Результат интеллектуальной деятельности: Способ прогнозирования послеоперационного спаечного процесса брюшины в эксперименте

Способ прогнозирования послеоперационного спаечного процесса брюшины в эксперименте

Предлагаемое изобретение относится к экспериментальной медицине, и может быть использовано в экспериментальной хирургии для прогнозирования развития послеоперационного адгезиогенеза брюшины.

В настоящее время существуют способы прогнозирования послеоперационного спаечного процесса брюшины, основанные на лабораторных и инструментальных методах исследования.

Известен способ прогнозирования послеоперационного спаечного процесса у детей путем исследования перитонеального экссудата [Заявка №2015141327 RU. МПК G01N 33/48 (2006.01). Способ; опубл. 23.01.2017 Бюл. №3]. Забор пробы осуществляют через 10-15 часов после операции, ее термостатируют в течение 30-40 минут при 37°С, после чего берут каплю надосадочной части экссудата, проводят микроскопическое исследование методом клиновидной дегидратации, и при обнаружении языковых полей в краевой зоне фации прогнозируют спаечную болезнь.

Также известны способы ранней диагностики послеоперационного адгезиогенеза брюшины по активности уровня интерлейкина-1 в сыворотке крови и альфа-фактора некроза опухоли. Повышение уровней этих показателей в послеоперационном периоде указывает на формирование послеоперационных спаек (Saba A., Godziachvili V., Mavani A., Silva Y. Serum levels of interleukin 1 and tumor necrosis factor alfa correlate with peritoneal adhesion grades in humans after mayor abdominal surgery. Am-Surg. 1998, Aug.; 64 (8): 734-6; discussion 737; USA).

Недостаток этих способов связан с возможным течением воспалительного процесса другой локализации (тонзиллит, отит, сочетанные травмы других органов или тканей и др.); а также индивидуальной реакцией организма на вводимые лекарственные препараты, что снижает специфичность прогноза вероятного развития спаечного процесса.

Известен способ прогнозирования спаечной болезни у детей, перенесших оперативные вмешательства на органах брюшной полости [патент РФ 2269133, МПК G01 33/53, 2006], включающий исследование жидкостной среды организма. Сущность способа состоит в том, что из лимфоцитов венозной крови выделяют ДНК, проводят генотипирование полиморфизма NAT2 методом полимеразной цепной реакции и при обнаружении одного из генотипов NAT2 прогнозируют риск развития спаечной болезни брюшины.

Однако данный способ имеет ряд недостатков, связанных с высокой дороговизной исследования, трудоемкостью, необходимостью высокой квалификации персонала, а взятие материала для исследования -дополнительное инвазивное вмешательство, нежелательное для детей.

Наиболее близким аналогом изобретения является лабораторный метод прогнозирования патологического спайкообразования в брюшной полости у детей в виде определения в сыворотке крови метаболитов соединительной ткани - аминокислот гидроксипролина и гексозаминов, которые являются объективной меткой наличия и количества коллагена и служат диагностическим индикатором метаболических процессов соединительной ткани. При грануляционно-фиброзных процессах, когда происходит усиленная продукция коллагена, концентрация их в крови повышается. Повышение уровня гидроксипролина более чем на 44%, а гексозаминов более чем на 30% говорит о патологическом спайкообразовании в брюшной полости у детей при нормальных показателях гидроксипролина 65,58±3,81 мкмоль/л и гексозаминов 8,07±0,21 ммоль/л. (Лукоянова Г.М., Парамонов А.А., Косых А.А., Василечко Г.А. Прогнозирование течения спаечного процесса в брюшной полости у детей // Хирургия. - 1988. - №7. - С. 128-132.).

Недостатками перечисленных способов является высокая субъективность данных, обусловленная тем, что оценка риска развития адгезиогенеза осуществляется в раннем послеоперационном периоде. Хотя в свете современного представления о послеоперационном спаечном процессе установлено, что данные патологические изменения развиваются в течение 21-го дня после операции с формированием зрелых спаек. Регенерация мезотелия занимает в среднем 7 дней с момента повреждения. При обширном и глубоком повреждении целостность покрова париетальной брюшины восстанавливается в течение 10 суток (Р.Данилов и соавт. 2010, diZerega G.S. et al.2001).

В основу изобретения положена задача, заключающаяся в поиске и объективной оценке ключевых изменений лабораторных показателей фибринолитической системы крови крыс, которые могут являться диагностическими индикаторами формирования спаечного процесса.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является определение лабораторных показателей коагуляционного звена гемостаза и фибринолиза крови крыс с послеоперационным спаечным процессом. Предложенный способ включает выполнение экспериментальному животному операции срединной лапаротомии, моделирование спаечного процесса. И последующего забора крови на 3-е сутки после операции.

Отличием является то, что для прогноза вероятности развития спаечного процесса используются показатели фибринолитической системы крови.

Для решения поставленных задач нами было проведено экспериментальное, проспективное, рандомизированное, слепое исследование на 35 лабораторных крысах линии Wistar обоих полов, общей массой 200-250 г. На первом этапе, под общей анестезией, достигнутой однократным внутрибрюшным введением раствора Золетил 100 (Virbac) в дозировке 20-40 мг/кг, животным производилась срединная лапаротомия и моделировался спаечный процесс асептическим травматическим способом путем скарификации париетальной брюшины правой мезогастральной области и смежного висцерального листка слепой кишки. В завершении операции в брюшную полость вводилось 2 мл. теплого физиологического раствора, и рана послойно ушивалась. На 3-е сутки производился забор крови в вакуумные пробирки объемом 4,5 мл с цитратным антикоагулянтом путем транскутанной пункции сердца крысы. Оценку коагуляционного гемостаза и фибринолиза проводили по 8 параметрам: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), фибриноген, растворимые комплексы мономерного фибрина (РКМФ), Хагеманзависимый фибринолиз (ХЗФ), антитромбин, плазминоген. Через 21 день с момента предшествующей лапаротомии производилась аутопсия животных, изучались морфологические изменения брюшной полости с использованием визуально-описательной методики. По результатам которой все крысы были поделены на 2 группы. 1-ю группу составили животные у которых развился спаечный процесс брюшины (рис. 1).

2-ю группу составили крысы, у которых спаек не было (рис. 2).

Статистическую обработку полученных результатов проводили при помощи пакета программ статистической обработки данных SPSS for Windows 21.0. Данные представлены в виде медиана ± процента ли. Для сравнения групп использовался непараметрический U критерий Манна-Уитни. Статистически значимыми считали различия с р<0,01.

Основная теория, способная объяснить развитие послеоперационного спаечного процесса построена на антагонизме процессов организации и деградации фибрина, который выпадает при повреждении мезотелия брюшины и склеивает соседние органы, формируя спайки. Ключевая роль фибринолитической системы крови обусловлена растворением выпавшего фибрина и регенерации поврежденного мезотелия брюшины без формирования адгезии соседних органов (Р.А. Женчевский и соавт. 1989; Б.П. Филенко и соавт. 2013; F. Catena et al. 2012; J.M. Alonso et al. 2014; S.E. Mutsaers et al. 2015; P.A. Bilderback et al. 2015; E. Stiven et al. 2015; J.J Duron et al. 2007). Таким образом угнетение тканевого фибринолиза в послеоперационном периоде является причиной низкой деградации выпавшего фибрина брюшины и способствует формированию спаек. Снижение уровня содержания плазминогена крови ниже 2% и увеличение времени, Хагеманзависимого фибринолиза, выше 10 мин. на 3-й сутки послеоперационного периода являются объективными диагностическими индикаторами угнетенного фибринолиза крови крыс и следствием патологического образования спаечного процесса брюшины.

Таким образом предложенный способ прогнозирования вероятности формирования послеоперационного спаечного процесса позволяет: во-первых, перейти к клиническим исследованиям, во-вторых предсказать развитие самого распространенного послеоперационного осложнения в абдоминальной хирургии, провести целенаправленную патогенетическую профилактику образования спаек и тем самым препятствовать развитию спаечной болезни брюшины требующей повторной госпитализации в стационар.

Литература.

1. Данилов Р.К. Руководство по гистологии 2-е изд. Спецлит. Спб 2010. Т. 1., стр. 190.

2. Женчевский Р.А. Спайки брюшной полости. Ставрополь: Ставропольское книжное издательство; 1984.

3. Филенко Б.П., Земляной В.П., Борсак И.И., Иванов А.С.Спаечная болезнь: профилактика и лечение. 171. С8. Санкт-Петербург, 2013.

4. G.S. diZerega, J.D. Campeau Peritoneal repair and post-surgical adhesion formation. Hum Reprod Update 2001; 7: 547-555.

5. Catena F, Ansaloni L, Di Saverio S, Pinna AD. World Society of Emergency Surgery. P.O.P.A. study: prevention of postoperative abdominal adhesions by icodextrin 4% solution after laparotomy for adhesive small bowel obstruction. A prospective randomized controlled trial. J Gastrointest Surg. 2012;16(2):382-8.

6. Bilderback PA, Massman JD, Smith RK, La Selva D, Helton WS. Small bowel obstruction is a surgical disease: patients with adhesive small bowel obstruction requiring operation have more cost-effective care when admitted to a surgical service. J Am Coll Surg. 2015;221(1):7-13.

7. Duron JJ. Postoperative intraperitoneal adhesion pathophysiology. Colorectal Dis. 2007;9 Suppl 2:14-24

8. Steven E. Mutsaers, K. Birnie, S. Lansley, S.E. Herrick, Chuan-Bian Lim, Cecilia M. Mesothelial cells in tissue repair and fibrosis. Front. Pharmacol. 2015 6:113. doi: 10.3389/fphar.2015.00113/

9. Alonso Jde, M., Alves, A.L., Watanabe, M.J., Rodrigues, C.A., and Hussni, C.A. (2014). Peritoneal response to abdominal surgery: the role of equine abdominal adhesions and current prophylactic strategies. Vet. Med. Int. 2014, 279730. doi:10.1155/2014/279730

10. Mutsaers SE, CM, Pengelly S, Herrick SE. Mesothelial cells and peritoneal homeostasis. Fertil Steril. 2016 Oct;106(5):1018-1024. doi:10.1016/j.fertnstert.2016.09.005.