СРЕДСТВА, УСИЛИВАЮЩИЕ СЕКРЕЦИЮ ГОРМОНА РОСТА

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к соединениям, которые полезны для введения млекопитающим с целью повышения в плазме уровня гормона роста.

Уровень техники

(а) Описание предшествующего уровня техники

Гормон роста (GH) или соматотропин, выделяемый гипофизом, входит в семейство гормонов, биологически активность которых является не только основой для роста в длину молодого организма, но также поддерживает целостность организма в зрелом возрасте. GH действует непосредственно или косвенно на периферийные органы, стимулируя синтез факторов роста (инсулин-подобного фактора роста-1 или IGF-I) или их рецепторов (эпидермальный фактор роста или EGF). Прямое действие GH является тем типом, которое относят к антиинсулиновому, что способствует расщеплению жира на уровне жировых тканей. Через его действие на IGF-1 (соматомедин С) синтез и секрецию GH стимулирует рост хрящей и костей (структурный рост), белковый синтез и клеточную пролиферацию в многочисленных периферийных органах, включая мышцы и кожу. Благодаря своей биологической активности GH участвует во взрослых организмах в поддержании состояния белкового анаболизма и играет первичную роль в регенерации ткани после травмы.

Уменьшение секреции GH с возрастом, демонстрируемое у людей и животных, способствует метаболическим изменениям в сторону катаболизма, который инициирует или участвует в старении организма. Потеря мышечной массы, накопление жировых тканей, деминерализация костей, потеря способности регенерации ткани после травм, которые наблюдаются в пожилом возрасте, коррелируются с уменьшением секреции GH.

Таким образом, GH является физиологическим анаболическим средством, абсолютно необходимым для роста детей и для управления белковым обменом взрослых.

Секреция гормона роста (GH) регулируется двумя гипоталамическими пептидами: GH-высвобождающим гормоном (GHRH), который оказывает стимулирующий эффект на высвобождение GH и соматостатином, который демонстрирует ингибирующее воздействие. В последние несколько лет было продемонстрировано, что секреция GH может также стимулироваться синтетическими олигопептидами, названными GH-высвобождающими пептидами (GHRP), такими как гексарелин и различные аналоги гексарелина (Ghigo et. al., European Journal of Endocrinology, 136, 445-460, 1997). Эти соединения действуют через механизм, который отличается от механизма действия GHRH (C.Y.Bowers, в "Xenobiotic Growth Hormone Secretagogues", Eds. B.Bercu и R.F.Walker, Pg.9-28, Springer-Verlag, New York 1996) и путем взаимодействия со специфическими рецепторами в гипофизе ((a) G.Muccioli et al., Journal of Endocrinology, 157, 99-106, 1998; (b) G.Muccioli, "Tissue Distribution of GHRP Receptors в Humans", Abstracts IV European Congress of Endocrinology, Sevilla, Spain, 1998). Недавно было продемонстровано, что GHRP рецепторы присутствуют не только в системе гиптоталамо-гипофиза, но даже в различных тканях человека, вообще не связанных с GH вывобождением (G.Muccioli et al., см. выше (а)).

GHRPs и их антагонисты описаны, например, в следующех публикациях: C.Y.Bowers, supra, R.Deghenghi, Growth Hormone Releasing Peptides", ibidem, 1996, pg.85-102; R.Deghenghi et al., "Small Peptides as Potent Releasers Growth Hormone", J.Ped. End. Metab., 8, pg.311-313, 1996; R.Deghenghi, "The Development of Impervious Peptides as Growth Hormone Growth Hormone Secretagogues", Acta Paediatr. Suppl., 423, pg.85-87, 1997; К.Veeraraganavan et. al., "Growth Hormone Releasing Peptides (GHRP) Binding to Porcine Anterior Pituitary и Hypothalamic Membranes", Life Sci., 50, Pg.1149-1155, 1992; и Т.С.Somers et. al., "Low Molecular Weight Peptidomimetic Growth Hormone Secretagogues, WO 96/15143 (May 23, 1996).

GH человека был получен с помощью генной инженерии приблизительно десять лет назад. До недавнего времени большинство применений GH было связано с задержкой роста у детей, теперь исследуют использование GH для взрослых. Фармакологическое применение GH, GHRPs и средств, усиливающих секрецию гормона роста, можно разделить на следующее три главных категории:

(b) Детский рост

Лечение с помощью рекомбинантного гормона роста человека показало, что он стимулируют рост у детей, имеющих карликовый гипофиз, почечную недостаточность, синдром Турнера и небольшой рост. Рекомбинантный GH человека теперь коммерчески доступен в Европе и в Соединенных Штатах для применения в случае замедления роста ребенка, вызванного недостатком GH, а также для лечения почечной недостаточности у детей. Другие его применения находятся в стадии клинического исследования.

(c) Лечение в течение длительного срока взрослых и пожилых пациентов

Снижение секреции GH вызывает изменения в организме с возрастом. Предварительные исследования лечения в течения года рекомбинантным GH человека показали увеличение мускульной массы и толщины кожи, снижение жировой массы при небольшом увеличении плотности кости у группы пожилых пациентов. В отношении остеопороза, как показали недавние исследования, рекомбинантный GH человека не увеличивает костную минерализацию, но, возможно, он может предотвращать деминерализацию костей в период пост-менопаузы у женщин. Дальнейшие исследования находятся в настоящее время в процессе реализации для демонстрации этой теории.

(d) Лечение взрослых и пожилых пациентов в течение короткого периода времени

В предклинических и клинических исследованиях было показано, что гормон роста стимулирует белковый анаболизм и заживление в случае ожогов, СПИДа и рака, при ранениях, а также стимулирует сращивание костей.

GH, GHRPs и средства, усиливающие секрецию гормона роста, также предназначены для фармакалогического и ветеринарного применения. GH, GHRPs и средства, усиливающие секрецию гормона роста, стимулируют рост свиней в течение периода их выкармливания за счет благоприятного влияния на рост мышечной ткани по сравнению с ростом жировых тканей, а также увеличивают надои коров и при этом не обнаруживаются нежелательные побочные эффекты, которые подвергли бы опасности здоровье животных, а также привели бы к вредным примесям в производимом мясе или молоке. Бычий соматотропин (BST) коммерчески доступен в США.

Большинство клинических исследований осуществляют в настоящее время с рекомбинантным GH. GHRPs и средства, усиливающие секрецию гормона роста, рассматриваются в качестве продуктов второго поколения, предназначенных для замены в ближайшем будущем использования GH в большинстве случаев. Соответственно применение GHRPs и средств, усиливающих секрецию гормона роста в настоящее время, имеет множество преимуществ перед использованим GH как такового.

Таким образом, имеется потребность в соединениях, которые в случае их введения млекопитающим, действуют в качестве средств, усиливающих секрецию гормона роста.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к новым соединениям, которые действуют в качестве средств, усиливающих секрецию гормона роста, и в целом к способам повышения в плазме уровня гормона роста у млекопитающих путем введения одного или нескольких соединений согласно изобретению. Изобретение также относится к способам лечения дефицита секреции гормона роста, стимулирования заживления ран, восстановления после хирургических операций или восстановления от изнурительных болезней, путем введения млекопитающим терапевтически эффективного количества одного из указанных соединений.

Подробное описание предпочтительных воплощений изобретения

В этом описании применены следующее сокращения: D обозначает декстро энантиомер, GH обозначает гормон роста, Boc обозначает трет-бутилоксикарбонил, Z обозначает бензилоксикарбонил, N-Me обозначает N-метил, Pip обозначает 4-амино-пиперидин-4-карбоксилат, Inip обозначает изонипекотил, т.е. пиперидин-4-карбоксилат, Aib обозначает α-аминоизобутирил, Nal обозначает β-нафтилаланин, Mrp обозначает 2-метил-Trp, и Ala, Lys, Phe, Trp, His, Thr, Cys, Tyr, Leu, Gly, Ser, Pro, Glu, Arg, Val и Gln обозначают аминокислоты аланина, лизина, фенилаланина, триптофана, гистидина, треонина, цистеина, тирозина, лейцина, глицина, серина, пролина, глутаминовой кислоты, аргинина, валина и глутамина соответственно. Кроме того, gTrp является группой формулы:

и gMrp является группой формулы:

где * означает, что атом углерода, который, когда является хиральным атомом углерода, имеет R или S конфигурацию. Соединения по изобретению имеют общую формулу I:

где * означает, что атом углерода, который, когда является хиральным атомом углерода, имеет R или S конфигурацию, один из R¹ и R³ является атомом водорода и другой является группой формулы II:

R² является атомом водорода, линейной или разветвленной C₁-С₆ алкильной группой, арильной группой, гетероциклической группой, циклоалкильной группой; (СН₂)_n-арильной группой, (СН₂)_n-гетероциклической группой, (СН₂)_n-циклоалкильной группой, метилсульфонильной группой, фенилсульфонильной группой, C(O)R⁸ группой или группой согласно одной из формул от III до VIII, представленных ниже:

R⁴ является атомом водорода или линейной или разветвленной С₁-С₄-алкильной группой, R⁵ является атомом водорода, линейной или разветвленной C₁-C₄ алкильной группой, (СН₂)_n-арильной группой, (СН₂)_n-гетероциклической группой, (СН₂)_n-циклоалкилькой группой или аминогруппой, R⁶ и R⁷ являются независимо друг от друга атомом водорода или линейной или разветвленной С₁-С₄-алкильной группой, R⁸ является линейной или разветвленной группой C₁-С₆-алкильной группой, R⁹, R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R¹⁵ и R¹⁶ независимо друг от друга являются атомом водорода или линейной или разветвленной С₁-С₄-алкильной группой, m имеет значение 0, 1 или 2 и n имеет значение 1 или 2.

Предпочтительным воплощением изобретения являются соединения, в которых R² представляет собой водород, R³ представляет собой группу формулы II и m имеет значение 0. Особенно предпочтительными являются соединения, в которых линейный или разветвленный C₁-C₄ алкил представляет собой метил, линейный или разветвленный C₁-С₆ алкил представляет собой метил, этил или изо-бутил, арил представляет собой фенил или нафтил, циклоалкил представляет собой циклогексил и гетероциклическая группа представляет собой 4-пиперидинил или 3-пирролильную группу.

Особенно предпочтительные соединения по изобретению включают следующее:

H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO:

N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃:

N-Me-Aib-D-Trp-N-Me-D-gTrp-C(O)CH₃:

В соответствии с настоящим изобретеним, было найдено, что соединения по изобретению являются полезными для повышения в плазме уровня гормона роста у млекопитающих. Кроме того, соединения по настоящему изобретению являются полезными для лечения дефицита секреции гормона роста, замедления роста у детей и нарушений обмена веществ, связанных с недостатком секреции гормона роста, в особенности в пожилом возрасте.

Фармацевтически приемлемые соли указанных соединений могут быть также применены, если необходимо. Такие соли включают органические или неорганические аддитивные соли, такие как гидрохлоридные, гидробромидные, фосфатные, сульфатные, ацетатные, сукцинатные, аскорбатные, тартратные, глюконатные, бензоатные, малатные, фумаратные, стеаратные или памоатные соли.

Фармацевтические композиции по изобретению являются полезными для повышения в плазме уровня гормона роста у млекопитающих, включая человека, так же как и для лечения дефицита секреции гормона роста, задержки роста у детей и нарушений обмена веществ, связанных с недостатком секреции гормона роста, в особенности в пожилом возрасте. Такие фармацевтические композиции могут включать соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или комбинации соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли необязательно в смеси с носителем, наполнителем, связующим веществом, разбавителем, матриксом или покрытием с пролонгированным выделением. Примеры таких носителей, наполнителей, связующих веществ и разбавителей могут быть найдены в Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A.R.Gennaro, Ed., Mack Publishing Company, Easton, PA; 1990.

Фармацевтические композиции по изобретению могут включать дополнительные средства, усиливающие секрецию гормона роста. Примеры соответствующих дополнительных средств, усиливающих секрецию гормонов роста, являются грелин (Ghrelin) (cf. M.Kojima то же, что al., Nature, 402 (1999), 656-660), GHRP-1, GHRP-2 и GHRP-6.

Любое из соединений в соответствии с настоящим изобретением может быть получено в соответствии со знаниями из уровня техники, связанном с созданием лекарственного средства, которые пригодны для парантерального, буккального, ректального, вагинального, трансдермального, легочного или орального пути введения.

Тип состава лекарственного средства, содержащего соединение, может быть выбран согласно желаемой скорости высвобождения. Для примера, если соединения должны быть быстро введены, то предпочтительно назальное или внутривенное введение.

Лекарственные средства могут быть введены млекопитающим, включая людей, в терапевтически эффективной дозе, которая может быть легко определена специалистом в этой области и которая может варьироваться в зависимости от вида лекарственного препарата, возраста, пола и веса лечащегося пациента или субъекта, так же как от пути введения. Точный уровень может быть легко определен опытным путем.

ПРИМЕРЫ

Следующее примеры иллюстрируют эффективность наиболее предпочтительных соединений для лечения по настоящему изобретению.

Пример 1: H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO

Полный синтез (проценты представляют выход, полученный при синтезе, как описано ниже):

Z-D-Trp-NH₂

Z-D-Trp-OH (8.9 г; 26 ммоль; 1 экв.) растворяют в диметиловом эфире (25 мл) и помещают на водяную со льдом баню при 0°С. Последовательно добавляют NMM (3.5 мл; 1.2 экв.), IBCF (4.1 мл; 1.2 экв.) и раствор аммиака 28% (8.9 мл; 5 экв.). Смесь разбавляют водой (100 мл), после чего продукт Z-D-Trp-NH₂ выпадает в осадок. Его фильтруют и сушат в вакууме, что дает 8.58 г белого твердого вещества.

Выход=98%,

С₁₉Н₁₉N₃О₃, 337 г·моль^-1

R_f=0.46 {Хлороформ/Метанол/Уксусная кислота (180/10/5)}.

¹Н ЯМР (250 мГц, DMSO-d⁶): δ 2.9 (дд, 1Н, Н_β, J_ββ'=14.5 Гц; J_βα=9.8 Гц); 3.1 (дд, 1Н, Н_β', J_β'_β=14.5 Гц; J_β'_α=4.3 Гц); 4.2 (сексдуплет, 1Н, Н_α); 4.95 (с, 2Н, СН₂ (Z)); 6.9-7.4 (м, 11Н); 7.5 (с, 1Н, Н²); 7.65 (д, 1Н, J=7.7 Гц); 10.8 (с, 1Н, N^jН).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 338 [M+H]⁺, 360 [М+Na]⁺, 675 [2M+H]⁺, 697 [2M+Na]⁺.

Boc-D-Trp-D-Trp-NH₂.

Z-D-Trp-NH₂ (3 г; 8.9 ммоль; 1 экв.) растворяют в ДМФА (100 мл). К перемешиваемой смеси добавляют HCl 36% (845 мкл; 1.1 экв.), воду (2 мл) и палладий на активированном угле (95 мг, 0,1 экв.). Над раствором пробулькивают водород в течение 24 часов. После завершения реакции палладий фильтруют на целите. Растворитель удаляют в вакууме, что дает HCl, H-D-Trp-NH₂ в виде бесцветного масла.

В 10 мл ДМФА последовательно добавляют HCl, H-D-Trp-NH₂ (8.9 ммоль; 1 экв.), Boc-D-Trp-OH (2.98 г; 9.8 ммоль; 1.1 экв.), NMM (2.26 мл; 2.1 экв.) и ВОР (4,33 г; 1.1 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает 4.35 г Boc-D-Trp-D-Trp-NH₂ в виде белого твердого вещества.

Выход=85%.

C₂₇H₃₁N₅O₄,489 г·моль^-1.

R_f=0.48 {Хлороформ/Метанол/Уксусная кислота (85/10/5)}.

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.28 (с, 9Н, Вос); 2.75-3.36 (м, 4Н, 2(CH₂)_β;. 4.14 (м, 1Н, СН_α); 4.52 (м, 1Н, СН_α'); 6.83-7.84 (м, 14Н, 2 индола (10Н), NH₂, NH (уретан) и NH (амид)); 10.82 (д, 1Н, J=2 Гц, N¹H); 10.85 (д, 1Н, J=2 Гц, N¹H),

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 490 [М+Н]⁺, 512 [M+Na]⁺, 979 [2М+Н]⁺.

Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-(NⁱBoc)Trp-NH₂.

Boc-D-Trp-D-Trp-NH₂ (3 г; 6.13 ммоль; 1 экв.) растворяют в ацетонитриле (25 мл). К полученному раствору последовательно добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (3.4 г; 2.5 экв.) и 4-диметиламинопиридин (150 мг; 0.2 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/гексаном {5/5}, что дает 2.53 г Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-(NⁱBoc)Trp-NH₂ в виде белого твердого вещества.

Выход=60%.

С₃₇Н₄₇N₅O₈, 689 г·моль^-1

R_f=0.23 {этилацетат/гексан (5/5)}.

¹H ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.25 (с, 9Н, Boc); 1.58 (с, 9Н, Boc); 1.61 (с, 9Н, Boc); 2.75-3.4 (м, 4Н, 2 (CH₂)_β); 4.2 (м, 1Н, СН_α'); 4.6 (м, 1Н, СН_α); 7.06-8 (м, 14Н, 2 индола (10Н), NH (уретан), NH и NH₂ (амиды)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 690 [М+Н]⁺, 712 [M+Na]⁺, 1379 [2М+Н]⁺, 1401 [2M+Na]⁺.

Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-H

Вос-D-(NⁱВос)Trp-D-(NⁱВос)Trp-NH₂ (3 г; 4.3 ммоль; 1 экв.) растворяют в смеси ДМФА/ вода (18 мл/7 мл). Затем добавляют пиридин (772 мкл; 2.2 экв.) и Бис(трифторацетокси)иодбензол (2.1 г; 1.1 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1М) и водным раствором насыщенного хлорида натрия (200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Boc-D-(N'Boc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-H применяют непосредственно на следующей стадии процесса формилирования.

R_f=0.14 {этилацетат/гексан (7/3)}.

C₃₆H₄₇N₅O₇, 661 г.моль^-1.

¹H ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.29 (с, 9Н, Boc); 1.61 (с, 18Н, 2 Boc); 2.13 (с, 2Н, NH₂ (амин)); 3.1-2.8 (м, 4Н, 2 (СН₂)_β); 4.2 (м, 1Н, СН_α'); 4.85 (м, 1Н, СН_α); 6.9-8 (м, 12Н, 2 индола (10Н), NH (уретан), NH(амид)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 662 [М+Н]⁺ 684 [M+Na]⁺.

Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-CHO

Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-H (4.3 ммоль; 1 экв.) растворяют в ДМФА (20 мл). Затем добавляют N,N-диизопропилэтиламин (815 мкл; 1.1 экв.) и 2,4,5-трихлорфенилформиат (1.08 г; 1.1 экв.). Через 30 минут смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/гексаном {5/5}, что дает 2.07 г Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-CHO в виде белого твердого вещества.

Выход=70%.

C₃₇H₄₇N₅O₈, 689 г.моль^-1

R_f=0.27 {этилацетат/гексан (5/5)}.

¹H ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.28 (с, 9Н, Boc); 1.6 (с, 9Н, Boc); 1.61 (с, 9Н, Boc); 2.75-3.1 (м, 4Н, 2(CH₂)_β); 4.25 (м, 1Н, (СН)α_А&B); 5.39 (м, 0.4Н, (СН)α'_B); 5.72; (м, 0.6Н, ((CH)α'_A); 6.95-8.55 (м, 14Н, 2 индола (10Н), NH (уретан), 2 NH (амиды), СНО (формил)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 690 [М+Н]⁺, 712 [M+Na]⁺, 1379 [2M+H]⁺.

Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO

Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-CHO (1.98 г; 2.9 ммоль; 1 экв.) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (TFA) (16 мл), анизола (2 мл) и тиоанизола (2 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и высаживают TFA, H-D-Trp-D-gTrp-CHO фильтруют.

TFA, H-D-Trp-D-gTrp-CHO (2,9 ммоль; 1 экв.), Boc-Aib-OH (700 мг; 1 экв.), NMM; (2.4 мл; 4.2 экв.) и ВОР (1.53 г; 1.2 экв.) последовательно добавляют в 10 мл ДМФА. Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл).

Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя с этилацетатом, что дает 1.16 г Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO в виде белого твердого вещества.

Выход=70%.

С₃₁Н₃₈N₆O₅, 574 г.моль^-1.

R_f=0.26 {Хлороформ/Метанол/ Уксусная кислота (180/10/5)}.

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.21 (с, 6Н, 2 СН₃(Aib)); 1.31 (с, 9Н, Boc); 2.98-3.12 (м, 4Н, 2(СН₂)_β); 4.47 (м, 1Н, (СН)α_A&B); 5.2 (м, 0.4Н, (СН)α'_B); 5.7 (м, 0.6Н, (СНα'_B); 6.95-8.37 (м, 15Н, 2 индола (10Н), 3 NH (амиды), 1 NH (уретан), СНО (формил)); 10.89 (м, 2Н, 2 N¹H (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 575 [М+Н]⁺, 597 [M+Na]⁺, 1149 [2M+H]⁺ 1171 [2M+Na]⁺.

H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO

Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO (1 г; 1.7 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок TFA, H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO фильтруют.

Продукт TFA, H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO очищают с помощью препаративной ЖХВД (высокоэффективной жидкостной хроматографии) (Waters, delta pak, С18, 40×100 мм, 5 мкм, 100 А).

Выход=52%.

С₂₆Н₃₀N₆О₃,474 г.моль^-1

¹Н ЯМР (400 мГц, DMSO-d⁶)+¹H/¹H корреляция: δ 1.21 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.43 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 2.97 (м, 2Н, (СН₂)_β); 3.1 (м, 2Н, (СН₂)_β'); 4.62 (м, 1Н, (СН)α_A&B); 5.32 (q, 0.4H, (СН)α'_B); 5.71 (кв, 0.6Н, (СН)α'_A); 7.3 (м, 4Н Н₅ и Н₆ (2 индола)); 7.06-7.2 (4d, 2Н, H_2A то же, что Н_2B (2 индола)); 7.3 (м, 2Н, Н₄ или Н₇ (2 индола)); 7.6-7.8 (4д, 2Н, Н_4A и Н_4B или H_7A то же, что Н_7B); 7.97 (с, 3Н, NH₂ (Aib) и СНО (формил)); 8.2 (д, 0.4H, NH1_1B (диамино)); 8.3 (м, lH, NH_A&B); 8.5 (д, 0.6Н, NH_1A (диамино)); 8.69 (д, 0.6Н, NH_2A (диамино)); 8.96 (д, 0.4H, NH_2B (диамино)); 10.8 (с, 0.6Н, N'H_1A (индол)); 10.82 (с, 0.4H, N'H_1B (индол)); 10.86 (с, 0.6Н, N¹H_2A (индол)); 10.91 (с, 0.4H, N¹H_2B (индол)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 475 [М+Н]⁺, 949 [2M+H]⁺.

Аналогичный синтез выполнен для следующих соединений:

Пример 2 H-Aib-D-Mrp-D-gMrp-CHO

C₂₈H₃₄N₆O₃, 502 г.моль^-1

¹H ЯМР (400 мГц, DMSO-d⁶)+¹H/¹H корреляция: δ 1.19 (с, 2Н, (СН₃)_1А (Aib)); 1.23 (с, 1Н, (СН₃)_1В (Aib)); 1.41 (с, 2Н, (СН₃)_2А (Aib)); 1.44 (с, 2Н, (СН₂)_2В (Aib)); 2.33-2.35 (4с, 6Н, 2СН₃ (индолы)); 2.93 (м, 2Н, (СН₂)_β); 3.02 (м, 2Н, (СН₂)_β'); 4.65 (м, 0.6Н, (СН)α_А; 4.71 (м, 0.4Н, (СН)α_В); 5.2 (м, 0.4H, (СНОα'_В); 5.6 (м, 0.6Н, (СН)α'_А; 6.95 (м, 4Н, Н₅ и Н₆ (2 индола)); 7.-19 (м, 2Н, Н₄ или Н₇ (2 индола)); 7,6 (м, 2Н, Н₄ или H₇ (2 индола)); 7.9 (с, 1Н, СНО (Формил)); 7.95 (с, 2Н, NH₂ (Aib)); 8.05 (д, 0.4H, NH_1B (диамино)); 8.3 (м, lH, NH_A&B); 8.35 (м, 0.6Н, NH_1A (диамино)); 8.4 (д, 0.6Н, NH_2А (диамино)); 8,75 (д, 0.4H, NH_2B (диамино)); 10.69 (с, 0.6Н, N¹H_1A (индол)); 10.71 (с, 0.4H, N¹H_1B (индол)); 10.80 (с, 0.6Н, N¹Н_2А (индол)); 10.92 (с, 0.4H, N¹H_2B (индол)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 503.1 [М+Н]⁺.

Пример 3 N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO

Boc-N-Me-Aib-OH (327 мг; 1.5 ммоль; 2.6 экв.) растворяют в хлористом метилене (10 мл) и охлаждают до 0°С. Затем добавляют дициклогексилкарбодиимид (156 мг; 0.75 ммоль; 1.3 экв.). Смесь после отфильтровывания DCU (дициклогексилмочевина) добавляют к раствору, содержащему TFA, H-D-Trp-D-gTrp-СНО (0.58 ммоль; 1 экв.) и триэтиламин (267 мкл; 3.3 экв.) в хлористом метилене (5 мл). Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры и нагревание прекращают через 24 часа. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/метанолом {9/1}, что дает 180 мг (53%) Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO в виде белой пены.

Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO (180 мг; 0.3 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок TFA, N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO фильтруют.

Продукт TFA, N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO (39 мг; 15%) очищают с помощью препаративной ЖХВД (Waters, delta pak, CIS, 40×100 мм, 5 мкм, 100 А).

C₂₇H₃₂N₆O₃, 488 г.моль^-1.

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.19 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.42 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 2.26 (с, 3Н, NCH₃); 3.12 (м, 4Н, 2(СН₂)_β); 4.66 (м, 1Н, (СН)_α); 5.32 то же, что 5.7 (м, 1Н, (СН)_α'); 6.9-7.8 (м, 10Н, 2 индола); 8 (м, 1H, СНО (формил)); 8.2-9 (м, 4Н, 3 NH (амиды) то же, что NH (амин)); 10.87 (м, 2Н, 2 N^JН (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 489.29 [М+Н]⁺.

Пример 4 H-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃

Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-H (0.72 ммоль; 1 экв.) растворяют в ДМФА (20 мл). Затем добавляют N,N-диизопропилэтиламин (259 мл; 2.1 экв.) и уксусный ангидрид (749 мл; 1.1 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл), водным раствором гидросульфата калия (100 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/гексаном, что дает 370 мг (73%) Boc-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱBoc)Trp-C(O)CH₃ в виде белого твердого вещества.

Вос-D-(NⁱBoc)Trp-D-g(NⁱВос)Trp-С(O)СН₃ (350 мг; 0.5 ммоль; 1 экв.) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок TFA, H-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ фильтруют.

В 10 мл ДМФА, последовательно добавляют TFA, H-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (0.5 ммоль; 1 экв.), Boc-Aib-OH (121 мг; 0.59 ммоль; 1.2 экв.), NMM (230 мкл; 4.2 экв.) и ВОР (265 мг; 1.2 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом, что дает 249 мг (85%) Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-С(O)СН₃ в виде белой пены.

Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (249 мг; 0.42 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок TFA, H-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ фильтруют.

Продукт TFA, H-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (80 мг; 23%) очищают с помощью препаративной ЖХВД (Waters, delta pak, CI8, 40×100 мм, 5 мм, 100 А).

С₂₇Н₃₂N₆О₃, 488 г.моль^-1.

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.22 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.44 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.8 (с, 3Н, С(О)СН₃); 3.06 (м, 4Н, 2 (СН₂)_β); 4.6 (м, 1Н, (СН)_α; 5.6 (м, 1Н, (СН)_α'); 6.9-7.8 (м, 10Н, 2 индола); 7.99 (с, 2Н, NH₂ (Aib)); 8.2-8.6 (м, 3Н, 3 NH 5 (амиды)); 10.83 (с, 2Н, 2 N¹H (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 489.32 [М+Н]⁺.

Пример 5 N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃

Boc-N-Me-Aib-OH (1.09 г; 5.04 ммоль; 4 экв.) растворяют в хлористом метилене (10 мл) и охлаждают до 0°С. Затем добавляют дициклогексилкарбодиимид (520 мг; 2.52 ммоль; 2 экв.). Смесь после отфильтровывания DCU добавляют к раствору, содержащему TFA, H-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (940 мг; 1.26 ммоль; 1 экв.) и триэтиламин (580 мл; 3.3 экв.) в хлористом метилене (5 мл). Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры и оставляют на 24 часа. Смесь разбавляют этилацетатом (50 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл), водным раствором гидросульфата калия (100 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/метанолом {9/1}, что дает 530 мг (70%) Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ в виде белой пены.

Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (530 мг; 0.88 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок TFA, N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ фильтруют.

Продукт TFA, N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (220 мг; 30%) очищают с помощью препаративной ЖХВД (Waters, delta pak, CIS, 40×100 мм, 5 мм, 100 А).

C₂₆H₃₄N₆O₃, 502 г.моль^-1

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.17 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.4 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.78 (с, 3Н, С(О)СН₃); 2.23 (с, 3Н, NCH₃); 3.15 (м, 4Н, 2 (СН₂)_β); 4.7 (м, 1Н, (СН)_α); 5.55 (м, 1Н, (СН)_α'); 6.9-7.9 (м, 10Н, 2 индола); 8,2-8.8 (с, 4Н, NH (амин) то же, что 3 NH (амиды)); 10.8 (с, 2Н, 2 N^JН (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 503.19 [М+Н]⁺.

Пример 6 Pip-D-Trp-D-gTrp-CHO

В 5 мл ДМФА последовательно добавляют TFA, H-D-Trp-D-gTrp-CHO (230 мг; 0.31 ммоль; 1 экв.), Boc-(N⁴Boc)Pip-OH (130 мг; 0.38 ммоль; 1.2 экв.), NMM (145 мкл; 4.2 экв.) и ВОР (167 мг; 0.38 ммоль; 1.2 экв.). Через 15 минут реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает Вос-(N⁴Boc)Pip-D-Trp-D-gTrp-CHO в виде пены.

Boc-(N⁴Boc)Pip-D-Trp-D-gTrp-CHO (0.3 1 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и TFA, H-Pir-D-Trp-D-gTrp-CHO фильтруют.

Продукт TFA, H-Pir-D-Trp-D-gTrp-CHO (127, мг; 42%) с помощью препаративной

ЖХВД (Waters, delta pak, C18, 40×100 мм, 5 мкм, 100 А).

С₂₈Н₃₃N₇O₃, 515 г.моль^-1

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.81 (м, 2Н, CH₂ (Pip)); 2.3 (м, 2Н, CH₂(Pip)); 3.1 (м, 8Н, 2(СН₂)_β то же, что 2СН₂ (Pip)); 4.68 (м, 1Н, (СН)_α); 5.3 то же, что 5,73 (2 м, 1Н, (СН)_α'); 6.9-7.7 (м, 10Н, 2 индола); 7.98 (2 с, 1Н, СНО (формил)); 8.2-9.2 (м, 6Н, NH₂ то же, что NH (Pip) то же, что 3 NH (амиды)); 10.9 (м, 2Н, 2 N¹H (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 516.37 [М+H]⁺, 538.27 [M+Na]⁺.

Пример 7 Pip-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃

В 5 мл ДМФА последовательно добавляют TFA, H-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (218 мг, 0.29 ммоль; 1 экв.), Boc-(N⁴Boc)Pip-OH (121 мг; 0.35 ммоль; 1.2 экв.), NMM (135 мкл; 4.2 экв.) и ВОР (155 мг; 0.35 ммоль; 1.2 экв.). Через 15 минут реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает Boc-(N⁴Boc)Pip-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ в виде пены.

Boc-(N⁴Boc)Pip-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (0.29 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0°С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок TFA, H-Pir-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ фильтруют.

Продукт TFA, H-Pir-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (135 мг; 47%) очищают с помощью препаративной ЖХВД (Waters, deltapak, CI8, 40×100 мм, 5 мкм, 100 А).

С₂₉Н₃₅Н₇O₃, 529 г.моль^-1

¹H ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.79 (м, 2Н, СН₂ (Pip)); 1.81 (с, 3Н, С(О)СН₃); 2.3 (м, 2Н, СН₂ (Pip)); 3.1 (м, 8Н, 2 (СН₂)_β то же, что 2 СН₂ (Pip)); 4.7 (м, 1Н, (СН)α); 5.6 (м, 1Н, (СН)_α' 6.9-7.8 (м, 10Н, 2 индола); 8.2-9 (м, 6Н, NH₂ то же, что NH (Pip) то же, что 3 NH (амиды)); 10.85 (м, 2Н, 2 N¹H (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 530.39 [M+H]⁺, 552.41 [M+Na]⁺.

Пример 8 Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-CHO

В 5 мл ДМФА последовательно добавляют TFA, H-D-Trp-D-gTrp-CHO (250 мг, 4.1 ммоль; 1 экв.), Fmoc- Изонипекотик-ОН (144 мг; 4.1 ммоль; 1.2 экв.), NMM (158 мкл; 4.2 экв.) и ВОР (181 мг; 4.1 ммоль; 1.2 экв.). Через 15 минут реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает Fmoc-Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-CHO в виде пены.

Fmoc-Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-CHO (4.1 ммоль) растворяют в смеси ДМФА (8 мл) и пиперидина (2 мл) и оставляют стоять в течение 30 минут. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-CHO фильтруют.

Продукт Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-CHO (81 мг; 28%) очищают с помощью препаративной ЖХВД (Waters, delta pak, CI8, 40×100 мм, 5 мкм, 100 А).

C₂₈H₃₂N₆O₃, 500 г.моль^-1

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.65 (м, 4Н, 2 СН₂ (Pip)); 2.4 (м, 1Н, СН (Pip)); 2.7-3.3 (м, 8Н, 2(СН₂)_β то же, что 2 CH₂ (Pip)); 4.6 (м, 1Н, (СН)_α); 5.3 то же, что 5.7 (2 м, 1Н, (СН)_α'); 6,9-7.7 (м, 10Н, 2 индола); 7.97 (2 с, 1Н, СНО (формил)); 8-8.8 (м, 4Н, NH (Pip) то же, что 3 NH (амиды)); 10.9 (м, 2Н, 2 N¹H (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 501.36 [М+Н]⁺.

Пример 9 Изонипекотил-Р-Trp-Р-gTrp-С(O)СН₃

В 5 мл ДМФА последовательно добавляют TFA, H-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (250mg_s 0.33 ммоль; 1 экв.), Fmoc-Изонипекотик-OH (141 мг; 0.4 ммоль; 1.2 экв.), NMM (155 мкл; 4.2 экв.) и ВОР (178 мг; 0.4 ммоль; 1.2 экв.). Через 15 минут реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает Fmoc- Изонипекотил-D-Trp-D-Trp-С(O)СН₃ в виде пены.

Fmoc-Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-С(O)СН₃ (0.33 ммоль) растворяют в смеси ДМФА (8 мл) и пиперидина (2 мл) и оставляют стоять в течение 30 минут. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-С(O)СН₃ фильтруют.

Продукт Изонипекотил-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH₃ (65 мг; 13%) очищают с помощью препаративной ЖХВД (Waters, delta pak, CI8, 40×100 мм, 5 мкм, 100 А).

C₂₉H₃₄N₆O₃. 514 г·моль^-1

¹Н ЯМР (200 мГц, DMSO-d⁶): δ 1.66 (м, 4Н, 2 СН₂ (Pip)); 1.79 (с, 3Н, С(О)СН₃); 2.7-3.3 (м, 8Н, 2 (СН₂)_β то же, что 2 СН₂ (Pip)); 4.54 (м, 1Н, (СН)_α); 5.59 (м, 1Н, (СН)_α'); 6.9-7.7 (м, 10Н, 2 индола); 8-8.6 (м, 4Н, NH (Pip) то же, что 3 NH (амиды)); 10.82 (м, 2Н, 2 N¹H (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 515.44 [М+Н]⁺.

Примеры 10-62

Следующее соединения были получены аналогичными способами:

Пример 10 H-Aib-D-Mrp-gMrp-CHO

Пример 11 H-Aib-Trp-gTrp-CHO

Пример 12 H-Aib-Trp-D-gTrp-CHO

Пример 13 H-Aib-D-Trp-gTrp-CHO

Пример 14 N-Me-D-Trp-gTrp-CHO

Пример 15 N-Метилсульфонил-D-Trp-gTrp-СНО

Пример 16 N-Фенилсульфонил-D-Trp-gTrp-СНО

Пример 17 N-(3-Метил-бутаноил)-D-Trp-gTrp-СО-СН₃

Пример 18 N-(3-Метил-бутаноил)-D-Trp-gTrp-CHO

Пример 19 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH₂-CH₃

Пример 20 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH₂-CH(CH₃)-CH₃

Пример 21 Aib-D-Trp-gTrp-СОСН₂-фенил

Пример 22 Aib-D-Trp-gTrp-СО-пиперидин-4-ил

Пример 23 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH₂-пиррол-3-ил

Пример 24 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH₂-CH₂циклогексил

Пример 25 N-Me-Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH₂-CH₃

Пример 26 N-Me-Aib-D-Trp-gTip-CO-CH₂-CH(CH₃)-CH₃

Пример 27 N-Ме-Aib-D-Trp-gTrp-СО-СН₂-фенил

Пример 28 N-Me-Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH₂-пиррол-3-ил

Пример 29 Н-Ме-Aib-D-Trp-gTrp-СО-СН₂-СН₂-циклогексил

Пример 30 Aib-D-Trp-gTrp-CHO

Пример 31 N-(3-амино-3-метил-бутаноил)-D-Trp-gTrp-СО-СН₃

Пример 32 N-Acetyl-D-Trp-gTrp-CHO

Пример 33 N-Acetyl-D-Trp-gTrp-CO-CH₃

Пример 34 N-Формил-D-Trp-gTrp-CHO

Пример 35 N-Формил-D-Trp-gTrp-CO-CH₃

Пример 36 N-(1,1-диметил-2-амино-2-кетоэтил)-D-Trp-gTrp-СНО

Пример 37 N-(2-амино-2-метил-пропил)-D-Trp-gTrp-СНО

Пример 38 N-(2-амино-2-метил-пропил)-D-Trp-gTrp-CO-CH₃

Пример 39 N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-Изонипекотил

Пример 40 N-Me-Aib-D-Trp-N-Me-D-gTrp-CrO)CH₃

Пример 41 H-Aib-D-Trp-N-Me-D-gTrp-C(O)CH₃

Пример 42 H-Aib-(D)-1-Nal-g-(D)-1-Nal-формил

С₃₀Н₃₂N₄O₃, 496 г.моль^-1.

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.14 и 1.4 (2 м, 6Н, 2 СН₃ (Aib)); 3.17-3.55 (м, 4Н, 2(СН₂)_β); 4.82 (м, 1Н, СНα); 5.5 и 5.82 (2 м, 1H, CHα); 7.36-7.64 (м, 8Н); 7.83-8 (м, 7Н); 8.25-9.45 (м, 5Н).

Масс-спектрометрия (FAB), м/е 497 [М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография (Delta Pak 5 мк С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: H₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 50 мин), tr (время задержки)=20.28 мин, 99%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 43 H-Aib-(D)-2-Nal-g-(D)-2-Nal-формил

С₃₀Н₃₂N₄O₃, 496

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.18 и 1.36 (2 м, 6Н, 2 СН₃ (Aib)); 2.84-3.3 (м, 4Н, 2 (СН₂)_β); 4.7 (м, 1H, СНα); 5.45 и 5.73 (2 м, 1H, CHα); 7.47-7.51 (м, 6Н); 7.76-8.06 (м, 11Н); 8.36-9.11 (м, 3Н).

Масс-спектрометрия (FAB), м/е 497 [М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О / ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 50 мин.), tr=20.26 мм, 95%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 44 H-Aib-(D)-l-Nal-(D)-gTrp-формил

С₂₈Н_3IN₃O₃, 485 г.моль^-1.

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.15 и 1.42 (2 м, 6Н, 2 СН₃ (Aib)); 3.11-3.3 и 3.54-3.7 (м, 4Н, 2 (CH₂)_β); 4.81 (м, 1Н, СН_α); 5.4 и 5.74 (2 м, 1H, CH_α'); 7.06-7.2 (м, 3Н); 7.34-7.65 (м, 6Н); 7.91-8.1 (м, 4Н); 8.2-8.4 (м, 1H); 8.55-9.5 (м, 3Н); 10.95 (м, 1H, N¹Н).

Масс-спектрометрия (FAB), м/е 486 [M+H]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до100% ACN в 50 мин), tr=17.33 мм, 92%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 45 H-Aib-(D)-2-Nal-(D)-gTrp-формил

С₂₈Н₃₁N₅O₃, 485 г.моль^-1.

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.19 и 1.45 (2 м, 6Н, 2 CH₃(Aib)); 2.93-3,3 (м, 4Н, 2 (СН₂)_β); 4.71 (м, 1H, CH_α); 5.35 и 5.7 (2 м, 1H, CH_α'); 7.05-7.1 (м, 2Н); 7.2-7.34 (м, 1H); 7.47-7.53 (м, 4Н); 7.64 (м, 1H); 7.78-8 (м, 8Н); 8.48-9.37 (м, 2Н); 10.88-11.04 (м, 1H, N¹H).

Масс-спектрометрия (FAB), м/е 486 [М+Н]^-1.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в SO мин), tr=17.30 мин, 95%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 46 H-Aib-(D)-Trp-g-(D)-l-Nal-формил

C₂₈H₃₁N₅O₃,485 г.моль^-1.

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO-d⁴): δ 1.23 и 1.41 (2 м, 6Н, 2 СН₃ (Aib)); 2.92-3.15 (м, 2Н, (СН₂)_β); 3.4-3.6 (м, 2Н, (СН₂)_β; 4.63 (м, 1H, CH_α'); 5.44 и 5.79 (2 м, 1H, CH_α'); 6.99-7.15 (м, 3Н); 7.33 (м, 1H); 7.45-8.1 (м, 11H); 8.34-9.37 (м, 3Н); 10.83 (м, 1H).

Масс-спектрометрия (FAB), м/е 486 (М+Н)⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Симметричная защита 3.5 мк С 18 100А, I мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 60% ACN в 15 мин, затем от 60 до 100% ACN в 3 мин), tr=10.00 мин, 99%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 47 H-Aib-D-Trp-g-D-2-Nal-формил

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.22 и 1.43 (2 м, 6Н, 2 СН₃ (Aib)); 2.85-3.3 (м, 4Н, 2 (СН₂)_β); 4.64 (м, 1Н, СН_α); 5.37 и 5.72 (2 м, 1H, СН_α'); 6.97-7.13 (м, 3Н); 7.32 (м, 1Н); 7.44-7.54 (м, 3Н); 7.66 (д, 1H); 7.78 (м, 1H); 7.86-8.02 (м, 7Н); 8.33-9.4 (м, 2Н); 10.82(м, 1H, N'H).)

Масс-спектрометрия (FAB), м/е 486 [M+H]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta pak 5 мк С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: H₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до100% ACN в 25 мин), tr=9.00 мин, 99%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 48 H-Aib-(D)-Trp-(D)-3(R/S)-gDht-формил

C₂₆H₃₂N₆O₃, 476 г.моль^-1.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.12 (с, 3Н, СН₃(Aib)); 1.32 (с, 3Н, СН₃(Aib)); 1.73 (м, 1H, СН₂); 2.01 (м, 1H, СН₂); 2.9 (м, 1H); 3.03 (м, 1Н); 3.13(м, 2Н); 3.54(м, 1H); 4.47 (м, 1H, СН_α); 5.10 и 5.52 (2 м, 1H, СН_α'); 6.71-8.83 (м, 16Н, 5Н (Trp). 4Н (Dht), 3 NH (амиды), NH и NH₂ (амины), формил); 10.7 (м, 1H, N¹H).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 477.46 [М+Н]⁺ 499.42 [M+Na]⁺; 953.51 [2М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 50 мин), tr=9.40 мин, 98%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 49 H-Aib-(D)-3(R/S)-Dht-(D)-gTrp-формил

C₂₆H₃₂N₆O₃, 476 г.моль^-1

ЯМР ¹H (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.58 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.85 (м, 1Н, СН₂); 2.2 (м, 1Н, СН₂,); 3.1 (д, 2Н); 3.35 (м, 2Н); 3.56 (м, 1Н); 3.7 (м, 1Н); 4.5 (м, 1H, СН_α); 5.33 и 5.71 (2 м, 1H, CH_α'); 6.88-8.91 (м, 16Н, 5Н (Trp). 4H (Dht), 3 NH (амиды), NH и NH₂ 10 (амины), формил); 10.92 и 10.97 (2c, 1H, N'H).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 477.33 [M+I]⁺; 499.42 [M+Na]⁺ 953.51 [2М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С18 100A, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в SO мин), tr=10.35 мм, 98%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 50 N(Me)-Aib-(D)-Trp-(D)-3(R/S)-gDht-ацетил

С₂₈Н₃₆N₆О₃, 504 г.моль^-1.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.42 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.63 (с, 3Н, СН₃(Aib)); 2.72 (м, 3Н, ацетил); 2.4 (м, 2Н, СН₂); 2.5 (м, 3Н, NCH₃); 3.2-3.5 (м, 4H); 3.85 (м, 1H); 4.85 (м, 1H, СН_α); 5.76 (м, 1H, СН_α'); 7.04-8.86 (м, 14Н, 5Н (Trp), 4H (Dht), 3 NH (амиды), 2 NH (амины)); 11.02 (2с, 1H, N¹Н).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 505,31 [М+Н]⁺; 527,70 [M+Na]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С18 100A, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: H₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 50 мин), tr=10.20 мин, 98%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 51 N(Me)-Aib-(D)-3(R/S)-Dht-(D)-gTrp-ацетил

C₂₈H₃₆N₆O₃, 504 г.моль^-1.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.58 (с, 6Н, 2 СН₃(Aib)); 1.81 (м, 3Н, ацетил); 1.98 (м, 1H, СН₂); 2.24 (м, 1H, СН₃); 2.54 (м, 3Н, NCH₃); 3.08 (д, 2Н); 3.31 (м, 2Н); 3.4 (м, 1H); 3.59 (м, 1H); 3.71 (м, 1H); 4.52 (м, 1H, СН_α'); 5.61 (м, 1H, СН_α'); 6.9-8.92 (м, 14Н, 5Н (Tip), 4H (Dht), 3 NH (амиды), 2 NH (амины)); 10.88 (с, 1Н, N¹H).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 505.43 [M+H]⁺; 527.52 [M+Na]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С18 100A, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до100% ACN в 50 мин), tr=11 мин, 98%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 52 N(Me)₂-Aib-(D)-Trp-(D)-gTrp-формил

С₂₈Н₃₆N₆О₃, 502 г.моль^-1.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.2 (с, 3Н, CH₃(Aib)); 1.39 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 2.29 (м, 3Н, NCH₃); 2.99-3.33 (м, 4H, 2 (CH₂)_β); 4.68 (м, 1Н, СН)_α); 5.3 и 5.69 (м, 1Н, СН)_α'); 6.97-7.72 (м, 10Н, 2 индола); 7.97 (2с, 1Н, формил); 8.2-9.47 (м, 3Н, 3 NH (амиды)); 10.85 (м, 2Н, 2 NH (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 503.45 [М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Симметричная защита 3.5 мк С18 100A, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 15 мин), tr=6.63 мин, 99%.

Сушка соединения вымораживанием.

Пример 53 N(Me)₂-Aib-D-Trp-(D)-gTrp-ацетил

С₂₉Н₃₆N₆О₃, 516 г.моль^-1.

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.22 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.4 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.8 (с, 3Н, ацетил); 2.28 (д, 3Н, NCH₃); 2.96-3.22 (м, 4H, 2 (СН₂)_β); 4.7 (м, 1Н, (СН)_α); 5.60 5 (м, 1Н, (СН)_α'); 6.98-7.75 (м, 10Н, 2 индола); 8.2-9.47 (м, 3Н, 3 NH (амиды)); 10.84 (м, 2Н, 2 NH (индолы)).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 517.34 [М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Симметричная защита 3.5 мк С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: H₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до100% ACN в 15 мин), tr=7.07 мм, 99%.

Сушка соединения вымораживанием.

Пример 54 Н-Асс²-(D)-Trp-(D)-gTrp-формил

С₂₆Н₂₈N₆O₃, 472 г.моль^-1

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.11 и 1.5 (2 м, 4H,2 CH₂(Acc³)); 2.91-3.12 (м, 4Н, 2 (СН₂)_β; 4.6 (м, 1Н, СН_α); 5.3 и 5.7 (2 м, 1Н, СН_α'); 6.91-1 М (м, 6Н, индолы); 7.32 0 (м, 2Н, индолы); 7.62-7.72 (м, 2Н, индолы); 7.97 (2с, 1Н, формил); 8.27-8.92 (м, 5Н, 3NH (амиды) и NH₂ (амин)); 10.80-10.90 (4с, 2Н, 2 N¹H).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е-473.22 [М+Н]⁺; 495.15 [M+Na]⁺ 945.47 [2M+H]⁺; 967.32 [2M+Na]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С18 100A, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% 5 TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 50 мин), tr=14.20 мин, 98%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 55 Н-Асс⁵-(D)-Trp-(D)-Trp-формил

C₂₆H₂₈N₆O₃, 472 г.моль^-1.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.51 и 2.31 (м, 8Н, 4 СН₂ (Асе⁵)); 2.97-3.18 (м, 0 4Н, 2 (СН₂)_β; 4.64 (м, 1Н, СН_α); 5.31 и 5.69 (2 м, 1Н, СН_α'); 6.96-7.34 (м, 8Н, индолы); 7.62-7.74 (м, 2Н, индолы); 7.96 (м, 3Н, формил и NH₂ (амин)); 8.48-8.96 (м, 3Н, 3 NH (амиды); 10.80-10.90 (4s, 2H, 2 N¹H).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 501.31 [М+Н]⁺; 523.42 [М-Na]⁺; 101.37 [2M+H]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5μ С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 50 мин), tr=15.35 мин, 98%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 56 Н-Асс⁶-(D)-Trp-(D)-Trp-формил

С₂₆Н₂₈N₆О₃, 472 г.моль^-1

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 1.29-1.57 (м, 8Н, 4 СН₂ (Асс⁶)); 1.89 и 2.04 (2 м, 2Н, СН₂(Асс⁶)); 2.95-3.17 (м, 4Н, 2 (CH₂)_β; 4.61 (м, 1Н, СН_α); 5.3 и 5.68 (2 м, 1Н, СН_α'); 6.95-7.21 (м, 6Н, индолы); 7.32 (м, 2Н, индолы); 7.6 (м, 2Н, индолы); 7.74 (м, 2Н, индолы); 7.96 (м, 3Н, формил и NH₂ (амин)); 8.18-8.67 (м, 5Н, 3 NH (амиды)); 10.77-10.89 (4s, 2H, 2N¹H).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 515.11 [М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5 мк С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: H₂O/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 50 мин), tr=15.9 мин, 97%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 57 H-Dpg-(D)-Trp-(D)-gTrp-формил

C₂₆H₂₈N₆O₃, 530 г.моль^-1

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 0 (м, 1Н, Dpg); 0.40 (м, 3Н, Dpg); 0.70 (м, 4Н, Dpg); 1.01-1.51 (м, 5Н, Dpg); 1.76 (м, 1Н, Dpg); 2.82-2.95 (м. 4Н, 2 (СН₂)_β; 4.59 (м, 1Н, СН_α); 5.3 и 5.54 (2 м, 1Н, СН_α'); 6.81-7.09 (м, 6Н, индолы); 7.19 (м, 2Н, индолы); 7.48 (м, 1Н, индолы); 7.6-7.68 (м, 5Н, 1Н (индолы), формил и NH₂ (амин); 7.83-8.82 (м, 3Н, 3 NH (амиды)); 1 0,69 и 1 0.76 (2 м, 2Н, 2N¹H).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 531.24 [М+Н]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Delta Pak 5μ С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% TFA градиент от 0 до100% ACN в 50 мм), tr=15.35 мм, 98%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 58 H-Aib-(D)-Trp-(D)-gTrp-C(O)NHCH₂CH₃

С₂₆Н₂₅Н₇O₃, 530 г.моль^-1

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶): δ 0.94 (т, 3Н, NHCH₂CH₃); 1.01 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.08 (с, 3Н, СН₃ (Aib)); 1.8 (sl, 2Н, NH₂); 2.95-3.15 (м, 6Н, 2 (СН₂)_β и NHCH₂CH₃); 4.43 (м, 1Н, СН_α); 5.39 (м, 1Н, СН_α'); 6.02 (м, 1Н); 6.22 (м, 1Н); 6.9-7.56 (м, 10Н, индолы); 8 (м, 1Н); 8.31 (м, 1Н); 10,77 и 10.79 (2s, 2H, 2N¹Н).

Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 518.4 [М+Н]⁺; 540.3 [M+Na]⁺.

Аналитическая ВЭЖХ (Симметричная защита 3.5 мк С 18 100А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент: Н₂О/ACN 0.1% TFA, градиент от 0 до 100% ACN в 15 мин), tr=7.12 мин, 99%. Сушка соединения вымораживанием.

Пример 59 N-Me-Aib-(D)-Trp-(D)-gTrp-C(O)NHCH₂CH₃

Пример 60 Н-Aib-(R)-Ме-Trp-(D)-gTrp-формил

Пример 61 Н-Aib-(D)-Trp-(R)-Ме-gTrp-формил

Пример 62 Н-Ме-Aib-(D)-Trp-(R)-Ме-gTrp-ацетил

Пример 63 ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ ПО ВЫСВОБОЖДЕНИЮ ГОРМОНА РОСТА НОВЫМИ СРЕДСТВАМИ, УСИЛИВАЮЩИМИ СЕКРЕЦИЮ ГОРМОНА РОСТА, У НОВОРОЖДЕННЫХ КРЫС

Животные

Для опытов используют крыс, самцов, в возрасте 10-дней Sprague Dawley, вес тела около 25 г.

Для опытов используют пятидневных щенков, содержащихся в следующих контролируемых условиях (22±2°С, 65% влажность и искусственный свет от 06.00 до 20.00 часов). Стандартная сухая диета и вода были доступны как добавка к материнскому кормлению.

Эксперимент

За час до эксперимента щенков отделяют от их матерей и хаотично делят на группы по восемь щенков в каждой группе.

Щенкам быстро вводят подкожно 100 мкл растворителя (DMSO, окончательное разбавление 1:300 в физиологическом растворе), гесарелин (Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH₂, используемый как контроль) или новые соединения (300 μг/кг) и убивают декапитацией 15 мин позже.

Артериальную кровь собирают и немедленно центрифугируют. Образцы плазмы хранят при -20°С до проведения опытов по определению в плазме концентраций GH.

Концентрации гормона роста в плазме измеряют с помощью RIA, используя материалы, поставляемые National Institute of Diabetes, Digestive и Kidney Diseases (NIDDK) of the National Institute of Health U.S.A.

Величины выражают в определениях NIDDK-крыса-GH-RP-2 стандарта (эффективность 21 ед/мг) в виде нг/мл плазмы,

Минимально определяемая величина GH крысы составляет приблизительно 1.0 нг/мл и колеблется внутри эксперимента в пределах приблизительно 6%.

Полученные результаты из нескольких серий испытаний, в которых активность на крысах определялась in vivo, представлены в следующих таблицах с 1 по 10.

Кроме того, была определена зависимость активности от времени при оральном введении у собаки (1 мг/кг; внутрь) по примеру 1 (H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO). Были исследованы хорошо подготовленные гончие собаки любого пола, >10 лет, 10-15 кг веса. Животные питались нормальной сухой едой с водой и были на режиме 12 часов освещение/12 часов темнота, начиная с 7.00. Собакам, которые голодали, начиная с 16.00 часов предшествующего дня, орально вводят соединение. Образцы крови забирают за 20 мин до введения, в процессе введения, и в течение 15, 30, 60, 90, 120 и 180 мин после введения. Результаты приведены в таблице 11.