Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ХЛАМИДИОЗА

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням и дерматовенерологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза, вызванного Chlamydia trachomatis (С. trachomatis).

Известным методом установления эффективности проведенного лечения урогенитального хламидиоза является культуральный метод, но его целесообразно использовать не ранее чем через три недели после окончания курса антибактериальной терапии [1]. В связи со сложностью культивирования хламидий, трудностями строгого выполнения стандартной операционной процедуры (СОП) культурального исследования, чувствительность этого метода варьирует от 33 до 85%, что ведет к получению ложноотрицательных результатов лабораторного исследования, недооценке возможности рецидива инфекции и, как следствие, повышению риска нежелательных побочных явлений [2]. Диагностическая ценность культурального метода снижается при использовании материала от больных с хронической формой инфекции, получавших повторные курсы антибактериальной терапии.

В настоящее время основным известным способом контроля излеченности хламидийной инфекции является метод амплификации нуклеиновых кислот - полимеразная цепная реакция (ПЦР), выполненная не ранее чем через 3 недели после окончания курса противохламидийной терапии [1, 2, 3].

Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ, direct fluorescence assays, DFA) в связи с низкой чувствительностью и специфичностью может использоваться только для диагностики острой инфекции С.trachomatis в том случае, если недоступны методы амплификации нуклеиновых кислот или кулыуральный метод [4].

При оценке эффективности лечения хламидиоза по титру специфических антител в крови так же возможны ложноотрицательные результаты, поскольку антигены хламидий обладают низкой иммуногенностью, вследствие чего антитела вырабатываются в низких титрах, поэтому кровь следует брать в период обострения заболевания, что позволяет обнаружить антихламидийные антитела лишь у 55-65% больных мочеполовым хламидиозом при наличии в 2-5% случаев ложноположительных результатов [5].

Наиболее близким аналогом - прототипом является способ прогнозирования эффективности терапии больных урогенитальным хламидиозом, основанный на определении фагоцитарного индекса (ФИ) нейтрофилов периферической крови до начала лечения и после каждого курса специфической терапии. При выявлении значений фагоцитарного индекса, не достигающих верхней границы нормы, прогнозируют неблагоприятный результат и необходимость дальнейшего специфического лечения. При выявлении значений фагоцитарного индекса, равных или превышающих значения верхней границы диапазона нормальных значений показателя, прогнозируют положительный эффект от проведенного курса терапии [6].

Основным недостатком известного прототипа является то, что он не предназначен для ранней оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза.

Главной задачей, решаемой изобретением, является обеспечение ранней информативной оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза.

Задача решена тем, что у пациента с генерализованной формой хронического урогенитального хламидиоза через 10-14 дней после противохламидийного лечения определяют в реакции фагоцитоза с использованием лейкоконцентрата периферической крови пациента, взвесей штаммов Staphylococcus aureus 209 Р (S. aureus 209 Р) и Escherichia coli 14169 (Е. coli 14169) фагоцитарные индексы нейтрофилов, измеренные через 30 и 120 минут от начала реакции фагоцитоза, затем рассчитывают значения дискриминантных функций по формулам:

F1=-33,2357+6,7958×ФИ1+4,1985×ФИ2+2,1007×ФИ3+1,6368×ФИ4

F2=-41,8411+9,7565×ФИ1+2,9077×ФИ2+3,5976×ФИ3+0,0507×ФИ4, где:

F1 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность отсутствия эффекта лечения хламидиоза,

F2 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность наличия эффекта лечения хламидиоза,

ФИ1 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ2 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ3 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ4 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.,

далее полученные по формулам значения F1 и F2 округляют до второго знака после запятой (до сотых долей) и устанавливают наличие эффекта лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза, если округленное значение F2 больше округленного значения F1, или устанавливают отсутствие эффекта лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза, если округленное значение F1 больше округленного значения F2, или повторно оценивают эффективность лечения урогенитального хламидиоза, если округленное значение F1 равно округленному значению F2.

Если округленное значение F1 равно округленному значению F2, проводят повторную оценку эффективности лечения урогенитального хламидиоза у пациента по заявляемому способу.

Для постановки опыта в стерильную пробирку вносят 0,3 мл лейкоконцентрата, приготовленного из изучаемого образца крови пациента, и добавляют 0,2 мл взвеси тест-культуры в концентрации, составляющей 10 ед. по оптическому стандарту мутности или 0,5 по MacFarland. Для постановки опыта в качестве тест-культур используют штаммы S. aureus 209 Р и Е. coli 14169. Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают и помещают в термостат для инкубации при 37°С. Через 30 минут инкубации готовят два мазка и снова помещают в термостат на инкубацию на 1,5 часа. По истечении указанного времени инкубации готовят еще два мазка. Мазки подписывают, фиксируют этанолом 20 минут и окрашивают по Романовскому-Гимзе. При микроскопии с иммерсионной системой подсчитывают количество клеток микроорганизмов, поглощенных каждым нейтрофилом, - (ФИ - фагоцитарный индекс).

В основу заявляемого изобретения положена обеспечивающая решение поставленной задачи новая совокупность оригинальных отличительных признаков.

Впервые оценка фагоцитарного индекса проводится при одновременном использовании двух штаммов грам-положительных и грам-отрицательных бактерий в сочетании с определением значения классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающего на вероятность отсутствия эффекта лечения хламидиоза, и значения классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающего на вероятность наличия эффекта лечения хламидиоза, у больных с генерализованной формой хронического урогенитального хламидиоза, что позволяет с высокой достоверностью (91,3%) прогнозировать эффект от проведенной терапии у этих больных.

Из патентно-технической литературы и практики обследования больных с хламидиозом неизвестно о способе оценки эффективности лечения урогенитального хламидиоза, который был бы идентичен заявляемому.

Отсюда правомерен вывод о соответствии заявляемого решения критерию «новизна».

Указанная выше совокупность существенных признаков необходима и достаточна для получения технического результата - обеспечения ранней информативной оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза.

Между существующими признаками и решаемой задачей существует причинно-следственная связь, где каждый признак необходим и влияет на получение технического результата, а вместе взятые признаки достаточны для его получения. Правомерен вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ может быть реализован многократно с использованием присущих ему существенных признаков, а, значит, заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость».

Заявляемое изобретение апробировано при обследовании 193 пациентов с генерализованной формой хронического урогенитального хламидиоза после проведенного противохламидийного лечения. Ниже приводятся результаты этой апробации.

Пример 1. Пациентка К., 47 лет с диагнозом хронический урогенитальный хламидиоз, генерализованная форма (хронический цервицит, сальпингоофорит, артрит), в мазках периферической крови и в лейкоконцентрате венозной крови обнаружены хламидии.

Для ранней оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза у пациентки через 10 дней после противохламидийного лечения определили в реакции фагоцитоза с использованием лейкоконцентрата периферической крови пациентки, взвесей штаммов S. aureus 209 Р и E. coli 14169 фагоцитарные индексы нейтрофилов, измеренные через 30 и 120 минут от начала реакции фагоцитоза, которые составили:

ФИ1 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,7 ед.;

ФИ2 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 5,5 ед.;

ФИ3 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,6 ед.;

ФИ4 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 5,2 ед.

Затем рассчитали значения дискриминантных функций по формулам:

F1=-33,2357+6,7958×ФИ1+4,1985×ФИ2+2,1007×ФИ3+1,6368×ФИ4

F2=-41,8411+9,7565×ФИ1+2,9077×ФИ2+3,5976×ФИ3+0,0507×ФИ4,

где:

F1 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность отсутствия эффекта лечения хламидиоза,

F2 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность наличия эффекта лечения хламидиоза,

ФИ1 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ2 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ3 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ4 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.

Далее полученные по формулам значения F1 и F2 округлили до второго знака после запятой (до сотых долей).

Данные округленные значения составили: для F1 - 48,87, для F2 - 50,17.

В связи с тем, что округленное значение F2 было больше округленного значения F1, установили наличие эффекта лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза.

На основании того, что при последующем трехкратном контроле эффективности противохламидийного лечения, проведенном через четыре недели после его окончания, были получены отрицательные результаты ПНР на С.trachomatis, установлено обеспечение ранней информативной оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза при использовании заявляемого способа.

Пример 2. Пациентка М., 37 лет с диагнозом хронический урогенитальный хламидиоз, генерализованная форма (хронический цервицит, цистит, подострый тиреоидит), в мазках периферической крови и в лейкоконцентрате венозной крови обнаружены хламидии.

Для ранней оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза у пациентки через 10 дней после противохламидийного лечения определили в реакции фагоцитоза с использованием лейкоконцентрата периферической крови пациентки, взвесей штаммов S. aureus 209 Р и E. coli 14169 фагоцитарные индексы нейтрофилов, измеренные через 30 и 120 минут от начала реакции фагоцитоза, которые составили:

ФИ1 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,3 ед.;

ФИ2 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 5,2 ед.;

ФИ3 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,0 ед.;

ФИ4 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 4,8 ед.

Затем рассчитали значения дискриминантных функций по формулам:

F1=-33,2357+6,7958×ФИ1+4,1985×ФИ2+2,1007×ФИ3+1,6368×ФИ4

F2=-41,8411+9,7565×ФИ1+2,9077×ФИ2+3,5976×ФИ3+0,0507×ФИ4,

где:

F1 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность отсутствия эффекта лечения хламидиоза,

F2 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность наличия эффекта лечения хламидиоза,

ФИ1 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ2 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ3 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ4 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.

Далее полученные по формулам значения F1 и F2 округлили до второго знака после запятой (до сотых долей).

Данные округленные значения составили: для F1 - 42,97, для F2 - 43,22.

В связи с тем, что округленное значение F2 было больше округленного значения F1, установили наличие эффекта лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза.

На основании того, что при последующем трехкратном контроле эффективности противохламидийного лечения, проведенном через четыре недели после его окончания, были получены отрицательные результаты ПЦР на С. trachomatis, установлено обеспечение ранней информативной оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза при использовании заявляемого способа.

Пример 3. Пациентка Ш., возраст 22 года, хронический урогенитальный хламидиоз, генерализованная форма (хронический цервицит, сальпингоофорит, пиелонефрит), в мазках периферической крови и в лейкоконцентрате венозной крови обнаружены хламидии.

Для ранней оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза у пациентки через 10 дней после противохламидийного лечения определили в реакции фагоцитоза с использованием лейкоконцентрата периферической крови пациентки, взвесей штаммов S. aureus 209 Р и E. coli 14169 фагоцитарные индексы нейтрофилов, измеренные через 30 и 120 минут от начала реакции фагоцитоза, которые составили:

ФИ1 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,2 ед.;

ФИ2 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 5,3 ед.;

ФИ3 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 4,2 ед.;

ФИ4 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 4,1 ед.

Затем рассчитали значения дискриминантных функций по формулам:

F1=-33,2357+6,7958×ФИ1+4,1985×ФИ2+2,1007×ФИ3+1,6368×ФИ4

F2=-41,8411+9,7565×ФИ1+2,9077×ФИ2+3,5976×ФИ3+0,0507×ФИ4,

где:

F1 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность отсутствия эффекта лечения хламидиоза,

F2 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность наличия эффекта лечения хламидиоза,

ФИ1 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ2 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ3 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ4 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.

Далее полученные по формулам значения F1 и F2 округлили до второго знака после запятой (до сотых долей).

Данные округленные значения составили: для F1 - 39,88, для F2 - 39,62.

В связи с тем, что округленное значение F1 было больше округленного значения F2, установили отсутствие эффекта лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза.

На основании того, что при последующем контроле эффективности противохламидийного лечения, проведенном через четыре недели после его окончания, были получены положительные результаты ПНР на С. trachomatis, установлено обеспечение ранней информативной оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза при использовании заявляемого способа.

Пример 4. Пациентка Г., возраст 26 лет, хронический урогенитальный хламидиоз, генерализованная форма (хронический цервицит, сальпингоофорит, пиелонефрит), в мазках периферической крови и в лейкоконцентрате венозной крови обнаружены хламидии.

Для ранней оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза у пациентки через 10 дней после противохламидийного лечения определили в реакции фагоцитоза с использованием лейкоконцентрата периферической крови пациентки, взвесей штаммов S. aureus 209 Р и Е. coli 14169 фагоцитарные индексы нейтрофилов, измеренные через 30 и 120 минут от начала реакции фагоцитоза, которые составили:

ФИ1 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,2 ед.;

ФИ2 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 5,1 ед.;

ФИ3 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 4,1 ед.;

ФИ4 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 4,0 ед.

Затем рассчитали значения дискриминантных функций по формулам:

F1=-33,2357+6,7958×ФИ1+4,1985×ФИ2+2,1007×ФИ3+1,6368×ФИ4

F2=-41,8411+9,7565×ФИ1+2,9077×ФИ2+3,5976×ФИ3+0,0507×ФИ4,

где:

F1 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность отсутствия эффекта лечения хламидиоза,

F2 - значение классификационной линейной функции дискриминантного анализа, указывающее на вероятность наличия эффекта лечения хламидиоза,

ФИ1 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ2 - фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ3 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации, ед.,

ФИ4 - фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации, ед.

Далее полученные по формулам значения F1 и F2 округлили до второго знака после запятой (до сотых долей).

Данные округленные значения составили: для F1 - 38,67, для F2 - 38,67.

В связи с тем, что округленное значение F1 было равно округленному значению F2, повторно провели оценку эффективности лечения урогенитального хламидиоза через неделю.

Повторно измеренные фагоцитарные индексы нейтрофилов, измеренные через 30 и 120 минут от начала реакции фагоцитоза, составили:

ФИ1 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,3 ед.;

ФИ2 (фагоцитарный индекс со S. aureus 209 Р, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 5,2 ед.;

ФИ3 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 30 минут от начала инкубации) - 5,0 ед.;

ФИ4 (фагоцитарный индекс с Е. coli 14169, измеренный через 120 минут от начала инкубации) - 4,8 ед.

Рассчитанные и округленные значения дискриминантных функций составили: для F1 - 42,97, для F2 - 43,22.

В связи с тем, что округленное значение F2 было больше округленного значения F1, установили наличие эффекта лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза.

Список литературы

1. Дмитриев, Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций / Г.А. Дмитриев. - М.: Медицинская книга; Н. Новгород: Изд-во НГМА, 2003. - 336 с.

2. Караулов, А.В. Хламидийная инфекция. Новые аспекты патогенеза, иммунологии, верификации и лечения инфекции у человека и приматов / А.В. Караулов, С.С. Афанасьев, В.А. Алешкин, Б.А. Лапин, Е.А. Воропаева, М.С. Афанасьев, В.В. Слободенюк, А.В. Алешкин, А.Л. Байракова, О.Г. Гречишникова, И.А. Дятлов, X.М. Галимзянов, И.В. Евстигнеева, Э.К. Джикидзе, О.В. Рубальский, Ю.В. Несвижский, А.Ю. Миронов, О.Г. Фотиади, Л.И. Кафарская, О.М. Кострова, А.П. Топтыгина, Н.С. Матвеевская, Д.С. Афанасьев, Е.О. Рубальский, Э.А. Светоч, С.Ю. Пчелинцев, О.В. Логунов, Л.И. Новикова, В.Ф. Ликов. - М.: Изд-во Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, 2012. - 256 с.

3. Башмакова, М.А. Лабораторная диагностика генитальных инфекций / М.А. Башмакова, А.М. Савичева // Проблемы репродукции. - 2000. - Т. 6, №1. - С. 20-24.

4. Lanjouw, Е. 2015 European guideline on the management of Chlamydia trachomatis infections / E. Lanjouw, S. Ouburg, H.J. de Vries, A. Stary, K. Radcliffe, M. Unemo // International journal of STD & AIDS. - 2016. V. 27, №5. - P. 333-48. - doi: 10.1177/0956462415618837.

5. Лобзин, Ю.В. Хламидийные инфекции / Ю.В. Лобзин, Ю.И. Ляшенко, А.Л. Позняк. - СПб.: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2003. - 400 с.

6. Левчик, Н.К. Пат. 2134881 Рос. Федерация, МПК G01N 33/48. Способ прогнозирования эффективности терапии больных урогенитальным хламидиозом / Н.К. Левчик, О.В. Павловская, В.В. Базарный, С.В. Батыршина; заявитель и патентообладатель Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии. - №2134881; заявл. 09.11.1997; опубл. 20.08.1999.