Результат интеллектуальной деятельности: Способ стимуляции адгезиогенеза в плевральной полости при политравмах с преимущественным поражением грудной клетки

Изобретение в области медицины, относящееся к хирургии и травматологии, в частности к торакальной хирургии.

Изобретение относится к способу стимуляции адгезиогенеза в плевральной полости при политравмах с преимущественным поражением грудной клетки путем их заполнения жировой тканью и трансформации ее в соединительную ткань.

При травме грудной клетки основным методом лечения является оперативный, направленный на стабилизацию реберного каркаса, необходимую в связи с тем, что нефиксированные отломки ребер приводят к повторному повреждению легкого и возникновению рецидивного пневмоторакса. Существует множество вариантов стабилизации реберного каркаса с использованием шин, пластин, аппаратов внешней фиксации [Котов И.И., Тителюева И.С. Методика наружной стабилизации грудной клетки при флотирующих переломах ребер // Вестник национального медико-хирургического Центра им. Н.И. Пирогова. - 2014. - Т. 9, №1. - С. 43-47]. Недостатком этих способов фиксации реберных отломков является то, что они могут быть выполнены только после стабилизации общего состояния пациента. Однако при сочетанной травме с преимущественным поражением грудной клетки, оперативное пособие не всегда возможно ввиду тяжести состояния больных, обусловленного поражением других жизненно важных органов.

Существуют способы увеличения количества фибробластов и/или их предшественников в дефектах тканей. Так, известны способы коррекции дефектов ткани с образованием соединительной ткани путем введения в дефект (рану) клеток жировой ткани. К ним относится использование аутологичных стромальных клеток жировой ткани в смеси с аутологичной костной крошкой для заполнения кистозных образований челюстей [Мельник Е.А. Оценка использования аутологичных стромальных клеток жировой ткани при хирургическом лечении кистозных образований челюстей. Автореф. дисс… к.м.н.. - Ставрополь. - 2011. - 22 с.].

Известно, что адипоциты, извлеченные из жировой ткани и помещенные в тканевой дефект, в условиях микроокружения могут трансформироваться в стволовые клетки и, далее, дифференцироваться в фибробласты [Кауров Я.В., Каурова Г.Н. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения сальника как источника стволовых клеток для стимуляции процесса регенерации // Нижегородский медицинский журнал. - №4. - 2005].

Наиболее близким к заявляемому способу является патент по применению адипоцитов, преадипоцитов и стволовых клеток для индукции или ускорения заживления раны и фармацевтическая композиция, содержащая их [Патент на изобретение РФ №2419441, Дата начала отсчета срока действия патента: 05.08.2004, Конвенционный приоритет: 07.08.2003 US 60/493,000, Дата публикации заявки: 20.08.2010. Авторы: Брейман-Уиксман Лиора (IL), Соломоник Инесса (IL)]. По заявляемому способу авторы предлагают использовать адипоциты в качестве источника стволовых клеток для регенерации тканей.

Недостатком данного способа является предложенное авторами введение адипоцитов только для кожных ран.

Для использования клеток жировой ткани, как источников стволовых клеток, предлагается способ стимуляции адгезиогенеза в плевральной полости при политравмах с преимущественным поражением грудной клетки путем их заполнения жировой тканью и трансформации ее в соединительную ткань, заключающийся в приготовлении 10% гомогенизированной взвеси жировой ткани в физиологическом растворе, адаптированной к введению через шприц, при этом гомогенизированную взвесь вводят точечно в плевральную полость в область перелома ребер субплеврально под париетальную плевру. Получение клеток жировой ткани для приготовления 10% гомогенизированной взвеси в физиологическом растворе представлено аутологичной жировой тканью реципиента, взятой из подкожной жировой клетчатки и/или сальника в асептических условиях операционной или перевязочной.

Пример.

В качестве примера был выполнен эксперимент на 23 нелинейных белых крысах обоего пола массой 180-210 г. Выбор, содержание животных, моделирование патологических процессов и выведение крыс из опыта осуществляли на основе базисных нормативных документов МЗ РФ и рекомендаций ВОЗ [Zutphen L.F., Baumans V., Beynen А.С. Principles of laboratory animal science. Amsterdam: Elsevier, 1993. 389 p].

У 13 животных опытной группы и 10 животных группы сравнения была воспроизведена травма грудной клетки, выполняемая следующим образом: под общим обезболиванием этаминалом (40 мг/кг) и рометаром (0,05 мл/кг) проводилась интубация трахеи для ИВЛ, после обработки операционного поля, в положении животного на правом боку, выполнялось послойное рассечение кожи, мягких тканей линейным разрезом от лопатки до реберной дуги на 2 сантиметра левее позвоночника. По достижении реберного каркаса проводили выделение с III по VI ребер при помощи оригинального двузубого распатора (оформлена заявка № от 2015 на полезную модель: «Двузубый реберный распатор для экспериментального моделирования травмы грудной клетки») и осуществляли полное поперечное пересечение ребер путем перекусывания ножницами. После послойного ушивания раны наглухо при помощи шприца с тупой иглой производили откачивание газа из плевральной полости до получения вакуума.

После воспроизведения травмы животным опытной группы в асептических условиях проводили изъятие 50 мг жировой ткани из подкожной жировой клетчатки передней брюшной стенки и гомогенизация в 450 мкл физиологического раствора на гомогенизаторе Minilys (Bertin Tec, USA). Полученную взвесь с помощью шприца вводили в область перелома ребер субплеврально под париетальную плевру. Животным группы сравнения субплеврально вводились 500 мкл физиологического раствора. Выведение животных из эксперимента осуществлялось на 30-ые сутки послеоперационного периода. Забор спаек проводили с максимальным сохранением точек прикрепления.

Для проведения морфологического исследования спайки фиксировали в 10% нейтральном формалине, материал заливали в парафин по стандартной методике, срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Масону, по Зербино. Морфометрический анализ был проведен в соответствии со сложившимися принципами количественных морфологических исследований. Микрофотографии сделаны с использованием микроскопа «Leica DM 100» с цифровой фотокамерой.

При исследовании плевральных спаек животных группы сравнения были обнаружены спаечные сращения, представленные рыхлой волокнистой соединительной тканью с участками лейкоцитарной инфильтрации и умеренным количеством лимфоцитов, макрофагов. Наличие лейкоцитов свидетельствует об активном воспалении в зоне спайки, а следовательно, о наличии риска развития бесконтрольного тотального спаечного процесса в плевральной полости.

У животных опытной группы плевральные спайки были зрелыми и, характеризовались преобладанием коллагеновых и эластических волокон, умеренной лимфогистиоцитарной инфильтрацией и редуцированным капиллярным руслом. Сформированные спайки локализовались в зоне перелома ребер и служили дополнительным фактором стабилизации реберного каркаса, при этом признаки воспаления в зоне спайки отсутствовали, что свидетельствовало о контролируемом адгезиогенезе при точечном введении гомогенезированной жировой ткани в плевральную полость в область перелома ребер субплеврально под париетальную плевру.

Заявляемый способ позволяет стимулировать адгезиогенез в плевральной полости при политравмах с преимущественным поражением грудной клетки, с формированием плевральных спаек, способствующих стабилизации легочного каркаса - с одной стороны, и скорейшему сращению ребер за счет стимуляции образования реберной мозоли - с другой. Получение клеток жировой ткани из аутологичной ткани реципиента позволяет избежать реакции отторжения введенной взвеси ткани иммунной системой. Использование подкожной жировой клетчатки в качестве источника пересаживаемой жировой ткани позволяет получить образцы клеток для аутотрансплантации щадящим методом без трудоемкой донорской операции. Использование гомогенизированной взвеси клеток и введение их в область перелома ребер субплеврально под париетальную плевру через шприц позволяют избежать полостной операции.