×
13.01.2017
217.015.7075

Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МАЛОНОВОГО ДИАЛЬДЕГИДА В ВЕГЕТАТИВНЫХ ОРГАНАХ РАСТЕНИЙ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способу определения малонового диальдегида в вегетативных органах черешни, винограда, ореха грецкого и проростках озимой пшеницы. Для этого проводят экстракцию биологического материала 96% спиртом и с последующим центрифугированием. Далее супернатант обрабатывают 0,5%-ным водным раствором тиобарбитуровой кислоты и инкубируют 30 мин при 50°C. После охлаждения реакционную смесь центрифугируют. Содержание малонового диальдегида определяют методом капиллярного электрофореза в кварцевом капилляре с внутренним диаметром 75 мкм и эффективной длиной 0,5 м. Анализ проводят при длине волны 254 нм в токе электролита, содержащего 0,33% масс. борной кислоты и 0,05% масс. тетрабората натрия при положительной полярности напряжения. Расчет проводят с учетом того, что на одну молекулу малонового альдегида расходуется две молекулы тиобарбитуровой кислоты. Изобретение позволяет проводить количественное определение концентрации малонового диальдегида, который служит маркером оксидативного стресса растений. 1 табл., 4 ил., 4 пр.

Изобретение относится к аналитической химии альдегидов, в частности к способу определения малонового диальдегида.

Малоновый диальдегид возникает в организме при деградации полиненасыщенных жиров активными формами кислорода и служит маркером перекисного окисления жиров и оксидативного стресса [Молекулярно-генетические и биохимические методы в современной биологии растений / под ред. Вл.В. Кузнецова, В.В. Кузнецова, Г.А. Романова. - М.: Бином. Лаборатория знаний, 2012. - 487 с.].

Известно, что для выделения и изучения малонового диальдегида используют различные методы, основанные на получении окрашенного триметинового комплекса малонового диальдегида с тиобарбитуровой кислотой, количество которого определяется по оптической плотности при 532 нм.

Для выделения малонового диальдегида в сыворотке крови ее инкубируют 30 мин при температуре 40°C, реакцию останавливают 3 мМ раствором дигидрокверцетина с последующим добавлением 1%-ного раствора трилона X-100, 0,6 М раствора HCl и 0,06 М рабочего раствора тиобарбитуровой кислоты, смесь которых нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Окраску раствора стабилизируют 5 мМ раствором трилона Б и смесью этанола с хлороформом в соотношении (7:3). В качестве контроля используют образец, содержащий 0,06 М рабочего раствора тиобарбитуровой кислоты и бидистиллированную воду, которую добавляют вместо экстракта ткани. Оптическую плотность растворов измеряют при 532 нм. Контролем служит пробирка, в которую добавляют все эти же растворы, а вместо сыворотки - бидистиллированную воду. В расчетах концентрации малонового диальдегида используют коэффициент поглощения 156 мМ-1см-1 [Рогожин В.В., Курилюк Т.Т. Повышение чувствительности метода определения концентрации малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Тезисы VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004». Устные доклады. Секция 5. Анализ биологических, медицинских и фармацевтических объектов // http:www.anchem.ru/literature/books/asbv-2004/095.asp].

Наиболее близким к заявляемому способу техническим решением является способ определения малонового диальдегида в растениях. Для этого растительный материал гомогенизируют в 20%-ной трихлоруксусной кислоте, центрифугируют и в супернатант добавляют 0,5%-ную тиобарбитуровую кислоту в 20%-ной трихлоруксусной кислоте и эту смесь инкубируют 30 мин при 95°C. В качестве контроля используют раствор тиобарбитуровой кислоты в трихлоруксусной кислоте [Молекулярно-генетические и биохимические методы в современной биологии растений / под ред. Вл.В. Кузнецова, В.В. Кузнецова, Г.А. Романова. - М.: Бином. Лаборатория знаний, 2012. - 487 с.].

Недостатки способа: при взаимодействии альдегидов с нуклеофилами образуются вещества, из которых альдегиды могут легко регенерироваться под действием кислоты, что снижает точность их количественного определения [Реутов О.А. Органическая химия. - Т. 3. - М.: Бином. Лаборатория знаний, 2004. - С. 10-134].

Малоновый диальдегид вступает в реакцию с тиобарбитуровой кислотой, образуя красный флуоресцентный состав, что позволяет проводить лишь приблизительный спектроморфометрический анализ содержания малонового диальдегида [Nair V., O′Neil C.L., Wang P.G. "Malondialdegyde" Enciclopedia for organic synthesis, 2008, John Wiley & Sons, New York. Doi: 10.1002/047084289X.rm013.pub 2 Article Online Posting Data: march 14. 2008].

Задачей изобретения является определение малонового диальдегида методом высокоэффективного капиллярного электрофореза для повышения точности обеспечения экспрессных и достоверных количественных результатов при минимальных затратах на пробоподготовку и выполнение анализа.

Техническим результатом при использовании предлагаемого изобретения является экспрессность и достоверность количественного определения малонового диальдегида методом капиллярного электрофореза с применением нетоксичных и доступных реактивов для проведения анализа.

Технический результат достигают за счет того, что способ определения малонового диальдегида предусматривает экстракционную пробоподготовку образца биологического материала 96%-ным этанолом, затем после экстракции и центрифугирования к супернатанту добавляют 0,5%-ный водный раствор тиобарбитуровой кислоты и реакционную смесь инкубируют 30 мин при 50°C, охлаждают, центрифугируют, содержание малонового диальдегида определяют по убыли количества тиобарбитуровой кислоты, пошедшей на реакцию, методом капиллярного электрофореза в кварцевом капилляре эффективной длиной 0,5 м, внутренним диаметром 75 мкм с использованием для анализа водного ведущего электролита, содержащего 0,33% масс. борной кислоты, 0,05% масс. тетрабората натрия при положительной полярности напряжения и длине волны детектирования 254 нм.

Для калибровки прибора используют стандартные водные растворы тиобарбитуровой кислоты.

Способ отличается тем, что с целью обеспечения экспрессности и достоверности анализа для выделения малонового диальдегида из растительной ткани образец гомогенизируют в 96% этаноле, затем после экстракции и центрифугирования к супернатанту добавляют 0,5%-ный водный раствор тиобарбитуровой кислоты и содержание малонового диальдегида определяют по убыли количества тиобарбитуровой кислоты, пошедшей на реакцию, методом капиллярного электрофореза.

Поставленная задача достигается за счет того, что для выделения малонового диальдегида из растительной ткани используется 96% этанол с последующим определением содержания малонового диальдегида по убыли количества тиобарбитуровой кислоты, пошедшей на реакцию с образованием триметинового комплекса, с учетом того, что на одну молекулу малонового диальдегида расходуется две молекулы тиобарбитуровой кислоты.

В результате проведенных исследований и сравнения с аналогом установлено, что предлагаемый способ определения содержания малонового альдегида в вегетативных органах, включающий экстракцию малонового диальдегида из растительной ткани 96% этанолом в течение 30 мин с последующим центрифугированием и инкубированием реакционной смеси экстракта с 0,5%-ным водным раствором тиобарбитуровой кислоты в течение 30 мин при 50°C и определением содержания малонового диальдегида по убыли количества тиобарбитуровой кислоты, пошедшей на реакцию с образованием триметинового комплекса, с учетом того, что на одну молекулу малонового альдегида расходуется две молекулы тиобарбитуровой кислоты, позволяет достичь объективного, экспрессного определения массового содержания малонового диальдегида в биологических пробах.

Преимущества заявляемого способа заключаются в использовании нетоксичных и доступных реактивов при пробоподготовке, получении более стабильного триметинового комплекса вследствие использования водного раствора тиобарбитуровой кислоты, снижения температуры реакционной смеси с 95°C до 50°C, что снижает потери от испарения реактивов, и осуществлении анализа на системах капиллярного электрофореза, например серии «Капель», обеспечении объективности и достоверности анализа образцов, стабильности во времени ведущего электролита, позволяющего обеспечить эффективное разделение анализируемого компонента.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Определение содержания малонового диальдегида методом капиллярного электрофореза

Согласно способу прототипа 100 мг растительного материала гомогенизируют в 1,5 см3 20% трихлоруксусной кислоты, центрифугируют при 10000 g в течение 15 мин при 4°C. К отобранным 0,3 см3 супернатанта добавляют 1,2 см3 0,5% тиобарбитуровой кислоты в 20% трихлоруксусной кислоте. Реакционную смесь инкубируют 30 мин при 95°C, охлаждают, центрифугируют 15 мин при 10000 g. Оптическую плотность супернатанта определяют при 532 нм и 600 нм. В качестве контроля используют раствор тиобарбитуровой кислоты в трихлоруксусной кислоте. Расчет содержания малонового диальдегида проводят по формуле:

где Cx - содержание малонового диальдегида, мкмоль/г сырой массы; E - оптическая плотность раствора; Ve - объем экстракта, мл; Va - объем экстракта, взятый для анализа, мл; k - коэффициент молярной экстинкции МДА=156 мМ-1 × см-1; mв - масса образца для экстракции, г.

По заявляемому способу. Образец листьев массой 0,1 г заливали 1,5 см 96%-ного этанола и тщательно гомогенизировали. Затем экстракцию проводили на шейкере в течение 30 минут. Полученный экстракт центрифугировали 15 мин при 10000 g. К 0,3 см супернатанта добавляли 1,2 см 0,5% водного раствора тиобарбитуровой кислоты в бидистиллированной воде и полученную реакционную смесь инкубировали 30 минут при 50°C, затем охлаждали и центрифугировали 15 мин при 10000 g. Содержание остаточной тиобарбитуровой кислоты в супернатанте определяли методом капиллярного электрофореза. В качестве контроля использовали 1,2 см3 0,5% водного раствора тиобарбитуровой кислоты в бидистиллированной воде в смеси с 0,3 см 96% этанола. Полученные растворы переносили для анализа в систему капиллярного электрофореза. Анализ осуществляли согласно описанным выше параметрам.

Расчет содержания малонового диальдегида проводили с учетом того, что на одну его молекулу при образовании триметинового комплекса приходится две молекулы тиобарбитуровой кислоты

где Cx - содержание малонового диальдегида, мкмоль/г сырой массы; Ак - содержание тиобарбитуровой кислоты в контрольном образце; Аоб - содержание тиобарбитуровой кислоты в опытном образце; Ve - объем экстракта, мл; Va - объем экстракта, взятый для анализа, мл; m - масса образца для экстракции, г.

Контролем служило определение малонового диальдегида этих же растительных образцов согласно способу-прототипу.

Полученные результаты приведены в таблице. Электрофореграммы определения малонового диальдегида в экстракте листьев черешни, винограда, в проростках пшеницы.

Пример 2. Определение содержания малонового диальдегида в листьях винограда

Аналогично примеру 1, кроме того, что пробоподготовке подвергали листья винограда сорта Красностоп АЗОС. Полученные результаты приведены в таблице.

Пример 3.

Аналогично примеру 1, кроме того, что пробоподготовке подвергали листья проростков озимой пшеницы сорта Краснодарская 99. Полученные результаты приведены в таблице.

Пример 4.

Аналогично примеру 1, кроме того, что пробоподготовке подвергали листья ореха грецкого.

Полученные результаты приведены в таблице.

Таблица - Содержание малонового диальдегида в листьях растений, мкмоль/г сырой массы

Применение заявляемого способа позволило получить воспроизводимый результат в обоих случаях для примеров 1-4.

Для проверки надежности метода капиллярного электрофореза использовали метод добавки тиобарбитуровой кислоты в пробу биологического материала. Установлено, что степень извлечения тиобарбитуровой кислоты для анализируемых образцов составила 103,5-104,1%.

Эти данные свидетельствуют о возможности корректного определения малонового диальдегида согласно заявляемому способу.

Предлагаемый способ практически лишен таких недостатков, как необходимость дополнительного разбавления проб для корректного анализа, влияние мешающих веществ биологической природы - фенольные соединения, водный раствор ведущего электролита стабилен во времени и не загрязняет внутреннюю поверхность капилляра.

При реализации способа получены количественные результаты определения массовой концентрации малонового диальдегида, превосходящие по своему качеству прототип, так как экстракцию проводят при комнатной температуре для снижения интенсивности окисления липидов. Реакцию малонового диальдегида с 0,5%-ным раствором биобарбитуровой кислоты в водно-спиртовом 20%-ном растворе проводят при температуре 50°C, что позволяет снизить регенерацию малонового диальдегида из триметинового комплекса.

Способ определения малонового диальдегида, характеризующийся тем, что предусматривает экстракционную подготовку пробы биологического материала, центрифугирование, взаимодействие выделенного малонового диальдегида с тиобарбитуровой кислотой, отличающийся тем, что для выделения малонового диальдегида из растительной ткани используется 96% этанол, затем после экстракции и центрифугирования к супернатанту добавляют 0,5%-ный водный раствор тиобарбитуровой кислоты и реакционную смесь инкубируют 30 мин при 50°С, охлаждают, центрифугируют, содержание малонового диальдегида определяют методом капиллярного электрофореза в кварцевом капилляре эффективной длиной 0,5 м, внутренним диаметром 75 мкм с использованием для анализа водного ведущего электролита, содержащего 0,33% масс. борной кислоты, 0,05% масс. тетрабората натрия при положительной полярности напряжения и длине волны детектирования 254 нм по убыли количества тиобарбитуровой кислоты, пошедшей на реакцию.
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МАЛОНОВОГО ДИАЛЬДЕГИДА В ВЕГЕТАТИВНЫХ ОРГАНАХ РАСТЕНИЙ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МАЛОНОВОГО ДИАЛЬДЕГИДА В ВЕГЕТАТИВНЫХ ОРГАНАХ РАСТЕНИЙ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МАЛОНОВОГО ДИАЛЬДЕГИДА В ВЕГЕТАТИВНЫХ ОРГАНАХ РАСТЕНИЙ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МАЛОНОВОГО ДИАЛЬДЕГИДА В ВЕГЕТАТИВНЫХ ОРГАНАХ РАСТЕНИЙ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 31.
20.02.2013
№216.012.2521

Средство для обработки семян зерновых и зернобобовых культур, пораженных фузариозом

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Средство содержит раствор действующего вещества фуролан. В него дополнительно вводят аминокислоту метионин при следующем соотношении компонентов, мас.%: фуролан 0,001-0,01; аминокислота метионин 0,005; вода - остальное до 100%. Изобретение позволяет...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002475025
Дата охранного документа: 20.02.2013
20.03.2013
№216.012.2f29

Способ повышения крупности и стандартности плодов

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Вносят препарат фуролан путем опрыскивания деревьев в дозе 5 г/га в виде водного раствора в 1000 л воды/га с дополнительным внесением комплексного минерального удобрения «Нитрофоска солуб» (голубая) N15P10K15 + микроэлементы» в дозе 5 кг/га в фазы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477608
Дата охранного документа: 20.03.2013
10.09.2013
№216.012.68bb

Способ определения глюкозы, сахарозы, фруктозы

Изобретение относится к аналитической химии сахаров, в частности к способам определения глюкозы, сахарозы, фруктозы в сельскохозяйственном сырье и продукции переработки, и направлено на ускорение, совершенствование и повышение объективности количественного анализа сахаров. Указанный результат...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492458
Дата охранного документа: 10.09.2013
27.11.2013
№216.012.8607

Способ определения общего фосфора методом капиллярного электрофореза

Изобретение относится к аналитической химии фосфора, в частности к способу определения общего фосфора в сельскохозяйственном сырье и продукции переработки, и направлено на ускорение, совершенствование и повышение объективности количественного анализа. Указанный способ предусматривает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002499989
Дата охранного документа: 27.11.2013
27.05.2014
№216.012.c8fd

Способ определения индолил-уксусной кислоты методом капиллярного электрофореза

Настоящее изобретение относится к аналитической химии ауксинов, в частности к способам определения индолил-уксусной кислоты в верхушках концевых приростов побегов и листьев яблони, груши, сливы, черешни, винограда и проростков пшеницы. Способ предусматривает экстракционную подготовку пробы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517219
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.07.2014
№216.012.dda0

Способ обработки садовых деревьев и винограда для защиты от низких температур и весенних заморозков

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к плодоводству и виноградарству. Способ обработки садовых деревьев и винограда для защиты от низких температур и весенних заморозков включает приготовление 4,2-4,6%-ного водного раствора силикатно-карбонатного препарата и обработку им...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522522
Дата охранного документа: 20.07.2014
20.07.2014
№216.012.e0af

Способ микроклонального размножения подвоев яблони

Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения подвоев яблони, где на этапах введения в культуру и собственно микроразмножения в среду Мурасиге-Скуга в качестве стимулятора роста добавляется препарат фуролан...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523305
Дата охранного документа: 20.07.2014
27.01.2015
№216.013.2071

Способ производства виноматериала

Изобретение относится к винодельческой отрасли и может быть использовано для производства сухих белых вин. Виноград дробят, отделяют сусло-самотек и прессовую фракцию первого давления, смешивают их и сульфитируют. Наносят разводку чистой культурой дрожжей на насадку, в качестве которой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002539753
Дата охранного документа: 27.01.2015
10.04.2015
№216.013.3d45

Способ повышения устойчивости растений вида vitis vinifera к поражению корневой формой филлоксеры

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к виноградарству. Способ повышения устойчивости растений вида Vitis Vinifera к поражению корневой формой филлоксеры характеризуется тем, что применяется композиция препаратов Фуролан в дозе 10 г/га и Метионин в дозе 10 г/га в соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547173
Дата охранного документа: 10.04.2015
27.06.2015
№216.013.5ada

Способ определения общего азота методом капиллярного электрофореза

Изобретение относится к аналитической химии азота, в частности к определению общего азота в сельскохозяйственном сырье и продуктах его переработки. Способ характеризуется тем, что предусматривает термическое кислотное разложение пробы растительного образца, кратное разбавление пробы до...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002554799
Дата охранного документа: 27.06.2015
Показаны записи 1-10 из 34.
20.03.2013
№216.012.2f29

Способ повышения крупности и стандартности плодов

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Вносят препарат фуролан путем опрыскивания деревьев в дозе 5 г/га в виде водного раствора в 1000 л воды/га с дополнительным внесением комплексного минерального удобрения «Нитрофоска солуб» (голубая) N15P10K15 + микроэлементы» в дозе 5 кг/га в фазы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477608
Дата охранного документа: 20.03.2013
10.09.2013
№216.012.68bb

Способ определения глюкозы, сахарозы, фруктозы

Изобретение относится к аналитической химии сахаров, в частности к способам определения глюкозы, сахарозы, фруктозы в сельскохозяйственном сырье и продукции переработки, и направлено на ускорение, совершенствование и повышение объективности количественного анализа сахаров. Указанный результат...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492458
Дата охранного документа: 10.09.2013
27.11.2013
№216.012.8607

Способ определения общего фосфора методом капиллярного электрофореза

Изобретение относится к аналитической химии фосфора, в частности к способу определения общего фосфора в сельскохозяйственном сырье и продукции переработки, и направлено на ускорение, совершенствование и повышение объективности количественного анализа. Указанный способ предусматривает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002499989
Дата охранного документа: 27.11.2013
27.05.2014
№216.012.c8fd

Способ определения индолил-уксусной кислоты методом капиллярного электрофореза

Настоящее изобретение относится к аналитической химии ауксинов, в частности к способам определения индолил-уксусной кислоты в верхушках концевых приростов побегов и листьев яблони, груши, сливы, черешни, винограда и проростков пшеницы. Способ предусматривает экстракционную подготовку пробы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517219
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.07.2014
№216.012.dda0

Способ обработки садовых деревьев и винограда для защиты от низких температур и весенних заморозков

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к плодоводству и виноградарству. Способ обработки садовых деревьев и винограда для защиты от низких температур и весенних заморозков включает приготовление 4,2-4,6%-ного водного раствора силикатно-карбонатного препарата и обработку им...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522522
Дата охранного документа: 20.07.2014
20.07.2014
№216.012.e0af

Способ микроклонального размножения подвоев яблони

Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения подвоев яблони, где на этапах введения в культуру и собственно микроразмножения в среду Мурасиге-Скуга в качестве стимулятора роста добавляется препарат фуролан...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523305
Дата охранного документа: 20.07.2014
27.01.2015
№216.013.2071

Способ производства виноматериала

Изобретение относится к винодельческой отрасли и может быть использовано для производства сухих белых вин. Виноград дробят, отделяют сусло-самотек и прессовую фракцию первого давления, смешивают их и сульфитируют. Наносят разводку чистой культурой дрожжей на насадку, в качестве которой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002539753
Дата охранного документа: 27.01.2015
10.04.2015
№216.013.3d45

Способ повышения устойчивости растений вида vitis vinifera к поражению корневой формой филлоксеры

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к виноградарству. Способ повышения устойчивости растений вида Vitis Vinifera к поражению корневой формой филлоксеры характеризуется тем, что применяется композиция препаратов Фуролан в дозе 10 г/га и Метионин в дозе 10 г/га в соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547173
Дата охранного документа: 10.04.2015
27.06.2015
№216.013.5ada

Способ определения общего азота методом капиллярного электрофореза

Изобретение относится к аналитической химии азота, в частности к определению общего азота в сельскохозяйственном сырье и продуктах его переработки. Способ характеризуется тем, что предусматривает термическое кислотное разложение пробы растительного образца, кратное разбавление пробы до...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002554799
Дата охранного документа: 27.06.2015
27.07.2015
№216.013.67da

N-бензил-2-(3-бензил-2-тиофен-2-ил-1,3-оксазолидин-4-ил)ацетамид, активирующий прорастание семян озимой пшеницы

Изобретение относится к области органической химии, а именно к N-бензил-2-(3-бензил-2-тиофен-2-ил-1,3-оксазолидин-4-ил)ацетамиду формулы 1. Технический результат: получено новое гетероциклическое соединение, полезное в качестве активатора прорастания семян озимой пшеницы. 1 табл., 2 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558139
Дата охранного документа: 27.07.2015
+ добавить свой РИД