Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НОВОКАИНА, ЛИДОКАИНА В МОЧЕ

Изобретение относится к области аналитической химии и клинической диагностики. Оно может быть использовано для определения местных анестетиков (новокаина и лидокаина) в моче пациентов при назначении данных препаратов.

Известен способ количественного определения наркотических и лекарственных веществ в экстрактах мочи (Дикунец М.А., Апполонова С.А., Родченков Г.М. // ЖАХ. 2009. Т.64, №8. С.854-864; патент РФ №2384846, G01N 33/493, 2010; заявка РФ №2008122386, G01N 3/50, 2009). Способ включает экстракцию наркотических и лекарственных веществ из физиологической жидкости, упаривание органического экстракта в токе азота, растворение сухого остатка в метаноле и анализ полученного раствора методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС). Недостатками данного способа являются использование токсичных органических растворителей; длительность и сложность анализа; дорогостоящая приборная база.

Заявляемое изобретение предназначено для прямого количественного in situ определения новокаина и лидокаина в моче.

Технический результат - снижение времени анализа; простота анализа; автоматизация анализа; возможность in situ анализа; исключение из анализа токсичных реактивов.

Технический результат достигается тем, что способ определения новокаина и лидокаина в моче включает последовательное вымораживание при температуре 0÷-4°С в течение часа, фильтрование через стекловолокно и центрифугирование при 3000 g в течение 15 минут образца мочи, полученного от пациента, разбавление полученного супернатанта водой в объемном соотношении 1:25, измерение с помощью сенсора в полученном тест-растворе мочи потенциала относительно электрода сравнения и определение по градуировочному графику концентрации новокаина и лидокаина в моче.

На фигуре 1 представлена блок-схема способа определения новокаина и лидокаина в моче; на фигуре 2 - фактические и определенные значения концентраций новокаина (NovHCl) в моче; на фигуре 3 - метрологические характеристики способа определения NovHCl в моче.

Способ может быть реализован с помощью следующей установки.

Конструкция установки включает биомедицинский холодильник с температурным режимом +5…-5°С, колонку для фильтрования, заполненную стекловолокном, центрифугу с ускорением 2000-4000 g, электрохимическую ячейку, состоящую из ПД-сенсора 1, хлоридсеребряного электрода сравнения 2, закрепленных в штативе 3, емкости с тест-раствором 4, высокоомного электронного вольтметра 5, блока управления 6, причем ПД-сенсор 1 и электрод 2 погружены в емкость 4, в которую наливается тест-раствор, и через вольтметр 5 подключены к блоку управления 6. Конструкция ПД-сенсора 1 включает два пластиковых корпуса 7 и 8, в одном из которых установлен электрод сравнения 9, в другом установлена перфторированная сульфокатионитовая полимерная (ПСП) трубка, или мембрана, или стержень 10 в калиевой форме так, что один их конец размещен в корпусе 7, а другой выступает за пределы корпуса 8. Корпус 7 заполнен 1М раствором КС1 (патент РФ №2376591). Блок управления 6 включает персональный компьютер с программным обеспечением для автоматического расчета концентрации новокаина и лидокаина в моче по градуировочному графику.

Способ реализуется следующим образом. Образец мочи последовательно вымораживается в течение 1-го часа при температуре 0÷-4°С (для кристаллизации и выпадения в осадок избытка неорганических солей: хлоридов и сульфатов калия, натрия, аммония), фильтруется через стекловолокно, центрифугируется в течение 15 минут при 3000 g (для снижения концентрации органических метаболитов (белков, сахаров, «кетоновых тел»)). Полученный супернатант разбавляется в мерной колбе водой в объемном соотношении 1:25. Аликвота 5 мл полученного тест-раствора мочи помещается в емкость 4. ПД-сенсор 1 и хлоридсеребряный электрод сравнения 2 опускаются в емкость с тест-раствором мочи 4 и с помощью высокоомного вольтметра 5 определяется ЭДС электрохимической цепи. Значения ЭДС фиксируются через 2-5 минут. Вольтметр 5 подключен к блоку управления 6, включающему персональный компьютер с программным обеспечением, для автоматического расчета концентрации новокаина и лидокаина в моче по градуировочному графику зависимости ЭДС от концентрации новокаина и лидокаина в моче. Рассчитанное значение концентрации выводится на экране компьютера.

ПРИМЕР

Образцы мочи (10 мл), полученные от пациентов, принимающих препараты «Новокаин», последовательно подвергли вымораживанию в течение 1-го часа при температуре 0÷-4°С, фильтрованию через стекловолокно, центрифугированию в течение 15 минут при 3000 g. Полученный супернатант разбавляли в мерной колбе водой в объемном соотношении 1:25. Аликвота 5 мл полученного тест-раствора мочи помещалась в емкость 4. ПД-сенсор 1 и хлоридсеребряный электрод сравнения 2 опускали в емкость с тест-раствором мочи 4 и с помощью высокоомного вольтметра 5 определяли ЭДС электрохимической цепи. Значения ЭДС фиксировали через 2-5 минут. Вольтметр 5 подключали к блоку управления 6, включающему персональный компьютер с программным обеспечением, для автоматического расчета концентрации новокаина в моче по градуировочному графику зависимости ЭДС от концентрации новокаина и лидокаина в моче (градуировочная зависимость является линейной в диапазоне концентраций новокаина 5·10^-5-7,3·10^-2 М с достоверностью аппроксимации 0,98 и позволяет фиксировать изменение концентрации новокаина гидрохлорида на 3·10^-5 М при изменении отклика ПД-сенсора на 10 мВ). Рассчитанное значение концентрации выводилось на экране компьютера.

Предел обнаружения NovHCl в моче с помощью данного способа составил 5·10^-5 М. Проверку правильности определения NovHCl в моче проводили способом «введено-найдено». Относительная погрешность определения NovHCl в моче не превышала 7% (фигура 2). Основные метрологические характеристики способа определения NovHCl в моче представлены в таблице на фигуре 3.