Результат интеллектуальной деятельности: Способ получения биогенного стимулятора для коррекции иммунного статуса сельскохозяйственных животных

Изобретение относится к области ветеринарии и связано с разработкой биогенного симулятора нового вида для коррекции иммунного статуса у животных.

Известен способ получения биогенного стимулятора "Спленивита" из селезенки животных, включающий измельчение пульпы, экстрагирование физиологическим раствором, термическую обработку, отделение осадка, фильтрацию и стерилизацию, причем после измельчения пульпы ее замораживают[ авт. св. N 1695869, кл. А 23 К 1/00].

Также известен способ получения биостимулятора для кормления птицы, предусматривающий введение в основной рацион биостимулятора, приготовленного путем охлаждения при температуре 2-4°С в течение 4-5 суток, разведения водой в пятикратном объеме и отстаивания в течение суток с последующим автоклавированием полученной массы, при этом в качестве биостимулятора используют яичную скорлупу и после обработки вводят ее в рацион в количестве 0,2-0,3 мл на 1 кг живой массы с интервалом 6-7 дней [см. а.с. СССР №150163, кл. А 23 К 1/16].

Недостатком приведенных выше способов является высокая стоимость материалов, сложность и многоступенчатость технологии получения, высокие энергозатраты и себестоимость полученного препарата.

Технической задачей изобретения является создание эффективного чистого и безопасного биостимулятора-иммунокорректора для животных на основе белков малоценного сырья крупного рогатого скота, уменьшение себестоимости и упрощение технологии получения.

Для решения поставленной технической задачи предложен способ получения биогенного стимулятора из семенников КРС, включающий промывание семенников проточной водой, очищение от соединительнотканных и жировых элементов, асептический автолиз при температуре 5-6°С с выдержкой 10 суток, измельчение до 2-3 мм, экстрагирование на водяной бане с добавлением изотонического раствора хлористого натрия при температуре 80-90°С в течении 30-40 минут, центрифугирование при 300 оборотах в минуту, фасовку полученной жидкой фракции в ампулы по 5 мл.

Технический результат изобретения заключается в создании эффективного чистого и безопасного биостимулятора-иммунокорректора для животных на основе белков малоценного сырья крупного рогатого скота, уменьшение себестоимости и упрощение технологии получения.

При промышленном производстве на предприятиях остается большое количество малоценного сырья. Среднегодовой выход семенников КРС на предприятии 0,3% к живой массе животных.

Семенники – мужские половые железы КРС, в них происходит сперматогенез и вырабатываются половые гормоны, такие как тестостерон, небольшое количество женских половых гормонов эстрогенов и прогестинов, а также некоторые андрогены – андростендион и дигидроэпиандростерон.

В семенниках содержится фермент – гиалиронидаза, увеличивающая проникаемость тканей и способствующая ускорению всасывания лекарственных средств. В их химический состав входит: холин, витамины В1, В2, В5, В6, В9, В12, Е, Н и РР, а также необходимые организму минеральные вещества: калий, кальций, магний, цинк, медь, марганец, железо, хлор, серу, йод, хром, фтор, молибден, олово, кобальт, никель, фосфор, натрий.

Бычьи семенники являются поставщиком быстроусвояемого белка. Реализуются в розничную торговлю и ресторанный бизнес.

На фигуре 1 представлена технологическая схема, иллюстрирующая процесс получения биогенного стимулятора.

Способ получения биогенного стимулятора для коррекции иммунного статуса сельскохозяйственных животных осуществляется следующим образом.

Семенники крупного рогатого скота, полученные от здорового животного, прошедшие ветеринарно-санитарную экспертизу согласно требований технологического регламента по заготовке малоценного сырья промывают проточной водой, очищают от соединительнотканных и жировых элементов, выдерживают в асептических условиях при температуре 5-6°С в течении 10 суток, измельчают до 2-3 мм, экстрагирование проводят на водяной бане с добавлением изотонического раствора хлористого натрия при температуре 80-90 °С в течении 30-40 минут, центрифугирование при 300 оборотах в минуту, фасовка жидкой фракции в ампулы по 5 мл.

Эффективность использования биогенного стимулятора для коррекции иммунного статуса сельскохозяйственных животных подтверждается в опытах на белых мышах. Опыты были проведены на белых мышах линии BALB/c массой 18-20г. Биогенный стимулятор животным вводили 2-кратно, подкожно, с интервалом между инъекциями 14 суток, в дозе 0,2 мл. Изучение иммуностимулирующей активности препарата проводили на фоне вакцинации мышей инактивированной вакциной против парвовирусного энтерита собак, (животным опытной группы биогенный стимулятор вводили одновременно с вакциной). В качестве контроля иммуностимулирующей активности были использованы белые мыши, привитые только одной вакциной (контроль №1), а в качестве общего контроля (контроль №2) были использованы интактные животные (не привитые вакциной и не обработанные иммуномодулятором).

Функциональное состояние Т-клеток оценивали в реакции Е-розеткообразования и ее модификации с теофилином. Изучение иммуностимулирующего эффекта мы также проводили методом локального гемолиза по Ерне, который дает возможность определить количество и функциональную активность клеточной кооперации В-лимфоцитов, из которых дифференцируются антителообразующиеся клетки (АОК).

Уровень иммуноглобулинов в плазме крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Уровень антител определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) против парвовируса энтерита собак второго типа (CPV-2). Ранее нами также были проведены исследования сывороток крови мышей, в аналогичных опытах, где наличие специфических антител к парвовирусу собак (CPV) определяли методом непрямого твердофазного ИФА. При постановки ИФА был использован стандартный вариант непрямого ИФА, основанный на взаимодействии специфических антител с антигеном (очищенный CPV-2), иммобилизованным на твердом носителе с последующим выявлением иммунного комплекса с помощью антивидовогоиммунопероксидазногоконъюгата в ферментативной реакции.

Результаты ИФА оценивали с помощью фотометра при длине волны 492 нм по коэффициенту оптического поглощения (OD 492). Титры антител в испытуемых сыворотках определяли как последнее разведение, обеспечивающее окраску, превышающую в 2 раза интенсивность окраски в лунках с контрольной отрицательной сывороткой (сыворотка крови мышей, взятой до иммунизации).

Полученные данные показали, что введение вакцины без биогенного стимулятора вызывало достоверное снижение нейтрофилов (контроль №1-18,5%, контроль №2 - 33,1%) и повышение числа лимфоцитов (контроль №1- 55,6%; контроль №2 - 49,0%). Количество Т-лимфоцитов оставалось практически на том же уровне. Однако увеличение общего числа лимфоцитов произошло за счет повышения количества В-клеток. Это косвенно подтверждается повышением уровня иммуноглобулинов (IgG) почти в два раза по сравнению с контролем №2.

Адъювантные свойства исследуемого препарата изучали в реакции простой и радиальной иммунодиффузии, определяя содержание иммуноглобулинов в плазме крови и суспензиях спленоцитов мышей. Полученные данные показали, что иммуноадъювантный эффект наблюдался при введении биогенного стимулятора в сочетании с вакциной и без нее. Уровень IgG в опытной группе составил 3,7, тогда как в контрольной группе №1-3,2 и контрольной группе № 2 - 1,6.

При определении иммуностимулирующего эффекта методом локального гемолиза по Ерне было установлено, что разница уровней Т-зависимого антителообразования у животных контрольных и опытной групп была статистически достоверна (р<0,01).Индекс стимуляции составил 1,7.

Одновременно мы проводили исследования сывороток крови мышей опытной группы и контрольной группы №1 в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Реакцию ставили для каждой пробы при двойном разведении сывороток в двух вариантах: при первичном разведении 1/2 и 1/3 с целью более точного определения отличий в значениях титров при одинаковом логарифме разведений. В опыте установлено, что у животных контрольной группы №1 (мыши, иммунизированные только вакциной против парвовирусного энтерита собак) на 28 сутки после вакцинации титры специфических антител к парвовирусу собак второго типа составляли в первичном разведении 1/2 -1:512 и вторичном разведении 1/3 - 1:384. У мышей опытной группы, привитых вакциной в сочетании с биогенным стимулятором, эти показатели составляли в первичном разведении 1:1024 и вторичном разведении 1:1536. При исследовании сывороток крови мышей методом непрямого твердофазного ИФА было установлено, что титры антител к CPV-2 в среднем по группе животных, привитых только вакциной, составляли 1:4800 (12,22 log²). Однако, у мышей, вакцинированных в сочетании с биогенным стимулятором, этот показатель составил 1:14080 (13,78 log²).

Способ получения биогенного стимулятора для коррекции иммунного статуса сельскохозяйственных животных поясняется следующим примером.

Пример 1.

Получают биогенный стимулятор согласно технологической схемы, представленной на фиг.1.

Семенники крупного рогатого скота, полученные от здорового животного, прошедшие ветеринарно-санитарную экспертизу согласно требований технологического регламента по заготовке малоценного сырья промывают проточной водой, очищают от соединительнотканных и жировых элементов, выдерживают в асептических условиях при температуре 5-6°С в течении 10 суток, измельчают до 2-3 мм, экстрагирование проводят на водяной бане с добавлением изотонического раствора хлористого натрия при температуре 80-90 °С в течении 30-40 минут, центрифугирование при 300 оборотах в минуту, фасовка жидкой фракции в ампулы по 5 мл.

Предложенный способ получения биогенного стимулятора для коррекции иммунного статуса сельскохозяйственных животных позволяет:

- расширить сырьевую базу для получения высокоактивных биогенных стимуляторов в ветеринарной практике;

- использовать малоценное сырье

- упростить технологическую схему производства

- создать эффективный чистый и безопасный биостимулятор-иммунокорректор.