Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ЗАЩИТЫ ЖИВОТНЫХ ПРИ ОТРАВЛЕНИИ ДИОКСИНОМ

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения животных при отравлении диоксином

Проблема диоксинов находится под пристальным вниманием Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), программ ООН по продовольственной и сельскохозяйственной безопасности (ФАО), окружающей среде (ЮНЕП), Международного агентства по исследованию рака (МАИР) и др. Множественность клеточных мишеней для диоксина и определяет широкий спектр токсических эффектов. В их числе - гепатотоксичность, иммунотоксичность, мембранотоксичность, нейротоксичность, эндокринотоксичность, дерматотоксичность, метаболические дефекты, связанные с модуляцией активности ферментных систем. По результатам многочисленных исследований отечественных и зарубежных ученых данные соединения обладают эмбриотоксическими, тератогенными, канцерогенными и мутагенными свойствами. Диоксины считаются суперэкотоксикантами и не имеют себе равных по глобальности экологических последствий, опасности для здоровья человека и животных. Они чрезвычайно токсичны, высоко устойчивы и широко распространены в окружающей среде.

Специфические средства лечения отравлений диоксином не разработаны, поэтому проводят в основном симптоматическую терапию. На данный момент не известны препараты, способные нейтрализовать и выводить диоксины из организма.

Известен способ лечения животных при отравлении диоксином, в котором ежедневно с питьевой водой дают димефосфон в дозе 50-150 мг/кг массы тела в сутки в течение 10-30 дней (пат. RU №2287331, МПК А61К 31/66 опуб. 20.11.2006 г.). Недостатком данного способа является относительная низкая эффективность лечения при отравлении диоксином и высокая стоимость.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в повышении эффективности лечения животных при отравлении диоксином и снижении себестоимости лечения.

Технический результат достигается тем, что в способе защиты животных при отравлении диоксином, животному в течение 30-60 дней, в зависимости от вида животного, на корень языка наносят антисептический стимулятор АСД-2 с помощью зонда или дозатора в количестве 0,05-3 мл на голову, а в корм подмешивают бентонит в дозе 2% от суточного рациона.

Используемый АСД-2 (антисептический стимулятор Дорогова) - продукт сухой перегонки сырья животного происхождения содержит соединения с активной сульфгидрильной группой, производные алифатических аминов, карбоновые кислоты, алифатические и циклические углеводороды, производные амидов и воду. Продукт относится к биогенным стимуляторам (а.с. №130857, опуб. 28.08. 1962 г.; Дерябина, З.И. Химико-фармакологическая характеристика препарата АСД // Труды ВНИЭВ, - т. 25, 1963. С. 326-339). В ветеринарии применяется для профилактики и лечения болезней желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, мочеполовой системы, поражениях кожных покровов, нарушениях обмена веществ, для стимуляции деятельности центральной и вегетативной нервной системы сельскохозяйственных животных и собак, повышения естественной резистентности у ослабленных и переболевших инфекционными и инвазионными болезнями животных, а также для стимуляции роста и развития молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

Используемый бентонит - глинопорошок бентонитовый Биклянского месторождения Республики Татарстан по ТУ 39-0147001-105-93 представляет собой тонкопористые глины, состоящие в основном из минералов группы монтмориллонита Al₂[Si₄0₁₀](OH)2·nH₂O. Обладает молекулярно-ситовым свойством и поэтому является хорошим адсорбентом для многих органических и неорганических веществ.

Эффективность препаратов испытывали на морских свинках, овцах и курах-несушках.

Пример 1. Из млекопитающих морские свинки являются наиболее чувствительными к диоксину и поэтому опыты проводили на 40 морских свинках живой массы 500-550 г. Животные были разделены на 4 группы по 10 в каждой. Первая группа служила биологическим контролем, которым внутрижелудочно вводили адекватное количество рафинированного масла без диоксина. Второй группе животных в течение 10 дней вводили маслянный раствор 2, 3, 7, 8 - ТХДД (диоксин) в дозе 1/10 ЛД₁₀₀ (0,2 мкг /кг массы тела). Третья получала токсикант и димефосфон (взяли для сравнения) в количестве 90 мг/кг массы тела (0,6 мл/кг), четвертая подопытная группа - диоксин и АСД-2 в дозе 2 мл на голову и бентонит в дозе 2% от суточного рациона. АСД-2 и димефосфон животные получали за 3 дня до и в течение 30 дней после введения полютанта, а бентонит в течение 10 дней со дня начала затравки. Оценка эффективности препаратов проводилась по клиническим признакам и соотношению выживших и павших животных.

Морские свинки контрольной группы хорошо поедали корм, прибавляли в весе и были активны.

В группе животных, получавших диоксин, симптомы проявлялись в виде уменьшения потребления корма, конъюктивитов, ринитов, окрашивание шерстного покрова вокруг гениталий в бурый цвет и снижения массы тела. Животные стали погибать на 12 сут и к 21 дню исследований все животные этой группы пали.

В группах животных, получавших испытуемые препараты снижение массы тела происходило менее выраженно, в третьей опытной группе на 40 г, в четвертой - на 33 г, тогда как во второй нелеченой группе уже к 20 сут вес снизился на 155 г от исходного уровня.

Из таблицы 1 видно, что в группе морских свинок получавших мембраностабилизатор выжило 4, пало 6, выживаемость составило 40%. В группе которым вводили антисептик стимулятор и сорбент, выжило 6, а пало 4, выживаемость составила 60%.

Пример 2. Для изучения воздействия лечебно-профилактических препаратов при субхроническом отравлении диоксином было сформировано 4 группы овец живой массой 30 кг. Первая группа служила биологическим контролем. Вторая получала диоксин в дозе 1/400 ЛД₅₀ (0,5 мкг/кг массы тела), третья - группа животных с диоксином получала димефосфон (взяли для сравнения) в дозе 90 мг/кг массы тела (0,6 мл/кг), четвертая - совместно с токсикантом получала тканевой стимулятор АСД-2 в количестве 3 мл/голову и бентонит в дозе 2% от рациона. Опыты проводились в течение 60 сут.

Гематологические, биохимические, иммунобиологические исследования проводили до начала затравки и на 20, 40 и 60 сут.

У овец всех опытных групп симптомы отравления не наблюдались, падежа животных не было.

В контрольной группе изменения гематологических, биохимических и иммунобиологических показателей не прослеживались.

У животных, получавших диоксин, наблюдалось снижение содержания эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов на 60 сут на 18, 17 и 12% соответственно. В третьей группе, эритроциты и гемоглобин снижались к концу эксперимента на 14 и 13%. В четвертой группе, получавшей тканевой стимулятор и сорбент, прослеживалось уменьшение количества гемоглобина на 60 сут на 11%, изменения содержания эритроцитов и гемоглобина не наблюдалось.

В сыворотки крови овец второй группы содержание общего белка на 60 сут понижалось на 14%, фракция альбуминов - на 21%, а фракция β-глобулинов на 40% соответственно от исходных данных. Активность АЛТ увеличивалась на 40 и 60 сут в 1,9 и 2,0 раза, ACT - в 2,2 и 1,5 раза, ГГТ - в 4,5 и 3,1 раза соответственно. Активность амилазы оставалась без изменений. Общий билирубин увеличивался на 40 и 60 сут на 12 и 16%, азот мочевины - на 26 и 84%. Отмечалось повышение концентрации холестерина на 40 сут на 42% и триглицеридов на 17% соответственно. Глюкоза снижалась на 40 и 60 сут на 48 и 57%. Содержание МДА в гемолизате увеличивалось на 40 и 60 сут на 44 и 44%, а в плазме - на 65 и 68% соответственно.

В третьей группе, получавшей с токсикантом димефосфон, содержание альбуминов на 40 и 60 сут снижалось на 17 и 17%, а концентрация α-, β- и γ-глобулинов в эти же сроки исследования увеличивалась на 10 и 10%, 11 и 15%, 13 и 20% соответственно от исходной величины. Количество печеночных ферментов к концу исследования увеличивалось, ACT - в 1,1 раза, АЛТ - в 1,1 раза. Прослеживалось увеличение содержания мочевины на 40 и 60 сут на 19 и 21%, в эти же сроки повышалась концентрация билирубина общего на 15 и 20%.

В группе животных, получавшей с диоксином АСД-2 и бентонит, содержание общего белка и его фракций не изменялось. Отмечалось увеличение концентрации мочевины к концу опыта на 14%. Общий билирубин увеличивался на 40 и 60 сут в 1,2 и 1,2 раза. Такие показатели, как АЛТ, ACT, ЛДГ, глюкоза, креатинин, холестерин и МДА, не изменялись и оставались в приделах исходной величины.

В группе животных, получавших только токсикант, фагоцитарное число на 40 и 60 сут исследования снижалось на 11 и 17%, фагоцитарная емкость - на 15 и 17%, активность лизоцима - на 15 и 20%. Прослеживалось снижение Т- и В-лимфоцитов. Так, Т-клетки на 60 сут снижались на 15%, а В-клетки - на 18%.

В третьей группе фагоцитарная активность, фагоцитарная емкость и активность лизоцима снижались к концу исследования на 6, 11 и 14% соответственно. Количество Т- и В-лимфоцитов снижалось на 40 сут на 10 и 9% и к концу 60 сут показатель возвращался к норме.

У овец, получавших АСД-2 и бентонит, исследуемые показатели не изменялись на протяжении всего опыта за исключением В-лимфоцитов, количество которых к 60 сут увеличилось на 13%.

Стоимость курса лечения овец при отравлении диоксином и применении димефосфона составила 3240 руб. на одну голову, тогда как при применении АСД-2 и бентонита на одну овцу было затрачено 398,4 руб.

Пример 3. Птицы являются наиболее чувствительными к действию диоксина и поэтому были проведены исследования на курах-несушках кросса «Хайсекс Браун» живой массой 1,5 кг в возрасте 135 дней, из которых по принципу аналогов сформировали 4 группы по 5 птиц в каждой. Начало яйцекладки отмечалось на 20 неделю жизни, которая достигла своего пика в период начала опыта, различий по яичной продуктивности во всех группах не наблюдались. В течение всего опыта куры находились в одинаковых условиях содержания, кормление проводили согласно принятым нормам. Птицы первой группы служили биологическим контролем и получали обычный рацион. Второй группе давали 2, 3, 7, 8 - тетрахлордибензо-парадиоксин (ТХДД) в дозе 0,53 мкг/кг (1/400 от ЛД₅₀), третья - токсикант и димефосфон в дозе 90 мг/кг массы тела (0,6 мл /кг), четвертая - токсикант и АСД-2 (0,05 мл на птицу) с бентонитом (2% от суточного рациона животного).

Клинические признаки, изменения гематологических, биохимических и иммунобиологических показателей в первой группе не отмечались.

Во второй группе клинические признаки появились к 30 сут в виде уменьшения потребления корма. Наблюдалось снижение массы тела на 14-20%. У затравленных птиц отмечали анемичность гребешков. Первые 25 сут наблюдалось снижение яйценоскости (таблица 2), которая в дальнейшем вовсе прекратилась. Из таблицы 3 видно, что в данной группе пала одна птица.

В третьей группе, получавшей с диоксином димефосфон, клинические признаки проявлялись в виде снижения яйценоскости с 30 сут. Масса тела снижалась в среднем на 8-9%.

В четвертой группе, получавшей тканевой стимулятор и сорбент, клинические признаки практически не проявлялись. На протяжении 45 сут куры продолжали нестись.

В третьей и четвертой группах гибель животных не наблюдалось.

У кур, получавших только токсикант, эритроциты, гемоглобин и лейкоциты к 45 сут снижались на 18, 12 и 18% соответственно.

В третьей группе, получавшей с токсикантами димефосфон, отмечалось снижение эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов на 45 сут в среднем на 10-11%.

В четвертой группе птиц, получавших с диоксином АСД-2 и бентонит, изменения гематологических показателей не наблюдались.

Во второй группе птиц отмечалось снижение общего белка на 30 и 45 сут на 12 и 20%, альбуминов - на 35 и 40%. Концентрация α-глобулинов уменьшалась к 45 сут на 19%, фракция β-глобулинов увеличивалась на 30 и 45 сут на 21 и 49%.

У птиц третьей леченой группы общий белок и альбумины оставались в приделах нормы. Фракция α-глобулинов снизилась на 15 сут на 19% и оставалась такой же на протяжении всего опыта, β-глобулины повышались на 45 сут на 20%. Отмечалось снижение γ-глобулинов на 15, 30 и 45 сут на 18, 18 и 20%.

В группе кур, получавших с токсикантом АСД-2 и бентонит, наблюдалось снижение α-глобулинов на 45 сут на 11%, а также отмечалось повышение β-глобулинов на 14%.

У птиц второй группы при изучении показателей естественной резистентности отмечалось снижение фагоцитарной активности на 30 и 45 сут на 18 и 25%, фагоцитарного числа на 20 и 35% соответственно. Фагоцитарная емкость крови уменьшалась на 15, 30 и 45 сут на 23, 41 и 46%. Содержание Т- и В-лимфоцитов на 30 и 45 сут снижалось на 26, 27 и 24, 25% соответственно.

В третьей опытной группе у кур наблюдалось незначительное снижение активности нейтрофилов, фагоцитарная емкость снижалась на 15 и 30 сут на 15 и 14%.

Отмечалось незначительное повышение фагоцитарной емкости у кур, получавших с диоксином тканевой стимулятор и бентонит. Содержание В-лимфоцитов увеличилось к 15 сут на 20%, в дальнейшем данный показатель приходил в норму.

Стоимость курса лечения кур-несушек при отравлении диоксином и лечении димефосфоном составило 162 руб. на одну голову, тогда как при применении АСД-2 и бентонита 5,4 руб.

Таким образом, при лечении острого отравления морских свинок диоксином с помощью АСД-2 и бентонита выживаемость животных составляет 60% (при 100%-ной гибели без лечения и 40%-ной выживаемости в группе леченой димефосфоном).

Предлагаемый способ защиты животных при отравлении диоксином позволяет повысить эффективность лечения за счет воздействия на гомеостатические системы организма и на функциональные способности органов, снизить стоимость лечения в несколько раз, чем при лечении димефосфоном.