Способ повышения иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологического созревания

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности ветеринарной фармакологии.

Известно использование иммуностимулирующих веществ на основе растительного сырья, например эхинацеи (Bauer R., Wagner Н. Echinacea species as potential immunostimulator drugs. In: Wagner H., Farnsworth N.R. (eds.), economic and Medicinal Plant Research. Vol. 5 New York: Akademic Press, 1991, p.p. 253-351) для профилактики иммунодефицита организма.

Наиболее близким техническим решением является способ профилактики иммунодефицита у новорожденных телят (см. патент РФ №2349332, Кл. A61K 36/00 (2006.01) и A61K 33/38 (2006.01)), включающий использование иммуностимулирующего препарата в виде смеси водно-спиртовой настойки из травы эхинацеи пурпурной и корневища девясила, приготовленной на основе 70% этилового спирта при соотношении 1:5 и разбавленной до 30 об. % дистиллированной водой, и водного раствора серебра, разбавленного в кипяченой воде, который животному дают перорально один раз в день за 20-30 мин до кормления.

Недостатком известного предложения является ограниченное действие.

Техническим результатом является повышение эффективности профилактики иммунодефицита.

Технический результат достигается тем, что в способе повышения иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологической созревания, включающем использование иммуностимулирующего препарата в виде смеси водно-спиртовой настойки из травы эхинацеи пурпурной и корневища девясила, приготовленной на основе 70 об. % этилового спирта при соотношении 1:5 и разбавленной до 30 об. % дистиллированной водой, и водного раствора серебра, разбавленного в кипяченой воде, который животному дают перорально один раз в день за 20-30 мин до кормления, согласно изобретению телкам в период наступления физиологической зрелости в 15-16-месячном возрасте дают в течение 20-30 дней, в дозе 0,10-0,12 мл на 1 кг массы животного, разбавленную со 130-150 мл кипяченой воды на 180-220 кг массы животного водно-спиртовую настойку, которую готовят следующим образом: 2 части эхинацеи пурпурной, 1 часть корневища девясила и 1 часть цветков календулы лекарственной смешивают с 70 об. % этилового спирта, настаивают в течение 14-15 дней при температуре 36-38°С, а водный раствор серебра вводят в водно-спиртовую настойку в дозе не более 200 мл, что составляет не более 8 мг ионов серебра, со 100-120 мл кипяченой воды на 30-40 кг массы животного.

Новизна заявленного предложения обусловлена тем, что за счет сочетанного применения каргдэхина (водно-спиртовая настойка из травы эхинацеи пурпурной, корневища девясила и цветов календулы с водным раствором серебра) обеспечивается повышение иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологического созревания.

Способ повышения иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологического созревания осуществляется следующим образом: телкам дают перорально с 15-16-месячного возраста в течение 20-30 дней один раз в день за 20-30 минут до кормления в дозе 0,10-0,12 мл на 1 кг массы животного, разбавленную со 130-150 мл кипяченой воды на 180-220 кг массы животного водно-спиртовую настойку из травы эхинацеи пурпурной, корневища девясила и цветов календулы с водным раствором серебра, имеющую рабочее название «Каргдэхин», которую готовят следующим образом: 2 части эхинацеи пурпурной, 1 часть корневища девясила и 1 часть цветков календулы лекарственной смешивают с 70 об. % этилового спирта в соотношении 1:5, настаивают в течение 14-15 дней при температуре 36-38°С, а водный раствор серебра вводятв настойку в дозе не более 200 мл, что составляет не более 8 мг ионов серебра, со 100-120 мл кипяченой воды на 30-40 кг массы животного.

Пример конкретного осуществления способа повышения иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологического созревания

Предварительно готовят настойку на основе сбора травы эхинацеи, корневища солодки и цветков календулы, сырье закупали на предприятии северокавказского ЗОС ВИЛАР. Высушенное сырье измельчали, корневища, стебли, листья - до 3 мм, цветки - до 5 мм, что смешивали в определенных массовых соотношениях, указанных выше в рецепте. Затем готовили водно-спиртовую настойку сбора. Для этого брали 1 часть сырья, добавляли 5 частей 70 об. % этилового спирта (т.е. в разведении 1:5), перемешивали, помещали в посуду из темного стекла, плотно закрывали и помещали в термостат при 36-38°C на 14-15 дней, периодически перемешивали. Затем процеживали через бумажный фильтр, предварительно хорошо отжав сырье. Полученную настойку доводили до 30 об. % концентрации дистиллированной водой.

Затем телкам в период наступления физиологического созревания с 15-16-месячного возраста в течение 20-30 дней один раз в день за 20-30 минут до кормления давали водно-спиртовую настойку в сочетании с водным раствором серебра. Водно-спиртовую настойку в дозе 0,1-0,12 мл на 1 кг массы животного, разбавленную со 130-150 мл кипяченой воды на 180-220 кг массы животного, а водный раствор серебра в дозе не более 200 мл, что составляет не более 8 мг ионов серебра на 30-40 кг массы животного, со 130-150 мл кипяченой воды, перорально.

Используемый водный раствор серебра получали в однородном электрическом поле между серебряными электродами (Ср-9,999). Заданные параметры режима (расстояние между электродами, температура процесса электролиза, сила тока и напряжение) обеспечивают переход ионов серебра в дистиллят с образованием вокруг них сольватной оболочки из дипольных молекул воды. Накопление (концентрация) в жидкости своеобразных «прикрепленных» к молекулам воды ионов серебра производят в движущемся потоке жидкости, находящейся в режиме периодического торможения. Полученный водный раствор серебра широкого спектра действия по внешнему виду представляет собой жидкость без цвета и запаха с кисловатым вкусом, обладает высокой микробицидной активностью вещества при концентрации ионов серебра от 0,001 мг/л, что значительно ниже допустимой санитарной нормы (0,01 г/л), против культур Candida albicans, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli. Устойчивые микробицидные свойства ионов серебра усиливаются его кислой реакцией.

Используемый водный раствор серебра разработан в соответствии с ТУ 9154-001-10073810-2002, «Концентрат гидратированного серебра химически чистый», и производителем его является ООО «Кубаньагроток». Иммуномоделирующие свойства препарата Каргдэхин in vitro.

Изучение иммуномоделирующих свойств каргдэхина осуществляли in vitro с периферической кровью телок. В качестве эталона был использован известный иммуномодулятор тимического происхождения - тактивин.

В предварительных экспериментах были подобраны оптимальные дозы содержания тактивин - 6,7⋅10^-4 мл, каргдэхина - 4⋅10^-3 мл.

Эффективность препаратов оценивали по влиянию на розеткообразование у лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов. Для этого розеткообразование осуществлялось с добавлением препаратов в цельную кровь.

Результаты исследования свидетельствовали о том, что тактивин в дозе 6,7⋅10^-4 в 1 мл при инкубации в течение 30 минут оказывал стимулирующее влияние на количество Е-РОЛ, умеренное повышение ЕАС-РОЛ у животных.

В результате исследований выявлено, что уровень Е-РОЛ (Т-лимфоциты) в абсолютном содержании составляет 4316,9±114,5 в 1 мм³, что в 1,3 раза выше, чем в контрольной группе животных (3342,5±134,2 в 1 мм³). Аналогичное действие препарата отмечено по отношению к ЕАС-РОЛ. Так, абсолютные значения количества ЕАС-РОЛ (В-лимфоциты) были в 1,3 раза выше, чем в контроле (2403,0±111,2 в 1 мм³). Инкубация с тактивином не оказала достоверного влияния на содержание поздних Е-РОН и приводила к незначительному снижению ранних Е-РОН.

Инкубация клеток с каргдэхином в концентрации 4⋅10^-3 мл вызывала повышение абсолютного количества Т-лимфоцитов в реакциях розеткообразования в 1,4 раза по отношению к таковому показателю у контрольной группы. Возрастал и уровень ЕАС-РОЛ (В-лимфоцитов) с 1907,0±117,2 до 2534,6±87,6 в 1 мм³, что в 1,3 раза выше контроля. Отмечена также тенденция к увеличению количества поздних Е-РОН, тогда как увеличение ЕАС-РОН было в 1,14 раза. Наряду с этим выявлен супрессирующий эффект по отношению к ранним Е-РОН (табл. 1).

Таким образом, полученные данные позволили сделать вывод о том, что тактивин и каргдэхин в системе in vitro оказывают иммунопротективные эффекты, однако фитопрепарат проявлял более выраженное действие. При этом отмечено, что при действии каргдэхина происходило более выраженное розеткообразование у Т- и В-лимфоцитов, кроме того, активировался рецепторный аппарат у нейтрофильных гранулоцитов.

Анализ полученных данных позволил установить, что тактивин и каргдэхин проявляли сходные иммунопротективные эффекты при инкубации с ними иммунокомпетентных клеток. Причем максимальное стимулирующее влияние на количество лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами барана (Т-лимфоциты) и C3-компонентом комплемента (В-лимфоциты), отмечено при инкубации лимфоцитов с каргдэхином, тогда как тактивин оказывал более выраженное влияние на количество поздних Е-РОН и ЕАС-РОН у телок. Данное положение свидетельствовало о позитивном влиянии рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток.

Иммунобиологические свойства препаратов тактивина и каргдэхина in vivo на телках

Телкам с 15-16-месячного возраста препарат каргдэхин применяли перорально в течение 20-30 дней один раз в день за 20-30 минут до кормления в дозе 0,10-0,12 мл на 1 кг массы животного, разбавленный со 130-150 мл кипяченой воды на 180-220 кг массы животного, после чего исследовали морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови животных. Тактивин вводили подкожно 0,02 мл/кг в течение 3-х дней.

Результатами исследования общеклинических показателей крови установлено, что у животных, получавших тактивин (опыт 1), увеличивалось количество эритроцитов на 9%, а каргдэхин (опыт 2) - на 16% по отношению к контрольной группе; лейкоцитов в первой опытной группе - на 15%, а во второй опытной группе - на 16%. В то же время происходило снижение количества лимфоцитов в опытных группах (на 11% и 14% соответственно) за счет увеличения сегментоядерных нейтрофилов (в 1,3 раза и 1,4 раза соответственно) относительно контрольной группы животных (табл. 2).

При биохимических исследованиях сыворотки крови телок были получены следующие данные: общий белок у животных контрольной группы составил 71,0 г/л, в первой опытной группе данный показатель был выше контрольной группы на 22%, во второй опытной группе - на 27%.

Содержание глюкозы в крови у контрольной группы составило 5,36 ммоль/л, у телок первой опытной группы - 5,89 ммоль/л, что на 9% выше, чем в контроле, у второй опытной группы - 6,80 ммоль/л или на 27% выше, чем в контроле.

Содержание мочевины в контроле составило 4,32 ммоль/л, в первой опытной группе - 3,05 ммоль/л (на 29% ниже относительно контроля), во второй опытной группе - 2,65 ммоль/л (на 39% ниже относительно контроля). Содержание холестерина у всех групп было примерно на одинаковом уровне.

Из полученных результатов можно сделать вывод о том, что применение тактивина и каргдэхина стимулировало обменные процессы в организме и повышало естественную резистентность животных.

Изучение бактериального фагоцитоза показало, что процент активно фагоцитирующих нейтрофилов в контрольной группе животных составил 43%, в первой и второй опытных группах - 50% и 55% соответственно (на 16% и 28% выше контрольной группы); поглотительная способность нейтрофильных гранулоцитов в контрольной группе составила 2,54, а у первой опытной группы - 2,67 (на 5% выше, чем в контроле), во второй опытной группе - 3,9 (на 53% выше, чем в контроле). Процент переваривания нейтрофильных гранулоцитов в контрольной группе составил 67%, в первой опытной группе - 72% (на 7% выше), во второй опытной группе - 78% (на 16% выше контрольной группы).

Происходило увеличение содержания Т-лимфоцитов в первой опытной группе на 65%, во второй опытной группе - на 80% относительно контрольной группы. Количество В-лимфоцитов увеличилось в первой опытной группе на 75%, во второй опытной группе - на 84% относительно контрольной группы животных.

Кроме того, препарат каргдэхин способствовал повышению воспроизводительной функции, что свидетельствовало о своевременном осеменении животных и благополучном исходе беременности, получении здорового приплода.

Следовательно, из результатов проведенных исследований можно сделать вывод, что препараты тактивин и каргдэхин оказывали стимулирующее действие на обменные процессы и иммунную систему животных, а именно на выработку эритроцитов, гемоглобина, общего белка и повышали активность Т- и В-лимфоцитов, что позволяет рекомендовать использование каргдэхина в животноводстве для повышения иммунобиологической реактивности организма телок в период подготовки полового созревания, кроме того, препарат каргдэхин способствует повышению воспроизводительной функции, что свидетельствует о своевременном осеменении животных и благополучном исходе беременности, получении здорового приплода.