Результат интеллектуальной деятельности: Способ лечения пациентов с осложнениями внутригоспитальными инфекциями

Изобретение относится к области медицины, и в частности к трансфузиологии и может быть использовано для отбора доноров (после предварительного их обследования), с целью целенаправленного и эффективного лечения пациентов с осложнениями внутригоспитальными инфекциями.

Одной из перспективных задач Службы крови является обеспечение лечебных учреждений иммунными препаратами направленного действия, находящимися в плазме донорской крови. Терапевтическая необходимость данных препаратов при лечении гнойно-септических внутригоспитальных инфекций научно обоснована и практически доказана (С.С. Балаян, 1991 г. «Плазма иммунная», Е.А. Селиванов и соавт., 2003 г. - отраслевой классификатор «Консервированная кровь человека и ее компонентов»).

Объем трансфузиологической помощи в лечебных учреждениях в последние годы характеризуется устойчивым ростом за счет увеличения трансфузий свежезамороженной, замороженной и иммунной плазмы.

Переливание иммунной плазмы проводится не только с лечебной целью, но и с профилактической (Н.В. Демидова, М., «Медицина». - 1987 г., В.Н. Цыган и соавт., С-Пб., 2011 г., М.А. Мягкова, B.C. Морозова, Иммунопатология, аллергология, инфектология, 2014, №3, 75-81).

Имеется опыт в СССР в учреждениях Службы крови выпуска антистафилококковой плазмы и иммуноглобулинов (противостолбнячной, противогриппозной, противооспенной) и др., которые получали из крови доноров, подвергаемых активной иммунизации. Однозначно объем и спектр выпускаемых иммунных препаратов не удовлетворяли практическое здравоохранение.

Для увеличения необходимых специфических иммунных компонентов сотрудниками Ленинградского ордена Трудового Красного Знамени, ордена Дружбы народов научно-исследовательского института гематологии и переливания крови проф. В.К. Мельниковой, кандидатами медицинских наук А.И. Смирновой, Л.К. Николаевой и кандидатом биологических наук Е.И. Кайтанджан и Р.Г. Файзулиным были подготовлены Методические рекомендации «Организация новой формы иммунного донорства среди лиц с естественными антибактериальными антителами с целью получения иммунных препаратов направленного действия» и утверждены Заместителем Министра Здравоохранения СССР Э.А. Ноговицыным 15 сентября 1989 года. В соответствии с требованиями данных рекомендаций и работы А.В. Чечеткина и соавт., 2008 год / Методические указания «Получение и клиническое применение иммунной плазмы в военно-медицинских учреждениях» до 2010 года, в Российской Федерации в лечебных учреждениях проводился отбор доноров крови путем скрининга определения бактериальных антител в «лечебном титре» в плазме крови (иммунная плазма) на наиболее часто встречаемые внутрибольничные инфекции:

- антистафилококковые;

- антиколибациллярные;

- антисинегнойные;

- антипротейные;

- антиклебсиеллезные.

Основным показателем отбора образцов крови доноров являлась величина или значимый (и выше) терапевтический титр антибактериальных антител для оказания трансфузиологической помощи. Процент обнаружения таковых у кадровых доноров варьировал от 12 до 73% и зависел от пола, возраста, времени года и сезонных работ.

С 2010 года производство диагностических препаратов в стране для тестирования на ранее указанные инфекции прекратилось, что побудило нас искать новый подход для поиска естественных антимикробных пептидов в плазме крови доноров, что крайне необходимо для оказания медицинской помощи и целевого применения плазмы определенной категории больных (верифицированной внутри госпитальной инфекции, ожоговой болезни, осложненной присоединившейся вторичной гнойной инфекции и др.). Патентный поиск по этим вопросам к успеху нас не привел.

Памятуя, что изыскание высокоэффективных средств терапии различных инфекций для службы крови приобретает в настоящее время особую актуальность и неотложную задачу практического здравоохранения.

Целью изобретения является разработка способа лечения пациентов с осложнениями внутригоспитальными инфекциями путем определения в плазме крови доноров естественных антимикробных пептидов, которые обладают микробицидной активностью без проведения целевой иммунизации доноров, вовлекались в защиту организма и воспалительные процессы, и расширить область их применения в клинической практике.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе лечения пациентов с осложнениями внутригоспитальными инфекциями применяются естественные антимикробные пептиды, находящиеся в донорской плазме, наличие которых подтверждается литической активностью при проведении бактериологического исследования выделенной от больного микробной культуры.

Бактериологическое тестирование образцов плазмы крови доноров на выявление естественных антимикробных пептидов на конкретно выделенную микробную культуру от больного проводится путем запаивания от 5 до 7 сегментов на магистральной трубке контейнера, заполненного плазмой на аппарате Bioscaer CR4 длиной 5 см, что позволит в дальнейшем использовать по одному образцу из вышеупомянутых сегментов определение естественных антимикробных пептидов; затем на питательные среды, приготовленные заранее, проводится посев культур, выделенных от больных из лечебных отделений, затем на поверхность засеянных чашек Петри наносится исследуемая плазма доноров, взятая из сегмента магистральной трубки, в количестве по 0,05 мл и помещается в термостат на 37 градусов на 1-2 суток, в зависимости от вида выделенной культуры микроорганизма, затем определяют литическую активность; плазму, которая обладает наибольшей литической активностью, используют для лечения больного путем плазмотрансфузии.

Изобретение поясняется с помощью фиг.1, на которой показаны фото чашек Петри с культурами выделенных от больных хирургических клиник с выраженной задержкой роста микроорганизмов.

В настоящее время естественные антимикробные пептиды представляют объект повышенного внимания широкого круга специалистов, в том числе рассматривающих такие соединения как альтернативу антибиотическим средствам. В настоящее время, чтобы противостоять патогенным микроорганизмам, появляются все новые и новые виды антибиотиков, которые по сути являются производными старых. Если мы не изменим методы изготовления, назначения и использования антибиотиков, нас ждут катастрофические последствия, а нам известно, что естественные антимикробные пептиды уступают антибиотикам по эффективности, но действуют быстрее, разрушая бактерии, невосприимчивые к антибиотикам (Garsia A.E., Osapau G., Tran P.A. Selsted ME Infect Immun. 2008 Dec. 76 (12): 5883-91).

Необходимо отметить, что естественные антимикробные пептиды постоянно образуются даже в стабильном состоянии организма (А.Е.Абатуров, журнал «Здоровье ребенка», 3 (38), 2012 г. ).

Б.П. Пинегин, А.С. Будихина в журнале «Иммунология», 2008 год, №5 отмечают, что естественные антимикробные пептиды являются компонентами иммунной системы и обеспечивают первую линию защиты макроорганизма от различных патогенов.

Естественные антимикробные пептиды - мультифункциональные катионные пептиды человека и представляют собой короткие молекулы длиной от 12 до 50 аминокислот, выполняют сложные функции в поддержании и регулировании иммунного ответа на вирусную, микробную и иную антигенную агрессию на основе прямого воздействия на клеточную мембрану микроорганизма, вызывающего разрушение клетки, а также участвуют в регулировании процесса презентации антигена.

Показатели содержания естественных антимикробных пептидов в крови человека рассматривается как индикатор наличия высокой иммунозащитной функции. Лекарственные препараты на основе естественных антимикробных пептидов пока не созданы, но идет активная работа в этом направлении.

Б.П. Пинегин, А.С. Будихина в журнале «Иммунология», 2008 год, №5 отмечают, что антимикробные пептиды являются компонентами иммунной системы и обеспечивают первую линию защиты макроорганизма от различных патогенов.

Поставленная нами цель может быть достигнута путем бактериологического тестирования образцов плазмы крови доноров (в том числе находящейся на карантине) на выявление естественных антимикробных пептидов на конкретно выделенную микробную культуру от больного.

Для исследования использовали сегмент из магистральной трубки контейнера образца плазмы донора, находящейся на карантинном хранении. Для этого предварительно на магистральной трубке, заполненной плазмой, делаем запаивания нескольких сегментов (5-7) на аппарате «Bioseaer CR 4» длиной 5 см, что дает нам возможность определять, при необходимости, неоднократно естественные антимикробные пептиды или другие исследования, не повреждая контейнера с гемокомпонентом.

Нами данная задача решалась следующим образом.

На стандартные питательные среды (кровяной агар, желточно-солевой агар или др.) приготовленные заранее, проводили посев общепринятым методом следующих культур, выделенных от больных лечебных отделений (гнойной хирургии, ожоговой и др.) E. Coli, St.aureus, Ps.aeruginosa, и Kl.Pneumoniae. Затем на поверхность засеянных чашек Петри наносили пастеровской пипеткой исследуемую плазму доноров, взятую из сегмента магистральной трубки, в количестве по 0,05 мл помещали в термостат на 37 градусов на 1-2 суток, в зависимости от вида выделенной культуры микроорганизма. В последующем проводили учет влияния исследуемой плазмы на засеянную культуру.

Оценку литической активности плазмы проводили: « - » - отсутствие активности;

«+» - низкая активность;

«++» - образование зоны лизиса с большим количеством колоний вторичного роста бактерий;

«+++» - зона лизиса с единичными колониями вторичного роста;

«++++» - прозрачная зона лизиса без колоний вторичного роста. Результаты учета роста:

Наглядно показано, что плазма крови отдельных доноров обладает литической активностью на вышеуказанную микрофлору, выделенная от больных в лечебном учреждении, которая в дальнейшем использовалась для лечения до полного устранения клинических проявлений бактериальной агрессии.

На фиг. 1 приведен пример 4 фото чашек Петри с культурами, выделенными от больных хирургических клиник с выраженной задержкой роста микроорганизмов.

В связи с отсутствием в настоящее время крайне необходимой лечебной и(или) профилактической регламентируемой естественной специфической иммунной плазмы на станциях (отделениях) переливания крови и в связи с отсутствием указаний руководящих документов для ее выявления нами предлагается данный способ.

Особенности определения естественных антимикробных пептидов:

- простота, доступность и экономичность;

- не требует специальной медицинской аппаратуры;

- выполнимы на уровне районной больницы и военном госпитале на 200 и более коек;

- наличие в штате лечебного учреждения врача-бактериолога.