Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО КАНЦЕРОГЕНЕЗА

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной онкологии, фармакологии, патологической физиологии, и может быть использовано для увеличения осмотической стойкости мембран эритроцитов в условиях экспериментального канцерогенеза, индуцированного N-нитрозодиэтиламином.

Биологическая мембрана - это эластическая молекулярная структура, состоящая из белков и липидов, которая отделяет содержимое любой клетки от внешней среды, одну клетку от другой, делает ее самостоятельной, обеспечивает ее целостность; регулирует обмен воды и растворенных в ней веществ. На мембране находятся многочисленные рецепторы и антигены, которые способны воспринимать гормоны, медиаторы и другие биологически активные вещества, она может менять метаболическую активность клетки и обеспечивать специфический иммунный ответ [«Осмотическая резистентность мембран эритроцитов у крыс с гипер- и гипокальциемией » Козаев А.В., Джиоев И.Г. и соавт.].

Таким образом, существование клетки без мембраны невозможно, а способ повышения резистентности клеточных мембран является актуальным, особенно при быстро меняющихся условиях внешней и внутренней среды при воздействии различных патогенных факторов.

Значительное количество работ посвящено изучению осмотической резистентности мембран эритроцитов и поиску различных методов и средств, способствующих увеличению осмотической резистентности мембран при различных патологических состояниях [«Осмотическая резистентность мембран эритроцитов у крыс с гипер- и гипокальциемией» Козаев А.В., Джиоев И.Г. и соавт.].

Наиболее близким является способ [Харин С.А., Тарасова С.Ю., Селезнева Т.Е. Осмотическая резистентность эритроцитов в условиях острой экспериментальной этаноловой интоксикации] повышения осмотической резистентности мембран эритроцитов, в основу которого было положено моделирование острой алкогольной интоксикации интрагастральным введением красного и белого вина, положительные эффекты которого обусловлены наличием биологически активных веществ (БАВ) в нем, в дозах 4 г/кг и 0,4 г/кг в течение 7 дней (содержание этилового спирта в винах составляло 10%) [Момот Т., Кушнерова Н., Рахманин Ю. Мембранозащитные свойства растительных полифенолов. LAP LAMBERT Akademic Publishing].

Недостатком прототипа является то, что вместе с биологически активными веществами в организм попадает и алкоголь, который, в свою очередь, оказывает негативное влияние на организм в целом и на осмотическую резистентность эритроцитов, в частности. Также одним из недостатков прототипа является неизвестность качественного и количественного состава БАВ, находящихся в винах.

Целью изобретения является повышение устойчивости мембран эритроцитов, в условиях экспериментального канцерогенеза печени и пищевода, индуцированного N-нитрозодиэтиламином, а следовательно, и повышение способности мембраны эритроцитов адекватно отвечать на изменения внешней и внутренней среды.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, заключающейся в разработке способа повышения устойчивости мембран эритроцитов в условиях экспериментального канцерогенеза путем введения ресвератрола с кормом в дозе 100 мг/кг массы тела.

Решение этой задачи обеспечивает значительное повышение осмотической резистентности мембран эритроцитов в условиях экспериментального канцерогенеза, что выражается в достоверном снижении процентного содержания гемолизированных клеток крови, в растворах, содержащих 45% и 55% мочевины в опытной группе по сравнению с контрольной.

Для достижения этого технического результата заявляемое изобретение - способ повышения устойчивости мембран эритроцитов в условиях экспериментального канцерогенеза - имеет следующие существенные признаки: животным ежедневно вводят с кормом ресвератрол в дозе 100 мг/кг в течение 6 месяцев, а N-нитрозодиэтиламин (для создания экспериментального канцерогенеза) в дозе 100 мг/л воды в течение 4 месяцев.

Заявляемый способ отличается от прототипа тем, что в качестве средства, повышающего осмотическую резистентность мембран эритроцитов, используется средство растительного происхождения - ресвератрол (основным преимуществом которого является полное отсутствие побочных эффектов, так как он относится к природным биологически активным веществам, из группы полифенолов, выделенным из ряда растений (виноград темных сортов, виноградные косточки, чемерицы белой «Veratrum grandiflorum О. Loes», корней горца гребенчатого «Polygonum cuspidatum» [A.M. Моисеева, Н.В. Железняк, А.Г. Генералова, Д.В. Моисеев / Фитоалексин ресвератрол: методы определения, механизмы действия, перспективы клинического применения // Вестник фармации №1 (55) 2012]. Применение ресвератрола ведет к достоверному снижению процента гемолиза клеток крови, увеличению продолжительности их жизни и повышению жизнеспособности в условиях экспериментального канцерогенеза. Заявляемый способ является эффективным, экономически выгодным и легковоспроизводимым.

По имеющимся у авторов сведениям, совокупность существенных признаков, характеризующих сущность заявляемого изобретения, не известна, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «новизна».

По мнению авторов, сущность заявляемого изобретения не следует для специалистов явным образом из известного уровня медицины, так как из него не выявляется вышеуказанная возможность получения способа повышения устойчивости мембран эритроцитов в условиях экспериментального канцерогенеза, включающего введение N-нитрозодиэтиламина с питьем и ресвератрола с кормом в качестве средства, повышающего осмотическую резистентность мембран эритроцитов в дозе 100 мг/кг, что позволяет сделать вывод о соответствии критерию «изобретательский уровень».

Совокупность существенных признаков, характеризующих сущность изобретения, в принципе, может быть многократно использована в медицине с получением результата, заключающегося в эффективном и легковоспроизводимом способе повышения осмотической стойкости мембран эритроцитов путем приема средства растительного происхождения - ресвератрола, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».

Способ осуществляется следующим образом.

Эксперимент был проведен на крысах-самцах линии Вистар массой 180-200 г. Канцерогенез печени и пищевода был индуцирован введением N-нитрозодиэтиламина в дозе 100 мг/л питьевой воды ежедневно на протяжении 4 месяцев. В качестве средства, улучшающего осмотическую резистентность, эритроцитов использовали ресвератрол, который вводили животным в дозе 100 мг/кг с кормом, ежедневно на протяжении 6 месяцев. Осмотическую резистентность эритроцитов определяли ежемесячно путем внесения эритроцитов в образцы с разным объемным соотношением изотонического и гипертонического растворов хлористого натрия и мочевины [Камышников B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. - 2003. - Т. II. - 463 с.].

При статистической обработке данных рассчитывали средние значения и величины стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.

Пример конкретного выполнения.

Эксперимент проведен на 90 крысах-самцах линии Вистар с исходной массой 180-200 г. Содержание животных осуществляли в соответствии с приказом Минздравсоцразвития России №708н от 23 августа 2010 года «Об утверждении Правил лабораторной практики». Животные находились при 12-часовом световом режиме в условиях свободного доступа к воде и пище. Все животные были разделены на две группы, по 30 в каждой: I группа - животные интактного контроля; II группа (животные, получавшие только N-нитрозодиэтиламин в дозе 100 мг/л ежедневно, в течение 4 месяцев) и III группа (животные, получавшие одновременно N-нитрозодиэтиламин и ресвератрол в дозе 100 мг/кг веса животного на протяжении 6 месяцев, предварительно равномерно смешав с творогом).

У исследуемых животных брали кровь, предварительно усыпив внутрибрюшинным введением 0,1-0,2 мл золетила (Zoletil, Франция). Осмотическую резистентность эритроцитов определяли спектрофотометрически, путем внесения отмытых эритроцитов в образцы с разным объемным содержанием изотонического и гипертонического растворов хлористого натрия и мочевины.

Изучение осмотической резистентности мембран эритроцитов показало, что количество разрушенных эритроцитов в растворе №1 (40% раствор мочевины) у крыс I (контрольной) группы составило 1,7±0,168%, во II группе животных (получавших только N-нитрозодиэтиламин) - 10,2±0,108% и в III группе животных (получавших одновременно N-нитрозодиэтиламин и ресвератрол) процент гемолиза составил 1,26±0,066% (p<0,001). В растворе №2 (45% мочевины) этот показатель составил 14,18±0,127, 34,84±2,414 и 7,59±2,797 (p<0,002) соответственно. Процент гемолизированных эритроцитов в растворе №4 составил: 65,86±7,7 (p<0,05); 87,42±2,11; 49,83±1,45 (p<0,001) (гемолиз в котором является более показательным, так как концентрация мочевины в этом растворе составляет 55% и только эритроциты с нормальной стойкостью мембран способны оказывать противодействие, а с ослабленной резистентностью начинают в большей степени разрушаться [«Осмотическая резистентность мембран эритроцитов у крыс с гипер- и гипокальциемией» Козаев А.В., Джиоев И.Г. и соавт.], что показано графически (Фиг.1). Показатели оптической плотности в растворе №7 нами принимался за 100%.

Таким образом, полученные результаты позволяют сделать вывод, что одновременное введение ресвератрола в дозе 100 мг/кг с N-нитрозодиэтиламином достоверно увеличивает осмотическую резистентность мембран эритроцитов, а следовательно, снижает процент гемолизированных клеток крови и повышает их жизнеспособность в условиях экспериментального канцерогенеза.