длиной амплифицированного фрагмента 63 п.н. или 75 п.н.,

к гену IND- А9Р84_07165 - праймеры TGGGTATTAAGCAATACGCAAG и AACAGAAACACCATTTATGCTTTG, с длиной амплифицированного фрагмента 84 п.н. или 96 п.н.,

при этом учет результатов дифференциации проводят визуально после электрофореза в 8% полиакриламидном геле в присутствии маркера молекулярных масс ДНК, причем для каждого штамма устанавливают уникальный INDEL-генотип по четырем INDEL-генам, а путем сравнения выявленных INDEL-генотипов устанавливают общее или различное происхождение исследуемых штаммов L. pneumophila.

При этом ПЦР проводят в объеме 10 мкл и реакционная смесь содержит:

1,5 MMMg-буфер,

0,2 мМ смеси дНТФ, 1,0 мкМ смеси праймеров (по 0,5 мкМ каждого праймера),

25 нг ДНК-матрицы,

1 ед. ДНК-полимеразы, оставшийся объем - вода, при этом в качестве матрицы используют геномную ДНК, объемом 5 мкл, которую получают из разных штаммов Legionella pneumophila.

Кроме того ПЦР проводят с соблюдением режимов:

1 этап - денатурация при 94°С - 35 с;

2 этап - отжиг при 60°С - 25 с;

3 этап - синтез при 72°С - 35 с (40 циклов);

Обоснование выбора праймеров

С помощью программного обеспечения, разработанного авторами (ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора) было проанализировано более 3005 генов L. pneumophila в базе данных GenBank. В процессе компьютерного анализа нуклеотидных последовательностей штаммов L. pneumophila в базе данных GenBank авторы идентифицировали ряд INDEL-генов, отличающихся по размеру у штаммов L. pneumophila различного происхождения, и имеющих только два альтернативных варианта размера ампликона. В результате было выделено 4 общих гена, имеющих делеции определенного размера, а именно:

IND- А9Р84_02210, А9Р84_08285, А9Р84_03850 и А9Р84_07165 (см. таблицу 1).

С помощью программного обеспечения PrimerМи BLAST NCBI к варьирующим участкам указанных генов А9Р84_02210, А9Р84_08285, А9Р84_03850 и А9Р84_07165 были сконструированы специфические праймеры.

Набор значений размера фрагментов для каждого штамма по каждому из четырех INDEL-генов является его индивидуальной характеристикой и позволяет дифференцировать один штамм от другого и определять их происхождениеспомощыо кластерного анализа.

Способ осуществляется следующим образом

Перед постановкой способа дифференциации штаммов L. pneumophila выделяют ДНК исследуемой культуры. Бактериальную суспензию исследуемого штамма в дистиллированной воде вносят в микропробирку объемом 1,5 мл, после чего проводят обеззараживание материала и выделение ДНК согласно МУ 1.3.2569-09 (7). Затем в ПЦР проводят амплификацию выделенной ДНК со специфическими праймерами:

к гену IND- А9Р84_02210 - праймеры TTCCCCTTATTTAAATGACACCA и AAGCATAATAGGCGGGAAGA, с длиной амплифицированного фрагмента 80 п.н. или 110 п.н.,

к гену IND- А9Р84_08285 - праймеры CAGAAGACAAAGCGGAATCTG и TGAGGCCGAGTTTCTTGACT, с длиной амплифицированного фрагмента 62 п.н. или 74 п.н.,

к гену IND- А9Р84_03850 - праймеры CAGGTATCTGCCACGAATCA и TGGTTGTTGTCCATTTGACTG, с длиной амплифицированного фрагмента 63 п.н. или 75 п.н.,

к гену IND- А9Р84_07165 - праймеры TGGGTATTAAGCAATACGCAAG и AACAGAAACACCATTTATGCTTTG, с длиной амплифицированного фрагмента 84 п.н. или 96 п.н.,

Условия проведения реакции амлификации

Амплификацию проводят по следующей схеме: денатурация при 94°С - 35 с, отжиг при 60°С - 25 с, синтез при 72°С - 35 с (40 циклов).

Реакционную смесь объемом 10 мкл готовят из расчета: 1,5 MMMg-буфер, 0,2 мМ смеси дНТФ, 1,0 мкМ смеси праймеров (по 0,5 мкМ каждого праймера) 25 нг ДНК-матрицы, 1 ед.. ДНК-полимеразы, оставшийся объем - вода. В качестве матрицы используют геномную ДНК (объемом 5 мкл), полученную из разных штаммов L. pneumophila. Учет результатов амплификации проводят с помощью электрофореза в 8% полиакриламидном гелев присутствии маркера молекулярных масс ДНК.

При этом учет результатов типирования проводят визуально после электрофореза, причем для каждого штамма устанавливают уникальный INDEL-генотип по четырем INDEL-генам, а путем сравнения выявленных NDEL-генотипов между собой и с известными генотипами идентификационной таблицы 1, устанавливают общее или различное происхождение исследуемых штаммов L. pneumophila, что дает возможность дифференцировать один штамм от другого.

Проведенные исследования доказывают, что использование разработанного способа молекулярно-генетического типирования штаммов L. pneumophila по структуре INDEL-генов позволяет выявлять штаммы с различными аллельными вариантами INDEL-генов.

Пример 1.

В эксперименте использованы штаммы L. pneumophila из коллекции Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института, выделенные в Ростовской области. Бактерии L. pneumophila (штаммы 15, 21, 23, 24, 25, 26, 15978/1, 39152) суспендировали в 100 мкл деионизованной воды, не содержащей нуклеаз. Далее проводили выделение ДНК согласно МУ 1.3.2569-09 (7). Для постановки полимеразной цепной реакции используют праймеры к гену А9Р84_02210 TTCCCCTTATTTAAATGACACCA и AAGCATAATAGGCGGGAAGA, с длиной амплифицированного фрагмента 80 п.н. или 110 п.н.; и праймеры к гену А9Р84_08285 CAGAAGACAAAGCGGAATCTG и TGAGGCCGAGTTTCTTGACT, с длиной амплифицированного фрагмента 62 п.н. или 74 п.н.

В реакционную ПЦР смесь добавляли по 1 микролитру специфических праймеров, 1 микролитр термостабильной ДНК-полимеразы и вносили 5 микролитров супернатанта ДНК. Общий объем реакционной смеси составляет 10 микролитров. Смесь перемешивали на вортексе и амплифицировали при условиях: денатурация при 94°С - 35 с, отжиг при 60°С - 25 с, синтез при 72°С - 35 с (40 циклов). Учет результатов амплификации проводятся помощью электрофореза в 8% полиакриламидном геле в присутствии маркера молекулярных масс ДНК (фото 1). На фото 1 видим: электрофорез продуктов амплификации INDEL-генов А9Р84_02210 и А9Р84_08285.

На фото 1 - нумерация от 1-8 соответствуют номерам штаммов: 1-15, 2-21, 3-23, 4-24, 5-25, 6-26, 7-15978/1, 8 - 39152. М - маркерная ДНК.

Вывод: анализ продуктов амплификации INDEL-гена А9Р84_02210. показывает, что два из восьми изученных штаммов (№25 и 15978/1) не имеют аллель А9Р84_02210, один штамм (39152) 80 п.н., а пять - аллель 110 п.н. Анализ продуктов амплификации INDEL-гена А9Р84_08205 показывает, что два штамма (15978/1, 39152) имеют одинаковый аллель 62 п.н., а шесть штаммов 74 п.н.

Следовательно дифференцируют эти штаммы и выделяют четыре группы различные по наличию/ отсутствию делеций, что подтверждает различия между группами этих штаммов и является их индивидуальной характеристикой, а для более полной характеристики штаммов потребуются дополнительные исследования по другим INDEL-генам. Данные по размерам аллелей для каждого штамма заносят в таблицу 2, аналогично идентификационной таблице 1.

Пример 2.

Из коллекции Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института были взяты штаммы L. pneumophila (№15, 21, 23, 24, 25, 26, 15978/1, 39152). Бактерии L. pneumophila суспендировали в 100 мкл деионизованной воды, не содержащей нуклеаз. Далее проводили выделение ДНК согласно МУ 1.3.2569-09 (7).

Для постановки полимеразной цепной реакции используют праймеры к гену А9Р84_03850 CAGGTATCTGCCACGAATCA и TGGTTGTTGTCCATTTGACTG, с длиной амплифицированного фрагмента 63 п.н. или 75 п.н.; праймеры к гену А9Р84_07165 TGGGTATTAAGCAATACGCAAG и AACAGAAACACCATTTATGCTTTG, с длиной амплифицированного фрагмента 84 п.н. или 96 п.н.

В реакционную ПЦР смесь добавляли по 1 микролитру специфических праймеров, 1 микролитр термостабильной ДНК-полимеразы и вносили 5 микролитров супернатанта ДНК. Общий объем реакционной смеси составляет 10 микролитров. Смесь перемешивали на вортексе и амплифицировали при условиях: денатурация при 94°С - 35 с, отжиг при 60°С - 25 с, синтез при 72°С - 35 с (40 циклов). Учет результатов амплификации проводятся помощью электрофореза в 8% полиакриламидном геле в присутствии маркера молекулярных масс ДНК (фото 2). На фото 2 видим: электрофорез продуктов амплификации INDEL-генов А9Р84_03850 и А9Р84_07165 (см. фото 2).

На фото 2 - нумерация от 1-8 соответствуют номерам штаммов: 1-15, 2-21, 3-23, 4-24, 5-25, 6-26, 7-15978/1, 8-39152. М - маркерная ДНК.

Вывод: анализ продуктов амплификации INDEL-гена А9Р84_03850 показывает, что два (штаммы №15978/1 и 39152) из восьми изученных штаммов имеют аллель 63 п.н. а шесть 75 п.н. Анализ продуктов амплификации INDEL-гена А9Р84_07165 показывает, что один (штамм №25) из восьми изученных штаммов имеет аллель 84 п.н., оставшиеся семь - 96 п.н.

Следовательно дифференцируют эти штаммы по двум локусам и выделяют три группы различные по наличию/ отсутствию делеций, что подтверждает различия между группами этих штаммов и является их индивидуальной характеристикой, а для более полной характеристики штаммов потребуются дополнительные исследования по другим INDEL-генам. Данные по размерам аллелей для каждого штамма заносят в таблицу 3, аналогично идентификационной таблице 1.

Пример 3.

Используя компьютерное моделирование полимеразной цепной реакции (ПЦР) был осуществлен анализ полных геномных секвенсов 58-и штаммов L. pneumophila взятых из базы данных Национального центра биотехнологической информации США (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome), с помощью программы Virtual PCR.

Таким образом стало возможным все 58 штаммов объединить в 10 групп по наличию или отсутствию делеций в ампликонах (см. таблицу 4). В результате анализа таблицы 4, видно что данным методом можно дифференцировать штаммы L. pneumophila один от другого, давать более точную генетическую характеристику и определять их происхождение, что важно при проведении расследований вспышек легионеллеза и мониторинга за этим возбудителем.

Использование предполагаемого изобретения позволяет достоверно и быстро за счет подбора праймеров унифицировать и создать набор значений размера фрагментов аллелей для каждого штамма L. pneumophila по каждому из четырех INDEL-генов, которые являются его индивидуальной характеристикой и позволяют дифференцировать один штамм от другого и определять их происхождение.

Источники информации

1. Тартаковский И.С., Кожевникова Г.М., Груздева О.А. Международные стандарты выявления и мониторинга легионеллеза путешественников, их значение для современной профилактической медицины. Материалы IV Ежегодного всероссийского конгресса по инфекционным болезням (Москва, 26--28 марта 2012 г.). Инфекционные болезни. 2012; 10 (прил. 1).

2. European Guidelines for control and prevention of travel associated legionellosis. EWGLI. London. 2002.5. Legionella and the prevention of legionellosis. WHO; Geneva: 2007.

3. Helbig J.H, Bernander S., Castellani Pastoris M. et. al. Pan-European Study on Culture-Proven Legionnaires' Disease: Distribution of Legionella pneumophila Serogroups and Monoclonal Subgroups. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2002. №21. P. 710-716. DOI 10.1007/s 10096-002-0820-3.

4. Gaia V., Fry N.K., Afshar B. et al. Consensus Sequence-Based Scheme for Epidemiological Typing of Clinical and Environmental Isolates of Legionella pneumophila. J. Clin, microbiol. 2005, 43(5): 2047-2052

5. A.C. Водопьянов, CO. Водопьянов, И.П. Олеников, Б.Н. Мишанькин, В.Д. Кругликов, И.В. Архангельская, Д.А. Зубкова, М.И. Ежова / INDEL- и VNTR-типирование штаммов Vibrio cholerae, выделенных в 2013 г. из объектов окружающей среды на территории Российской Федерации / Журнал "Здоровье населения и среда обитания" 2015. №5 (266). С. 41-44.

6. Christine Pourcel, Paolo Visca, Baharak Afshar, Silvia D'Arezzo, Gilles Vergnaud, and Norman K. Fry / Identification of Variable-Number Tandem-Repeat (VNTR) Sequences in Legionella pneumophila and Development of an Optimized Multiple-Locus VNTR Analysis Typing Scheme / J Clin Microbiol. 2007 April; 45(4): 1190-1199, doi: 10.1128/JCM.02078-06

7. Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности: Методические указания. МУ 1.3.2569-09. - М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2009. - 35 с.


Способ дифференциации штаммов Legionella pneumophila путем молекулярно-генетического типирования
Способ дифференциации штаммов Legionella pneumophila путем молекулярно-генетического типирования
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 23.
02.08.2018
№218.016.7736

Способ получения образцов биоплёнок холерных вибрионов для исследования методом трансмиссионной электронной микроскопии

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине. Предложен способ получения образцов биопленок холерных вибрионов для исследования методом трансмиссионной электронной микроскопии, включающий культивирование биопленок в суспензии исследуемого штамма на поверхности пленок-подложек...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002662938
Дата охранного документа: 31.07.2018
09.08.2018
№218.016.79b3

Штамм культивируемых гибридных клеток животного mus musculus-продуцент моноклонального антитела к мембранному белку, общему для тср+ штаммов холерных вибрионов о1 и о139 серогрупп

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен штамм культивируемых гибридных клеток Mus. musculus L. ГХ-H2F6/Omp, депонированный под номером Н-61. Данный штамм является продуцентом моноклональных антител, специфичных к мембранному белку холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп, в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002663003
Дата охранного документа: 31.07.2018
09.08.2018
№218.016.79d6

Способ дифференциации штаммов yersinia pestis на токсически активные и неактивные

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Способ дифференциации штаммов Yersinia pestis на токсически активные и неактивные предусматривает выращивание клеток вакцинного штамма Yersinia pestis на плотной питательной среде с последующей подготовкой взвеси бактерий, ее инкубированием,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002663133
Дата охранного документа: 01.08.2018
01.09.2018
№218.016.820a

Способ идентификации нетоксигенных штаммов холерных вибрионов о1 серогруппы с помощью пцр для выделения генетических детерминант

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Изобретение может быть использовано при изучении нетоксигенных штаммов холерных вибрионов различного происхождения на молекулярно-биологическом уровне с целью установления их роли в этиологии спорадических случаев и вспышек диарейных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002665542
Дата охранного документа: 30.08.2018
04.10.2018
№218.016.8e28

Штамм vibrio parahaemolyticus, используемый в качестве продуцента прямого термостабильного гемолизина (tdh)

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм бактерий Vibrio parahaemolyticus, обладающий гемолитической и цитотоксической активностями, депонирован в Государственной коллекции патогенных бактерий ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002668805
Дата охранного документа: 02.10.2018
01.11.2018
№218.016.984d

Рекомбинантная плазмида, экспрессирующая клонированный ген гемолизина vibrio cholerae, и штамм escherichia coli - суперпродуцент прогемолизина vibrio cholerae

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмиде pHlyA. Плазмида pHlyA экспрессирует клонированный ген hlyA (гемолизина) Vibrio cholerae, встроенный по сайтам BamHI-Pstl в полилинкер векторной плазмиды pQE30 под контролем Т5-промотора. Изобретение также...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002671099
Дата охранного документа: 29.10.2018
27.04.2019
№219.017.3bb9

Способ моделирования биоплёнок, формируемых vibrio cholerae 01 серогруппы на поверхности хитина

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Описан способ моделирования биопленок, формируемых Vibrio cholerae 01 серогруппы на поверхности хитина. Способ включает использование хитина для формирования биопленки, образуемой клетками V. cholerae, с последующей инкубацией и анализом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002685878
Дата охранного документа: 23.04.2019
29.05.2019
№219.017.634b

Способ дифференциации штаммов helicobacter pylori путем молекулярно-генетического типирования

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способам молекулярно-генетического типирования штаммов возбудителей инфекционных заболеваний, которые используются при микробиологическом и молекулярно-генетическом мониторинге штаммов H.pylori, циркулирующих на различных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002688434
Дата охранного документа: 21.05.2019
29.05.2019
№219.017.638a

Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и предназначено для лабораторных или экспериментальных исследований при изучении антибиотикочувствительности холерных вибрионов. Для повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002688165
Дата охранного документа: 20.05.2019
14.06.2019
№219.017.830e

Способ повышения эффективности противохолерной вакцинации для профилактики на экспериментальных животных

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к способу повышения эффективности противохолерной вакцинации на модели экспериментальных животных. Для этого первоначально иммунизируют животных по следующей схеме: однократно таблетированную дозу вакцины, а именно 1/3...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002691411
Дата охранного документа: 13.06.2019
Показаны записи 1-10 из 97.
27.01.2013
№216.012.2004

Способ дифференциации штаммов vibrio cholerae 0139 серогруппы по алкилсульфатозной активности

Предлагаемое изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается дифференциации токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов 0139 серогруппы. Описанный способ включает получение синтетической среды для приготовления 100 мл которой готовят навески: 0,5 г хлористого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002473697
Дата охранного документа: 27.01.2013
27.04.2013
№216.012.3aaf

Способ оперативного прогнозирования основных показателей разработки нефтяных залежей

Изобретение относится к нефтедобывающей промышленности и может использоваться при проектировании и контроле показателей разработки нефтяных залежей. Способ включает определение проницаемости, пористости, вязкости агента вытеснения и вытесняемой жидкости, эффективной нефтенасыщенной толщины...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480584
Дата охранного документа: 27.04.2013
27.06.2013
№216.012.4ee6

Способ приготовления концентрированного соевого заменителя молочных кормов

Изобретение относится к кормопроизводству и может быть использовано при производстве сухих заменителей молочных кормов. Способ приготовления концентрированного соевого заменителя молочных кормов включает смешивание семян сои и пшеницы в соотношении 1,5:1, их термообработку путем...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485791
Дата охранного документа: 27.06.2013
27.06.2013
№216.012.50b3

Способ видовой идентификации и дифференциации штаммов yersinia pseudotuberculosis от yersinia pestis и yersinia enterocolitica

Изобретение касается экспресс-идентификации штаммов, принадлежащих к виду Yersinia pseudotuberculosis, и их дифференциации от близкородственных видов, а именно Y.pestis и Y.enterocolitica. Сущность способа заключается в использовании видоспецифических праймеров, состоящих из двух нуклеотидных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002486252
Дата охранного документа: 27.06.2013
10.11.2013
№216.012.7bdc

Способ приготовления кормов с использованием сои

Изобретение относится к кормопроизводству и может быть использовано при приготовлении высококачественных кормов. Способ переработки семян с получением комбикормов с использованием сои включает замачивание композиции семян сои и пшеницы, или семян сои и кукурузы, или семян сои и ячменя, или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002497381
Дата охранного документа: 10.11.2013
20.07.2014
№216.012.de4e

Способ получения мучных изделий повышенной биологической ценности

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при производстве мучных изделий. Способ предусматривает приготовление теста на основе муки из оболочковой и семядолевой фракций соевого зерна, полученных при производстве термообработанной соевой крупки или необезжиренной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522696
Дата охранного документа: 20.07.2014
20.07.2014
№216.012.de5c

Способ приготовления теста повышенной биологической ценности

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано в хлебопекарной и кондитерской промышленности. Способ предусматривает получение мучной композиции соевой муки из оболочковой и зародышевой фракций при соотношении 2:3, смешивание данной муки с мукой из зернового сырья и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522710
Дата охранного документа: 20.07.2014
20.11.2014
№216.013.062a

Способ получения хлебобулочных и мучных кондитерских изделий функциональной направленности

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при производстве хлебобулочных и мучных кондитерских изделий. Способ предусматривает приготовление соевой зародышевой муки, на основе зародышевой фракции, полученной при производстве термообработанной соевой крупки или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532979
Дата охранного документа: 20.11.2014
20.11.2014
№216.013.0632

Способ получения хлебобулочных и мучных кондитерских изделий повышенной биологической ценности

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при производстве хлебобулочных и мучных кондитерских изделий. Способ предусматривает отделение термообработанной семенной оболочки сои, полученной при производстве термообработанной соевой крупки или соевой необезжиренной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532987
Дата охранного документа: 20.11.2014
20.11.2014
№216.013.07cc

Способ регулирования проницаемости пласта

Изобретение относится к нефтедобывающей промышленности, в частности к способам ограничения водопритока в нефтяные и газовые скважины и выравнивания профиля приемистости. Технический результат - снижение проницаемости обводненного высокопроницаемого коллектора. В способе регулирования...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002533397
Дата охранного документа: 20.11.2014
+ добавить свой РИД