×
20.01.2018
218.016.0fbc

Результат интеллектуальной деятельности: Штамм Amycolatopsis orientalis - продуцент антибиотика диметилванкомицина и способ получения антибиотика

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Заявлена группа изобретений, которая может быть использована при производстве антибактериального антибиотика диметилванкомицина сульфата, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми и анаэробами. Предлагается штамм Amycolatopsis orientalis – продуцент диметилванкомицина, депонированный в ВКПМ под регистрационным номером ВКПМ Ас-1984, и способ получения диметилванкомицина. Способ получения диметилванкомицина включает культивирование штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984, сорбцию антибиотика из нативного раствора на катионите КБ-2 (Na), десорбцию антибиотика, нейтрализацию элюата катионитом КУ-2-20 (Н) и сорбцию (pH 6,8) антибиотика на Амберлит CG-25 (NH) с последующей элюцией диметилванкомицина (0,05-0,3) н. раствором аммиака. Водный раствор антибиотика концентрируют и осаждают ацетоном. Изобретение позволяет получить антибиотик 97,4% чистоты. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается нового штамма актиномицета, образующего противобактериальный антибиотик диметилванкомицин.

Антибиотик диметилванкомицин по химическому строению относится к полициклическим антибиотикам группы ванкомицина-ристомицина (далбагептидам), являющимся жизнеспасающими средствами при лечении особо тяжелых инфекций.

Диметилванкомицин эффективен при лечении заболеваний, вызываемых грамположительными бактериями, включая метициллинрезистентные штаммы золотистого стафилококка (MRSA) и многие анаэробы, в том числе возбудителя псевдомембранного колита Clostridium difficile.

Диметилванкомицин служит также исходной субстанцией в получении полусинтетических производных природной структуры для улучшения химиотерапевтических показателей, в том числе ослабления аллергизирующего действия, характерного для гликопептидных антибиотиков.

Впервые диметилванкомицин, как один из шести компонентов, был обнаружен в составе комплекса гликопептидных антибиотиков, образуемого мутантным штаммом культуры Nocardia orientalis 2450 - мирового продуцента ванкомицина [2]. Известен штамм этой культуры Amycolatopsis (прежнее название Nocardia) orientalis subsp. Eremomycini ВКПМ-Ас-807 - промышленный продуцент близкого к ванкомицину антибиотика эремомицина [3], принятый в качестве прототипа.

Сущность изобретения состоит в том, что получен новый штамм №9325 - продуцент диметилванкомицина путем селекционного преобразования свойств известного штамма Amycolatopsis orientalis subsp. eremomycini ВКПМ-Ас 807 в результате последовательного двухступенчатого воздействия N-метилнитрозомочевины и гамма-лучей 60Со на споры исходной культуры и отбора оригинального мутантного продуцента диметилванкомицина среди мутагенизированной популяции колоний актиномицета, выросших на селективном фоне устойчивости к ванкомицину.

Полученный новый штамм №9325 депонирован в коллекции культур ГосНИИ «Генетика» под номером штамм ВКПМ-Ас-1984.

Изобретение включает способ выделения образованного диметилванкомицина при глубинном культивировании нового штамма-продуцента, предусматривающий сорбцию его из нативного раствора на карбоксильном катеоните КБ-2 в солевой форме с последующей десорбцией 0,3 н. раствором аммиака, концентрацией и хроматографической очисткой от примесей микробных метаболитов с использованием Амберлита CG-25 (NH3+) и катеонита КУ-2-20 (Н+), осаждением ацетоном субстанции 97,4% чистоты из водного раствора антибиотика.

Штамм Amycolatopsis orientalis subsp. ВКПМ-Ас-1984 с антибиотической активностью 1800 мкг в 1 мл ферментационной жидкости обладает способностью синтеза диметилванкомицина в виде монокомпонента и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологическими признаками.

Культурально-морфологические и физиологические признаки штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984

Длительность выращивания для изучения таксономических признаков (7-21) суток при температуре 28°C. Для засева диагностических сред используется споровый посевной материал десятидневной культуры штамма, выращенной на глюкозо-аспарагиновом агаре или на среде Линденбайна. Цвет определен по таблице Бондарцева и Праузера. Данные приведены в таблице №1.

Морфологические признаки. Гифы воздушного мицелия прямые или слегка извилистые, распадающиеся на фрагменты различной длины; поверхность спор гладкая.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб. Растет при (24-37)°C, оптимум роста 28°C и в диапазоне значений pH (5,0 - 10,0) с оптимумом роста при pH 7,0; желатину разжижает, молоко пептонизирует. Сахарозу инвертирует. Крахмал гидролизует. На клетчатке не растет. Восстанавливает нитраты до нитритов. Меланоидные пигменты не образует при росте на провокационной среде Треснера с лимонно-кислым железом.

Использование источников углерода. Хорошо утилизирует глюкозу, фруктозу, лактозу, рамнозу, ксилозу, рибозу, арабинозу, маннит, мальтозу; умеренно - сорбит; не утилизирует сахарозу, рафинозу, целлюлозу.

Антагонистические свойства. Штамм Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984 при росте на агаровых средах умеренно угнетает рост грамположительных бактерий Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus mycoides, Micrococcus luteus и не действует на грамотрицательные бактерии Escherichia colli, Comamonas terrigena, Providencia stuartii.

Хранение штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984. Штамм хранится в виде спор на стерильной почве с кварцевым песком или на зернах пшена, а также в виде зрелой культуры на агаровых средах под вазелиновым маслом. Антибиотическая активность штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984 при глубинном культивировании определяется луночным методом диффузии в агар (среда №2 Гаузе) с использованием в качестве тест-микроорганизма Bacillus subtilis АТСС 6633 и сравнением зон подавления роста образцами испытуемой ферментационной жидкости с калибровочной кривой стандарта эремомицина сульфата (100 мкг, 50 мкг, 25 мкг, 12,5 мкг). Биологическая активность получаемой биосинтезом и химически очищенной субстанции антибиотика определяется трехдозным вариантом метода (ГФХ, стр. 949).

Штамм Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984 поясняется следующим примером.

Пример 1. Споровым материалом с мицелием культуры Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984, выращенной в течение (10-14) суток при 28°C на среде Линденбайна, засевают питательную среду (150 мл в колбах Эрленмейера объемом 0,75 л) и выращивают при 28°C в течение (24-36) часов на круговой качалке при (220-240) об/мин.

Состав посевной среды, %:

Среда стерилизуется в течение 30 мин при давлении 1,0 атм. при 120°C.

Выросшим мицелием в количестве (5-10) % засевают питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера объемом 0,75 л) следующего состава, %:

Стерилизация среды в течение 30 мин при давлении 1,0 атм. при 120°C.

Ферментационное культивирование проводят при 28°C в течение 120 часов на качалке при (220-240) об/мин. Диметилванкомицин накапливается в культуральной жидкости продуцента. Антибиотическую активность определяют методом диффузии в агар с использованием тест-культуры Bacillus subtilis АТСС 6633. Содержание диметилванкомицина при биосинтезе штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984 к окончанию ферментации составляет 1800 мкг в 1 мл культуральной жидкости.

Для выделения диметилванкомицина проводят его сорбцию из нативного раствора (отфильтрованной от мицелия ферментационной жидкости) на карбоксильном катионите КБ-2 в солевой форме.

Способ выделения поясняется следующим примером

Пример 2

1 л ферментационной жидкости, содержащей 1,8 г антибиотика, подкисляют серной кислотой до pH 6,7. Мицелий отделяют, промывают дистиллированной водой, нативный раствор, объединенный с промывной водой (1,1 л), пропускают через колонку с катионитом КБ-2 (Na+) с десорбцией антибиотика 0,3 н. раствором аммиака. Элюат нейтрализуют при использовании катеонита КУ-2-20 (Н+) и при pH 6,8 сорбируют на Амберлит CG-25 (NH4+) с последующим вытеснением антибиотика раствором аммиака (0,05-0,3) н. и удалением избытка аммиака использованием катеонита КУ-2-20 (Н+). Водный раствор антибиотика концентрируют упариванием в вакууме и диметилванкомицин осаждается добавлением ацетона. Получено 0,738 г субстанции диметилванкомицина сульфата 97,4% чистоты (метод ВЭЖХ). Выход составляет 41% от содержания диметилванкомицина в ферментационной жидкости.

Антибиотик, полученным заявленным способом, представляет собой белый аморфный порошок, легко растворимый в воде и практически нерастворимый в органических растворителях; имеет УФ-спектр, характерный для ванкомициновой группы антибиотиков-гликопептидов с максимумом поглощения при 280 нм и батохромным сдвигом (20-25 нм) при щелочной реакции.

ВЭЖХ анализ полученного диметилванкомицина проводили на жидкостном хроматографе "Knauer" (Germany) с автоматической системой обработки данных и спектрофотометрическим детектором К-2501; колонка из нержавеющей стали длиной 150 мм с внутренним диаметром 4 мм, заполненная сорбентом "Диасфер-110-С16" (БиоХимМак СТ, Москва) с размером частиц 5 мкм. Для элюции антибиотика использовали систему, состоящую из 0,2% раствора HCOONH4 и ацетилнитрила при изменении линейного градиента элюции от 12 до 35% за 30 мин. Скорость потока 1 мл/мин, детектирование при длине волны 280 нм, температура хроматографирования - комнатная, объем петли 20 мкл. В этих условиях время выхода диметилванкомицина - 10,97 мин, время выхода ванкомицина - 6,36 мин.

Показатели, характеризующие диметилванкомицин сульфат (физико-химические свойства, антибактериальная активность), полностью соответствуют показателям, которые определены для диметилванкомицина сульфата, защищенного патентом US 0159180 с брутто-формула C68H79Cl2N9O24, мол. масса 1477.3 Да, УФ-спектр, λmax2O)=280 нм. Таким образом, создан новый мутантный штамм - активный продуцент диметилванкомицина Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984, отличающийся от известного по способности образовывать новый для штамма-прототипа антибиотик в виде монокомпонента, а также по характеру роста на диагностических агаровых средах и по степени усвоения источников углерода (таблица 2).

Использование нового штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984 и способа выделения антибиотика для коммерческого получения диметилванкомицина позволяет осуществить выход целевого продукта 97,4% чистоты в количестве 0,738 г из 1 л ферментационной жидкости.

Источники информации

1. Shashkov A.S., Tsvetkov D.E., Grachev A.A., Lapchinskaia O.A., Lavrova-Balashova M.F., Ponomarenko V.I., Katrukha G.S., Nifantiev N.E. Structural analysis of Antibiotic INA 9301 from Amycolatopsis orientalis. Natural product communication. Vol.3(10), P. 1631-1638 (2008).

2. Патент ЕР US 0159180 (1985).

3. Патент RU 2352631 от 10.10.2008 г.

Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 21-30 из 35.
04.04.2018
№218.016.30c0

Полусинтетические производные гелиомицина, ингибирующие опухолевый рост

Изобретение относится к 4-аминометильным производным гелиомицина, соответствующим формуле:
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002644780
Дата охранного документа: 14.02.2018
10.05.2018
№218.016.3c7d

Способ синтеза индоло[1',7':1,2,3]пирроло[3',4':6,7]азепино[4,5-b]индол-1,3(2н,10н)-диона

Изобретение относится к новому способу получения индоло[1',7':1,2,3]пирроло[3',4':6,7]азепино[4,5-b]индол-1,3(2Н,10Н)-диона, который является исходным веществом для получения потенциального противоопухолевого препарата...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648039
Дата охранного документа: 21.03.2018
24.07.2018
№218.016.742d

Фармацевтическая композиция на основе соли производного оливомицина, обладающая противоопухолевой активностью

Настоящее изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию с противоопухолевой активностью на основе соли N,N-диметиламиноэтиламид 1'-дез-(2,3-дигидрокси-н-бутироил)-1'-карбоксиоливомицина А, выбранной из группы метансульфоната,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002662087
Дата охранного документа: 23.07.2018
27.10.2018
№218.016.9778

Новые производные гелиомицина и фармацевтические композиции на их основе, ингибирующие опухолевый рост

Изобретение относится к новому производному гелиомицина, содержащему от одной до трех аминоалкиламиногрупп, соответствующему формуле I, его таутомерным формам или фармацевтически приемлемым солям, обладающему способностью ингибировать пролиферацию клеток, а также к фармацевтической композиции и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002670763
Дата охранного документа: 25.10.2018
23.02.2019
№219.016.c7ab

Регулятор роста и развития сельскохозяйственных культур

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для регулирования роста и развития сельскохозяйственных культур с использованием биологически активных веществ. Применение композиции, содержащей биологически активную сумму тритерпеновых кислот и биологически активный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002321197
Дата охранного документа: 10.04.2008
14.03.2019
№219.016.deef

Штамм streptomyces hygroscopicus 18 - продуцент нафтохиноновых антибиотиков - астолидов а и в с противогрибковой и цитотоксической активностью и способ их получения

Предложена группа изобретений, относящихся к биотехнологии - штамм Streptomyces hygroscopicus ВКПМ Ас-2079 - продуцент антибиотиков астолидов А и В и способ получения антибиотиков астолида А и астолида В с применением указанного штамма. Штамм Streptomyces hygroscopicus 18, обладающий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002681828
Дата охранного документа: 12.03.2019
10.04.2019
№219.017.03e8

Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины (варианты)

Изобретение относится к способу переработки древесины, в частности к способу выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины сучковой зоны лиственницы или пихты. Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины, в котором измельченную древесину сучковой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002359666
Дата охранного документа: 27.06.2009
24.05.2019
№219.017.5f80

Противогрибковый полусинтетический полиеновый антибиотик, его водорастворимые соли и фармацевтические композиции на их основе

Настоящее изобретение относится к солям ацетату, L-глутамату, цитрату или фумарату N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В формулы I которые могут быть использованы в медицине. Предложены новые противогрибковые соединения со сниженной токсичностью и улучшенной стабильностью, фармацевтические...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002688658
Дата охранного документа: 22.05.2019
13.09.2019
№219.017.caa0

Субстрат для культивирования ксилотрофных базидиомицетов и способ его получения с использованием методов химической модификации лигноцеллюлозного сырья

Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована для получения плодовых тел базидиомицетов. Предложены способ приготовления селективных субстратов и селективный субстрат для получения плодовых тел базидиомицетов. Способ включает кислотную модификацию лигноцеллюлозного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002699991
Дата охранного документа: 11.09.2019
01.11.2019
№219.017.dd50

Штамм emericellopsis alkalina bilanenko & georgieva - продуцент антибиотиков - пептаиболов с антигрибной и антибактериальной активностью

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Emericellopsis alkalina депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F-1428. Штамм Emericellopsis alkalina ВКПМ F-1428 обладает способностью продуцировать пептаиболы, обладающие антигрибной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002704421
Дата охранного документа: 28.10.2019
Показаны записи 21-30 из 38.
04.04.2018
№218.016.30c0

Полусинтетические производные гелиомицина, ингибирующие опухолевый рост

Изобретение относится к 4-аминометильным производным гелиомицина, соответствующим формуле:
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002644780
Дата охранного документа: 14.02.2018
14.11.2018
№218.016.9ce0

Вращающийся парашют

Изобретение относится к вращающимся парашютам. Купол парашюта состоит из центральной части круглой формы, к которой с противоположных сторон прикреплены две лопасти и полотнища для укладки лопастей. Лопасти соединены между собой гибкими связями и уложены на нижнюю кромку центральной части вдоль...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002672222
Дата охранного документа: 12.11.2018
23.02.2019
№219.016.c7ab

Регулятор роста и развития сельскохозяйственных культур

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для регулирования роста и развития сельскохозяйственных культур с использованием биологически активных веществ. Применение композиции, содержащей биологически активную сумму тритерпеновых кислот и биологически активный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002321197
Дата охранного документа: 10.04.2008
08.03.2019
№219.016.d4ac

Штамм streptomyces roseolus вкпм s-1082 - продуцент линкомицина и способ получения линкомицина

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве антибактериального антибиотика линкомицина гидрохлорида, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми, и некоторыми...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002391396
Дата охранного документа: 10.06.2010
08.03.2019
№219.016.d4e4

Штамм nonomuraea roseoviolacea subsp. carminata (actinomadura carminata) - продуцент антибиотика карминомицина и способ получения карминомицина

Штамм Nonomuraea roseoviolacea subsp carminata (Actinomadura carminata) BKIIM-S1081 получен в результате многоступенчатого мутагенного воздействия нитрозометилбиуретка, метилнитрозогуанидина и гамма-лучей Co на исходный штамм № ВКПМ S-806 с последующим отбором мутантов на средах, содержащих...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002355757
Дата охранного документа: 20.05.2009
08.03.2019
№219.016.d4e6

Штамм streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini вкпм-s887 - продуцент блеомицина a и способ получения антибиотика блеомицина a

Изобретение относится к новому штамму - продуценту антибиотика блеомицина и его использованию в биосинтезе противоопухолевого антибиотика блеомицина А, эффективного при лечении плоскоклеточного рака и ряда других типов опухолей. Штамм-продуцент Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002355758
Дата охранного документа: 20.05.2009
08.03.2019
№219.016.d4ea

Штамм streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini вкпм-s1086 - продуцент блеомицетина и способ получения антибиотика блеомицетина

Изобретение относится к новому штамму-продуценту антибиотика блеомицетина и его использованию в биосинтезе противоопухолевого антибиотика блеомицетина гидрохлорида, используемого при лечении плоскоклеточного рака. Штамм-продуцент Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S1086 получен в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002358008
Дата охранного документа: 10.06.2009
15.03.2019
№219.016.e075

Штамм amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini - продуцент антибиотика ристомицина

Штамм Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini 8765 получен в результате мутантного преобразования свойств штамма Proactinomyces fructiferi var. ristomycini 5339 в результате последовательного трехступенчатого воздействия метилнитрозогуанидина, ультрафиолетовых и гамма-лучей Со на исходный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002392325
Дата охранного документа: 20.06.2010
22.03.2019
№219.016.ec39

Вращающийся парашют

Изобретение относится к вращающимся парашютам. Купол парашюта состоит из центральной части, к которой с противоположных сторон прикреплены лопасти и полотнища для укладки лопастей. Центральная часть имеет тормозное полотнище, которое имеет возможность перемещения по стропам от купола к коушу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682686
Дата охранного документа: 20.03.2019
29.03.2019
№219.016.eccb

Вращающийся парашют

Изобретение относится к вращающимся парашютам. Купол парашюта состоит из центральной части круглой, квадратной или многоугольной формы, к которой прикреплены диаметрально противоположные парные лопасти. Парные лопасти располагаются под разными углами по отношению к плоскости перпендикулярной к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682959
Дата охранного документа: 22.03.2019
+ добавить свой РИД