Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА И РАЗМЕРОВ ЖИРОВЫХ КАПЕЛЬ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ ДЛЯ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Изобретение относится к методам контроля качества лекарственных средств и касается способа измерения размера жировых капель в эмульсиях для парентерального применения методом электрочувствительных зон.

Известен способ определения размеров жировых капель в эмульсиях для парентерального применения методом лазерной дифракции [1], состоящий из:

- настройки программы для ЭВМ,

- подготовки пробы препарата и помещения пробы в прибор,

- измерения и подсчета с помощью прибора,

- обработки результатов в программе ЭВМ.

К недостаткам данного способа следует отнести то, что результатом обработанных данных является только процентное распределение жировых капель по размерам, невозможность подсчета содержания капель каждого размера. Кроме того, для метода лазерной дифракции возможен учет капель только в высоких концентрациях, без возможности учета малых концентраций жировых капель.

Также известен микроскопический способ [2] определения размера жировых капель в эмульсиях для парентерального применения, состоящий в визуальном определении размеров жировых капель за счет увеличения изображения и подсчета с помощью окуляр-микрометра микроскопа.

Способ микроскопии состоит из стадий:

- пробоподготовка образца и помещение пробы на предметный столик,

- просмотр, измерение,

- регистрация размеров жировых капель.

К недостаткам этого известного способа следует отнести субъективность, длительность, неточность, невозможность подсчета мелких капель (менее 1 мкм), невозможность оценки распределения капель по размерам.

Задачей изобретения является расширение арсенала средств измерения, повышение точности, сокращение времени анализа.

Поставленная задача решается благодаря тому, что применение предлагаемого способа для измерения размера жировых капель в эмульсиях для парентерального применения позволяет быстро подсчитать точное количество жировых капель заданных размеров, оценить процентное распределение капель в широком диапазоне размеров и провести статистическую обработку полученных данных.

Техническим результатом предлагаемого способа является обеспечение точности, объективности, высокой скорости и возможности выполнения статистической обработки данных, осуществляемой во встроенной программе с удобным интерфейсом.

Технический результат получен способом измерения количества и размеров жировых капель в лекарственных препаратах для парентерального применения, характеризующимся тем, что подготавливают пробу посредством введения эмульсии лекарственного препарата в профильтрованный через мембранный фильтр раствор натрия хлорида, перемешивания полученной суспензии и последующего забора части полученной суспензии и введения ее в профильтрованный через мембранный фильтр раствор натрия хлорида и перемешивания полученной суспензии. При этом пробу подготавливают в условиях, ограничивающих попадание посторонних частиц, в шкафу с ламинарным потоком воздуха, помещают пробу в измеритель частиц, содержащий апертурную трубку, элементы для управления апертурным током и систему анализа жидкостей, включающую насос и измерительный прибор. Затем производят измерения количества и размеров жировых капель посредством определения изменения силы тока между двумя электродами, расположенными по разные стороны апертуры, при пропускании пробы через апертуру.

В отдельных вариантах применения способа для подготовки пробы используют 4%-ный раствор натрия хлорида, профильтрованный через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм; эмульсию лекарственного препарата вводят в раствор натрия хлорида с помощью автоматической пипетки; суспензию лекарственного препарата и раствора натрия хлорида вводят в раствор натрия хлорида с помощью автоматической пипетки; в измерителе частиц используется апертура диаметром 20 мкм; в ходе измерений в измерителе частиц устанавливают силу тока в размере 200 µА; в качестве измерителя частиц используют прибор Coulter Counter Multisizer®, в настройках которого вводят 256 каналов.

Испытания показали, что продолжительность единичного измерения составляет не более 60 секунд, при этом возможно наблюдение за ходом анализа в режиме реального времени.

На фиг. 1 и 2 показаны результаты определения количества капель в широком диапазоне размеров в виде графика с цифровыми значениями.

Причинно-следственная связь между совокупностью существенных признаков предлагаемого способа и достигаемым техническим результатом:

1. Подсчет количества жировых капель с помощью прототипа невозможен. С помощью предлагаемого объекта подсчет жировых капель точный за счет автоматизированной системы подсчета (регистрируется каждая капля, проходящая через апертуру).

2. Подсчет процентного распределения по размеру с помощью прототипа возможен только в высокой концентрации жировых капель. С помощью предлагаемого способа такой подсчет возможен в любой концентрации жировых капель, включая единичные капли.

Изобретение позволяет объективно, точно и быстро оценить размер и подсчитать количество жировых капель в эмульсиях для парентерального применения.

Средства и методы

При определении размера частиц в жировых эмульсиях для парентерального применения использовали счетчик частиц Coulter Counter Multisizer™ 3, производства Beckman Coulter, Швейцария, год выпуска - 2005. Счетчик частиц представляет собой одну установку, содержащую апертурную трубку, систему анализа жидкостей (включающую насос и измерительный прибор) и элементы для управления апертурным током. Диапазон измеряемых размеров - от 0,4 до 1200 мкм.

Принцип действия прибора основан на определении изменения силы тока между двумя электродами, расположенными по разные стороны апертуры (отверстие определенного размера), при пропускании суспензии жировых капель в электропроводящей жидкости через это отверстие.

Предварительно были произведены следующие настройки прибора:

- установлена апертурная трубка с диаметром отверстия 20 мкм - диапазон измеряемых размеров от 0,4 до 12 мкм;

- выбрано число каналов - 256;

- сила тока в апертурной трубке - 200 µА.

Реактивы:

- раствор натрия хлорида (х/ч) 4% (4,0 г натрия хлорида растворяли в воде очищенной в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводили водой до метки). Перед использованием раствор фильтровали через мембранный фильтр Millipore с диаметром пор 0,22 мкм. Определяли фоновые показания раствора с помощью прибора.

Калибровка прибора:

- прибор калибровали с помощью латексных стандартов (Coulter СС Size Standard) производства Beckman Coulter, Inc. США, размером 5 мкм.

Пример 1. Определение количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения (эмульсия для внутривенной анестезии) - 10 мг/мл.

Для определения количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения (эмульсия для внутривенной анестезии) - 10 мг/мл, установили апертуру диаметром 20 мкм, ввели в настройки 256 каналов, установили апертурный ток 200 µА. Заполнили систему анализа жидкостей прибора профильтрованным раствором натрия хлорида 4%.

Определяли количество жировых капель размером более или равным 2 мкм. Все манипуляции проводили в условиях, ограничивающих попадание посторонних частиц, в шкафу с ламинарным потоком воздуха. В тщательно промытой стеклянной посуде готовили раствор натрия хлорида 4%, который использовали для разведения эмульсии. Предварительно раствор натрия хлорида 4% был профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, затем в указанном растворе определяли фоновые показания. Далее с помощью автоматической пипетки вносили 1 мл эмульсии в 20 мл 4% раствора натрия хлорида и перемешивали. Затем из полученной суспензии с помощью автоматической пипетки отбирали 40 мкл, добавляли в 20 мл раствора натрия хлорида 4%, аккуратно перемешивали и сразу производили измерение.

Результат: в исследованной эмульсии для парентерального применения содержание капель размером более 2 мкм - 426 штук/мл.

Пример 2. Определение количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения (эмульсия для внутривенной анестезии) - 10 мг/мл.

Для определения количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения (эмульсия для внутривенной анестезии) - 10 мг/мл, установили апертуру диаметром 20 мкм, ввели в настройки 256 каналов, установили апертурный ток 200 µА. Заполняли систему анализа жидкостей прибора профильтрованным раствором натрия хлорида 4%.

Определяли процентное содержание жировых капель размером не более 5 мкм, и не более 1,5 мкм. Все манипуляции проводили в условиях, ограничивающих попадание посторонних частиц, в шкафу с ламинарным потоком воздуха. В тщательно промытой стеклянной посуде готовили раствор натрия хлорида 4%, который использовали для разведения эмульсии. Предварительно раствор натрия хлорида 4% был профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, затем в указанном растворе определяли фоновые показания. Далее с помощью автоматической пипетки вносили 40 мкл эмульсии в 20 мл раствора натрия хлорида 4%, аккуратно перемешивали и сразу производили измерение.

Результат: в исследованной эмульсии для парентерального применения количество жировых капель размером не более 5 мкм - 100%, капель размером не более 1,5 мкм - 99,6%.

Пример 3. Определение количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения - 10 мг/мл (эмульсия для парентерального питания).

Для определения количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения - 10 мг/мл (эмульсия для парентерального питания), установили апертуру диаметром 20 мкм, ввели в настройки 256 каналов, установили апертурный ток 200 µА. Заполняли систему анализа жидкостей прибора профильтрованным раствором натрия хлорида 4%.

Определяли процентное содержание жировых капель более 1 мкм от общего числа жировых капель размером более 0,5 мкм и процентное содержание жировых капель размером более 5 мкм от общего числа жировых капель более 0,5 мкм.

Все манипуляции проводили в условиях, ограничивающих попадание посторонних частиц, в шкафу с ламинарным потоком воздуха. В тщательно промытой стеклянной посуде готовили раствор натрия хлорида 4%, который использовали для разведения эмульсии. Предварительно раствор натрия хлорида 4% был профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, затем в указанном растворе определяли фоновые показания. Далее с помощью автоматической пипетки вносили 100 мкл эмульсии в 20 мл раствора натрия хлорида 4% и перемешивали. Из полученной суспензии с помощью автоматической пипетки отбирали 50 мкл и растворяли в 25 мл раствора натрия хлорида 4%, аккуратно перемешивали и сразу производили измерение.

Результат: в исследованной эмульсии для парентерального применения 10 мг/мл, содержание жировых капель размером более 1 мкм - 0,7%, при размере всех капель более 0,5 мкм, капли размером более 5 мкм не обнаружены.

Пример 4. Определение количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения - 20 мг/мл (эмульсия для парентерального питания).

Для определения количества и размера жировых капель в эмульсии для парентерального применения - 20 мг/мл (эмульсия для парентерального питания), установили апертуру диаметром 20 мкм, ввели в настройки 256 каналов, установили апертурный ток 200 µА. Заполняли систему анализа жидкостей прибора профильтрованным раствором натрия хлорида 4%.

Определяли процентное содержание жировых капель более 1 мкм от общего числа жировых капель размером более 0,5 мкм и процентное содержание жировых капель размером более 5 мкм от общего числа жировых капель более 0,5 мкм. Все манипуляции проводили в условиях, ограничивающих попадание посторонних частиц, в шкафу с ламинарным потоком воздуха. В тщательно промытой стеклянной посуде готовили раствор натрия хлорида 4%, который использовали для разведения эмульсии. Предварительно раствор натрия хлорида 4% был профильтрован через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, затем в указанном растворе определяли фоновые показания. Далее с помощью автоматической пипетки вносили 100 мкл эмульсии в 20 мл раствора натрия хлорида 4% и перемешивали. Из полученной суспензии с помощью автоматической пипетки отбирали 50 мкл и растворяли в 25 мл раствора натрия хлорида 4%, аккуратно перемешивали и сразу производили измерение.

Результат: в исследованной эмульсии для парентерального применения 20 мг/мл, содержание жировых капель размером более 1 мкм - 1,6% при размере всех капель более 0,5 мкм. Капли размером более 5 мкм не обнаружены.

Список литературы

1. Измерение размера частиц дифракцией света / Фармакопея США: USA 29; Национальный формуляр: NF24: в 2 т.: [пер. с англ.] // - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - Т. 2. - С. 2432-2434.

2. Оптическая микроскопия / Фармакопея США: USA 29; Национальный формуляр: NF24: в 2 т.: [пер. с англ.] // - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - Т. 2. - С. 2583-2586.