Способ прогнозирования длительности ремиссии у больных раком вульвы

Изобретение относится к медицине, к онкогинекологии и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы.

Рак вульвы выявляется в основном у пожилых женщин, у женщин менопаузального возраста, чаще всего в интервале 60-80 лет. Эта локализация доступна для визуального осмотра и, несмотря на это, малосимптомное течение заболевания в ранних стадиях, отсутствие профилактических осмотров и онконастороженности приводит к поздней обращаемости к специалисту. И как следствие этого, более 50% больных поступают с III-IV стадиями злокачественного процесса. Эффективность лечения на этих стадиях снижена (см. Пушкарев В.А., Мазитов И.М., Хуснутдинов Ш.М. Анализ клинического течения рака вульвы // Медицинский вестник Башкортостана. - 2012. - Т. 7, №2. - С. 87-90; см. Аглуллин И.Р., Панов А.В., Сафин И.Р., Ибрагимова Л.Ш. Опыт реконструктивно-пластических оперативных вмешательств в лечении местно-распространенных форм рака вульвы // Материалы VIII Всеросс. Съезда онкологов. Т.П. Вопросы онкологии. - 2013. - Т. 59, №3. - С. 691-692).

В силу особенностей анатомо-топографического строения наружных половых органов с чрезвычайно богатой сетью лимфатических сосудов, рак данной локализации является агрессивным, так как обладает склонностью к быстрому росту, метастазированию и рецидивированию. По данным литературы, общая 5-летняя выживаемость у больных раком вульвы не превышает 50%. Сложность представляет и лечение рецидивов рака вульвы, которые возникают у больных от 30 до 60% в течение первых 5 лет после окончания лечения (см. Турчак А.В. Рецидивы рака вульвы и результаты их терапии (20-летний опыт). // Онкология. - 2009. - Т. 11, №4, с. 312-313). Основными причинами летальных исходов являются несвоевременная диагностика и нерадикальность проведенного лечения, и больные, как правило, погибают от рецидивов и метастазов (см. Урманчеева А.Ф. Эпидемиология рака вульвы. Факторы риска и прогноза // Практическая онкология. - 2006. - №7(4). - С. 189-196; см. Франк Г.А. Рецидив злокачественной опухоли: понятие, сущность, терминология // Рос. онкол. Журн. - 2006. - №3. - С. 2-7).

Таким образом, поиск любых прогностических факторов эффективности лечения рака вульвы является актуальным на сегодняшний день.

Из патентных источников известен способ прогнозирования рецидива рака вульвы (см. патент RU №2532342, МПК G01N 33/53, опубл. 10.11.2014, бюл. №31), сущностью которого является то, что у больных раком вульвы перед началом лечения определяют содержание в крови больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ) и уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), при содержания БГЛ выше 11,8% и уровня ЦИК ниже 33,3 у.е. прогнозируют безрецидивный период в течение 5 и более лет, а при содержании БГЛ ниже 9,8% и ЦИК выше 42,7 у.е. прогнозируют развитие рецидива в ближайшие 2 года. Однако данный способ применяется для всех больных раком вульвы независимо от стадии.

Также известен способ прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы (см. патент RU №2517541 С1, МПК G01N 33/52, опубл. 27.05.2014, бюл. №15). Способ включает биохимическое исследование крови и отличается тем, что при контрольных осмотрах больных раком вульвы в эритроцитах крови определяют погруженность белков в липидный матрикс мембран эритроцитов, и при ее значении в пределах 0,21-0,35 у.е. оптической плотности прогнозируют появление рецидивов, а при 0,08-0,2 у.е. оптической плотности - продолжительное нахождение больных в состоянии ремиссии. Однако данный способ определяет уже наличие рецидива или его отсутствие на данный момент.

Известен способ прогнозирования безрецидивного периода после комплексного лечения рака вульвы (см. патент RU №2193776 C1, МПК G01N 33/48, опубл. 27.11.2002), сущностью которого является то, что у женщин менопаузального возраста с латерализацией опухоли определяют сторону расположения опухоли, возраст менархе, количество абортов и родов и длительность безрецидивного периода: при левосторонних локализациях прогнозируют в обратной зависимости от возраста менархе и количества абортов, при правосторонних локализациях - в прямой зависимости от возраста менархе и в обратной зависимости от количества родов. Способ позволяет индивидуально планировать лечебно-профилактические мероприятия, рационально использовать лекарственные средства, однако данный способ не обладает критериями прогноза эффективности лечения.

Из патентных источников известен способ оценки ангиогенных факторов при химиотерапии рака молочной железы (см. патент RU 2341198 С2, опубл. 20.12.2008, бюл. 35), сущностью которого является то, что после удаления опухоли оценку эффективности проводят определяя экспрессию ангиогенного фактора VEGF в цитоплазме опухолевых и эндотелиальных клеток удаленного операционного материала. Снижение экспрессии VEGF как в опухолевых клетках, так и на эндотелии сосудов свидетельствует о снижении ангиогенного потенциала опухоли под воздействием указанной химиотерапии. Однако данный способ применяется при раке молочной железы при неоадъювантной химиотерапии.

Техническим результатом предлагаемого нами изобретения является прогнозирование наступления короткой или длительной ремиссии у больных раком вульвы.

Технический результат достигается тем, что в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67, при значении Ki-67 в пределах 80-90%, р53 в пределах 66,3-76,5%, CD34 в пределах 5,16-5,78% прогнозируют короткую ремиссию, а при значении Ki-67 в пределах 7,6-9,8%, р53 в пределах 11,4-17%, CD34 в пределах 2,82-3,68% прогнозируют длительную ремиссию.

Изобретение способ прогнозирования длительности ремиссии у больных раком вульвы является новым, так как оно неизвестно из уровня медицины в области прогнозирования длительности ремиссии у больных раком вульвы.

Новизна изобретения заключается в том, что в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом определяют экспрессию пролиферативной активности Ki-67, фактора апоптоза (р53) и ангиогенного фактора (CD34) и прогнозируют длительность ремиссии.

В открытых источниках информации России, стран СНГ и зарубежья указаний на аналогичный способ прогнозирования течения опухолевого процесса у больных раком вульвы нами не обнаружено.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть воспроизведено и многократно повторено в любой клинической лаборатории лечебных учреждений системы здравоохранения.

Способ осуществляется следующим образом.

Материал (ткань) для исследования методом иммуногистохимии фиксируют 10% нейтральным формалином в течение 24 ч, заливают в парафин, готовят срезы толщиной 3-4 мкм на ротационном микротоме Асси-Cut SRM 200 фирмы Sakura (Япония). Срезы наносят на высокоадгезивные стекла и высушивают вертикально в термостате при температуре 55-56°C в течение 10 ч.

Иммуногистохимическое исследование проводят на срезах с парафиновых блоков, предназначенных для стандартного морфологического исследования. Использованные в работе первичные антитела и их разведения представлены в таблице 1.

Парафиновые срезы депарафинируют и регидратируют по стандартной методике. "Демаскировку" антигенов проводят в PT-Link Thermo. Протокол включает в себя предварительный нагрев до 65°C, восстановление антигена в течение 20 минут при температуре 97°C и дальнейшее охлаждение до 65°C. Затем стекла промывают в течение 1-3 минут TBS-буфером (Dako) и помещают в автостейнер Thermo Scientific для окрашивания в автоматическом режиме. Для визуализации иммуногистохимической реакции используют систему детекции Reveal Polyvalent HRP-DAB Detection System. Срезы докрашивают гематоксилином Майера, для заключения используют бальзам Bio-Mount. Полуколичественно оценивают экспрессию маркеров пролиферативной активности Ki-67, фактор апоптоза (р53) и ангиогенный фактор (CD34).

Проведенное ИГХ-исследование у больных раком вульвы с короткой и длительной ремиссией позволило считать факторами прогноза пролиферативную активность Ki-67, фактор апоптоза (р53) и ангиогенный фактор (CD34) (табл. 2).

Короткая ремиссия - от 5 до 20 месяцев, длительная - от 3 до 18 лет.

Приводим клинический пример применения способа.

Пример 1

Больная С., 59 лет.

В феврале 2009 года обратилась в гинекологическое отделение РНИОИ с жалобами на наличие образования в области наружных половых органов. При обследовании: экзофитная опухоль верхней трети большой половой губы диаметром 1,5 см.

Гистологический анализ (ГА): высокодифференцированный плоскоклеточный рак с ороговением. Паховые лимфоузлы не увеличены.

Диагноз рак вульвы, стадия I.

В марте 2009 г. выполнена операция - вульэктомия. Послеоперационный ГА - высокодифференцированный плоскоклеточный рак с ороговением, инвазия 3 мм. Выполнено иммуногистохимическое исследование с парафиновых блоков: пролиферативная активность Ki-67 - 8,2%, фактор апоптоза р53 - 14%, фактор ангиогенеза CD34 - 3,2 (количество сосудов в поле зрения). На основании представленных данных ИГХ больная отнесена к группе с длительной ремиссией.

Больная находится под регулярным диспансерным наблюдением уже в течение 7 лет без признаков рецидива.

Пример 2

Больная К., 71 год, поступила в отделение гинекологии в июле 2015 г. с диагнозом рак вульвы, стадия 2, язвенная форма с поражением клитора.

ГА - низкодифференцированный плоскоклеточный рак без ороговения. Паховые лимфоузлы не увеличены.

В августе 2015 г. выполнена операция - вульэктомия. Послеоперационный ГА - низкодифференцированный плоскоклеточный рак без ороговения, инвазия 7 мм.

Выполнено иммуногистохимическое исследование с парафиновых блоков: пролиферативная активность Ki-67 - 85%, фактор апоптоза р53 - 70%, фактор ангиогенеза CD34 - 5 (количество сосудов в поле зрения). Таким образом, по данным иммуногистохимических показателей больная отнесена к группе с короткой ремиссией.

Больная была подвергнута наружной лучевой терапии на область регионарных лимфоузлов и первичный очаг в дозе 40 Гр.

Больная регулярно 1 раз в 3 месяца находилась под диспансерным наблюдением. Через 10 месяцев возник рецидив. ГА - низкодифференцированный плоскоклеточный рак.

Больной рекомендовано соответствующее лечение по поводу рецидива рака вульвы.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть воспроизведено и многократно повторено в любых патологоанатомических отделениях лечебных учреждений системы здравоохранения.