×
10.05.2018
218.016.3f50

Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу диагностики оспы овец и коз. Способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец включает отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией. В качестве патологического материала используют пробы из очага инфекционного заболевания оспы, при этом отбор проб патологического материала осуществляют от всех животных, находящихся в очаге инфекционного заболевания, и проводят экспресс-диагностику полученного патологического материала в течение суток для выявления животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования. Учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, если наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают положительным - вирус оспы овец и коз присутствует, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы, если не наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают отрицательным - вирус оспы овец и коз отсутствует и значения контрольных образцов также находятся в пределах нормы. Способ позволяет расширить функциональные возможности способа диагностики оспы овец и коз. 3 табл., 1 ил.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу диагностики вируса оспы коз и овец.

Известен способ обнаружения специфических антител к вирусам оспы овец и коз методом ингибирования твердофазного иммуноферментного анализа, предусматривающий взаимодействие исследуемой сыворотки крови с антигеном вируса оспы овец и последующую детекцию иммобилизированного на твердой фазе комплекса антитело - специфический антиген поликлональным пероксидазным конъюгатом, где на первом этапе реакции происходит взаимодействие исследуемой сыворотки с культуральным антигеном вируса оспы овец, на втором этапе не вступивший в реакцию антиген взаимодействует с иммобилизированными на твердой фазе моноклональными антителами клона 08.3, обладающими специфичностью к антигенной детерминанте полипептида молекулярной массы 36-40 кД вируса оспы овец штамма "НИСХИ", а образовавшийся комплекс моноклональное антитело - антиген выявляют специфическим пероксидазным конъюгатом поликлональных антител, выделенных из гипериммунной сыворотки животных-реконвалесцентов (патент РФ №2202112, кл. А61К 39/275, G12Q 1/68).

Известен метод диагностики оспы коз и овец (Орлова Е.С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз: автореф. дис. канд. биол. наук / Е.С. Орлова. - Владимир, 2007 г. - 25 с.), включающий проведение ПЦР в реакционной смеси следующего состава: 2,5 мкл 10× буфера для Taq-полимеразы, 3 мМ Mg2+ 0,2 мМ dNTPs, 1,0 ед. Taq-полимеразы, по 10 пмоль праймеров, 3 мкл раствора вирусной ДНК и вода до конечного объема 25 мкл на ДНК-амплификаторе РТС-100 (MJ Research, США) при следующем температурном режиме: 2 мин предварительной денатурации при 94°C, 35 циклов амплификации (30 с денатурации при 94°C, 30 с отжига праймеров при 55°C, 30 с элонгации при 72°C) и 2 мин заключительной элонгации, с возможным (при необходимости) проведением второго этапа амплификации с внутренними праймерами в смеси аналогичного состава в течение 20-25 циклов, далее продукты реакции анализировали с помощью электорофореза в 2,0% агарозном геле, содержащем 0,001% бромистого этидия, при силе тока 50 мА.

Недостаток данного способа - он дает только качественный результат.

Известно техническое решение (Касьян Ж.А. и др. «Разработка тест-системы для дифференциации видов бруцелл методом ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени. Проблемы особо опасных инфекций. 2016, вып. 3, с. 47-51. http://journal.microbe.ru/jour - прототип) отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией.

Недостатком данного метода является ограниченная применимость только к возбудителю бруцеллеза и отсутствие возможности диагностирования раннего развития заболевания с целью предотвращения массового распространения заболевания и перехода его в тяжелую запущенную форму.

Техническим результатом является расширение функциональных возможностей способа, предотвращение массового распространения заболевания и перехода его в тяжелую запущенную форму.

Технический результат достигается тем, что в способе экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец, включающем отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, согласно изобретению в качестве патологического материала используют пробы из очага инфекционного заболевания оспы, при этом отбор проб патологического материала осуществляют от всех животных, находящихся в очаге инфекционного заболевания, и проводят экспресс-диагностику полученного патологического материала в течение суток для выявления животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования, при этом учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, если наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают положительным - вирус оспы овец и коз присутствует, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы, если не наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают отрицательным - вирус оспы овец и коз отсутствует и значения контрольных образцов также находятся в пределах нормы.

Новизна заявляемого способа экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец состоит в идентификации вируса оспы в пробах патологического материала с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени, что в свою очередь позволяет выявить животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования животных.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец рекомендовано использовать в специализированных ветеринарных, санитарно-эпидемиологических, животноводческих, сельскохозяйственных предприятиях, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец осуществляют следующим образом.

В стаде овец или коз осуществляют отбор проб патологического материала от каждого животного из очага инфекционного заболевания оспы.

При отборе проб и их подготовке для исследования соблюдают меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами.

Для исследования используют содержимое везикул, пустул, после предварительной очистки их поверхности спиртом; папулы, соскобленные скальпелем, и оспенные корки, собранные пинцетом; фрагменты измененных органов (лимфатические узлы, селезенка, легкие); для получения сыворотки собирают кровь в пробирку без антикоагулянта.

Взятие клинического материала производят в пробирку с транспортной средой.

Перед проведением анализа исследуемый материал подготавливают:

- исследуемые пробы тканей, органов гомогенизируют с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков, затем готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе. Суспензию переносят а пробирку объемом 1,5 мл и отстаивают в течение 5-7 минут. Аликвоту надосадочной жидкости используют для экстракции ДНК;

- для получения сыворотки пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка. Затем центрифугируют при 800-1000 g в течение 10 минут при комнатной температуре. Сыворотку переносят одноразовыми наконечниками с фильтром в одноразовые пробирки объемом 1,5 мл.

После подготовки исследуемого материала приступают к проведению анализа, состоящего из 3 этапов:

- экстракция ДНК;

- проведение полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени;

- учет результатов анализа.

ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени имеет ряд значительных преимуществ:

- объединение этапов амплификации и детекции результатов. Появляется возможность оценить кинетику процесса, которая зависит от начального количества исследуемого материала;

- существенное снижение риска контаминации и ошибок при анализе результатов;

- высокая специфичность реакции за счет использования высокоспецифичных флуоресцентных зондов;

- высокая производительность;

- упрощение требований к организации ПЦР-лаборатории;

- возможность количественной оценки исходной ДНК матрицы;

- регистрация и учет данных в электронном формате.

ПЦР в реальном времени характеризуется возможностью проведения качественного и количественного анализа. Регистрируемое в процессе амплификации нарастание сигнала от отделенного флуорофора прямо пропорционально увеличению концентрации синтезированных специфических продуктов и отражает концентрацию ДНК в исходной матрице.

Экстракция ДНК.

Перед выделением ДНК осуществляют подготовку исследуемых проб с помощью набора реагентов «ПЦР-ОСПА-ФАКТОР», состоящего из 2 комплектов (таблица 1 и 2).

В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию 10 мкл ПЦР СМЕСЬ РОХ, 5 мкл смеси ПЦР БУФЕР РОХ, 0,5 мкл TAQ POLYMERASE. Перемешивают смесь на вортексе и сбрасываю капли кратковременным центрифугированием. Затем отбирают необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб, вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси. Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки добавляют:

1) отрицательный контроль ПЦР (К-) - вносят в пробирку по 10 мкл ОКО;

2) по 10 мкл ДНК из исследуемых образцов в соответствующие пробирки;

3) положительный контроль ПЦР (К+) - вносят в пробирку 10 мкл ПКО.

При этом не наносят маркировку на крышку пробирок, т.к. это затрудняет процесс считывания амплификатором.

Проведение полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.

Устанавливают пробирки в реакционный модуль прибора «Rotor-Gene 3000/6000» (Q), в котором осуществляют полимеразную цепную реакцию с флуоресцентным детектором в режиме реального времени. В соответствии с протоколом анализа прибор программируют, устанавливают параметры температурно-временного режима амплификации, детекцию флуоресцентного сигнала назначают после стации отжига праймеров, после чего начинают процесс амплификации с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. В его основе лежит принцип флуоресцентной детекции продуктов полимеразной цепной реакции непосредственно в ходе амплификации. Детекция продуктов амплификации проводится прямо в реакционной среде через стенки или крышку закрытой пробирки.

Учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (см. чертеж). Образец считают положительным (вирус оспы овец и коз присутствует), если наблюдают рост специфического сигнала, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы (таблица 3). Образец считают отрицательным (вирус оспы овец и коз отсутствует), если не наблюдают рост специфического сигнала, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы.

Способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец, включающий отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, отличающийся тем, что в качестве патологического материала используют пробы из очага инфекционного заболевания оспы, при этом отбор проб патологического материала осуществляют от всех животных, находящихся в очаге инфекционного заболевания, и проводят экспресс-диагностику полученного патологического материала в течение суток для выявления животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования, при этом учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, если наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают положительным - вирус оспы овец и коз присутствует, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы, если не наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают отрицательным - вирус оспы овец и коз отсутствует и значения контрольных образцов также находятся в пределах нормы.
Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 526.
10.11.2013
№216.012.7cb9

Прямоточный грохот

Изобретение относится к технике для классификации сыпучих материалов и может быть использовано в строительной, горнодобывающей, металлургической и других отраслях промышленности. Прямоточный грохот включает просеивающую поверхность, загрузочное и разгрузочное приспособления, привод....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002497602
Дата охранного документа: 10.11.2013
10.11.2013
№216.012.7cba

Грохот строительных материалов

Изобретение относится к технике для классификации сыпучих материалов и может быть использовано в строительной, горнодобывающей, металлургической и других отраслях промышленности. Грохот строительных материалов включает просеивающую поверхность, загрузочное и разгрузочные приспособления, привод....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002497603
Дата охранного документа: 10.11.2013
10.01.2014
№216.012.93cd

Устройство для отделочно-зачистной обработки

Изобретение относится к машиностроению и может быть использовано для отделочно-зачистной и упрочняющей обработки деталей в свободном состоянии. Устройство содержит установленный на станине галтовочный барабан с приводом его вращения и средства для загрузки и выгрузки деталей. Галтовочный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002503531
Дата охранного документа: 10.01.2014
10.04.2014
№216.012.b228

Стержневой бетоносмеситель

Для расширения технологических возможностей в стержневом бетоносмесителе, содержащем имеющий привод вращения барабан и рабочий орган, выполненный в виде не связанных между собой стержней-катков, рабочий орган изготовлен в виде многозаходной винтовой поверхности с винтовыми канавками внутри и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002511324
Дата охранного документа: 10.04.2014
10.06.2014
№216.012.cb6e

Способ возделывания адаптивных систем сортов пшеницы (варианты)

Изобретения относятся к области сельского хозяйства. Способ включает высев на полях комплекса сортов пшеницы, расположенных совместно в регионе. При этом поле предварительно делят посредством разделительных полос на участки, каждый из которых засевают одним из сортов, входящих в комплекс....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517849
Дата охранного документа: 10.06.2014
10.06.2014
№216.012.d17b

Станок для химико-отделочно-упрочняющей обработки деталей

Изобретение относится к машиностроению и может быть использовано для отделочно-зачистной и упрочняющей обработки деталей в свободном состоянии с использованием химических растворов. Станок содержит установленный горизонтально на станине барабан, выполненный с многозаходной винтовой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519398
Дата охранного документа: 10.06.2014
20.06.2014
№216.012.d34c

Способ посева сортов-двуручек колосовых культур

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ включает обработку почвы, использование севооборотов яровых колосовых культур, предпосевную подготовку семян и посев весной в сроки посева яровых колосовых культур. Семена увлажняют, доводя содержание влаги семян до 45-50% их массы,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519863
Дата охранного документа: 20.06.2014
10.07.2014
№216.012.da13

Трехфазный инвертор с переменной структурой

Изобретение относится к электротехнике и может быть использовано в автономных системах бесперебойного электроснабжения для преобразования напряжений постоянного тока в трехфазную симметричную систему напряжений переменного тока. Технический результат заключается в обеспечении номинального...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002521605
Дата охранного документа: 10.07.2014
10.07.2014
№216.012.dbda

Наглядное пособие для демонстрации принципа работы одиночного стержневого молниеотвода

Изобретение относится к области образования и наглядных учебных пособий, в частности к наглядным пособиям для демонстрации принципа работы одиночного стержневого молниеотвода. Модель защищаемого объекта выполнена трехмерной. Модель зоны защиты выполнена в виде полого тонкостенного конуса с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522060
Дата охранного документа: 10.07.2014
20.07.2014
№216.012.e168

Способ очистки растительных масел от восков

Изобретение относится к масложировой промышленности. Способ очистки растительных масел от восков предусматривает вымораживание масла с добавлением вспомогательных фильтровальных порошков. Далее масло выдерживают при низкой температуре и затем отделяют отработанный фильтровальный порошок с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523490
Дата охранного документа: 20.07.2014
Показаны записи 1-10 из 204.
27.10.2013
№216.012.79ec

Штамм бактериофага escherichia coli ecd4, обладающий литической активностью по отношению к бактериям escherichia coli серотипа о104:н4

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается штамма бактериофага Escherichia coli ECD4. Штамм бактериофага Escherichia coli ECD4 выделен из фекалий бройлерных кур на культуре бактерий штамма Escherichia coli О104:Н4 RKI№112027 и депонирован в Государственной коллекции...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496874
Дата охранного документа: 27.10.2013
10.06.2014
№216.012.cd34

Композиция антибактериальная, штамм бактериофага escherichia coli, используемый для получения такой композиции.

Изобретение относится к области пищевой промышленности, биотехнологии и касается композиции антибактериальной и штамма бактериофага Escherichia coli, используемого для получения такой композиции. Охарактеризованная композиция антибактериальная включает фильтрат фаголизата Escherichia coli,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002518303
Дата охранного документа: 10.06.2014
10.10.2014
№216.012.fcf9

Способ выращивания перепелов

Изобретение относится к ветеринарии и птицеводству, а конкретно к способу выращивания перепелов. Способ выращивания перепелов заключается в том, что полученный электрохимическим способом раствор натрия гипохлорита, разбавленный дистиллированной водой до концентрации 100-200 мг/л, используется...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002530607
Дата охранного документа: 10.10.2014
20.10.2014
№216.012.feae

Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и вируса геморрагической болезни...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002531054
Дата охранного документа: 20.10.2014
10.01.2015
№216.013.1a4a

Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота

Изобретение относится к ветеринарной медицине и касается способа изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота. Представленный способ включает: отбор патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002538158
Дата охранного документа: 10.01.2015
10.06.2015
№216.013.54c2

Штамм вируса ящура aphtae epizooticae типа а для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа а

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picomaviridae, рода Aphtovirus. Охарактеризованный штамм выделен от больных свиней и получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553219
Дата охранного документа: 10.06.2015
10.06.2015
№216.013.5519

Штамм бактерии pseudomonas aeruginosa

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм Pseudomonas aeruginosa O11 депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ под наименованием «Pseudomonas aeruginosa №10» и регистрационным номером «№10-ДЕП». Штамм имеет высокую длительно сохраняющуюся иммуногенную активность, в связи с чем может...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553306
Дата охранного документа: 10.06.2015
20.06.2015
№216.013.5607

Штамм бактерий pseudomonas aeruginosa для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa №34-ДЕП депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ. Штамм имеет высокую иммуногенную активность и предназначен для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. При использовании вакцины на основе...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553553
Дата охранного документа: 20.06.2015
20.06.2015
№216.013.5608

Штамм бактерий pseudomonas aeruginosa для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa №25-ДЕП депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ. Штамм имеет высокую иммуногенную активность и предназначен для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. При использовании вакцины на основе...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553554
Дата охранного документа: 20.06.2015
20.06.2015
№216.013.5609

Штамм бактерий pseudomonas aeruginosa для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Штамм Pseudomonas aeruginosa №1 КВЛ-ДЕП депонирован в коллекции ФГБУ ВГНКИ. Штамм имеет высокую иммуногенную активность и предназначен для изготовления вакцины против псевдомоноза свиней. При использовании вакцины на основе предложенного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553555
Дата охранного документа: 20.06.2015
+ добавить свой РИД