Результат интеллектуальной деятельности: Способ прогнозирования результата дентальной имплантации

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии и клинической лабораторной диагностике, и предназначено для прогноза возможности развития воспалительных осложнений дентальной имплантации.

На сегодняшний день не существует полноценных скрининговых лабораторных методов, позволяющих оценить риск развития воспалительных осложнений дентальной имплантации и несостоятельности имплантата на предоперационном этапе.

Наиболее близким аналогом заявленного способа является «Способ доклинической диагностики дентального периимплантита» [заявка на изобретение 2006125860/15, 17.07.2006, авторы: Тлустенко B.C., Гильмияров Э.М., Гильмиярова Ф.Н., Тлустенко В.П., Радомская В.М., Тлустенко Е.С.], который также базируется на исследовании слюны. Осложнения дентальной имплантации прогнозируют по результатам биохимического исследования слюны: определяется содержание общего белка, мочевой кислоты, альбумина, кальция, производят сравнение содержания этих показателей с нормой, и по снижению содержания показателей метаболизма в ротовой жидкости от нормы судят о риске развития дентального периимплантита. При всех достоинствах известного способа диагностики дентального периимплантита он относительно сложен в исполнении, включает несколько этапов, а потому не отвечает требованиям, предъявляемым к современным методам лабораторной экспресс-диагностики. Кроме того, метод предназначен для ранней, доклинической диагностики периимплантита, но малоэффективен для прогноза.

Технический результат: повышение точности прогнозирования осложнений дентальной имплантации в предоперационном периоде, при сокращении трудоемкости и сроков выполнения исследований.

Это достигается применением объективных лабораторных методов при исследовании слюны для прогноза риска развития осложнений дентальной имплантации. В качестве лабораторных показателей, характеризующих риск осложнений дентальной имплантации, весьма перспективным объектом исследования являются показатели окислительной модификации белков слюны.

Предлагаемый способ позволяет на этапе планирования дентальной имплантации установить риск осложнений дентальной имплантации, принять своевременные меры по профилактике и коррекции лечебной тактики.

Сущность предлагаемого способа заключается в использовании для диагностики и прогнозирования осложнений дентальной имплантации скринингового определения уровня окислительной модификации белков в слюне, полученной при подготовке пациента к дентальной имплантации (при клинико-лабораторном обследовании).

Способ осуществляют следующим образом.

В стеклянную или пластиковую пробирку собирают слюну, полученную при подготовке пациента к дентальной имплантации. Материал стабилен в течение 24 часов при 4°С или 20 суток при температуре -20°С; до 90 суток при температуре -86°С.

Для количественного определения уровня окислительной модификации белков может быть использован любой из доступных лабораторных методов. В ходе разработки предлагаемого способа использован метод, основанный на специфическом взаимодействии карбонильных производных белков с 2,4-динитрофенилгидразином с последующей количественной спектрофотометрической детекцией соответствующих производных (Дубинина Е.Е. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека, метод ее определения / Е.Е. Дубинина, С.О. Бурмистров, Д.А. Ходов и др. // Вопросы медицинской химии. - 1995. - №41. - С. 24-26).

Ключевой механизм окислительной модификации белков реализуется путем реакций карбонилирования. Карбонилированию подвержены аминокислотные остатки лизина, аргинина, пролина и треонина. Окисленные белки служат субстратом для протеолитических ферментов. Образовавшийся пул поврежденных белков активирует протеолиз. Окисленные белки, помимо утраты физиологического функций или их трансформации, способны выступать в качестве источника свободных радикалов, истощать запасы клеточных антиоксидантов, таких как аскорбиновая кислота и глутатион. Продукты свободнорадикального окисления белков опосредуют окислительные повреждения ДНК, снижают функции белков электрон-транспортных цепей, активности АТФ-аз, изменяют окислительно-восстановительный потенциал митохондриальной мембраны, а также способны приводить к нарушениям в других процессах. Таким образом, окислительно-модифицированные белки являются не только чувствительными маркерами, но и участниками свободнорадикального окисления, что позволяет использовать их для прогнозирования течения воспалительных и регенеративных процессов.

Ход определения. Для определения используют две аликвоты (0,1 мл) образца слюны. После добавления к исследуемым образцам 1,0 мл 20% трихлоруксусной кислоты в первую порцию (опыт) добавляют 0,1 мл 0,1М раствора 2,4-динитрофенилгидразина (на 2М растворе НСl), а во вторую порцию (контроль) - 0,1 мл 2М раствора НСl. Далее пробы инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре, и для получения белкового осадка центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут. Осадок промывают 2 раза в 5 мл смеси этанол-этилацетат (1:1) для экстракции липидов и 2,4-динитрофенилгидразина, который не прореагировал с карбонильными группами модифицированных белков. Полученный очищенный осадок высушивают для удаления растворителей и растворяют в 2,5 мл 8М раствора мочевины. Оптическую плотность полученных растворов измеряют при 370 нм. Расчет производят исходя из коэффициента молярной экстинкции динитрофенилгидразонов и выражают в нмоль/грамм белка.

Разработку способа осуществляют двойным слепым методом: сопоставление и анализ полученных в ходе лабораторного исследования данных проводят после получения клинической картины исходов операции дентальной имплантации. Интерпретацию результата исследования осуществляют следующим образом: нормальный уровень карбонилированных белков в слюне составляет 15-55 нмоль/грамм белка. В том случае, если уровень карбонилированных белков в слюне превышает указанные значения, высока вероятность развития осложнений дентальной имплантации.

Предлагаемым способом были обследованы 80 пациентов стоматологической клиники. На этапе обследования пациентов, предшествующем имплантации, не было выявлено никаких клинических признаков (включая данные стандартных лабораторных и инструментальных методов, данные анамнеза) неблагополучия или патологии костной ткани альвеолярного отростка. Результаты лабораторного исследования сопоставлены с клиническими наблюдениями.

Полученные результаты были подвергнуты статистической обработке с использованием пакета статистических программ Statistica for Windows 6.0. О достоверности различий показателей судили с помощью непараметрических критериев Манна-Уитни.

Примеры конкретного выполнения

Клинический пример №1

Пациент А., 56 лет, обратился по поводу частичной адентии нижней челюсти справа. Клинически конфигурация лица без особенностей. В полости рта на нижней челюсти справа вторичная адентия 3 класс по Кеннеди. Слизистая оболочка в области отсутствующих зубов плотная, влажная, блестящая, без видимых патологических изменений. По КТ отмечено наличие достаточного объема костной ткани в области отсутствующих зубов. В предоперационном периоде получен образец слюны для биохимического исследования.

Диагноз: частичное вторичное отсутствие зубов на нижней челюсти 3 класс по Кеннеди.

Протокол операции: под инфильтрационной анестезией «Ораблок» (4% артикаин) с вазоконстриктором в концентрации 1:100000 проведен разрез через слизистую оболочку и надкостницу, соответственно в области премоляра 4.5 и моляра 4.6, откинут слизисто-надкостничный лоскут, обнажен беззубый участок альвеолярного отростка. Сформированы костные ложа для 2 дентальных имплантатов. Во всех случаях определялось плотное и безболезненное дно костного ложа. Проведена инсталляция имплантатов соответствующих размеров. Гемостаз. Установлены формирователи десны. Рана ушита нитью «Промилен».

В слюне определено содержание карбонилированных белков: 35,56 нмоль/грамм белка, что соответствует нормальным значениям.

В послеоперационном периоде больному назначен амоксиклав 625 мг по 1 таблетке 2 раза в день, линекс 500 мг 3 раза в день, ополаскиватель с содержанием хлоргексидина 0,05%, обезболивающие лекарственные препараты (кеторол) в течение 5 дней. Швы сняты на 12 день. Заживление раны первичным натяжением.

Через 4 месяца проведен осмотр пациента, выполнено контрольное рентгенологическое обследование (КТ) и определяется хорошая остеоинтеграция. Пациент направлен на ортопедическое лечение.

Клинический пример №2

Пациент К., 48 лет, обратился в связи с отсутствием жевательных зубов на нижней челюсти слева. Конфигурация лица без особенностей. В полости рта на нижней челюсти слева - вторичная адентия 1 класс 2 подкласс по Кеннеди.

Слизистая оболочка в области отсутствующих зубов плотная, влажная, блестящая, без видимых патологических изменений. По КТ отмечено наличие достаточного объема костной ткани в области отсутствующих зубов. В предоперационном периоде получен образец слюны для биохимического исследования.

Диагноз: частичное вторичное отсутствие зубов на нижней челюсти 1 класс 2 подкласс по Кеннеди.

Протокол операции: под инфильтрационной анестезией «Ораблок» (4% артикаин) с вазоконстриктором в концентрации 1:100000 проведен разрез через слизистую оболочку и надкостницу, соответственно в области 3.6 3.7. зубов, а также в области 4.4. и 4.7. откинут слизисто-надкостничный лоскут, обнажен беззубый участок альвеолярного отростка. Сформированы костные ложа для 4 дентальных имплантатов. Во всех случаях определяется плотное и безболезненное дно костного ложа. Проведена инсталляция имплантатов соответствующих размеров. Гемостаз. Установлены формирователи десны. Рана ушита нитью «Промилен».

В слюне определено содержание карбонилированных белков: 39,86 нмоль/грамм белка, что соответствует нормальным значениям.

В послеоперационном периоде больному назначен амоксиклав 625 мг по 1 таблетке 2 раза в день, линекс 500 мг 3 раза в день, ополаскиватель с содержанием хлоргексидина 0,05%, обезболивающие лекарственные препараты (кеторол) в течение 5 дней. Швы сняты на 12 день. Заживление раны первичным натяжением.

Через 4 месяца проведен осмотр пациента, выполнено контрольное рентгенологическое обследование (КТ) и определяется хорошая остеоинтеграция. Пациент направлен на ортопедическое лечение

Клинический пример №3

Пациент П., 42 года, обратился в связи с отсутствием жевательного зуба на нижней челюсти слева. Конфигурация лица без особенностей. В полости рта на нижней челюсти слева - вторичная адентия 3 класс по Кеннеди. Слизистая оболочка в области отсутствующего зубов плотная, влажная, блестящая, без видимых патологических изменений. По КТ отмечено наличие достаточного объема костной ткани в области отсутствующего зуба. В предоперационном периоде получен образец слюны для биохимического исследования.

Диагноз: частичное вторичное отсутствие зубов на нижней челюсти 3 класс по Кеннеди

Протокол операции: под инфильтрационной анестезией «Ораблок» (4% артикаин) с вазоконстриктором в концентрации 1:100000 проведен разрез через слизистую оболочку и надкостницу, соответственно в области 3.6 зуба, откинут слизисто-надкостничный лоскут, обнажен беззубый участок альвеолярного отростка. Сформировано костное ложе для дентального имплантата. Определяется плотное и безболезненное дно костного ложа. Проведена инсталляция имплантата соответствующего размера. Гемостаз. Установлен формирователь десны. Рана ушита нитью «Промилен».

В слюне определено содержание карбонилированных белков: 65,56 нмоль/грамм белка, что превышает нормальный уровень.

В послеоперационном периоде больному назначен амоксиклав 625 мг по 1 таблетке 2 раза в день, линекс 500 мг 3 раза в день, ополаскиватель с содержанием хлоргексидина 0,05%, обезболивающие лекарственные препараты (кеторол) в течение 5 дней. Швы сняты на 10 день. Заживление раны первичным натяжением.

Через 3 недели появились жалобы на боли в области операции. При осмотре в области операции слизистая оболочка альвеолярного отростка гиперемирована, отечна. Определяется наличие свищевого хода в области установленного имплантата. Перкуссия имплантата болезненна, имплантат подвижен. При рентгеновском обследовании определяется участок резорбции костной ткани вокруг установленного имплантата.

Диагноз: периимплантит.

Протокол операции: под инфильтрационной анестезией «Ораблок» (4% артикаин) с вазоконстриктором в концентрации 1:200000 проведено удаление дентального имплантата с кюретажем костной раны. Заживление вторичным натяжением.

Клинический пример №4

Пациент О., 44 года, обратился в связи с отсутствием зубов на нижней челюсти слева. Конфигурация лица без особенностей. В полости рта на нижней челюсти слева - частичное вторичное отсутствие зубов, 1 класс по Кеннеди. Слизистая оболочка в области отсутствующих зубов плотная, влажная, блестящая, без видимых патологических изменений. По КТ отмечено наличие достаточного объема костной ткани в области отсутствующего зуба. В предоперационном периоде получен образец слюны для биохимического исследования.

Диагноз: частичное вторичное отсутствие зубов на нижней челюсти 1 класс по Кеннеди.

Протокол операции: под инфильтрационной анестезией «Ораблок» (4% артикаин) с вазоконстриктором в концентрации 1:100000 проведен разрез через слизистую оболочку и надкостницу, соответственно в области 3.5 3.6, 3.7 зубов, откинут слизисто-надкостничный лоскут, обнажен беззубый участок альвеолярного отростка. Сформировано костное ложе для дентальных имплантатов. Определяется плотное и безболезненное дно костного ложа. Проведена инсталляция имплантатов соответствующих размеров. Гемостаз. Установлен формирователь десны. Рана ушита нитью «Промилен».

В слюне определено содержание карбонилированных белков: 99,42 нмоль/грамм белка, что превышает нормальный уровень.

В послеоперационном периоде больному назначен амоксиклав 625 мг по 1 таблетке 2 раза в день, линекс 500 мг 3 раза в день, ополаскиватель с содержанием хлоргексидина 0,05%, обезболивающие лекарственные препараты (кеторол) в течение 5 дней. Швы сняты на 14 сутки. Заживление раны первичным натяжением.

Через 1 мес появились жалобы на боли в области операции. При осмотре в области операции слизистая оболочка альвеолярного отростка гиперемирована, отечна, выделяется гной. Определяется наличие свищевого хода в области установленных имплантатов. Перкуссия имплантата болезненна, имплантаты подвижны. При рентгеновском обследовании определяется участок резорбции костной ткани вокруг установленных имплантатов.

Диагноз: периимплантит.

Протокол операции: под инфильтрационной анестезией «Ораблок» (4% артикаин) с вазоконстриктором в концентрации 1:200000 проведено удаление дентальных имплантатов с кюретажем костной раны. Заживление вторичным натяжением.

Таким образом, применение предлагаемого способа позволяет заблаговременно выявлять и прогнозировать осложнения дентальной имплантации.