Способ лечения крупного рогатого скота при букстонеллёзе

Изобретение относится к области ветеринарной протозоологии, а более конкретно, к разработке надежных средств для лечения букстонеллеза крупного рогатого скота.

Заболевания желудочно-кишечного тракта крупного рогатого скота актуальная проблема для скотоводства и ветеринарии в связи с экономическими потерями продуктивности, а также затрат на лечение и диагностику.

Букстонеллез - паразитарное заболевание крупного рогатого скота возбудителем является паразитический простейший Buxtonella sulcata, который имеет овоидное тело, с хорошо заметным желобком, окаймленным двумя гребнями, идущими от одного конца тела к другому; цитостом расположен на заднем конце, размер трофозоитов 60-138×46-100 мкм., цисты тонкостенные, величиной 47-100 мкм. Букстонеллы поражают слизистую оболочку слепой кишки толстого отдела кишечника (Крылов М.В., 1994, 1996).

Таксономия: Царство - Cellular organisms, Подцарство - Eukaryota, Надтип - Alveolata, Тип - Ciliophora, Подтип - Intramacronucleata, Класс - Litostomatea, Подкласс - Trichostomatia, Отряд - Vestibuliferida, Семейство - Pycnotrichidae, Род - Buxtonella, Вид - Buxtonella sulcata (http://eol.org/, 2016).

Букстонеллез имеет распространение в Великобритании (Fox М.Т., Jacobs D.Е., 1996), странах ближнего Востока (Al-Saffar Т.М. et al., 2010) Восточной Европы ( J., 2015), Северной Африке (Sultan К., Khalafalla R.Е., 2013), Юго-Восточной Азии (Hong K.О., Youn Н.J., 1995), Северной Америке (Urman Н.D., Kelley G. W. В., 1963), Южной Америке (Velazquez J.В., 1983) и др., на территории России впервые выявлен у крупного рогатого скота в Московской и Тульской областях (Шибитов С.К., Сафиуллин Р.Т., 2016).

Данные паразитические простейшие при низкой интенсивности инвазии (далее ИИ) не оказывают патогенного влияния на макроорганизм, находясь в кишечнике, они питаются микроорганизмами и клетками крови. Вредоносное воздействие простейших Buxtonella sulcata на организм животных проявляется, когда их количество превышает 800 цист на 1 г фекалий. Патогенное действие букстонелл обусловлено нарушением целостности слизистой оболочки слепой кишки, всасывательной способности кишечника в местах их нахождения, в процессе своей жизнедеятельности они выделяют токсины, которые приводят к нарушению функций пораженных участков.

Основными источниками распространения букстонеллеза являются больные животные - крупный рогатый скот (носители инвазии) [1, 2, 4].

В ветеринарной практике России до недавнего времени были известны патогенные инфузории животных в основном свиней, Balantidium spp., которые патогенны и для человека.

При балантидиозе молодняка свиней в качестве лечебных средств внутрь с кормом и водой использовали: осарсол в дозе 30 мг/кг массы животного два раза в день в течение 3-5 дней; метронидазол в дозе 0,25-0,5 г два раза в день в течение 3 дней подряд; йодинол в дозе 20-25 мл на один прием два раза в день в течение 7-10 дней; энтеросептол в дозе 40 мг/кг массы в течение 3-5 дней с интервалом 10 дней; фурозолидон в дозе 0,3 г на голову два раза в день в течение 5 дней.

Из вышеперечисленных препаратов наибольшей эффективностью для лечения патогенных инфузорий обладают препараты широкого спектра действия, такие как, метронидазол, осарсол, тилан и другие [3, 5].

Безусловно, каждый из отмеченных препаратов имеет свои достоинства и недостатки. Препараты мышьяка были доступны, их применяли широко, но в настоящее время эти препараты не используют из-за их токсичности и отсутствия на фармацевтическом рынке. Препараты йода и нитрофурановой группы выпускают в основном для наружного применения. На этом фоне появление нитромидазолов (метронидазола, тинидазола, орнидазола) устраивает многих своей доступностью. Нитромидазолы поставляют на Российский ветеринарный рынок несколько отечественных и иностранных фирм, но при всех своих достоинствах они достаточно дороги и могут оказывать неблагоприятное побочное воздействие на организм крупного рогатого скота.

Для приготовления препарата против букстонеллеза использовали два активных компонента и вспомогательные средства. В качестве действующих веществ следует рассматривать триметоприм и сульфадиазин при их совместном применении, а вспомогательных веществ - лактозу и крахмал картофельный. Необходимо отметить, что такое сочетанное применение этих препаратов при болезнях паразитарной этиологии животных не известно. Активные компоненты комбинированного препарата триметоприм и сульфадиазин усиливают действие друг друга путем последовательного воздействия на метаболизм п-аминобензойной и фолиевой кислот в паразитарной клетке, обеспечивая широкий спектр антипаразитарного действия. После перорального назначения препарата его активные компоненты быстро всасываются в желудочно-кишечном тракте и проникают в органы и ткани организма животного, достигая максимальных концентраций в сыворотке крови через 3-4 часа и удерживается в сыворотке крови в течение 12 часов. Выводится препарат из организма в основном с мочой. По степени воздействия на организм животных комбинированный препарат относится к умеренно опасным веществам - 3-й класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76, и в рекомендованной дозе хорошо переносится животными.

Использованные в качестве вспомогательных веществ лактоза и крахмал картофельный являются слизистыми веществами, которые разбухая в воде, образуют гомогенную густую жидкость. Они сами по себе не вступают в химические процессы, но, покрывая воспалительные ткани слизистой кишечника, они понижают чувствительность нервных окончаний и способствуют более быстрому разрешению воспалительного процесса. Использованный в качестве наполнителя крахмал в желудочно-кишечном тракте животных превращается под действием фермента диастазы, распадаясь на декстрины, а в дальнейшем до мальтозы и лактозы. Обволакивающее действие крахмала кратковременно, но вместе с тем следует иметь ввиду, перевариваясь, он является ценным пищевым средством.

Второй использованный нами наполнитель лактоза, растворимый в воде, плохо всасывается в кишечнике. Слабо раздражая рецепторы в желудке и кишечнике, усиливает и нормализует перистальтику и угнетает гнилостную микрофлору кишечника.

При совместном применении при букстонеллезе крупного рогатого скота рассматриваемые выше средства триметоприм и сульфадиазин оказывают синергетическое действие на паразитарный объект в кишечнике, а использованные в качестве вспомогательных веществ лактоза и крахмал кратковременно способствуют более быстрому разрешению воспалительного процесса в кишечнике, нормализуя перистальтику и микрофлору.

В задачу наших исследований входило разработать эффективное средство лечения букстонеллеза крупного рогатого скота доступными средствами, учитывая отсутствие отрицательного действия на организм животных. Решение поставленной задачи достигается тем, что в качестве лечебного средства (этиотропное лечение) при букстонеллезе крупного рогатого скота был использован составленный нами комбинированный препарат букцид, имеющий следующий состав: триметоприм 2%, сульфадиазин 10% и вспомогательные компоненты 88%, в числе которых лактоза 44%, крахмал картофельный, 44%.

Из доступных заявителю источников информации не известна указанная совокупность существующих признаков, позволяющая получать указанный технический результат, поэтому заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности «новизна».

Заявителю неизвестны средства аналогичного назначения, в которых были бы раскрыты отличительные признаки заявляемого изобретения с получением от использования его в какой-либо совокупности признаков указанного технического результата. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».

Доказательства производственной применимости заявляемого приводятся в следующих примерах.

Примеры конкретного исполнения

Пример 1. Приготовление комбинированного препарата «Букцид», состоящего из триметоприма, сульфадиазина и наполнителя. Для лечения паразитарного заболевания букстонеллеза.

Исследования по отмеченной проблеме проводили в лаборатории ВНИИ паразитологии животных и растений - филиал ФНЦ ВИЭВ имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко.

Комбинированный препарат «Букцид» разными концентрациями действующих веществ (ДВ) триметоприма и сульфадиазина готовили из соотношения ДВ 1:5, всего было приготовлено три партии препарата.

При приготовлении первой партии препарата в фарфоровую ступку по частям постепенно помещали, перемешивали и растирали пестиком в течение 7-10 минут 4 г триметоприма, 20 г сульфадиазина и 176 г наполнителя - в равных частях крахмал картофельный и лактоза. При этом соотношение ДВ и наполнителя составила 1:7,3. Таких закладок всего было семь и общая масса первой партии комбинированного препарата составила 1400 г, которую поместили в пакет, снабдили этикеткой с указанием даты приготовления и содержания ДВ.

При приготовлении второй партии комбинированного препарата брали триметоприма, 4,25 г, сульфадиазина 21,25 г и 187 г наполнителя, а процесс приготовления аналогичен ранее описанному. Общая масса приготовленной второй партии комбинированного препарата составила 1488 г

При приготовлении третьей партии комбинированного препарата брали триметоприма 4,5 г сульфадиазина 22,5 г и 198 г наполнителя, которую делали по ранее описанной схеме. Общая масса приготовленной третьей партии комбинированного препарата составила 1575 г.

Из каждой приготовленной партии комбинированного препарата основная масса от 1200 до 1350 г в дальнейшем была использована в опыте по определению оптимальной дозы комбинированного препарата букцид при экспериментальном букстонеллезе телят, а необходимая для контрольных исследований для определения содержания ДВ часть препарата из каждой партии и в количестве 200-225 г оставалось лаборатории института.

Пример 2. Определение оптимальной лечебной дозы комбинированного препарата букцид при экспериментальном букстонеллезе крупного рогатого скота

Изучение лечебной эффективности оптимальной лечебной дозы букцида при экспериментальном букстонеллезе крупного рогатого скота проводили в условиях опытного хозяйства «Кленово» филиала ФНЦ ВИЖ им. Эрнста г. Москва и лаборатории ВНИИ паразитологии - филиал ФНЦ ВИЭВ им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко г. Москва, согласно методическим рекомендациям [6].

Для испытаний было проведено экспериментальное заражение телят трехмесячного возраста, масса которых колебалась от 50 до 80 кг. Предварительно опытных телят подвергали клиническим исследованиям, взвешиванию, индивидуальной и групповой нумерации, содержали в станках по 6 голов. Экспериментальному заражению подвергали 30 телят, которым внутрь задавали по 30 тысяч цист букстонелл, полученных от спонтанно зараженных коров. Предварительные исследования, проведенные в условиях Калужской области, показали, что наибольшая интенсивность букстонелезной инвазии (ИИ) была выявлена у молодняка крупного рогатого скота.

Шесть телят аналогичного возраста и массы оставались без заражения и служили контролем. За время опыта животных всех групп содержали в аналогичных условиях, но изолированно по группам, кормили по зоотехническим нормам и они оставались под ежедневными клиническими наблюдениями. Успешность экспериментального заражения букстонеллами устанавливали по результатам ежедневных копроскопических исследований опытных животных с 7 по 12 дни после заражения с установлением экстенсивности и интенсивности инвазии (по количеству цист букстонелл в 1 г фекалий).

Следует отметить, что по результатам проведенных исследований все телята, которым задавали отмеченную дозу инвазионного материала, были заражены букстонеллами, а среднее количество выделяемых цист колебалось от 765 до 835 экземпляров.

После установления экстенсивности и интенсивности инвазии зараженных телят разделили на 5 аналогичных групп по 6 голов в каждой. Животным первой группы задавали комбинированный препарат в дозе по ДВ 480 мг/кг массы животного, состоящий из 80 мг/кг триметоприма и 400 мг/кг сульфадиазина внутрь в два приема с интервалом 12 часов в течение 5 дней. Животным второй группы препарат назначали в дозе 510 мг/кг состоящей из 85 мг/кг триметоприма и 425 мг/кг сульфадиазина внутрь в два приема с интервалом 12 часов в течение 5 дней. Животным третьей группы комбинированный препарат назначали в дозе по ДВ 540 мг/кг массы, состоящий из 90 мг/кг триметоприма и 540 мг/кг сульфадиазина внутрь в два приема с интервалом 12 часов в течение 5 дней. Животным четвертой группы назначали метронидазол в дозе по ДВ 10 мг/кг массы внутрь двукратно в течение 4 дней (базовый препарат). Животные пятой группы лечению не подвергались и служили зараженным контролем, а животные шестой группы были свободны от инвазии и служили контролем (чистый контроль). За время опыта после лечения животных всех групп продолжали содержать в аналогичных условиях и кормили по принятым нормам.

Эффективность назначенных препаратов и разных доз определяли по результатам копроскопических исследований на седьмой день после лечения. Проведенные в период лечения и в последующие 6 дней после, наблюдения показали, что подопытные животные переносили назначенное лечение удовлетворительно и заметных отклонений от нормы в состоянии и поведении подопытных животных не отмечено.

При исследовании через 6 и 7 дней после лечения, путем назначения отмеченными выше препаратами из 6 животных первой группы, получавших комбинированный препарат в дозе 480 мг/кг массы в течение 5 дней цисты букстонелл обнаружены у 1 животного в количестве 66 экз. (табл. 1), а исходное количество цист было 765 экз. Отсюда интенсэффективность проведенного лечения путем назначения комбинированного препарата составила 91,4%, а экстенсэффективность 83,3%.

При исследовании в отмеченные сроки после проведенного лечения животные второй и третьей групп, котором назначали комбинированный препарат в дозах 510 и 540 мг/кг массы соответственно в течение 5 дней были свободны от букстонелл. Тогда как их исходное количество составляло 812 и 835 экз. Отсюда эффективность комбинированного препарата в дозе 510 и 540 мг/кг массы в течение 5 дней при экспериментальном букстонеллезе телят составила 100%.

Из шести животных четвертой группы, которым задавали базовый препарат метронидазол в рекомендованной дозе при исследовании через 7 дней после лечения от цист букстонелл освободились 4 животных из шести экстенсэффективность составила 66,7%. Среднее количество цист букстонелл у зараженных телят составила 135 экз., а их исходное количество было 796 экз. Интенсэффективность по данной группе при назначении базового препаратами метронидазола в рекомендованной дозе составила 83,1%.

Результаты, полученные в опыте по определению оптимальной лечебной дозы комбинированного препарата букцид при экспериментальном букстонеллезе телят показали, что доза препарата 480 мг/кг массы в течение 5 дней обеспечила 83,3%-ную экстенсэффективность и 91,4%-ную интенсэффективность.

Комбинированный препарат букцид в дозах 510 и 540 мг/кг массы внутрь в течение 5 дней при экспериментальном букстонеллезе телят обеспечили 100%-ную эффективность и хорошо переносился животными.

Использованный нами в качестве сравнения базовый препарат метронидазол в рекомендуемой дозе при экспериментальном букстонеллезе телят обеспечил 66,7%-ную экстенсэффективность и 83,1%-ную интенсэффективность.

Полученные нами результаты исследований дают основание считать оптимальной лечебной дозой комбинированного препарата букцида 510 мг/кг массы животного внутрь в два приема с интервалом 12 часов в течение 5 дней, которая при экспериментальном букстонеллезе телят обеспечила 100%-ную эффективность.

Пример 3. Производственное испытание лечебной эффективности комбинированного препарата букцид при спонтанном букстонеллезе крупного рогатого скота.

Изучение лечебной эффективности оптимальной лечебной дозы Букцида при спонтанном букстонеллезе крупного рогатого скота проводили в условиях опытного хозяйства «Кленово» филиал ФНЦ ВИЖ им. Эрнста г. Москва и лаборатории ВНИИ паразитологии - филиал ФНЦ ВИЭВ им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко г. Москва, согласно методическим рекомендациям (4).

В условиях опытного хозяйства «Кленово» и лаборатории ВНИИ паразитологии, в течение с мая по июль 2018 года были обследованы 150 голов крупного рогатого скота в возрасте от 2 до 9 лет методом последовательных промываний на спонтанную инвазированность букстонеллами. Экстенсинвазированность в группах колебалась от 48 до 52%, которых использовали в производственном испытании, а интенсивность инвазии по количеству цист колебалась от 670 до 753 цист (табл. 2).

Исходя из зараженности, животных условно разделили на три группы. Животным первой группы (50 голов) назначали комбинированный препарат букцид в дозе по ДВ 510 мг/кг массы внутрь в течение 5 дней состоящий из 85 мг триметоприма и 425 мг сульфадиазина в два приема с интервалом 12 часов. Животным второй группы (50 голов) назначали метронидазол в дозе по ДВ 10 мг/кг массы внутрь двукратно в течение 4 дней (базовый препарат). Животные третьей группы (50 голов) оставались без лечения и служили контролем.

Эффективность проведенного лечения определяли по результатам копроскопических исследований через 7 дней после назначения препаратов.

Наблюдения, проведенные в период лечения и в последующие 10 дней после, показали, что животные обработанные комбинированным препаратом букцид переносили назначенное лечение хорошо и без осложнений.

При исследовании через 7 дней после лечения из 26 зараженных букстонеллами животных первой группы, получавших комбинированный препарат в дозе 510 мг/кг массы в течение 5 дней от цист букстонелл освободились 25, а цисты букстонелл обнаружены у одного животного в количестве 21 экз. Исходное количество цист было 753 экз. Отсюда, интенсэффективность проведенного лечения, путем назначения оптимальной дозы комбинированного препарата букцид в дозе 510 мг/кг массы внутрь в течение 5 дней составило 97,2%, а экстенсэффективность сравнялась 96, 15%.

Во второй группе из 24 зараженных животных после лечения метронидазолом от инвазии освободились 20 животных, экстенсэффективность составила 83,3%. Среднее количество цист букстонелл у зараженных животных 97 экз., а исходное было 670 экз., интенсэффективность проведенного лечения равнялось 85,5%. Количество зараженных животных в контрольной группе оставалась на прежнем уровне, а среднее количество цист в г фекалий увеличилось с 695 до 704 экз.

Результаты производственного испытания подтвердили высокую эффективность комбинированного препарата букцид, при букстонеллезе крупного рогатого скота разного возраста.

Таким образом, комбинированный препарат букцид в дозе 510 мг/кг из расчета 85 мг/кг триметоприма и 425 мг/кг сульфадиазина внутрь двукратно в течение 5 дней обеспечивает 97,2%-ную интенсэффективность при букстонеллезе крупного рогатого скота.

Предложенный способ, включающий в себя применение комбинированного препарата букцид, обеспечивает высокую лечебную эффективность при букстонеллезе крупного рогатого скота.

Источники информации

1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Водянов А.А. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. М., 2008. - 776 с.

2. Вершинин И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика. - Екатеринбург, 1996. - 264 с.

3. Кленова И.Ф., Мальцев К.Л., Яременко Н.А. Ветеринарные препараты в России. Справочник в 2-х томах. - М., Сельхозиздат, 2004. - 1018 с.

4. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. - СПб, 1996. - 602 с.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей, в 2-х частях, издание 12-ое, переработанное и дополненное. - М., Медицина, 1993. - 736 с.

6. Методические рекомендации по борьбе с эймериозами и изоспорозами животных. - М., 1994. - 46 с.