×
10.05.2018
218.016.4b6b

Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ КРИОПРОТЕКЦИИ СВОБОДНОПЛАВАЮЩИХ СРЕЗОВ МОЗГА ДЛЯ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ криопротекции свободноплавающих срезов мозга для иммуногистохимического исследования, включающий фиксирование срезов мозга в растворе формальдегида, помещение их в раствор на основе фосфатно-солевого буфера NaCl, NaHPO и NaHPO с криопротектором и хранение при пониженной температуре, отличающийся тем, что в качестве криопротектирующего вещества в раствор добавляют глицерин в объемном соотношении 50:50. Изобретение позволяет создать более экономический способ криопротекции срезов мозга и менее трудоемкий процесс его приготовления из-за уменьшения числа компонентов криопротектирующего раствора. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и биологии, а конкретно к способам заключения и хранения гистологических препаратов. Может быть использовано в нейробиологии для длительного хранения срезов мозга при низкой температуре и последующего иммуногистохимического исследования.

Существуют различные способы криопротекции срезов мозга. Общим для них является помещение срезов мозга в раствор, содержащий компоненты, предотвращающие замерзание раствора и ткани при пониженной температуре [1].

Наиболее близким (прототипом) является метод криопротекции, предложенный R. E. Watson с соавторами [2], который состоит в помещении свободноплавающих срезов мозга в раствор, содержащий 4 различных компонента: фосфатно-солевой буфер (содержащий соли NaCl, Na2HPO4 и NaH2PO4), сахарозу, поливинилпирролидон и этиленгликоль.

Задачей изобретения является создание более экономичного способа криопротекции срезов мозга и менее трудоемкого процесса его приготовления за счёт уменьшения числа компонентов криопротектирующего раствора.

Поставленная задача решается использованием в качестве криопротектора раствора, содержащего всего два компонента: фосфатно-солевой буфер (содержащий соли NaCl, Na2HPO4 и NaH2PO4) и глицерин в объемном соотношении 50:50.

Способ состоит в помещении предварительно зафиксированных в 4% формальдегиде срезов мозга в 50% раствор глицерина в фосфатно-солевом буфере, выдерживании в течение часа при комнатной температуре и последующем помещении раствора вместе со срезами на хранение при температуре ниже -20°С.

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что раствор для криопротекции срезов мозга содержит только два компонента: фосфатно-солевой буфер и нейтральный для гистохимических препаратов глицерин. Использование раствора глицерина на основе фосфатно-солевого буфера в качестве средства криопротекции срезов мозга не описано в доступной литературе. Совокупность признаков явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники.

Предложенный метод криопротекции срезов мозга можно использовать в иммуногистохимических исследованиях нервной ткани мозга.

Пример

Для хранения срезов мозга 500 мл раствора, содержащего 86 г NaCl, 25 г Na2HPO4x12H2O и 4,7 г NaH2PO4x2H2O, смешали с 500 мл глицерина. Эксперимент проводился на 10 образцах мозга мыши, зафиксированных в 4% формальдегиде. Из каждого образца было получено по 15 коронарных двадцатимикронных (20 мкм) срезов обонятельной луковицы, которые были помещены в фосфатно-солевой буфер. Срезы от первых 5 образцов были сразу окрашены иммуногистохимически на белок даблкортин (DCX) – широко использующийся в нейробиологии маркер нейрогенеза.

Срезы от других 5 образцов были переведены в криопротектирующий раствор глицерина на основе фосфатно-солевого буфера и через час помещены в этом растворе на хранение при температуре ниже -20°С. После 4 месяцев хранения эти срезы были вновь переведены в фосфатно-солевой буфер и затем окрашены иммуногистохимически на белок даблкортин (DCX).

Тщательная оценка иммуногистохимических препаратов срезов мозга второй серии не позволила обнаружить повреждения, вызванные замораживанием, размораживанием и хранением.

На фиг. 1 представлены результаты иммуногистохимического окрашивания срезов мозга на белок даблкортин (маркер нейрогенеза). Синее: хроматин клеток, помеченный DAPI. Зелёное: белок даблкортин в молодых нейронах, помеченный антителом, связанным с красителем Alexa Flour 488. А – срез мозга, окрашенный до криопротекции и хранения. Б – срез мозга, окрашенный после криопротекции и хранения.

Статистический анализ результатов окрашивания на даблкортин (фиг. 2) показал отсутствие значимых различий между двумя сериями (P<0.05). Следовательно, замораживание, размораживание и хранение не привели к значимому разрушению или денатурации белка в срезах мозга.

Это говорит о том, что хранение срезов мозга в растворе 50% раствора глицерина на основе фосфатно-солевого буфера NaCl, Na2HPO4 и NaH2PO4 достаточно для криопротекции срезов мозга.

Таким образом, предложен более экономичный и менее трудоемкий способ криопротекции свободноплавающих срезов мозга, предназначенных для хранения при низкой температуре и последующего иммуногистохимического исследования.

Литература

1. Hoffman, G.E., Le, W.W., 2004. Just cool it! Cryoprotectant anti-freeze in immunocytochemistry and in situ hybridization. Peptides 25, 425-431.

2. Watson RE, Wiegand SJ, Clough RW, Hoffman GE. Use of cryoprotectant to maintain longterm peptide immunoreactivity and tissue morphology. J Peptides 1986; 7:155–9.

Способ криопротекции свободноплавающих срезов мозга для иммуногистохимического исследования, включающий фиксирование срезов мозга в растворе формальдегида, помещение их в раствор на основе фосфатно-солевого буфера NaCl, NaHPO и NaHPO с криопротектором и хранение при пониженной температуре, отличающийся тем, что в качестве криопротектирующего вещества в раствор добавляют глицерин в объемном соотношении 50:50.
СПОСОБ КРИОПРОТЕКЦИИ СВОБОДНОПЛАВАЮЩИХ СРЕЗОВ МОЗГА ДЛЯ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
СПОСОБ КРИОПРОТЕКЦИИ СВОБОДНОПЛАВАЮЩИХ СРЕЗОВ МОЗГА ДЛЯ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 101-110 из 173.
10.05.2018
№218.016.3fa1

Облегчённая тампонажная композиция

Изобретение может найти применение в газовой и нефтяной промышленности при цементировании обсадных колонн эксплуатационных и глубоких разведочных скважин, при наличии в разрезе горных пород, склонных к гидроразрыву. Технический результат – снижение плотности тампонажного раствора,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648730
Дата охранного документа: 28.03.2018
10.05.2018
№218.016.4517

Способ фракционной разгонки газовой смеси, состоящей из гексафторида урана, фтористого водорода и примесей

Изобретение относится к химической и атомной областям промышленности и может быть использовано при производстве гексафторида урана в технологии обогащения урана. Способ фракционной разгонки газовой смеси, состоящей из гексафторида урана, фтористого водорода и примесей, включает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650134
Дата охранного документа: 09.04.2018
10.05.2018
№218.016.4642

Анализатор состава природного газа

Изобретение относится к области измерительной техники. Анализатор состава природного газа содержит непрерывный лазер, фокусирующую линзу, газовую кювету с входным и боковым окном, фотообъектив, голографический фильтр, спектральный прибор, сопряженный с ПЗС-матрицей, и блок управления,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650363
Дата охранного документа: 11.04.2018
10.05.2018
№218.016.4c7d

Способ лечения блефарита

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и касается лечения демодекозного блефарита. Способ включает криогенное воздействие контактной аппликацией объемного элемента из металла. При этом используют охлажденный в жидком азоте криоаппликатор из проницаемо-пористого никелида...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002652073
Дата охранного документа: 24.04.2018
29.05.2018
№218.016.5998

Стенд для моделирования процесса десублимации компонентов газовой смеси

Изобретение относится к моделированию сложных технологических процессов, протекающих, например, при очистке гексафторида урана от летучих компонент. При использовании в производственных целях установка может быть использована при очистке гексафторида урана от легколетучих примесей, для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002655347
Дата охранного документа: 25.05.2018
09.06.2018
№218.016.5aa8

Устройство для измерения временного положения и длительности случайного импульсного сигнала

Устройство для измерения временного положения и длительности случайного импульсного сигнала относится к области радиотехники и может быть использовано для анализа импульсных сигналов в составе аппаратуры радиосвязи, радиолокации, систем автоматического контроля и управления. Устройство содержит...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002655465
Дата охранного документа: 28.05.2018
09.06.2018
№218.016.5f02

Цифровой когерентный демодулятор четырехпозиционного сигнала с фазовой манипуляцией

Изобретение относится к области радиотехники. Технический результат заключается в обеспечении высокоскоростной цифровой когерентной демодуляции сигналов с четырехпозиционной фазовой манипуляцией. Цифровой когерентный демодулятор четырехпозиционного сигнала с фазовой манипуляцией содержит...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002656577
Дата охранного документа: 05.06.2018
11.06.2018
№218.016.60a4

Поглотитель электромагнитных волн гигагерцевого диапазона

Изобретение относится к области радиопоглощающих материалов и конструкциям поглотителей, а конкретней к системам защиты от сверхвысокочастотного электромагнитного излучения, и может быть использовано для решения задач электромагнитной совместимости радиоэлектронных систем и комплексов, при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002657018
Дата охранного документа: 08.06.2018
05.07.2018
№218.016.6bdc

Способ прогнозирования пятилетней безметастатической выживаемости у больных раком молочной железы на основе экспрессии генов белков ykl-39 и ccl18

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогнозирования пятилетней безметастатической выживаемости у больных раком молочной железы. Проводят молекулярно-генетическое исследование биопсийных образцов опухолевой ткани с последующим выделением РНК и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002659676
Дата охранного документа: 03.07.2018
10.07.2018
№218.016.6f0e

Способ получения гликолида из модифицированных олигомеров гликолевой кислоты

Изобретение относится к способу получения гликолида, который является одним из исходных мономеров в реакциях с раскрытием цикла при получении ценных биодеградируемых полимеров, которые находят широкое применение в медицине, фармацевтике, пищевой промышленности и в современных аддитивных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002660652
Дата охранного документа: 09.07.2018
Показаны записи 1-3 из 3.
20.07.2014
№216.012.e111

Способ количественной оценки баланса про- и антиоксидантов в отделах головного мозга животного

Изобретение относится к области физиологии, нейрофизиологии, биохимии, в частности к характеристике про- и антиоксидантного статуса головного мозга, и может быть использовано для исследования влияния различных факторов на локализацию и степень нейродегенеративных изменений в головном мозге...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523403
Дата охранного документа: 20.07.2014
27.05.2016
№216.015.42a7

Средство, стимулирующее нейрогенез при ишемических повреждениях головного мозга

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и касается стимуляции нейрогенеза при ишемических повреждениях головного мозга. Для этого вводят п-тирозол в эффективном количестве. Это обеспечивает стимуляцию нейрогенеза и восстановление исходного уровня нейронов в гиппокампе в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002585094
Дата охранного документа: 27.05.2016
19.01.2018
№218.016.08c3

Активный ингредиент лекарственного средства, лекарственное средство, фармацевтическая композиция и способ лечения демиелинизирующих заболеваний живого организма, включая профилактику заболевания

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой лекарственное средство для лечения заболеваний живого организма, связанных с воспалительной демиелинизацией, представляющее собой полипренолы, полученные из древесной зелени хвойных пород общей формулы Также...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002631887
Дата охранного документа: 28.09.2017
+ добавить свой РИД