×
15.03.2019
219.016.e0f3

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ SAUSSUREA ORGAADAYI V. KHAN. ET KRASNOB

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
№ охранного документа
0002428472
Дата охранного документа
10.09.2011
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к культивированию клеточных культур лекарственных растений. Питательная среда содержит KNO, NHNO, СаСl6НО, MgSO7HO, KHPO, FeSO7HO, NаЭДТА2НО, НВО, MnSO4HO, ZnSO7HO, KI, NaMoO2HO, CuSO5HO, CoCl6HO, никотиновую кислоту, тиамин, пиридоксин, 2,4-Д, БАП, сахарозу, агар-агар и воду при заданных соотношениях компонентов. Изобретение позволяет культивировать клеточную культуру SAUSSUREA ORGAADAYI V. KHAN. ET KRASNOB.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к культивированию клеточных культур лекарственных растений. Область применения - фармацевтическая промышленность, получение нового вида сырья в качестве источника биологически активных веществ (БАВ) растительного происхождения.

В доступных отечественных и зарубежных источниках не заявлена питательная среда для получения и культивирования Saussurea orgaadayi (сем. Asteraceae).

Известны опубликованные работы зарубежных авторов по исследованию и культивированию других видов рода Saussurea.

Виды рода Saussurea обладают широким спектром фармакологической активности и применяются в народной медицине в качестве антибактериальных, гемостатических, общеукрепляющих средств, оказывают противовоспалительное, жаропонижающее и др. действия. Saussurea orgaadayi в отличие от других видов этого рода является также очень редким, ограниченным своим местообитанием эндемиком, и введение данного вида в культуру in vitro может стать перспективной возможностью решения этой проблемы.

Известна питательная среда для выращивания Saussurea medusa. В работе авторы (Chun-Xiang Fu. Cellular aggregate size as the critical factor for flavanoid production by suspension cultures of Saussurea medusa / Chun-xiang Fu, De-Xio Zhao, Yan Huang, Feng-Snan Ma // Biotechnology Letters. 2005. C.91-95.) культивировали каллусную культуру S.medusa на среде MS (Мурасиге и Скуга), содержащей глюкозу (10 г/л), миоинозитол (100 мг/л), НУК (2 мг/л), 6-бензиладенин (0,5 мг/л), в условиях освещения (60 µmol m-2s-1) при 25±2°C в течение 9 дней.

Недостатками питательной среды для культивирования клеточной культуры Saussurea medusa является использование, кроме регуляторов роста, дополнительных компонентов, таких как глюкоза и миоинозитол, а в качестве одного из гормонов роста используют синтетический аналог ауксина (НУК) в высоких концентрациях (до 2 мг/л), что делает питательную среду экономично невыгодной.

Известна питательная среда для выращивания Saussurea obvallata. В работе авторы (Uppeandra Dhar. Efficient plant regeneration protocol through callus for Saussurea obvallata (DC.) Edgew. (Asteraceae): effect of explant type, age and plant growth regulators / Uppeandra Dhar, Mitali Joshi // Plant Cell Rep (2005) 24:195-200) получили каллусную культуру S.obvallata на среде MS, содержащей бензиладенин (2,5 µМ) в комбинации с НУК (1,0 µM) в течение 30 дней.

Недостатками питательной среды для культивирования клеточной культуры Saussurea obvallata является то, что в качестве гормонов роста используют высокие концентрации бензиладенина (до 2,5 мг/л).

Известна питательная среда для выращивания Saussurea involucrate, выбранная в качестве прототипа. В работе авторы (Jing Ming JIA. Antiinflammatory and Analgesic Activities of the Tissue Culture of Saussurea involucrate // Jing Ming JIA, Chun Fu WU, Wen LIU, Hai YU, Yue HAO, Jian Hua ZHENG, and Yu Rong JI // Biol. Pharm. Bull. (2005) 28(9):1612-1614) получили каллусную культуру S.involucrate от стеблевых и листовых эксплантов на среде MS, содержащей НУК (2,0 мг/л), 6-бензиламинопурин (0,5 мг/л) в условиях 12-часового освещения (58,4 µmol m-2s-1) при 24±1°C в течение 4-х недель.

Недостатком питательной среды для культивирования клеточной культуры Saussurea involucrate является то, что в качестве одного из гормонов роста используют синтетический аналог ауксина (НУК) в высоких концентрациях (до 2 мг/л).

Недостатком известных аналогов является их направленность на культивирование видов растений рода Saussurea, отличных от изучаемого: Saussurea orgaadayi, который был впервые введен в клеточную культуру на заявленной питательной среде.

Задачей настоящего изобретения является разработка качественного и количественного состава питательной среды для получения клеточной культуры Saussurea orgaadayi Khan. Et Krasnob. Поставленная задача решается тем, что питательная среда для культивирования каллусной культуры Saussurea orgaadayi Khan. Et Krasnob. характеризуется тем, что она содержит компоненты в следующем количественном соотношении, мг/л:

KNO3 - 1900

NH4NO3 - 1650

CaCl26H2O - 440

MgSO47H2O - 370

2РО4 - 170

FeSO47H2O - 27,8

Na2ЭДTA2H2O - 37,3

H3BO3 - 6,2

MnSO44H2O - 22,3

ZnSO47H2O - 8,6

KI - 0,83

Na2MoO42H2O - 0,25

CuSO45H2O - 0,025

CoCl26H2O - 0,025

Никотиновая кислота - 0,50-0,10

Тиамин - 0,50-0,10

Пиридоксин - 0,50-0,10

2,4-Д - 0,5-1,0

БАП - 0,2-0,8

Сахароза - 30000

Агар-агар - 0,1-6700

Вода - до 1 л.

Для приготовления питательной среды готовят концентрат макросолей, при этом каждая из макросолей растворяется последовательно в небольшом количестве воды, а затем объем доводится до 1 л. Аналогично готовятся концентраты микросолей, хелата железа, витаминов. Макро- и микросоли, хелат железа, витамины в виде концентратов смешивают в небольшом количестве воды. Затем к полученной смеси добавляют 2,4-Д, БАП, сахарозу и агар и все тщательно перемешивают. Раствор доводят дистиллированной водой до 1 л. Все сосуды с питательными средами закрывают фольгой и стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при 1,0 атм. Чашки Петри, сосуды для культивирования, скальпель, пинцет стерилизуют в сухожаровом шкафу при 160°C. Питательные среды после из стерилизации помещают в сосуды для культивирования клеточной культуры в стерильных условиях ламинарного бокса. Клеточную культуру высаживают в возрасте 30 суток. Культивирование каллусной культуры проводится при 25-27°C и 70%-ной влажности воздуха в условиях непрерывной темноты.

Ниже представлен пример осуществления изобретения.

Пример

Для приготовления питательной среды готовят концентрат макросолей (KNO3 - 1900 мг/л, NH4NO3 - 1650 мг/л, MgSO47H2O - 370 мг/л, KH2PO4 - 170 мг/л), при этом каждая из макросолей растворяется последовательно в небольшом количестве воды, а затем объем доводится до 1 л. Аналогично готовятся концентраты микросолей (Н3ВО3 - 6,2 мг/л, MnSO44H2O - 22,3 мг/л, ZnSO47H2O - 8,6 мг/л, KI - 0,83 мг/л, Na2MoO42H2O - 0,25 мг/л, CuSO45H2O - 0,025 мг/л, CoCl26H2O - 0,025 мг/л), хелата железа (FeSO47H2O - 27,8 мг/л, Na2ЭДTA2H2O - 37,3 мг/л), CaCl2 (CaCl26H2O - 440 мг/л), витаминов (никотиновая кислота - 0,50 мг/л, тиамин - 0,50 мг/л, пиридоксин - 0,50 мг/л). Макро- и микросоли, хелат железа, витамины в виде концентратов смешивают в небольшом количестве воды. Затем к полученной смеси добавляют БАП (0,5 мг/л) и 2,4-Д (0,8 мг/л), сахарозу (30000 мг/л), агар (6700 мг/л) и все тщательно перемешивают. Раствор доводят дистиллированной водой до 1 л. Все сосуды (колбы) с питательными средами закрывают фольгой и стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при 1,0 атм. Чашки Петри, скальпель, пинцет заворачивают в бумагу, сосуды для культивирования (пробирки, флаконы) закрывают фольгой и стерилизуют в течение 2,5 ч в сухожаровом шкафу при 160°C. Затем стерильную питательную среду в условиях ламинарного бокса размещают по культуральным сосудам в условиях ламинарного бокса. Культивирование каллусной культуры проводится при 25-27°C и 70%-ной влажности воздуха в условиях непрерывной темноты. Для сбора биомассы и дальнейшего субкультивирования используется культура 30 суток.

В настоящем изобретении для получения и культивирования клеточной культуры Saussurea orgaadayi Khan. Et Krasnob. применяют среду Мурасиге-Скуга (МС), модифицированную добавлением гормонов роста: 2,4-Д (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота) и БАП (6-бензиламинопурин). Преимущества такого сочетания компонентов в питательной среде таковы, что в качестве оного из гормонов роста - ауксина - используется его синтетический аналог 2,4-Д, который является наиболее сильным по сравнению с другими часто используемыми аналогами (ИУК, НУК), что позволяет добавлять его в довольно небольших количествах. Второй применяемый гормон роста (БАП) также берется в низких концентрациях, что в целом делает питательную среду экономично более выгодной. Именно такой качественный и количественный состав позволил впервые успешно получить и культивировать клеточную культуру Saussurea orgaadayi.

Питательная среда для культивирования каллусной культуры Saussurea orgaadayi V Khan. Et Krasnob., имеющая следующее соотношение компонентов, мг/л:
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-6 из 6.
01.03.2019
№219.016.cde4

Способ получения сорбента для экстракции антиоксидантов

Изобретение относится к способам получения сорбентов на основе комплекса переходных металлов. Способ получения сорбента для экстракции антиоксидантов включает обработку кремнеземного пористого носителя, содержащего на поверхности гидроксильные группы, водным раствором хлорида меди, упаривание,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002415705
Дата охранного документа: 10.04.2011
01.03.2019
№219.016.cf3a

Способ получения витаминной части растительного сырья

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Получают витамины группы K из зеленого чая экстрагированием при последовательном добавлении к сырью изопропанола и бидистиллированной воды в ультразвуковой ванне. Осуществляют поочередное пропускание полученных экстрактов через...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002402369
Дата охранного документа: 27.10.2010
29.05.2019
№219.017.672e

Способ лечения отморожений по принципу свч-нагрева

Изобретение относится к медицине, а именно к физиотерапии. Способ включает подведение к отмороженной конечности СВЧ-излучения с нескольких сторон. Воздействие осуществляют мощностью от 15 до 30 Вт, Продолжительность воздействия устанавливают в пределах 20-30 мин. Способ обеспечивает оптимальный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002360713
Дата охранного документа: 10.07.2009
29.05.2019
№219.017.67f9

Способ получения сложных эфиров из отходов производства капролактама

Изобретение относится к области синтеза сложных эфиров из спиртовой фракции капролактама. Способ получения сложных эфиров из отходов производства капролактама осуществляется путем реакции этерификации органической кислоты и спирта в условиях автокаталитического выделения тепла, поддерживающего...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002422434
Дата охранного документа: 27.06.2011
10.07.2019
№219.017.accf

Огнезащитная краска для древесины

Огнезащитная краска для древесины от возгорания и распространения пламени включает в качестве связующего водную дисперсию поливинилацетата, неионогенное поверхностно-активное вещество, консервант, в качестве пигмента двуокись титана, в качестве наполнителей природные силикаты диопсида и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002313549
Дата охранного документа: 27.12.2007
10.07.2019
№219.017.ae50

Огнезащитный пропиточный состав для древесины и способ его получения

Изобретение относится к составам для защиты древесины от возгорания. Описан огнезащитный состав для древесины на основе водного раствора ортофосфорной кислоты и карбамида, кроме того, состав дополнительно содержит пленкообразующий спиртовой раствор тетраэтоксисилана с ультрадисперсным порошком...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002307736
Дата охранного документа: 10.10.2007
Показаны записи 1-3 из 3.
27.06.2013
№216.012.4ec5

Способ выращивания мицелия grifola frondosa

Изобретение относится к области биотехнологии и сельскохозяйственному производству, в частности к грибоводству. Способ включает приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде в присутствии стимулятора роста, в качестве которого используют селективный свет с длиной волны...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485758
Дата охранного документа: 27.06.2013
24.05.2019
№219.017.60b7

Способ регуляции транскрипции хлоропластных генов ячменя (hordeum vulgare)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве в области растениеводства на открытом грунте и в сооружениях защищенного грунта. Сущность изобретения состоит в активации прорастания семян ячменя и стимуляции транскрипции 12 хлоропластных генов растений путем...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002460279
Дата охранного документа: 10.09.2012
29.06.2019
№219.017.9d4a

Способ культивирования in vitro клеточной культуры трансгенного табака nicotiana tabacum l., содержащего ген интерлейкина-18 человека

Изобретение может быть использовано в фармакологии для выращивания биомассы клеточной культуры трансгенного табака Nicotiana tabacum L., содержащего ген интерлейкина-18 человека, а также в исследовательских целях. Семена трансгенных растений Nicotiana tabacum L. стерилизуют, переносят на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002354692
Дата охранного документа: 10.05.2009
+ добавить свой РИД