Результат интеллектуальной деятельности: ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к препаратам для дезинфекции объектов ветеринарного надзора.

Известны дезинфицирующие средства, в состав которых входят препараты йода, хлора, щелочей и кислот (Смирнов А.М., Дорожкин В.И. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. 1(11), 2014, с. 6-10). Недостатком препаратов данного ряда является их высокая агрессивность к производственному оборудованию.

Известны дезинфицирующие средства на основе перекисей (Готовский Д.Г. Ученые записки учреждения образования "Витебская ордена "Знак почета" государственная академия ветеринарной медицины". 2013. Т.49. №1-2. С. 66-69). Недостатком данных препаратов является их быстрое разложение во внешней среде. Катализаторами этих процессов являются присутствующие во внешней среде ионы металлов.

Известны дезинфектанты на основе катионоактивных поверхностно-активных веществ (Готовский Д.Г. Ученые записки учреждения образования "Витебская ордена "Знак почета" государственная академия ветеринарной медицины". 2012. Т.48. №2-1. С. 61-64. Киселев А.Л., Краснобаева О.А., Краснобаев Ю.В., Бессарабова Е.В. Ветеринария. 2010. №11. С. 19-21). К препаратам данного ряда относится поликомпонентный дезинфицирующий состав Вироцид, выбранный нами в качестве прототипа. Недостатком препаратов на основе четвертичных аммониевых соединений, в том числе Вироцида, является слабая эффективность против резистентных штаммов микроорганизмов (Bridier A., Briandet R., Thomas V., Dubois-Brissonnet F. Comparativebiocidalactivityofperaceticacid, benzalkoniumchlorideandortho-phthalaldehydeon 77 bacterialstrains, Journalof Hospital Infection v.78, p. 208-213, 2011. Aylin Akoglu, Evrim Gunes Altuntas, Gokce Polat Yemis A Modified Selective Medium Containing Benzalkonium Chloride (BKC) for the Isolation of Pseudomonas aeruginosa from Raw Milk, Food and Nutrition Sciences, v.3, p. 947-950, 2012).

Целью изобретения является создание дезинфицирующего средства на основе четвертичных аммониевых соединений и глутарового альдегида, обладающего высокой активностью против резистентных штаммов микроорганизмов.

Поставленная цель достигается тем, что в состав дезинфектанта включен диальдегид глиоксаль при следующих соотношениях компонентов (мас.%):

- алкилдиметилбензиламмония хлорид - 1,0-35,0

- дидецилдиметиламмония хлорид - 1,0-25,0

- глутаровый альдегид - 1,0-15,0

- глиоксаль - 1,0-15,0

- вспомогательные вещества - до 100,0

Обоснование граничных значений массовых процентов компонентов в составе дезинфектанта: превышение массовых процентов алкилдиметилбензиламмония хлорида более 35,0 и дидецилдиметиламмония хлорида более 25,0 сильно повышает вязкость смеси, что затрудняет фасовку препарата и правильную дозировку при приготовлении рабочего раствора; превышение массовых процентов альдегидов более 15,0 приводит к росту токсичности и неоправданно завышенному их расходованию при изготовлении рабочего раствора; уменьшение нижних границ всех компонентов приводит к излишнему расходованию растворителя и повышению транспортных расходов.

Оптимальным является следующее соотношение компонентов (мас.%):

- алкилдиметилбензиламмония хлорид - 28,8

- дидецилдиметиламмония хлорид - 11,9

- глутаровый альдегид - 8,0

- глиоксаль - 12,4

- вспомогательные вещества - до 100,0

Антимикробную активность заявляемого дезинфектанта в сравнении с препаратом Вироцид определяли in vitro по методике серийных разведений в жидкой питательной среде, описанной в кн.: «Методы экспериментальной химиотерапии», М., Медицина, 1971. - С. 100-105. Бактерицидную активность каждого вещества определяли в ряду из 10 двухкратных разведений от 500 мкг/мл до 0,975 мкг/мл. Учитываемая бактериальная нагрузка составляла 250 тысяч микробных клеток в 1 мл. Исходные суспензии, содержащие 10⁹ микробных клеток в 1 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР), готовили по оптическому стандарту плотности (Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. А.Н. Тарасевича) из суточной агаровой культуры. Бактериальные суспензии разводили жидкой питательной средой до концентрации 500000 микробных тел в 1 мл. Затем вносили в пробирки по 1 мл приготовленной таким образом бактериальной взвеси и 1 мл раствора испытуемого вещества соответствующей концентрации в жидкой питательной среде. Выдерживали в термостате 18 часов при 37°C и из пробирок, в которых отсутствовал рост микроорганизмов, делали высевы в жидкую питательную среду. Учет результатов проводили после выдерживания пробирок при 37°C в течение 18 часов. Минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) препаратов определяли по минимальной концентрации вещества (в пересчете на сухое вещество) в пробирке, в которой отсутствовал рост микроорганизмов (тест-бактерий).

В таблице 1 представлены МБК заявляемого препарата и препарата Вироцид в отношении двух тест-культур (Escherichia coli АТСС-25922 и Staphylococcus aureus АТСС-6538Р), а также 10 полирезистентных полевых изолятов, устойчивых к двум и более антибиотикам (минимальные подавляющие концентрации антибиотиков в отношении этих культур составляли более 100 мкг/мл)

Из данных таблицы можно сделать вывод о том, что предлагаемый препарат в 2-3 раза более активен, чем Вироцид.

Нами установлено, что причиной более высокой активности предлагаемого нами препарата является синергидный эффект, обусловленный сочетанием двух альдегидов - глутарового альдегида и глиоксаля. Так, замена глутарового альдегида в предлагаемом препарате таким же количеством глиоксаля резко снижает активность препарата: МБК такой смеси в отношении представленных в таблице микроорганизмов становятся такими же, как и для препарата Вироцид. С другой стороны, смесь, не содержащая глиоксаля (как и в Вироциде), не дает резкого повышения активности по мере возрастания процентного содержания глутарового альдегида: наблюдается лишь естественное плавное увеличение антибактериальной активности. Резкий скачок активности возможен только при сочетании глутарового альдегида и глиоксаля.

Определение дезинфицирующих свойств предлагаемого препарата в сравнении с Вироцидом.

Дезинфицирующие свойства определяли на контаминированных тест-культурами (Escherichia coli АТСС-25922 и Staphylococcus aureus АТСС-6538Р) тест-объектах. В качестве тест-объектов использовались деревянные, кирпичные и металлические поверхности. Контаминированный тест-объект подсушивали в течение одного часа при комнатной температуре, а затем обрабатывали препаратами путем опрыскивания. Температура рабочего раствора дезинфицирующего средства и воздуха во время проведения опытов была в пределах 18-20°C, относительная влажность 65-75%. Все опыты были поставлены в пятикратной повторности.

Контроль эффективности дезинфекции осуществляли следующим образом. После окончания заданной экспозиции брали смывы с контрольных и опытных тест-объектов путем тщательного протирания их стерильным, слегка увлажненным тампоном. Тампоны, каждый в отдельности, помещали в пробирки с нейтрализатором (использовали стерильную водопроводную воду). Через 1-2 ч тампоны из пробирок удаляли, жидкость центрифугировали в течение 20-30 мин при 2500 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливали, в пробирку добавляли стерильную воду, содержимое перемешивали и снова центрифугировали 20 мин. После этого вновь сливали надосадочную жидкость, а из центрифугата производили посевы на соответствующие питательные среды.

Учет результатов проводился каждые 24 часа в течение 7 суток инкубирования тест-культур на питательных средах при температуре 37°C.

Качество дезинфекции оценивали по наличию или отсутствию роста исходных тест-культур. Заключение о качестве обеззараживания поверхностей делали на основании пяти повторных опытов с совпадающими результатами. Результаты представлены в таблице 2.

Приведенные в таблице 2 данные свидетельствуют о высоком бактерицидном действии препарата. Из данных таблицы видно, что инактивация кишечной палочки (Escherichia coli) произошла при обработке тест-объектов рабочим раствором предлагаемого препарата при концентрации 0,031% и экспозиции 30 мин. Инактивация золотистого стафилококка произошла при концентрации рабочего раствора препарата 0,063% и экспозиции 30 мин, причем препарат в 4 раза более активен, чем Вироцид в отношении Escherichia coli, и в 2 раза - в отношении Staphylococcus aureus.

Расход рабочего раствора препарата составлял во всех случаях эксперимента - 350 мл/м².

Технический результат, достигаемый при осуществлении данного изобретения:

1. Усиление дезинфицирующего эффекта в 2-4 раза.

2. Применение в предлагаемом препарате сочетания глутарового альдегида и глиоксаля обеспечивает синергидный эффект, проявляющийся более надежным обеззараживанием объектов ветеринарного надзора.

3. Препарат легко фасуется, предлагаемая форма препарата позволяет осуществлять правильную дозировку при приготовлении его рабочих растворов.

4. Препарат проявляет эффективное бактерицидное действие в одинаковой степени как в отношении референтных штаммов, так и в отношении клинических изолятов бактерий.