Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВЫХ ФРАКЦИЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для определения белковых фракций сыворотки крови.

Известен способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови. Сущность способа состоит в следующем: из сыворотки крови пациента получают два контрольных образца №1 и №2, затем в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для контроля биологических жидкостей с постоянно поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, последовательно помещают дистиллированную воду, сыворотку крови и контрольные образцы №1 и №2, пропускают через них ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц, и определяют скорость его прохождения в каждой из сред, относительные изменения скоростей ультразвука в сыворотке крови в первом и втором устройствах при соответствующих температурах и в контрольных образцах №1 и №2 относительно дистиллированной воды, а также частотный коэффициент скорости ультразвука и частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови. На основании полученных данных определяют концентрацию общего белка, белковых фракций и липидных компонентов в сыворотке крови.

(Пат. 2253115 Российская Федерация, МПК G01N 33/49, N 29/18. Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови / Клемин В.А., Долгов В.В., Клемина А.В.;

патентообладатель Клемин В.А., Долгов В.В., Клемина А.В. - №2003115002/15; заявл. 22.05.2003; опубл. 27.05.2005, Бюл. №15. - 17 с.)

Однако данный способ определения компонентов сыворотки крови обладает недостаточной точностью и длительным временем проведения анализа.

Известен турбодиметрический (нефелометрический) способ определения белковых фракций сыворотки крови, включающий осаждение белковых фракций сыворотки крови фосфатными растворами определенной концентрации в 6-ти пробирках, определение оптической плотности и вычисление содержания каждой фракции сыворотки крови в относительных процентах, отличающийся тем, что концентрацию белков в исследуемой пробе определяют по степени мутности растворов, устанавливаемой с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК), при этом измерение оптической плотности проводят в обратной последовательности.

(Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / под ред. И.И. Кондрахина. - М.: КолосС, 2004. - С. 97-98).

Однако этот способ достаточно трудозатратен, занимает много времени, лабораторной посуды. Способ не адаптирован к современным биохимическим анализаторам.

Техническая задача, решаемая предполагаемым изобретением, заключается в расширении номенклатуры способов определения белковых фракций сыворотки крови, снижении трудозатрат, уменьшении трудоемкости, сокращении времени анализа, уменьшении расхода рабочих растворов, сыворотки и реагентов.

Технический результат заключается в расширении номенклатуры способов определения белковых фракций сыворотки крови, снижении трудозатрат, уменьшении трудоемкости подготовки проб, сокращении времени анализа, уменьшении в 5 раз количества рабочих растворов, сыворотки и реагентов, удешевлении способа.

Указанный результат достигается тем, что для определения белковых фракций сыворотки крови готовят 6 пробирок, при этом вносят 1 мл дистиллированной воды в пробирку №0, по 1 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов в пробирки №№1, 2, 3, 4 и дополнительно 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды, 0,75 мл основного фосфатного раствора в пробирку №5 с последующим перемешиванием путем перевертывания смеси в пробирке №5 и перенесением этой смеси по 0,1 мл в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4. Содержимое пробирок №№0, 1, 2, 3, 4 тщательно перемешивают. Через 15 минут проводят измерение оптической плотности по степени мутности растворов на биохимическом анализаторе «Stat fax 1904+» в каждой пробирке, в прямой последовательности, начиная с пробирки №1, затем в пробирках №2, 3, 4 против контроля (пробирка №0) или в обратной последовательности, начиная с пробирки №4.

На основании полученных данных вычисляют содержание каждой белковой фракции сыворотки крови в относительных процентах.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1.

Для анализа использовали биохимический анализатор «Stat Fax 1904+» - компактный, управляемый микропроцессором, фотометр общего назначения с возможностью двух-волнового измерения, с шестью фильтрами и температурой инкубации 37°С.

(«Stat fax 1904+». Биохимический анализатор. Руководство пользователя. - Режим доступа: http://doc.westmedica.com/54RU/инструкции_пользователя/sf1904+_ru.pdf).

Провели анализ крови коровы с клиническими признаками жировой дистрофии печени.

Для проведения анализа подготовили основной фосфатный раствор, для этого взяли 33,5 г натрия гидроксида, растворили в 400 мл дистиллированной воды, добавили 226,8 г калия фосфата однозамещенного. После растворения раствор охладили до комнатной температуры и добавили дистиллированную воду до объема 500 мл.

В мерные колбы на 100 мл взяли 92,4 мл (№1), 74,9 мл (№2), 58,8 мл (№3), 48,7 мл (№4) основного фосфатного раствора и довели объем дистиллированной водой до метки. Тщательно размешали путем встряхивания.

Приготовили 6 боросиликатных пробирок с расстоянием между рабочими гранями 10 мм, обозначив их №№0, 1, 2, 3, 4, 5.

В пробирку №0 внесли 1,0 мл дистиллированной воды. В пробирки №№1, 2, 3, 4 внесли по 1,0 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов (№1-4). В пробирку №5 внесли 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды и 0,75 мл основного фосфатного раствора. Закрыли пробкой и перемешали путем перевертывания. После этого перенесли по 0,1 мл смеси в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4. Содержимое пробирок осторожно и тщательно перемешали.

Через 15 минут провели измерение оптической плотности по степени мутности растворов на биохимическом анализаторе «Stat fax 1904+» в каждой пробирке-кювете из боросиликатного стекла, начиная с пробирки №1, затем в пробирках №2, 3, 4 против контроля (пробирка №0) в режиме абсорбции при длине волны (фильтре) 600 нм.

Установленные оптические плотности растворов записали и произвели расчет.

Пример расчета:

Оптическая плотность пробирки №1 составила 0,675

Оптическая плотность пробирки №2 составила 0,554

Оптическая плотность пробирки №3 составила 0,519

Оптическая плотность пробирки №4 составила 0,398

Расчет оптической плотности белковых фракций провели по схеме:

- оптическая плотность пробирки №1 равна сумме всех фракций белка;

- оптическая плотность альбуминов равна оптическая плотность пробирки №1 минус оптическая плотность пробирки №2;

- оптическая плотность альфа-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №2 минус оптическая плотность пробирки №3;

- оптическая плотность бета-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №3 минус оптическая плотность пробирки №4;

- оптическая плотность гамма-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №4.

Результаты расчета оптической плотности

альбуминов 0,675-0,554=0,121;

альфа-глобулинов 0,554-0,519=0,350;

бета-глобулинов 0,519-0,398=0,121;

гамма-глобулинов 0,398.

Принимая сумму оптической плотности всех фракций белка (0,675) за 100%, вычислили содержание каждой фракции в относительных процентах.

Относительный процент альбуминов

Относительный процент альфа-глобулинов

Относительный процент бета-глобулинов

Относительный процент гамма-глобулинов

Таким образом, предлагаемый способ расширяет номенклатуру способов определения белковых фракций сыворотки крови, позволяет в короткие сроки провести анализ и определить содержание белковых фракций, снизить трудозатраты, уменьшить трудоемкость подготовки проб, экономить количество рабочих растворов, сыворотки и реагентов, тем самым удешевить анализ.