10.06.2016
216.015.487e

КАТИОННЫЙ ТЕТРАПЕПТИД Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH КАК ИНГИБИТОР МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ СИНТАЗЫ ОКСИДА АЗОТА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине и касается применения катионного тетрапептида Phe-D-Arg-Phe-Lys-NHв качестве ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота. Изобретение обеспечивает лучшую по сравнению со средством-прототипом (унитиол) выживаемость подопытных животных при нарушениях мозгового кровообращения, более позднее наступление судорог и существенное увеличение продолжительности жизни подопытных животных в условиях гиперкапнической гипоксии. 3 табл., 3 пр.
Основные результаты: Применение катионного тетрапептида Phe-D-Arg-Phe-Lys-NHв качестве ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области медицины, касается средства, ингибирующего митохондриальную синтазу оксида азота и ограничивающего дезинтеграцию митохондрий.

В настоящее время сформировались взгляды в отношении функционального дуализма свободных радикалов, прежде всего кислорода, в процессах повреждения клетки и регуляции метаболических процессов. Известно, что активные формы кислорода являются универсальными повреждающими агентами как при непосредственном окислении биосубстратов, так и вследствие изменения редокс-статуса системы. Свободные радикалы кислорода могут также выступать в качестве естественных метаболитов клетки, оказывающих позитивное действие на многие метаболические процессы посредством прежде всего тиолдисульфидных конформаций биологически активных молекул. В этой связи для достижения протективного эффекта принципиальное значение имеет направленное воздействие на короткоживущие свободные радикалы, в особенности на гидроксильный радикал, обладающий наибольшей окислительной способностью. Образование гидроксильного радикала в организме возможно при протекании следующих биохимических процессов: реакции Фентона, реализация которой осуществляется в присутствии металлов переменной валентности, а также протекающей в кислой среде реакции декомпозиции пероксинитрита, обладающего высокой пенетрантной способностью. Именно пероксинитрит вследствие его физико-химических свойств может рассматриваться в качестве наиболее опасного повреждающего агента, продукция которого может стать объектом фармакологической регуляции. Образование предшественника пероксинитрита - оксида азота (NO) катализируется синтазой оксида азота при определенных условиях насыщения энзима тетрагидробиоптерином.

Ингибиторы синтазы оксида азота различаются по своей специфичности в отношении различных изоформ фермента: индуцибельной (iNOS) и двух конституитивных форм - эндотелиальной (eNOS) и нейрональной (nNOS). В настоящее время описано большое количество соединений, обладающих способностью угнетать активность энзима посредством воздействия на его синтазный домен. Ингибиторы оксидазного центра фермента, активные in vitro, оказались весьма токсичными, в связи с чем не рассматривались. Вместе с тем описаны свойства митохондриальной синтазы оксида азота (mtNOS). Подобно конституитивным изоформам она также является кальцийзависимой [1]. Продуцируемый ею оксид азота угнетает клеточное дыхание при связывании с цитохром С оксидазой и может конъюгировать с супероксидным анион-радикалом, образующимся при утечке электронов с комплексов дыхательной цепи, с образованием пероксинитрита (ONOO-). Расположенные в матриксе митохондрий ферменты цикла Кребса являются поставщиками протонов в межмембранное пространство через комплексы I, III и IV дыхательной цепи, необходимых для инициации декомпозиции пероксинитрита с образованием гидроксильного радикала. В этой связи ингибирование mtNOS может стать тем решающим фактором, который позволит повысить эффективность реакций дыхательной цепи и предотвратить дезинтеграцию митохондрий с последующей индукцией апоптоза [2].

Проблема ингибирования mtNOS связана с наличием мембранных барьеров, которые не могут преодолеть известные ингибиторы фермента. Соединения, избирательно ингибирующие митохондриальную изоформу NOS, в настоящее время не известны.

При решении задачи направленной доставки фармакологических средств в митохондрии определенный интерес представляют соединения на основе трифенилфосфониевого катиона (иона Скулачева), включающие фрагменты витамина Ε (mitoE), изученные и описанные В.П. Скулачевым [3]. Однако данных об использовании трифенилфосфония и других катионных фрагментов для транспорта в митохондрии ингибиторов синтазы оксида азота при анализе доступной информации не выявлено. Нет данных и о том, что ион Скулачева может найти применение при создании ингибиторов митохондриальной изоформы синтазы оксида азота и что для векторной доставки фармакофорного фрагмента в митохондрии могут быть использованы катионные ионы другой структуры.

Известно также, что снижение концентрации оксида азота и пероксинитрита посредством связывания в нитрозотиолы возможно за счет использования тиольного соединения (унитиола), являющегося субстратным антиоксидантом, которое наиболее близко по технической сущности к заявленному изобретению и выбрано в качестве прототипа.

Однако тиолы не находят широкого практического применения при терапии ряда заболеваний и неотложных состояний, так как обладают рядом существенных недостатков:

- большинство тиолов не способны проникать в митохондрии в восстановленном состоянии;

- при передозировке тиолы изменяют окислительно-восстановительные градиенты и нарушают синтез макроэргов;

- связывание оксида азота с тиолами обратимо, пул оксида азота может мобилизоваться при определенных условиях при взаимодействии с восстановителями.

Указанные негативные свойства средства-прототипа определили необходимость изыскания соединений, направленно снижающих активность митохондриальной синтазы оксида азота.

Целью изобретения явилось изыскание средства, ингибирующего митохондриальную синтазу оксида азота и ограничивающего дезинтеграцию митохондрий.

Указанная цель достигается применением в качестве ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота катионного тетрапептида Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20).

Катионный тетрапептид SS-20 синтезировали в химической лаборатории с применением коммерчески доступных аминокислот по общепринятой методике. Идентификацию синтезированного катионного тетрапептида и степень его очистки определяли хроматографически.

Заявляемое средство было впервые синтезировано в 2005 г. с целью применения в качестве антиоксиданта [4]. Сведения об изучении и использовании катионного тетрапептида SS-20 в качестве ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота в доступной информации отсутствуют.

Возможность достижения цели изобретения подтверждается следующими примерами. Достоверность различий средних значений контролируемых показателей в группах оценивали по t-критерию Стьюдента.

Пример 1. Исследование влияния средства-прототипа и заявляемого средства на активность синтазы оксида азота в митохондриях и их набухание

Критериями влияния средства-прототипа и заявляемого средства на активность синтазы оксида азота в митохондриях служили снижение продукции нитритов (продукт окисления оксида азота кислородом) и степень набухания митохондрий.

Для получения митохондрий методом градиентного центрифугирования использовали гомогенат головного мозга подопытных животных - белых беспородных крыс-самцов массой 180-220 г. Выделение фракции, обогащенной митохондриями, осуществляли последовательным центрифугированием по схеме, приведенной Г.Н. Крыжановским, при помощи холодовой утрацентрифуги [5]. Полученную суспензию митохондрий разводили охлажденным раствором Хенкса с аргинином, помещали в пробирки, термостатировали при температуре 37°С и насыщали кислородом посредством барботирования через капилляр. Стимуляцию активности митохондриальной синтазы оксида азота осуществляли внесением в среду хлорида кальция в конечной концентрации 0,16 мкМ. После внесения индуцирующего агента в среду вносили средство-прототип (унитиол) или заявляемое средство (катионный тетрапептид SS-20). Контролем служили пробы, в которые вносили раствор Хенкса. Через 1 час после инкубации в реакции с реактивом Грисса-Илосвая регистрировали количество нитрит-иона. Степень набухания митохондрий оценивали нефелометрически с учетом того, что снижение степени рассеивания света суспензией косвенно характеризует степень набухания митохондрий.

Результаты экспериментов, приведенные в таблице 1, доказывают существенные преимущества заявляемого средства перед средством-прототипом. Применение средства-прототипа (унитиол) способствует снижению на 30% количества нитритов, но при этом не оказывает существенного влияния на процессы набухания митохондрий, что доказывает низкую вероятность его проникновения в матрикс. В то же время заявляемое средство (катионный тетрапептид SS-20) существенно (на 26%) ограничивает продукцию нитритов и почти в 2 раза уменьшает скорость набухания митохондрий по сравнению со средством-прототипом.

Таким образом экспериментально установлено эффективное влияние заявляемого средства на активность синтазы оксида азота в митохондриях. Результаты опытов in vitro доказывают наличие у заявляемого средства свойств ингибитора синтазы оксида азота, так как иных источников нитритов в среду не вносили.

Пример 2. Исследование влияния средства-прототипа и заявляемого средства на выживаемость крыс и активность синтазы оксида азота после эспериментального инсульта

В ходе эксперимента проводили гистохимическое определение активности синтазы оксида азота в нейронах после поэтапной перевязки сонных артерий и терапии с применением средства-прототипа или заявляемого средства (ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота).

Для моделирования острого ишемического инсульта у подопытных животных (белых беспородных крыс-самцов массой 180-220 г) применяли методику двухстадийной перевязки общей сонной артерии с реперфузией [6]. Вначале подопытным животным выполняли одностороннюю перевязку сосуда, а через 30 сут после этого проводили вторую операцию, состоящую в том, что общую сонную артерию на контралатеральной стороне пережимали на 10 мин и, сняв лигатуру, восстанавливали нарушенный кровоток. Затем рану ушивали и проводили введение средства-прототипа или заявляемого средства в течение 3 сут. Выживших животных подвергали аутопсийному исследованию. Применяемые в эксперименте средства вводили внутрибрюшинно, причем средство-прототип вводили в дозе 50 мг/кг, а заявляемое средство - в дозе 1 мг/кг.

Гистохимическое определение активности синтазы оксида азота в пирамидных нейроцитах сенсомоторной коры проводили в соответствии с методикой [7], предусматривающей оценку НАДФН2-диафоразной активности фермента путем обработки исследуемого препарата растворами солей тетразолия в присутствии НАДФН2 после выдержки препарата в течение 10 мин в 4% водном растворе нейтрального формалина и проведение комплекса гистохимических реакций, включающего дополнительно оценку сопряжения функционирования каталитических центров фермента в ходе НСТ-теста путем окрашивания препарата в течение 30 мин в 0,2% растворе нитросинего тетразолия в забуференном физиологическом растворе (рН 7,4) и выявления нитритов путем выдержки препарата в свежеприготовленном реактиве Грисса-Илосвая в течение 30 мин при температуре 37°С. Активность синтазы оксида азота определяли фотометрически по содержанию в клетках препарата продуктов цитохимических реакций на нитриты и диформазан.

Как показали результаты эксперимента, приведенные в таблице 2, заявляемое средство действительно проявляет свойства ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота. Выживаемость крыс с нарушениями мозгового кровообращения была выше в 2 раза, а вероятность неферментативного окисления биосубстратов снижалась более чем на 30% по сравнению с соответствующими показателями средства-прототипа.

Пример 3. Исследование антигипоксического действия средства-прототипа и заявляемого средства

Антигипоксическое действие средства-прототипа и заявляемого средства исследовали на модели гиперкапнической гипоксии (гипоксии в гермообъеме).

Эксперименты выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 18-22 г. В эксперименте формировали три группы животных по 6 особей в каждой: контрольную и две опытные.

Животным контрольной группы за 10 мин до воздействия вводили изотонический раствор. Животным первой опытной группы вводили средство-прототип (унитиол) в дозе 50 мг/кг, а животным второй опытной группы - заявляемое средство (катионный тетра-пептид SS-20) в дозе 1 мг/кг. Применяемые в ходе эксперимента средства вводили внутрибрюшинно.

Критериями устойчивости к гипоксии, развивающейся под воздействием применяемых средств, служили время начала судорог и продолжительность жизни подопытных животных.

Результаты исследований представлены в таблице 3, из которой видно, что под воздействием средства-прототипа судороги начинаются практически в то же время, что и в контрольной группе.

В случае же использования заявляемого средства по сравнению со средством-прототипом развивается большая устойчивость к гипоксии: судороги наступают через 19,6±1,08 мин, то есть почти в 1,5 раз позже, а продолжительность жизни подопытных животных составляет 31,9±9,45 мин, то есть в 1,7 раз превышает аналогичный показатель унитиола.

Таким образом, экспериментально доказано, что применение заявляемого средства позволяет обеспечить ингибирование активности митохондриальной синтазы оксида азота и ограничение дезинтеграции митохондрий при острых повреждениях гипоксической природы, что подтверждает достижение цели изобретения.

Заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна», так как впервые предложено использовать известное антиоксидантное средство - катионный тетрапептид Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 - в качестве ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота, ограничивающего дезинтеграцию митохондрий.

Заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень», так как на основании доступной информации возможность применения известного антиоксидантного средства, а именно катионного тетрапептида Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2, в качестве ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота, способного ограничить дезинтеграцию митохондрий, не представляется очевидной.

Соответствие заявляемого изобретения критерию «пригодность для применения» подтверждается результатами исследований, показавшими, что заявляемое средство действительно проявляет свойства ингибитора синтазы оксида азота, значимо ограничивает продукцию нитритов и снижает степень набухания митохондрий, обеспечивает лучшую по сравнению с унитиолом выживаемость подопытных животных при нарушениях мозгового кровообращения, а также способствует более позднему наступлению судорог и существенному увеличению продолжительности жизни подопытных животных в условиях гиперкапнической гипоксии.

Список литературы

1. Ghafourifar P. Mitochondrial nitric oxide synthase / P. Ghafourifar, C.K. Sen // Front Biosci. - 2007. - Vol. 12. - P. 1072-1078.

2. Haynes V. Mitochondrial nitric-oxide synthase: role in pathophysiology / V. Haynes, S.L. Elfering, R.J. Squires, N. Traaseth, J. Solien, A. Ettl, C. Giulivi // IUDMB Life. - 2003. - Vol. 55, №10-11. - P. 599-603.

3. RU 2318500 C2, 10.03.2008.

4. RU 2376028 C2, 20.12.2009.

5. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы: Руководство. - М.: Медицина, 1997. - 351 с.

6. Чепур C.B. Особенности экспериментального моделирования соматических и неврологических заболеваний для оценки эффективности лекарственных препаратов / С.В. Чепур, В.Н. Быков, М.А. Юдин, А.С. Никифоров, И.В. Фатеев, А.А. Арутюнян / Биомедицина. - 2012. - Т. 1, №1. - С. 16-28.

7. RU 2202110 C1, 10.04.2003.

Катионный тетрапептид Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 как ингибитор митохондриальной синтазы оксида азота

Применение катионного тетрапептида Phe-D-Arg-Phe-Lys-NHв качестве ингибитора митохондриальной синтазы оксида азота.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 28.
27.05.2013
№216.012.4392

Способ получения гипериммунных риккетсиозных сывороток

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии, клинической и лабораторной диагностике и иммунологии. Способ получения гипериммунных риккетсиозных сывороток заключается в следующем. Иммунизацию кроликов-самцов породы «Шиншилла» 10-12-месячного возраста массой 2,5-3,0 кг проводят в два...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482875
Дата охранного документа: 27.05.2013
10.06.2013
№216.012.49c9

Способ диагностики отравлений малыми дозами фосфорорганических отравляющих веществ

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии, касается установления факта воздействия на биологический объект фосфорорганических отравляющих веществ (ФОВ) и может быть использовано на объектах по их производству, хранению и уничтожению, а также в непредвиденных чрезвычайных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002484469
Дата охранного документа: 10.06.2013
10.10.2013
№216.012.719a

Фармацевтические композиции, содержащие ипидакрин и их применение для лечения нарушений потенции и других форм половой активности

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности, а именно к применению ипидакрина в качестве средства для лечения нарушений потенции. Фармацевтическая композиция ипидакрина представляет собой таблетку, в том числе таблетку пролонгированного действия, либо...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002494739
Дата охранного документа: 10.10.2013
10.04.2014
№216.012.afea

Способ лечения (терапии) компенсированной формы неспецифического хронического тонзиллита

Изобретение относится к области медицины и предназначено для лечения компенсированной формы неспецифического хронического тонзиллита. Способ включает стресс-протективную терапию, диетотерапию, витаминотерапию, пробиотикотерапию, антиоксидантную терапию, терапию пребиотик-подобными препаратами,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002510749
Дата охранного документа: 10.04.2014
27.08.2014
№216.012.ee46

Способ оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002526817
Дата охранного документа: 27.08.2014
27.12.2014
№216.013.1672

Средство профилактики церебральной формы острой лучевой болезни

Изобретение относится к медицинской радиологии и может быть использовано для профилактики церебральной формы острой лучевой болезни. Предложено использовать официнальный лекарственный препарат пиразинамид в качестве средства профилактики церебральной формы острой лучевой болезни. Ранее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537170
Дата охранного документа: 27.12.2014
10.04.2015
№216.013.3fdb

Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием

Изобретение относится к азолоазиниевым солям соединений фторхинолонового ряда формул 4а-в, 5а-в, 7а-б и 8а-б, обладающим антибактериальным и противовирусным свойствами. Заявленные соединения могут быть использованы для создания лекарственного средства для экстренной профилактики и лечения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547835
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.05.2015
№216.013.49b1

Твердотельный лазер

Изобретение относится к лазерной технике. Твердотельный лазер содержит активный элемент и лампу накачки, установленные в осветителе, включающем отражатель, а также резонатор, образованный глухим и полупрозрачным зеркалами. Осветитель выполнен монолитным из высокоотражающего материала и имеет...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550372
Дата охранного документа: 10.05.2015
10.05.2015
№216.013.4afa

Лазер с модуляцией добротности резонатора

Изобретение относится к лазерной технике. Лазер с модуляцией добротности резонатора содержит корпус с отражателем, внутри которого размещены лампа накачки и активный элемент. На его оптической оси с противоположных торцов активного элемента установлены неподвижно закрепленное полупрозрачное...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550701
Дата охранного документа: 10.05.2015
27.06.2015
№216.013.58f6

Импульсный твердотельный лазер

Изобретение относится к лазерной технике. Импульсный твердотельный лазер содержит активный элемент, осветитель, включающий лампу накачки и отражатель, а также резонатор, включающий призму-крышу и плоское зеркало, установленные с противоположных торцов активного элемента таким образом, что ребро...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002554315
Дата охранного документа: 27.06.2015
Показаны записи 1-10 из 33.
27.05.2013
№216.012.4392

Способ получения гипериммунных риккетсиозных сывороток

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии, клинической и лабораторной диагностике и иммунологии. Способ получения гипериммунных риккетсиозных сывороток заключается в следующем. Иммунизацию кроликов-самцов породы «Шиншилла» 10-12-месячного возраста массой 2,5-3,0 кг проводят в два...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482875
Дата охранного документа: 27.05.2013
10.06.2013
№216.012.49c9

Способ диагностики отравлений малыми дозами фосфорорганических отравляющих веществ

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии, касается установления факта воздействия на биологический объект фосфорорганических отравляющих веществ (ФОВ) и может быть использовано на объектах по их производству, хранению и уничтожению, а также в непредвиденных чрезвычайных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002484469
Дата охранного документа: 10.06.2013
10.10.2013
№216.012.719a

Фармацевтические композиции, содержащие ипидакрин и их применение для лечения нарушений потенции и других форм половой активности

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности, а именно к применению ипидакрина в качестве средства для лечения нарушений потенции. Фармацевтическая композиция ипидакрина представляет собой таблетку, в том числе таблетку пролонгированного действия, либо...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002494739
Дата охранного документа: 10.10.2013
27.08.2014
№216.012.ee46

Способ оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002526817
Дата охранного документа: 27.08.2014
27.12.2014
№216.013.1672

Средство профилактики церебральной формы острой лучевой болезни

Изобретение относится к медицинской радиологии и может быть использовано для профилактики церебральной формы острой лучевой болезни. Предложено использовать официнальный лекарственный препарат пиразинамид в качестве средства профилактики церебральной формы острой лучевой болезни. Ранее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537170
Дата охранного документа: 27.12.2014
10.04.2015
№216.013.3fdb

Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием

Изобретение относится к азолоазиниевым солям соединений фторхинолонового ряда формул 4а-в, 5а-в, 7а-б и 8а-б, обладающим антибактериальным и противовирусным свойствами. Заявленные соединения могут быть использованы для создания лекарственного средства для экстренной профилактики и лечения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547835
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.05.2015
№216.013.49b1

Твердотельный лазер

Изобретение относится к лазерной технике. Твердотельный лазер содержит активный элемент и лампу накачки, установленные в осветителе, включающем отражатель, а также резонатор, образованный глухим и полупрозрачным зеркалами. Осветитель выполнен монолитным из высокоотражающего материала и имеет...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550372
Дата охранного документа: 10.05.2015
10.05.2015
№216.013.4afa

Лазер с модуляцией добротности резонатора

Изобретение относится к лазерной технике. Лазер с модуляцией добротности резонатора содержит корпус с отражателем, внутри которого размещены лампа накачки и активный элемент. На его оптической оси с противоположных торцов активного элемента установлены неподвижно закрепленное полупрозрачное...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550701
Дата охранного документа: 10.05.2015
27.06.2015
№216.013.58f6

Импульсный твердотельный лазер

Изобретение относится к лазерной технике. Импульсный твердотельный лазер содержит активный элемент, осветитель, включающий лампу накачки и отражатель, а также резонатор, включающий призму-крышу и плоское зеркало, установленные с противоположных торцов активного элемента таким образом, что ребро...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002554315
Дата охранного документа: 27.06.2015
20.07.2015
№216.013.6584

Способ биохимической идентификации высокотоксичных антихолинэстеразных ядов

Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии, и касается способа биохимической идентификации высокотоксичных антихолинэстеразных ядов и может быть использовано в чрезвычайных ситуациях (аварии на объектах по уничтожению химического оружия) для отождествления опасных для человека...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002557535
Дата охранного документа: 20.07.2015

Похожие РИД в системе

+ добавить свой РИД