Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ПСОРИАТИЧЕСКОЙ ОНИХИИ

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии, и может быть использовано для диагностики псориатической онихии.

В настоящее время у большинства больных псориазом выявляются хотя бы минимальные проявления псориатической онихии либо данные о подобных изменениях ногтевых пластинок имеются в анамнезе (Кондрашов Г.В. Псориатическое поражение ногтей: клинические аспекты / Г.В. Кондрашов, Н.Н. Потекаев // Клиническая дерматология и венерология. - 2008. - №5. - С. 95-100; Рукавишникова В.М. Изменения ногтей при псориазе // Вестник дерматологии и венерологии. - 2009. - №2. - С. 71-79). Поражение ногтевых пластинок при псориазе может служить предвестником развития псориатического артрита ( М. et al. Nail involvement can predict enthesopathy in patients with psoriasis // J Dtsch Ges. - 2016 Nov. - №14 (11). - P. 1102-1107). Псориатическая онихия может быть изолированной и зачастую оставаться нераспознанной (Jiaravuthisan М.М. et al. Psoriasis of the nail: anatomy, pathology, clinical presentation, and review of the literature on therapy // J Am Acad Dermatol. - 2007 Jul. - №57 (1). - P. 1-27).

Известен способ определения степени тяжести псориатической онихии с помощью индекса тяжести псориатического поражения ногтевых пластинок NAPSI (Nail Psoriasis Severity Index). Сущность способа заключается в том, что ногтевая пластинка визуально разделяется центральной продольной и поперечной линиями на 4 равных сектора, в каждом из которых степень выраженности патологического признака оценивается от 0 до 4 баллов. Суммарное значение для всех ногтевых пластинок на кистях 0-80 баллов. При этом оцениваются следующие патологические клинические признаки: 1) продольные, поперечные борозды, точечные углубления, белые пятна; 2) расслаивание ногтевой пластинки по свободному краю (онихошизис, онихорексис); 3) отслоение ногтевой пластинки с дистального края (онихолизис), с проксимального края (онихомадез), истончение, размягчение ногтевой пластинки, ложкообразные ногтевые пластинки. 4) утолщение, увеличение, искривление ногтевой пластинки. Соответствие по бальной системе: 0 - нет патологических признаков; 1 - присутствует на 1/4 ногтевой пластинки; 2 присутствует на 2/4; 3 - присутствует на 3/4; 4 - присутствует на 4/4. Подсчет индекса осуществляется суммированием всех баллов: минимальное значение - 0 баллов, максимальное значение - 80 баллов.

Чем больше показатель, тем более тяжелое течение патологического процесса. Индекс NAPSI до 20 баллов указывает на легкое течение процесса, от 20 до 40 баллов на среднюю тяжесть процесса и более 40 на тяжелое течение патологического процесса (Симонова Е.П. Онихопатии при хронических дерматозах: клинические характеристики и подходы к лечению: автореф. дис. … канд. мед. наук: 14.01.10 / Симонова Елена Павловна - Новосибирск, 2013. - 18 с.).

Недостатком вышеуказанного способа является его необъективность, а также диагностика тяжести псориатической онихии только по внешним клиническим признакам.

Задачей изобретения является объективизация способа определения степени тяжести псориатичской онихии, выработка лабораторного критерия степени тяжести псориатической онихии.

Известен способ определения активности перекисного окисления липидов в биологических тканях, заключающийся в том, что исследуют костную ткань скелетированных трупов, которую измельчают механическим способом, высушивают при 37°С, экстрагируют раствором, содержащим фосфатный буфер и 96° этиловый спирт в соотношении 5:1 соответственно, полученную суспензию выдерживают на кипящей водяной бане в течение 10 минут, фильтруют, а при хемилюминесцентном анализе экстракта оценивают интенсивность быстрой вспышки, время полузатухания, интенсивность ингибирования, светосумму люминесценции. При этом на 500 мг костной ткани берут 6 мл экстрагирующего раствора. Способ позволяет оценивать активность перекисного окисления липидов в костной ткани (Патент №2350956 РФ, МПК G01N 33/52. Способ определения активности перекисного окисления липидов в биологических тканях / Федоров Г.Н., Леонов С.Д.; ГОУ ВПО Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию; заявка №2007129325/15 от 30.07.2007; опубликовано 27.03.2009. Бюл. №9). Так как ногти являются твердой биологической тканью, то этот способ можно применить для определения псориатической онихии.

Известен метод оценки свободнорадикального окисления при псориазе, заключающийся в том, что исследуют свободные дистальные участки ногтевых пластинок кистей, которые измельчают, кипятят на водяной бане в течение 10 минут в присутствии 5 мл дистиллированной воды и 1 мл 95% этилового спирта, фильтруют через фильтровальную бумагу, после хемилюминесцентного анализа рассчитывают коэффициент Н (H=S/Фmax) и сравнивают данный показатель с коэффициентов Н у здоровых доноров (Белявская А.А. Новые возможности применения метода хемилюминесценции для оценки свободнорадикального окисления при псориазе / А.А. Белявская, И.Е. Торшина // 2-й Конгресс ЕААД: сб. тезисов. - Москва, 2012. - С. 118).

Сущность предлагаемого способа состоит в том, что измельченные состриженные ногтевые пластинки кистей экстрагируют раствором, содержащим фосфатный буфер (pH 7,4) и 96° этиловый спирт в соотношении 5:1 соответственно, выдерживают на кипящей водяной бане в течение 10 минут, фильтруют смесь через фильтровальную бумагу, затем при хемилюминесцентном анализе полученного экстракта оценивают интенсивность быстрой вспышки (Ф max, отн. ед.) и светосумму хемилюминесценции (S, отн. ед.) и рассчитывают коэффициент Z, равный отношению S к Ф max. При получении 7,04<Z≤9,4 определяют легкую степень тжести псориатической онихии, при 9,4<Z≤10,2 - среднюю степень тяжести псориатической онихии, а при Z>10,2 - тяжелую псориатическую онихию.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Ногтевые пластинки кистей, не покрытые косметическим лаком и лекарственными препаратами, обрабатывают смесью диэтиловый эфир - этанол в соотношении 1:1, состригают, измельчают механическим способом (ножницами), 30 мг измельченных ногтевых пластинок экстрагируют раствором, содержащим 5 мл фосфатного буфера (20 мМ KH₂PO₄, 10 мМ KCl pH 7,4) и 1 мл 96° этилового спирта, выдерживают на кипящей водяной бане в течение 10 минут, смесь фильтруют через фильтровальную бумагу. Полученный экстракт исследуют методом хемилюминесценции на программно-аппаратном комплексе «Биохемилюминометр 3606-М» (СКТБ «Наука» КНЦ СО РАН, г. Красноярск, Россия) с учетом фоновой хемилюминесценции, добавляя в термостатируемую силиконизированную кювету хемилюминометра 0,2 мл фосфатного буфера (pH 7,4), 0,2 мл полученного экстракта, 0,05 мл 12,5 мМ FeSO₄*7H₂O и на 7-м цикле 0,1 мл 3% H₂O₂. Регистрируют хемилюминесценцию в течение 20 циклов, что соответствует 20 секундам, оценивают интенсивность быстрой вспышки (Ф max, отн. ед.) и светосумму хемилюминесценции (S, отн. ед.) и рассчитывают коэффициент Z, равный отношению S к Ф max. При 7,04<Z≤9,4 определяют легкую степень тяжести псориатической онихии, при 9,4<Z≤10,2 определяют среднюю степень тяжести псориатической онихии, а при Z>10,2 - тяжелую псориатическую онихию.

Пример 1. Пациентка И., 37 лет, городская жительница, продавец, больная псориазом в течение 32 лет, обострения ежегодно в весеннее время на фоне стрессовых ситуаций. Наследственность по псориазу отягощена по материнской линии.

Клинический диагноз: псориаз обыкновенный, распространенный.

Сопутствующие заболевания: хронический гастрит, ремиссия.

Отмечает изменения ногтевых пластинок кистей в течение последних семи лет. Индекс PASI при поступлении 10,2 балла, индекс NAPSI 2 балла. Из клинических патологических признаков псориатической онихии наблюдался симптом «наперстка» (точечные углубления). При микроскопическом исследовании ногтевых пластинок на грибы результат отрицательный.

При поступлении исследовали состриженные ногтевые пластинки кистей, которые перед состриганием обрабатывали смесью диэтиловый эфир - этанол в соотношении 1:1. Состриженные ногтевые пластинки измельчали механическим способом. Затем 30 мг измельченных ногтевых пластинок помещали в колбу с вытянутым горлышком, добавляли 5 мл фосфатного буфера (20 мМ KH₂PO₄, 10 мМ KCl pH 7,4) и 1 мл 96° этилового спирта. Полученную смесь выдерживали на кипящей водяной бане в течение 10 минут, затем фильтровали через фильтровальную бумагу. Получали около 3 мл экстракта.

При хемилюминесцентном анализе в термостатируемую силиконизированную кювету помещали 0,2 мл полученного экстракта, 0,2 мл фосфатного буфера (pH 7,4), 0,05 мл 12,5 мМ FeSO₄⋅7H₂O и на 7-м цикле 0,1 мл 3% H₂O₂. Регистрировали хемилюминесценцию в течение 20 циклов.

Затем оценивали параметры хемилюминесцентной кривой (Ф max и S). Рассчитывали коэффициент Z, равный отношению S к Ф max, Z=7630/1010=7,554, что соответствует легкой степени тяжести псориатической онихии.

Пример 2. Пациентка М., 56 лет, пенсионерка, страдает псориазом в течение 18 лет, наследственность по псориазу не отягощена.

Клинический диагноз: псориаз обыкновенный, распространенный.

Сопутствующие заболевания: наружный отит.

Отмечает изменения ногтевых пластинок кистей в течение последних двух лет. Индекс PASI при поступлении 21 балл, индекс NAPSI 30 баллов. Из клинических признаков поражения ногтевых пластинок наблюдался симптом «наперстка», дистальный онихолизис, онихорексис I пальцев кистей. При микроскопическом исследовании ногтевых пластинок на грибы результат отрицательный.

При поступлении исследовали состриженные ногтевые пластинки кистей, которые перед состриганием обрабатывали смесью диэтиловый эфир - этанол в соотношении 1:1. Ногтевые пластинки измельчали механическим способом. Затем 30 мг измельченных ногтевых пластинок помещали в колбу с вытянутым горлышком, добавляли 5 мл фосфатного буфера (20 мМ KH₂PO₄, 10 мМ KCl pH 7,4) и 1 мл 96° этилового спирта. Полученную смесь выдерживали на кипящей водяной бане в течение 10 минут, затем фильтровали через фильтровальную бумагу. При хемилюминесцентном анализе в термостатируемую силиконизированную кювету помещали 0,2 мл полученного экстракта, 0,2 мл фосфатного буфера (рН 7,4), 0,05 мл 12,5 мМ FeSO₄⋅7H₂O и на 7-м цикле 0,1 мл 3% H₂O₂. Регистрировали хемилюминесценцию в течение 20 циклов.

Затем оценивали параметры хемилюминесцентной кривой (Ф max и S) и рассчитывали коэффициент Z, равный отношению S к Ф max. Z=9520/970=9,814433, что соответствует средней степени тяжести псориатической онихии.

Пример 3. Пациент Ш., 57 лет, городской житель, фотограф, болен псориазом 10 лет, наследственность по псориазу не отягощена.

Клинический диагноз: псориаз обыкновенный, распространенный.

Сопутствующие заболевания: миокардиодистрофия смешанного генеза.

Отмечает изменения ногтевых пластинок кистей в течение последних пяти лет. Индекс PASI при поступлении 9,4 балла, индекс NAPSI 49 баллов. Из клинических патологических признаков псориатической онихии наблюдался симптом «наперстка» (точечные углубления), дистальный онихолизис, утолщение ногтевых пластинок всех пальцев кистей. Микроскопическое исследование ногтевых пластинок - грибы не обнаружены.

При поступлении исследовали состриженные ногтевые пластинки кистей, которые перед состриганием обрабатывали смесью диэтиловый эфир - этанол в соотношении 1:1. Ногтевые пластинки измельчали механическим способом. Затем 30 мг измельченных ногтевых пластинок помещали в колбу с вытянутым горлышком, добавляли 5 мл фосфатного буфера (20 мМ KH₂PO₄, 10 мМ KCl pH 7,4) и 1 мл 96° этилового спирта. Полученную смесь выдерживали на кипящей водяной бане в течение 10 минут, затем фильтровали через фильтровальную бумагу. При хемилюминесцентном анализе в термостатируемую силиконизированную кювету помещали 0,2 мл полученного экстракта, 0,2 мл фосфатного буфера (pH 7,4), 0,05 мл 12,5 мМ FeSO₄⋅7H₂O и на 7-м цикле 0,1 мл 3% H₂O₂. Регистрировали хемилюминесценцию в течение 20 циклов.

Затем оценивали параметры хемилюминесцентной кривой (Ф max и S) и рассчитывали коэффициент Z, равный отношению S к Ф max. Z=6810/630=10,81, что соответствует тяжелой псориатической онихии.

Был проведен хемилюминесцентный анализ ногтевых пластинок 28 пациентов с псориазом с различной степенью тяжести псориатической онихии и 9 практически здоровых доноров, не страдающих кожной патологией, по описанной выше методике. Данные исследования представлены на фиг. 1; 2.

Всем обследуемым провели микроскопическое исследование ногтевых пластинок для исключения грибкового поражения.

У всех пациентов с псориазом значение коэффициента Z было больше 7,04, тогда как в группе контроля меньше или равно 7,04. Среднегрупповое значение коэффициента Z у пациентов с псориазом и здоровых доноров соответственно было равным 9,62±1,25 и 5,73±0,95 (p<0,001).

У пациентов с псориазом с легкой степенью тяжести псориатической онихии значение коэффициента Z - 7,04<Z≤9,4, со средней степенью тяжести псориатической онихии 9,4<Z≤10,2 и при тяжелой псориатической онихии Z>10,2. Медианные значения коэффициента Z приведены на фиг. 3 (p<0,001).

Таким образом, предлагаемый способ определения степени тяжести псориатической онихии быстр и прост в выполнении, не требует сложных подсчетов, позволяет объективизировать определение степени тяжести псориатической онихии, повысить точность постановки данного диагноза, т.к. учитывает не только внешние признаки, но и метаболические изменения, происходящие в ногтевых пластинках при псориазе.

10,2 определяют тяжелую псориатическую онихию.