ПРИМЕНЕНИЕ НАНОФОСФОЛИПИДНОЙ КОМПОЗИЦИИ РИФАМПИЦИНА СОВМЕСТНО С ПРОТИОНАМИДОМ ИЛИ ЕГО НАНОФОСФОЛИПИДНОЙ ФОРМОЙ В ЛЕЧЕНИИ ТУБЕРКУЛЕЗА

Изобретение относится к медицине и фармакологии и касается применения нанофосфолипидной композиции рифампицина совместно с протионамидом или его нанофосфолипидной формой в комбинированной противотуберкулезной терапии.

В настоящее время противотуберкулезные препараты делят на основные и резервные. К основным препаратам относят изониазид, рифампицин, пиразинамид, стрептомицин и этамбутол.

Резервные препараты включают этионамид, протионамид, антибиотики - циклосерин, капреомицин, канамицин, амикацин, рифабутин, парааминосалициловую кислоту (ПАСК); в ту же группу входят фторхинилоны - ломефлоксацин, ципрофлоксацин и офлаксоцин.

Основные препараты высокоэффективны, но к ним у микобактерий относительно быстро (через 3-4 месяца) вырабатывается резистентность. Значительно медленнее развивается устойчивость при одновременном применении разных препаратов. Поэтому основным принципом современного лечения туберкулеза является комбинированная двухэтапная химиотерапия.

Вместе с тем, необходимо учитывать, что действие противотуберкулезных препаратов сопровождается обычно побочными эффектами, выраженность которых может возрастать при их совместном применении.

Протионамид относится к резервным препаратам. Быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), С_мах составляет 2-3 час; легко проникает в ткани, частично метаболизируется, выводится с мочой и фекалиями.

Рифампицин относится к основным препаратам. Является полусинтетическим антибиотиком широкого спектра действия. Активен в отношении микобактерий туберкулеза и лепры, влияет на грамположительные (особенно стафилококки) и грамотрицательные (менингококки, гонококки) бактерии, а также на возбудителей бруцеллеза, легионеллеза, сыпного тифа и трахомы. Эффективен при приеме внутрь, имеет широкий спектр антибактериального действия.

Хорошо и быстро всасывается в ЖКТ, при приеме внутрь С_мах составляет 2,0-2,5 час. Легко проникает в ткани и жидкости организма и обнаруживается в терапевтических концентрациях в плевральном экссудате, мокроте, содержимом каверн, костной ткани; небольшая концентрация создается в тканях печени и почек; выводится с желчью и мочой.

В основном, все противотуберкулезные препараты являются плохо растворимыми соединениями с ограниченной биодоступностью. Использование этих препаратов длительно в больших дозах, преимущественно в комбинированных схемах лечения, из-за лекарственной резистентности создает предпосылки поиска новых и усовершенствование известных лекарственных препаратов [1, 2].

Известна стабильная при хранении наносистема с размером частиц от 10 до 30 нм, включающая фосфатидилхолин и мальтозу, предназначенная для включения в фосфолипидные наночастицы лекарственных средств [3]. Известно снижение токсичности противотуберкулезных препаратов путем включения этих препаратов в состав фосфолипидных наночастиц [4]. Однако вопрос снижения токсичности противотуберкулезных средств при комбинированной противотуберкулезной терапии является по-прежнему актуальным.

Задачей настоящего изобретения является снижение побочных токсических эффектов при комбинированной противотуберкулезной терапии.

Указанная задача может быть решена путем применения нанофосфолипидной композиции рифампицина совместно с протионамидом или его нанофосфолипидной формой в лечении туберкулеза.

Исходя из принятых рекомендаций, для лечения туберкулеза используется комбинированная терапия с обязательным включением помимо рифампицина также и другого резервного препарата.

Был поставлен эксперимент по сравнению эффективности лечения одновременным введением 2-х препаратов, например рифампицина и протионамида, в случае замены одного из них или обоих на соответствующую нанофосфолипидную форму (табл.1).

Были исследованы показатели выраженности туберкулезного процесса инфекции у мышей, зараженных М. tuberculosis Erdman, через 6 недель от начала курса лечения комбинациями противотуберкулезных препаратов (ПТП), содержащими рифампицин и протионамид и/или их фосфолипидные композиции.

Лечение животных начинали через 7 дней после заражения. Препараты в дозе 10 мг/кг растворяли в воде и вводили внутрижелудочно через атравматичный зонд ежедневно (кроме выходных), в течение 6 недель, через неделю после заражения. Объем вводимого препарата составлял 0,5 мл/мышь. Развитие туберкулезного процесса тестировалось по общему состоянию животных (снижение активности, снижение веса, затрудненное дыхание). Лечение заканчивалось, когда в контрольной группе (зараженные мыши без лечения) смертность достигала 70-100% [5].

Показатели массы тела мышей учитывали еженедельно, с 1-го по 42 день после инфицирования.

Для микробиологических и морфологических исследований животных выводили из эксперимента дислокацией шейных позвонков. С целью мониторинга процесса через 7 дней после инфицирования пять мышей из контрольной группы вывели из эксперимента для определения КОЕ Mtb в легких перед началом лечения.

Применение нанофосфолипидной формы (НФО) рифампицина в комплексе с противотуберкулезным препаратом протионамидом способствовало приросту эффективности проводимой химиотерапии: индекс эффективности лечения (ИЭ) увеличился на 19,25% по сравнению с группой контроля терапии за счет снижения величины всех тестируемых показателей (в 1,2 раза коэффициента массы легких, в 1,3 раза индекса их поражения и в 1,4 раза высеваемости Mtb). При этом средний суммарный показатель пораженности у этих животных снизился в 1,2 раза (2,47 против 3,07).

Использование комбинированной терапии ПТП, включающей рифампицин и НФО протионамида, привело к снижению индекса эффективности комплексного лечения на 20,13% с вариацией показателя от +8,26 (по коэффициенту массы легких) до +20,39 (по показателю индекса поражения легких) при увеличении массивности КОЕ Mtb на 107%. При этом средний суммарный показатель пораженности у этих животных увеличился в 1,8 раза (5,51 против 3,07).

Использование НФО форм как рифампицина, так и протионамида в комбинированной терапии ПТП показало значительное повышение эффективности использованной химиотерапии: индекс эффективности увеличился на 25,72% по сравнению с группой контроля терапии. При этом наблюдалось снижение всех тестируемых показателей: коэффициента массы легких - на 25,69%; индекса поражения легких - на 23,3% и высеваемости Mtb - на 28,17%.

При применении комбинированной противотуберкулезной терапии с использованием противотуберкулезных препаратов в составе фосфолипидных наночастиц животные выглядели практически здоровыми, хорошо прибавляли в весе.

Исследования, проведенные на модели экспериментального лекарственно-чувствительного генерализованного туберкулеза у мышей, показали что встраивание рифампицина и/или протионамида в фосфолипидные наночастицы приводит к существенному повышению их противотуберкулезного действия.

Установлено достоверное увеличение среднего срока жизни экспериментальных мышей, инфицированных летальной дозой М. tuberculosis Erdman и получавших внутрижелудочно исследуемые препараты в дозе 10 мг/кг в течение 6-ти недель, по сравнению с животными контрольной группы.

Микробиологически и морфологически установлено, что ежедневное внутрижелудочное введение исследуемых препаратов в дозе 10 мг/кг приводит к выраженному терапевтическому влиянию на течение туберкулезного воспаления.

При вскрытии животных был выявлен выраженный гепатопротективный эффект после применяемой комбинированной терапии.

Таким образом, полученные результаты позволяют сделать заключение о высокой эффективности и снижении гепатотоксичности при применении фосфолипидной композиции рифампицина совместно с протионамидом или их фосфолипидной формой в комбинированной противотуберкулезной терапии.

Литература

1. М.Д. Машковский. Лекарственные средства, изд. 15. М.: Новая волна, 2006, с. 857-871.

2. J. van den Boogaard, G.S. Kibiki, E.R. Kisanga, M.J. Boeree, and R.E. Aarnoutse. New Drugs against Tuberculosis: Problems, Progress, and Evaluation of Agents in Clinical Development. // Antimicrob. Agents Chemother. - 2009. - 53(3) - P. 849-862.

3. Патент RU №2463056.

4. Патент RU №2472512.

5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под общей редакцией Р.У. Хабриева. М.: Медицина, 2005, с. 571-581.