Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОЙ ТВЕРДОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ, СОДЕРЖАЩЕЙ АМЛОДИПИН И ВАЛСАРТАН

Изобретение относится к области хроматографии и может быть использовано для анализа и исследования лекарственных препаратов на основе амлодипина и валсартана, обладающих схожестью химической структуры и сорбционных свойств. Предложен способ разделения пиков амлодипина и валсартана способом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при использовании в качестве неподвижной фазы октадецилсилил силикагеля, а в качестве подвижной фазы - смесь воды, метанола и ацетонитрила, содержащая ионпарную добавку (триэтиламин). Способ позволяет обеспечить высокую селективность разделения.

Изобретение относится к области хроматографии и может быть использовано для разделения комбинированных лекарственных препаратов, в частности комбинации амлодипина и валсартана на амлодипин основание и валсартан. Амлодипин является лекарственным средством, относящимся к производным дигидропиридина, и представляет собой блокатор медленных кальциевых каналов II поколения, оказывающий антиангинальное и гипотензивное действие. Валсартан - блокатор рецепторов ангиотензина II семейства сартанов, антигипертензивного действия. Комбинация данных средств широко распространена и используется в качестве средств для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.

Основной задачей практикующих специалистов в области хроматографии является разделение всех солютов за приемлемое время. На разделение в ВЭЖХ влияют многочисленные параметры (например, параметры колонки, характеристики ее упаковки, состав элюента, температура, тип буфера, pH, природа взаимодействия растворитель-солют). Выбор оптимальных условий разделения в ВЭЖХ при разработке новых методик анализа является достаточно сложной задачей, т.к. необходимо учесть большое число факторов, которые часто зависят друг от друга. Кроме того, в ВЭЖХ отсутствуют устойчивые модели процессов разделения, которые могли бы использоваться при разработке любой методики разделения солютов.

Особенно сложным, но в то же время наиболее актуальным, является разделение многокомпонентных сложных смесей близких по свойствам соединений. Несмотря на значительный прогресс в области применения математических методов в химии, вопрос о выборе оптимальных условий разделения многокомпонентных смесей солютов остается не решенным окончательно. Решение конкретной задачи разделения включает как априорный выбор варианта ВЭЖХ, основанный на данных о физико-химических свойствах разделяемых солютов и свойствах стационарной и подвижной фазы, так и последующую оптимизацию условий разделений: состава подвижной фазы, pH, скорости подвижной фазы, температуры и т.д.

Одним из таких сложных многокомпонентных составов, представляющим интерес специалистов в области фармацевтической промышленности и химического анализа, является эффективная гипотензивная комбинация валсартана и амлодипина.

Из уровня техники известно о существовании фармакопейных статей на субстанции амлодипина безилат, валсартан и их комбинаций. Так, в Европейской Фармакопее 7.0 описаны методики анализа амлодипина безилат (Европейская Фармакопея. В 2 томах. Том 2, стр. 1906-1907) и валсартана (Европейская Фармакопея. В 2 томах. Том 2, стр. 2120-2121).

Также методики хроматографического анализа данных субстанций (препаратов) и их комбинаций описаны в Американской Фармакопее 2013 (the United States Pharmacopoeia (USP) and the National Formulary (NF) (USP 36 NF 31)) и Британской Фармакопее 2009 (British Pharmacopoeia).

В частности, описаны следующие субстанции и препараты:

- амлодипина безилат субстанция (USP 36 NF 31, Official Monographs, Amlodipine, р. 2466-2467),

- амлодипина безилат таблетки (USP 36 NF 31, Official Monographs, Amlodipine, р. 2467-2468),

- комбинация амлодипина безилат и беназеприла гидрохлорид в капсулах (USP 36 NF 31, Official Monographs, Amlodipine, р. 5934-5936),

- валсартан субстанция (USP 36 NF 31, Official Monographs, Valsartan, р. 5537-5539),

- валсартан таблетки (USP 36 NF 31, Official Monographs, Valsartan, р. 5539-5540),

- комбинация валсартана и гидрохлортиазида в таблетках (USP 36 NF 31, Official Monographs, Valsartan, р. 5540-5542),

- амлодипина безилат (British Pharmacopoeia Volume I & II, Monographs: Medicinal and Pharmaceutical Substances Amlodipine Besilate, p. 2-4).

Из предшествующего уровня техники способов хроматографического анализа комбинации валсартана и амлодипина выявить не удалось.

Специалистам в области химического анализа известно, что при количественном определении амлодипина и валсартана в комбинированной твердой лекарственной форме способом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии существует проблема хроматографического разделения пиков амлодипина и валсартана, которые при элюировании на колонке, заполненной октадецилсилил силикагелем выходят с низким коэффициентом разрешения и имеют практически одинаковые времена удерживания.

Так, при стандартном проведении хроматографии способом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии при обычных условиях: колонка - Luna С18 (2), зернение 5 мкм, размеры 150×4.6 мм; скорость потока ПФ=1.5 мл/мин; температура = 45 градусов по Цельсию; длина волны = 254 нм; ПФ А: в м.к. на 1000 мл + 10 мл триэтиламина + вода pH 2.8 (подкисленная ортофосфорной кислотой) до метки; ПФ В: метанол-ацетонитрил (7:3); изократический режим - ПФ А:ПФ В (1:1) получали хроматограммы с неразделяемыми пиками амлодипина и валсартана (Фиг. 1).

Такое поведение амлодипина и валсартана во время проведения анализа можно объяснить схожестью их химического строения и сорбционных свойств.

Таким образом, существует необходимость исследования и разработки способов эффективного хроматографического разделения двухкомпонентной смеси валсартана и амлодипина.

Задачей настоящего изобретения является разработка хроматографического способа разделения амлодипина и валсартана, обладающего высокой селективностью.

Способ осуществляют с использованием ультрафиолетового спектрофотометрического детектора. В процессе подбора условий и способов хроматографического разделения амлодипина и валсартана авторами настоящего изобретения варьировались следующие параметры: тип сорбента хроматографической колонки, режим элюирования, скорость потока подвижной фазы, состав подвижной фазы, температура хроматографической колонки, длина волны детектирования. Так, при хроматографировании на колонках, заполненных октилсилилсиликагелем или нитрильным силикагелем, при фиксированных остальных параметрах, были получены результаты, неудовлетворящие тесту «Проверка пригодности хроматографической системы». При хроматографировании на колонках, заполненных октадецилсилил силикагелем из водно-ацетанитрильно-метанольных растворов, когда при разделении происходит сорбция компонентов лекарственной формы (амлодипина и валсартана) на колонках, удалось получить удовлетворительные результаты. При выборе состава подвижной фазы использовались различные концентрации ионпарных добавок (от 0,1% до 5%) к водной фазе и различное соотношение растворителей (метанол/ацетонитрил) в органической фазе. Температуру термостатирования хроматографической колонки варьировали от 25°C до 50°С. При высоких температурах (более 40°С) наблюдалось уменьшение времен удерживания исследуемых компонентов и соответственно уменьшение разрешения между пиками. При комнатной температуре 25°С фактор асимметрии пика амлодипина незначительно увеличивался. Таким образом, была выбрана температура термостатирования колонки 30°С.

На Фиг. 2 приведена наиболее оптимальная хроматограмма, показывающая разделение между пиками амлодипина (время удерживания 10,1 мин) и валсартана (время удерживания 14,9 мин). Хроматограмма получена при использовании ОФ ВЭЖХ на колонке Luna С18 (2) размером 150×4,6 мм, заполненной октадецилсилил силикагелем зернением 5 мкм. Режим элюирования градиентный (0 мин - 50% подвижная фаза А, 50% подвижная фаза В; 3 мин - 50% подвижная фаза А, 50% подвижная фаза В; 15 мин - 30% подвижная фаза А, 70% подвижная фаза В; 28 мин - 30% подвижная фаза А, 70% подвижная фаза В; 28,1 мин - 50% подвижная фаза А, 50% подвижная фаза В; 35 мин - 50% подвижная фаза А, 50% подвижная фаза В) с использованием ионпарной добавки к подвижной фазе в количестве 1%. В качестве органического модификатора подвижной фазы использована смесь метанола и фаз А и В. Подвижную фазу А готовили следующим образом: около 500 мл воды помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 10 мл триэтиламина, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. pH полученного раствора доводят до 2,8±0,05 ортофосфорной кислотой концентрированной. Подвижную фазу В готовили следующим образом: смешивают метанол и ацетонитрил в объемных соотношениях 7:3. Поток подвижной фазы 1 мл/мин, длина волны детектирования составила 237 нм, как наиболее подходящая для определения амлодипина и валсартана в комбинированном препарате. Достоинством данной методики является хорошее разрешение между пиками амлодипина и валсартана (около 17), высокое число теоретических тарелок для обоих компонентов (более 20000), а также сравнительно небольшое время хроматографирования (16 минут), позволяющее достаточно быстро делить компоненты.

Подобного способа хроматографического разделения комбинированной твердой лекарственной формы, содержащей амлодипин и валсартан, из предшествующего уровня техники выявить не удалось.

Таким образом, в результате выбора способа хроматографического разделения указанных веществ, экспериментальным путем были подобраны оптимальные условия хроматографического анализа методом ВЭЖХ. В соответствии с полученными данными анализ проводили на хроматографической колонке размером 150×4,6 мм, заполненной сорбентом Luna С18 (2) с размером частиц 5 мкм. В качестве растворителя пробы были использованы метанол и смесь из подвижных фаз А и В в объемном соотношении 1:1, температура колонки около 30 градусов, детектирование осуществляли при длине волны 237 нм, режим хроматографирования - градиентный. В предложенных условиях время удерживания амлодипина составило около 10 мин, валсартана около 15 мин. Данная методика отвечает требованиям теста «Проверка пригодности хроматографической системы», а именно - разрешение между пиками амлодипина и валсартана составило не менее 2,0;

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пикам амлодипина и валсартана, не менее 2000 теоретических тарелок соответственно;

- относительные стандартные отклонения для площадей пиков амлодипина и валсартана не более 2,0% соответственно;

- факторы асимметрии пиков амлодипина и валсартана не более 2,0 соответственно.

Таким образом, предложенный способ удовлетворяет стандартным требованиям проверки пригодности хроматографической системы, позволяет разделить пики амлодипина и валсартана и произвести корректный количественный расчет данных действующих веществ в анализируемой пробе за сравнительно небольшое время анализа.